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石达:中美家具反倾销案的启示
1
作者 石达 《中国对外贸易》 2005年第11期66-67,共2页
关键词 木制卧室家具 反倾销案 中美 家具企业 出口数据 涉案金额 中国外贸 家具出口 税率 初裁
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猪病毒性腹泻有效防控——生猪产业无法回避的现实问题
2
作者 冯力 石达 《猪业科学》 2024年第4期40-43,共4页
猪病毒性腹泻并不是一种传染病,而是一大类感染消化道病毒病的统称,因其临床症状均导致腹泻而得来,其病源包括4种猪肠道冠状病毒和猪轮状病毒(PoRV)。猪肠道冠状病毒主要包括猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪德尔... 猪病毒性腹泻并不是一种传染病,而是一大类感染消化道病毒病的统称,因其临床症状均导致腹泻而得来,其病源包括4种猪肠道冠状病毒和猪轮状病毒(PoRV)。猪肠道冠状病毒主要包括猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)和新发的猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)。 展开更多
关键词 猪病毒性腹泻 猪肠道 猪德尔塔冠状病毒 生猪产业 有效防控 腹泻综合征 临床症状 病毒病
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猪急性腹泻综合征冠状病毒诱导细胞自噬并增强病毒复制的研究 被引量：3
3
作者 曾苗苗 刘大凯 +8 位作者 张记宇 张燎原 冯廷帅 杨小曼 时洪艳 张鑫 陈建飞 石达 冯力 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期61-69,共9页
为研究猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)感染细胞是否诱导自噬及自噬对病毒复制的影响,本研究将SADS-CoV(MOI 0.1)接种Vero E6细胞培养36 h后,经透射电子显微镜观察可见,SADS-CoV感染的细胞中出现了包裹胞浆的自噬体样双层膜结构,证... 为研究猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)感染细胞是否诱导自噬及自噬对病毒复制的影响,本研究将SADS-CoV(MOI 0.1)接种Vero E6细胞培养36 h后,经透射电子显微镜观察可见,SADS-CoV感染的细胞中出现了包裹胞浆的自噬体样双层膜结构,证实SADS-CoV可以诱导Vero E6细胞发生自噬。构建pEGFP-LC3的真核表达质粒并经双酶切及测序鉴定正确后转染Vero E6细胞,24 h后以SADS-CoV感染,24 h后经激光共聚焦显微镜观察可见,与阴性对照组细胞相比,感染SADS-CoV的细胞出现绿色荧光的点状聚集。进一步将SADS-CoV(MOI 0.1)感染Vero E6细胞不同时间后通过western blot检测自噬相关蛋白LC3-Ⅱ和p62表达水平的变化,结果显示,与阴性对照组相比,SADS-CoV感染组LC3-Ⅱ的表达水平升高,LC3-Ⅱ/GAPDH比值呈上升趋势,而p62蛋白表达水平则显著降低(P<0.05),表明SADS-CoV感染能够诱导Vero E6细胞产生完整的自噬应答。为了探究自噬对病毒复制的影响,本研究分别采用自噬抑制剂3-MA和自噬诱导剂Rapamycin处理Vero E6细胞后以SADS-CoV感染,于感染后不同时间收获细胞,通过western blot和病毒滴度(TCID_(50))测定检测SADS-CoV N蛋白表达水平的变化。结果显示,与仅感染病毒的对照组相比,采用3-MA处理Vero E6细胞后SADS-CoV N蛋白的表达水平及TCID_(50)均显著降低(P<0.05),而采用Rapamycin处理后SADS-CoV N蛋白的表达水平及TCID_(50)则均显著升高(P<0.05)。针对ATG5基因设计3条特异性的ATG5 si RNA(siATG5-1/2/3),将干扰效率较好的siATG5-1转染Vero E6细胞后再以SADS-CoV感染,24 h后检测病毒滴度并利用western blot检测SADS-CoV N蛋白表达水平的变化。结果显示,与未转染siATG5的3组阴性细胞相比,转染细胞中SADS-CoV N蛋白的表达水平及病毒滴度均显著降低(P<0.05)。本研究首次表明SADS-CoV感染可以诱导宿主细胞自噬并促进病毒的复制,该结果为深入研究SADS-CoV感染与其致病机理以及防控该病毒的感染奠定了基础。 展开更多
