目的在大肠杆菌中提高粉尘螨1类变应原(Der f 1)的可溶性表达。方法用RT-PCR方法扩增得到Der f 1的全长序列与成熟肽序列(mDer f 1);以已知Der p 5基因的前导序列替换Der f 1前导序列和原酶序列,重新构建出rDer f 1基因;将上述3个基因...目的在大肠杆菌中提高粉尘螨1类变应原(Der f 1)的可溶性表达。方法用RT-PCR方法扩增得到Der f 1的全长序列与成熟肽序列(mDer f 1);以已知Der p 5基因的前导序列替换Der f 1前导序列和原酶序列,重新构建出rDer f 1基因;将上述3个基因分别克隆入原核表达载体pGEX-4T-1中表达,经Western-blot对三者的表达产物进行分析鉴定。结果Western-blot表明,pGEX-Der f 1与pGEX-mDer f 1的表达产物分别为分子量约63 000与51 000的重组蛋白质,重组蛋白质主要存在于细胞裂解液的沉淀中。pGEX-rDer f 1大量表达了可溶性目的蛋白质,分子量约53 000,并被成功地分离纯化。以上三种表达产物均可被鼠抗GST抗体与螨过敏患者血清特异地识别。结论表达了含Der f 1,mDer f 1与rDer f 1的三种GST融合蛋白质,它们均具免疫反应性,纯化获得了GST-rDer f 1融合蛋白质,为后期的诊断及治疗奠定了基础。展开更多
文摘目的在大肠杆菌中提高粉尘螨1类变应原(Der f 1)的可溶性表达。方法用RT-PCR方法扩增得到Der f 1的全长序列与成熟肽序列(mDer f 1);以已知Der p 5基因的前导序列替换Der f 1前导序列和原酶序列,重新构建出rDer f 1基因;将上述3个基因分别克隆入原核表达载体pGEX-4T-1中表达,经Western-blot对三者的表达产物进行分析鉴定。结果Western-blot表明,pGEX-Der f 1与pGEX-mDer f 1的表达产物分别为分子量约63 000与51 000的重组蛋白质,重组蛋白质主要存在于细胞裂解液的沉淀中。pGEX-rDer f 1大量表达了可溶性目的蛋白质,分子量约53 000,并被成功地分离纯化。以上三种表达产物均可被鼠抗GST抗体与螨过敏患者血清特异地识别。结论表达了含Der f 1,mDer f 1与rDer f 1的三种GST融合蛋白质,它们均具免疫反应性,纯化获得了GST-rDer f 1融合蛋白质,为后期的诊断及治疗奠定了基础。
