原代肝实质细胞被广泛应用到药物代谢和毒性评估中,但其体外培养呈现去分化状态,表现为逐渐失去正常形态和代谢解毒功能,到目前为止对去分化的分子机制并不清楚。在肝实质细胞体外去分化过程中转录因子(Transcription factor,TF)起重要...原代肝实质细胞被广泛应用到药物代谢和毒性评估中,但其体外培养呈现去分化状态,表现为逐渐失去正常形态和代谢解毒功能,到目前为止对去分化的分子机制并不清楚。在肝实质细胞体外去分化过程中转录因子(Transcription factor,TF)起重要作用,而且非实质细胞可以在体外维持肝实质细胞功能。然而目前的技术手段不能有效地鉴定和定量分析大量TFs。本文建立了单层肝实质细胞单独培养以及肝实质细胞与非实质细胞共培养系统,细胞培养到24、48、72 h。利用TF富集技术(Transcription factor response elements on tip,TOT)和质谱技术研究在肝实质细胞体外培养过程中TFs变化。本研究3次重复实验共鉴定到219个TFs,分析发现肝实质细胞培养过程中与细胞增殖、死亡、免疫等通路相关的TFs表达增高,而与代谢通路相关的TFs表达减弱。我们建立的肝细胞培养-TFs鉴定系统对揭示肝实质细胞去分化的分子机制以及肝实质与非实质细胞间相互作用具有重要意义。展开更多
文摘原代肝实质细胞被广泛应用到药物代谢和毒性评估中,但其体外培养呈现去分化状态,表现为逐渐失去正常形态和代谢解毒功能,到目前为止对去分化的分子机制并不清楚。在肝实质细胞体外去分化过程中转录因子(Transcription factor,TF)起重要作用,而且非实质细胞可以在体外维持肝实质细胞功能。然而目前的技术手段不能有效地鉴定和定量分析大量TFs。本文建立了单层肝实质细胞单独培养以及肝实质细胞与非实质细胞共培养系统,细胞培养到24、48、72 h。利用TF富集技术(Transcription factor response elements on tip,TOT)和质谱技术研究在肝实质细胞体外培养过程中TFs变化。本研究3次重复实验共鉴定到219个TFs,分析发现肝实质细胞培养过程中与细胞增殖、死亡、免疫等通路相关的TFs表达增高,而与代谢通路相关的TFs表达减弱。我们建立的肝细胞培养-TFs鉴定系统对揭示肝实质细胞去分化的分子机制以及肝实质与非实质细胞间相互作用具有重要意义。