关键词 猪急性腹泻综合征冠状病毒 自噬 病毒复制 LC3-Ⅱ
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猪急性腹泻综合征冠状病毒S蛋白多克隆抗体的制备及在检测该病毒感染中的应用 被引量：1
4
作者 刘大凯 韩郁茹 +8 位作者 张记宇 张燎原 冯廷帅 杨小曼 曾苗苗 时洪艳 秦毅斌 石达 冯力 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期499-504,共6页
为制备猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)纤突蛋白(S)的多克隆抗体(PAb),本研究经PCR扩增SADS-Co V S蛋白S1亚基C端结构域(S1-CTD)基因片段(384 bp),并将其克隆至原核表达载体p GEX-6p-1中,构建重组质粒p GEX-6p-1-S1-CTD,经双酶切和... 为制备猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)纤突蛋白(S)的多克隆抗体(PAb),本研究经PCR扩增SADS-Co V S蛋白S1亚基C端结构域(S1-CTD)基因片段(384 bp),并将其克隆至原核表达载体p GEX-6p-1中,构建重组质粒p GEX-6p-1-S1-CTD,经双酶切和测序鉴定正确后,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,利用IPTG诱导表达,通过western blot鉴定重组S1-CTD蛋白(rS1-CTD)的表达及反应原性。结果显示,r S1-CTD以包涵体的形式表达,在40 ku处出现特异性条带。诱导表达后的r S1-CTD经不同浓度尿素重悬并超声离心,SDS-PAGE检测后切胶纯化,得到纯化的重组蛋白。利用BCA试剂盒测得蛋白的浓度为33μg/m L。将该重组蛋白乳化后经3次免疫新西兰大白兔,并在3免一周后采血,分离血清获得S1-CTD蛋白PAb。将SADS-Co V感染Vero E6细胞24 h后,以获得的兔PAb为一抗,分别采用western blot和间接免疫荧光试验(IFA)检测该PAb的反应原性。Western blot结果显示,在约250 ku处出现特异性条带,而阴性对照组无该条带;IFA结果显示,SADS-Co V感染的细胞中出现绿色荧光,而阴性对照细胞无绿色荧光。将SADS-Co V感染仔猪的回肠组织制备病理切片,以制备的PAb为一抗,通过免疫组织化学(IHC)检测SADS-Co V的抗原。结果显示,该组织切片中出现棕色阳性信号,而阴性对照仔猪回肠组织切片则无该棕色信号。表明该PAb可与感染SADS-Co V的仔猪回肠组织中的相应抗原发生特异性免疫反应。综上所述,本实验制备的S1-CTD蛋白PAb具有良好的反应原性和免疫原性,可以用于western blot、IFA、IHC检测体内外SADS-Co V的感染,为后续SADS-Co V检测方法的建立及S蛋白生物学功能的研究奠定基础。 展开更多
关键词 猪急性腹泻综合征冠状病毒 S蛋白 原核表达 多克隆抗体 初步应用
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猪急性腹泻综合征冠状病毒S1蛋白抗体间接ELISA检测方法的建立
5
作者 杨小曼 时洪艳 +8 位作者 张燎原 张鑫 张记宇 刘大凯 冯廷帅 曾苗苗 陈建飞 石达 冯力 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期608-613,共6页
