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杆菌肽发酵过程中用毛细管电泳研究氨基酸代谢 被引量：5
1
作者 林纲 申克宇 +1 位作者 赵文杰 蒋家琛 《中国医药工业杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期515-518,共4页
应用毛细管电泳技术研究了杆菌肽发酵过程中游离氨基酸含量的动态变化及与发酵效价间的关系,并分析了杆菌肽发酵过程中的部分代谢流方向和规律。结果显示,在高浓度有机氮源的发酵培养基中,菌体代谢的EMP途径从3-PG向PEP转化过程的抑制... 应用毛细管电泳技术研究了杆菌肽发酵过程中游离氨基酸含量的动态变化及与发酵效价间的关系,并分析了杆菌肽发酵过程中的部分代谢流方向和规律。结果显示,在高浓度有机氮源的发酵培养基中,菌体代谢的EMP途径从3-PG向PEP转化过程的抑制被解除,同时TCA循环得到加强,这种有利的变化以及添加适量外源Lys,可以促进发酵前期菌体细胞的TCA循环通量,皆可提高发酵效价。 展开更多
关键词 毛细管电泳 杆菌肽 氨基酸 代谢
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重组L-门冬酰胺酶工程菌的表达和PEG的化学修饰 被引量：2
2
作者 曹荣月 申克宇 +2 位作者 王学军 凤姣 刘景晶 《生物学杂志》 CAS CSCD 2005年第3期8-10,共3页
目的提高重组L-门冬酰胺酶(rL-ASP)工程菌的表达量,分离纯化rL-ASP并对之进行PEG化学修饰。方法将带有编码rL-ASP的基因的质粒(pKA)导入不同的宿主菌中,挑出高表达菌株,同时优化发酵培养基,分离纯化获得的高纯度rL-ASP再用PEG进行化学修... 目的提高重组L-门冬酰胺酶(rL-ASP)工程菌的表达量,分离纯化rL-ASP并对之进行PEG化学修饰。方法将带有编码rL-ASP的基因的质粒(pKA)导入不同的宿主菌中,挑出高表达菌株,同时优化发酵培养基,分离纯化获得的高纯度rL-ASP再用PEG进行化学修饰,SDS-PAGE检测修饰效果。结果在pH7.0的条件下,宿主菌为JMl09的工程菌pKA/JMl09酶活力最高,三角瓶振摇培养的酶活力可达216×103IU/L;发酵罐发酵培养,酶活力达312×103IU/L。纯化后的rL-ASP比活力为220IU/mg,rL-ASP经过PEG化学修饰生成rL-ASP-PEG,分子量发生改变。结论改变目标蛋白表达的宿主菌和优化发酵工艺,提高了rL-ASP的表达量,纯化的rL-ASP经过PEG化学修饰后分子量增大。 展开更多
关键词 发酵 重组L-门冬酰胺酶 聚乙二醇 化学修饰
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聚乙二醇化学修饰的重组L-门冬酰胺酶对小鼠白血病细胞P_(388)的抑制作用
3
作者 曹荣月 钱之玉 +2 位作者 竞永华 申克宇 刘景晶 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2004年第6期628-632,共5页
目的 :考察聚乙二醇 (polyethyleneglycol,PEG)化学修饰的重组L 门冬酰胺酶 (recombinantL asparaginase ,rL ASP)的抗肿瘤活性。方法 :PEG化学修饰rL ASP ,获得的化学修饰酶 (polyethylenegly colmodifiedrecombinantL asparaginase ,r... 目的 :考察聚乙二醇 (polyethyleneglycol,PEG)化学修饰的重组L 门冬酰胺酶 (recombinantL asparaginase ,rL ASP)的抗肿瘤活性。方法 :PEG化学修饰rL ASP ,获得的化学修饰酶 (polyethylenegly colmodifiedrecombinantL asparaginase ,rL ASP PEG)利用十二烷基硫酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳法 (sodi umdodecylsulfatepolyacrylamidegelelectrophoresis ,SDS PAGE)观察其分子大小变化 ,四甲基偶氮唑盐(3 (4 ,4 dimcthylthioazol 2 yl) 2 ,5 diphenyl tetrazoliumbromide ,MTT)法和流式细胞仪 (flowcytometer,FCM )检测rL ASP PEG对体外培养的小鼠白血病细胞P3 3 8增殖作用的抑制作用 ,腹腔给药考察rL ASP PEG对小鼠移植性实体瘤P3 3 8抑瘤效果 ,透射电镜(transmissionelectronmicroscopy ,TEM )观察rL ASP PEG引起的肿瘤组织超微病理变化。结果 :SDS PAGE显示 ,rL ASP PEG的分子量大于rL ASP ;MTT实验表明 ,rL ASP PEG能抑制体外培养的小鼠P3 88白血病细胞的增殖 ,半数有效浓度 (inhibitoryconcen tration 5 0 % ,IC50 )为 2 .0 5 6IU·ml-1。FCM结果表明 ,rL ASP PEG主要将肿瘤细胞P3 88抑制在G0 +G1期 ,S期细胞减少。DBA 2荷瘤小鼠的抑瘤实验表明rL ASP PEG对移植性实体瘤P3 3 8有显著抑制作用 。 展开更多
关键词 重组L-门冬酰胺酶 聚乙二醇 肿瘤抑制 化学修饰 半数有效浓度 白血病 十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法
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高效液相色谱-蒸发光散射检测法直接检测20种未衍生基本氨基酸 被引量：31
4
作者 王玉红 申克宇 +2 位作者 李鹏 周君裔 阎超 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期908-911,共4页
应用国产蒸发光散射检测器(ELSD),建立了一种采用反相高效液相色谱-蒸发光散射检测器(RHPLC-ELSD)直接测定20种未衍生基本氨基酸的分析方法,并将其用于氨基酸注射液中氨基酸含量的测定。采用BISCHOFFTMC18 AQ PLUS色谱柱(250 mm×4.... 应用国产蒸发光散射检测器(ELSD),建立了一种采用反相高效液相色谱-蒸发光散射检测器(RHPLC-ELSD)直接测定20种未衍生基本氨基酸的分析方法,并将其用于氨基酸注射液中氨基酸含量的测定。采用BISCHOFFTMC18 AQ PLUS色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm)分离,以甲醇-0.2%七氟丁酸溶液(含0.1%三氟乙酸)为流动相进行梯度洗脱,流速0.8 mL/min,ELSD飘移管温度40℃,载气流量2.5 L/min,对20种基本氨基酸进行分离检测。氨基酸的质量浓度在30～300 mg/L范围内,其峰面积的对数值与进样质量的对数值呈良好的线性关系;氨基酸的检出限(信噪比(S/N)>3)介于24～100 ng之间,样品加标回收率为90.6%～106.0%。结果表明,该系统及方法操作简便快速、准确可靠,无需依靠专门的氨基酸分析仪或衍生处理氨基酸即可直接测定氨基酸注射液中氨基酸含量,为药品、食品及化工生产等领域混合氨基酸样品的直接检测提供了参考。 展开更多
关键词 反相高效液相色谱 蒸发光散射检测 未衍生化氨基酸 氨基酸 注射液
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