为建立猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)S1蛋白抗体的间接ELISA检测方法,本研究通过构建重组真核分泌型表达质粒p CAGGS-S1-His并转染HEK293F悬浮细胞进行可溶性表达S1蛋白。转染重组质粒5 d后的细胞上清利用HisTrapTMExcel亲和层析... 为建立猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)S1蛋白抗体的间接ELISA检测方法,本研究通过构建重组真核分泌型表达质粒p CAGGS-S1-His并转染HEK293F悬浮细胞进行可溶性表达S1蛋白。转染重组质粒5 d后的细胞上清利用HisTrapTMExcel亲和层析柱纯化,浓缩后的蛋白经SDS-PAGE、western blot鉴定显示获得了分子量约为130 ku且大于理论大小的重组S1蛋白,表明该蛋白为分泌表达且具有良好的翻译后修饰。利用获得的重组S1蛋白作为包被抗原,通过优化反应条件,初步建立了SADS-CoV S1蛋白抗体的间接ELISA检测方法。该方法与猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)、猪轮状病毒(PoRV)和猪圆环病毒2型(PCV2)阳性血清均无交叉反应,仅与SADS-CoV阳性血清反应,表明该方法特异性较强;该方法检测SADS-CoV阳性血清,当稀释至1:3 200时仍为阳性,表明该方法具有较高的敏感性;对4份阳性血清的批内和批间重复性试验的变异系数均小于10%,表明该方法具有良好的重复性和稳定性;利用该方法和间接免疫荧光试验(IFA)对50份临床样品检测,结果显示该间接ELISA检测到9份阳性样品,41份阴性样品;IFA检出5份阳性样品,45份阴性样品,二者的总符合率为92%。综上表明,本研究建立的间接ELISA检测方法能够特异、灵敏地检测SADS-CoV S1蛋白抗体,可以用于SADS-CoV灭活疫苗的免疫效果评价以及该病原的血清学流行病学调查和免疫水平监测,为SADS-CoV所致疫病的鉴别诊断和防控奠定基础。 展开更多
关键词 猪急性腹泻综合征冠状病毒 S1蛋白 间接ELISA方法 抗体检测
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猪流行性腹泻病毒N蛋白与Vero E6核仁蛋白Fibrillarin的亚细胞定位分析 被引量：2
6
作者 石达 陈建飞 +2 位作者 时洪艳 张志榜 冯力 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期833-836,共4页
为鉴定猪流行性腹泻病毒(PEDV)核衣壳蛋白(N)与Vero E6细胞核仁fibrillarin蛋白的亚细胞定位的特征。本实验参照GenBank中人细胞fibrillarin基因(M59849.1)序列,设计并合成特异性引物,利用RT-PCR方法扩增了Vero E6细胞的fibrillarin基因... 为鉴定猪流行性腹泻病毒(PEDV)核衣壳蛋白(N)与Vero E6细胞核仁fibrillarin蛋白的亚细胞定位的特征。本实验参照GenBank中人细胞fibrillarin基因(M59849.1)序列,设计并合成特异性引物,利用RT-PCR方法扩增了Vero E6细胞的fibrillarin基因,并将其克隆于真核表达载体pDsRed2-N1中,构建重组质粒pDsRed-Fib。将pDsRed-Fib与本实验室构建的含有PEDV N基因的重组质粒pAcGFP-N,共转染Vero E6细胞。Western blot结果表明fibrillarin及N融合蛋白在转染的Vero E6细胞中均获得表达;利用共聚焦显微镜观察显示在共转染VeroE6细胞中PEDV N蛋白与Vero E6细胞核仁中的fibrillarin发生共定位。该结果为进一步研究PEDV和核仁蛋白相互作用奠定基础。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 核衣壳蛋白 纤维蛋白 共定位
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开放性喉外伤急诊救治及临床分析 被引量：3
7
作者 石达 刘长益 +1 位作者 胡波 王虎 《海南医学院学报》 CAS 2010年第6期755-756,759,共3页
目的:探讨开放性喉外伤的急诊救治、手术处理方法。方法:回顾性分析开放性喉外伤28例患者的临床资料。结果:28例全部急诊手术治疗,1例患者在抢救中合并心肺功能衰竭死亡,其余27例患者临床治愈后随访6个月以上。27例患者中有25例患者术... 目的:探讨开放性喉外伤的急诊救治、手术处理方法。方法:回顾性分析开放性喉外伤28例患者的临床资料。结果:28例全部急诊手术治疗,1例患者在抢救中合并心肺功能衰竭死亡,其余27例患者临床治愈后随访6个月以上。27例患者中有25例患者术后发音恢复正常,其中有2例术后发生咽瘘,1例术后发生气管食管瘘,经进一步处理瘘道愈合,无声音嘶哑。另有2例患者术后发生喉狭窄,再次手术后喉狭窄治愈,但声音仍嘶哑。结论:在开放性喉外伤的急诊救治过程中,应尽量抢救生命,最大限度保留、恢复喉功能和防止并发症的发生。 展开更多
关键词 开放性喉外伤 急诊 外科手术
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鼻内镜下电凝止血治疗鼻后部出血59例 被引量：4
8
作者 石达 刘长益 +1 位作者 胡波 王虎 《中国眼耳鼻喉科杂志》 2010年第5期321-321,共1页
关键词 鼻后部出血 双极电凝治疗 止血治疗 鼻内镜下 难治性鼻出血 上呼吸道感染 出血患者 2009年
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猪流行性腹泻病毒蛋白对Vero E6核蛋白B23.1的影响 被引量：1
9
作者 石达 吕茂杰 +3 位作者 陈建飞 时红艳 张志榜 冯力 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2012年第4期21-23,I0003,共4页
为了解猪流行性腹泻病毒(PEDV)核蛋白N对Vero E6细胞核仁蛋白B23.1的影响,将本实验室构建的DsRed-N1/B23.1重组质粒转染Vero E6细胞,转染6h后接种PEDV,分别在转染后12、18h和24h三个时间点,进行病毒感染细胞的间接免疫试验,同时设未感... 为了解猪流行性腹泻病毒(PEDV)核蛋白N对Vero E6细胞核仁蛋白B23.1的影响,将本实验室构建的DsRed-N1/B23.1重组质粒转染Vero E6细胞,转染6h后接种PEDV,分别在转染后12、18h和24h三个时间点,进行病毒感染细胞的间接免疫试验,同时设未感染对照组,而后利用激光共聚焦显微镜分析感染和转染细胞中B23.1蛋白的变化。结果表明,PEDV N蛋白与Vero E6核蛋白B23.1有共定位特征,在PEDV感染Vero E6细胞12h后,B23.1蛋白开始发生变化,随着时间的延长逐渐碎裂、分散。这个结果提示,病毒可能通过破坏核仁的结构和核仁蛋白的功能,进而为病毒的复制提供便利。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 核衣壳蛋白 VeroE6细胞 核蛋白B23.1
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鼻内镜下电凝止血术治疗难治性鼻出血临床观察 被引量：5
10
作者 石达 刘长益 +1 位作者 王虎 江月成 《中国中西医结合耳鼻咽喉科杂志》 2011年第4期277-278,共2页
目的总结鼻内镜下双极电凝止血术治疗反复鼻出血的临床经验。方法回顾性分析2004年9月～2009年9月我科采用经鼻内镜引导下双极电凝治疗50例难治性鼻出血的临床资料。结果本组50例难治性鼻出血患者均在鼻内镜下找到出血部位,以出院后1月... 目的总结鼻内镜下双极电凝止血术治疗反复鼻出血的临床经验。方法回顾性分析2004年9月～2009年9月我科采用经鼻内镜引导下双极电凝治疗50例难治性鼻出血的临床资料。结果本组50例难治性鼻出血患者均在鼻内镜下找到出血部位,以出院后1月内未再次出血作为治愈标准,1次性治愈48例,2次治愈2例,总有效率100%。结论鼻内镜下治疗难治性鼻出血具有视野清晰、出血部位明确、止血迅速、疗效确切、术后反应轻等优点,提高了鼻出血治疗的效果和质量。 展开更多
关键词 鼻内镜 电凝止血术 难治性鼻出血
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开放性喉外伤急诊喉重建手术及临床分析 被引量：2
11
作者 石达 王虎 +1 位作者 江月成 罗将 《中国中西医结合耳鼻咽喉科杂志》 2016年第2期115-116,共2页
目的探讨开放性喉外伤的准确诊断与急诊处理方法。方法回顾性分析开放性喉外伤急诊患者17例的临床诊疗资料,总结其临床特点及诊疗经验。结果 17例患者均采用了急诊重建手术。术后12例发音恢复正常;2例发生术后咽瘘,1例发生术后气管食管... 目的探讨开放性喉外伤的准确诊断与急诊处理方法。方法回顾性分析开放性喉外伤急诊患者17例的临床诊疗资料,总结其临床特点及诊疗经验。结果 17例患者均采用了急诊重建手术。术后12例发音恢复正常;2例发生术后咽瘘,1例发生术后气管食管瘘,经进一步处理后瘘道均愈合,无声音嘶哑;1例术后发生喉狭窄,再次手术后喉狭窄治愈,单遗留术后声音嘶哑;1例患者因伤势过重而死亡。结论在开放性喉外伤的急诊期即应尽抢救,最大限度保留或恢复喉功能,防止并发症。 展开更多
关键词 开放性喉外伤 急诊治疗 喉重建 功能保留
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Vero细胞nucleolin和fibrillarin基因的克隆及序列分析
12
作者 石达 陈建飞 +7 位作者 时红艳 王洪峰 张鑫 刘孝珍 张莎 刘随心 王璐 冯力 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期830-832,共3页
为克隆及分析Vero细胞的nucleolin和fibrillarin基因,本研究根据人类的相关基因设计两对引物,从Vero E6细胞中扩增nucleolin和fibrillarin基因。测序结果显示nucleolin基因序列长度为2 139 bp,编码712个氨基酸;fibrillarin基因序列长度... 为克隆及分析Vero细胞的nucleolin和fibrillarin基因,本研究根据人类的相关基因设计两对引物,从Vero E6细胞中扩增nucleolin和fibrillarin基因。测序结果显示nucleolin基因序列长度为2 139 bp,编码712个氨基酸;fibrillarin基因序列长度为969 bp,编码322个氨基酸。与GenBank中登录的人类相应序列相似性高达97%,处于同一进化分支,表明该基因具有种属特异性并且保守性很高;同时利用软件对nucleolin和fibrillarin预测蛋白进行了生物信息学分析,从而为研究冠状病毒核蛋白与核仁蛋白相互作用奠定了基础。 展开更多
关键词 核仁素 纤维蛋白 克隆 序列分析
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CO_2激光显微手术与喉内镜下常规手术在声带息肉切除术中的疗效差异分析 被引量：2
13
作者 石达 《中外医疗》 2018年第36期1-3,共3页
目的探索激光显微手术与喉内镜下常规手术在声带息肉切除术中的疗效差异。方法方便收集该院2015年2月—2018年2月声带息肉患者62例。随机分为研究组和对照组,各31例。研究组采用CO_2激光显微手术,对照组采用喉内镜下常规手术。然后对两... 目的探索激光显微手术与喉内镜下常规手术在声带息肉切除术中的疗效差异。方法方便收集该院2015年2月—2018年2月声带息肉患者62例。随机分为研究组和对照组,各31例。研究组采用CO_2激光显微手术,对照组采用喉内镜下常规手术。然后对两组患者进行电子喉镜、频闪喉镜检查。分析两组患者术前、术后1周、术后1个月和3个月的VHI主观评分、GRBAS、客观嗓音。结果术后1周研究组的嘶哑度是(2.1±0.6),术后1周对照组的嘶哑度是(1.6±0.8)。术后1周对照组的嘶哑度低于研究组,差异有统计学意义(t=2.784,P<0.05);术后1个月研究组的基频微扰百分比、基频扰动商、振幅微扰百分比分别是(3.2±0.6)%、(1.3±0.5)%、(3.3±0.4)%。术后1个月对照组的基频微扰百分比、基频扰动商、振幅微扰百分比分别是(3.2±0.6)%、(1.3±0.6)%、(3.6±0.9)%。研究组和对照组患者术后1个月的基频微扰百分比、基频扰动商、振幅微扰百分比差异无统计学意义(t=0.000,P>0.05;t=0.000,P>0.05;t=1.696,P>0.05)。结论 CO_2激光喉显微手术治疗声带息肉疗效优于喉内镜下常规手术。 展开更多
关键词 声带息肉 CO2激光显微手术 疗效
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抗生素耳浴联合臭氧治疗对慢性化脓性中耳炎患者听力恢复及治疗后复发率的影响 被引量：3
14
作者 石达 《中国处方药》 2018年第4期54-55,共2页
目的探讨抗生素耳浴联合臭氧治疗对慢性化脓性中耳炎患者听力恢复及治疗后复发率的影响。方法选取2015年6月~2016年8月收入耳鼻喉科的慢性化脓性中耳炎患者100例为研究对象,随机分为研究组和对照组,每组50例,对照组采用氧氟沙星滴耳液... 目的探讨抗生素耳浴联合臭氧治疗对慢性化脓性中耳炎患者听力恢复及治疗后复发率的影响。方法选取2015年6月~2016年8月收入耳鼻喉科的慢性化脓性中耳炎患者100例为研究对象,随机分为研究组和对照组,每组50例,对照组采用氧氟沙星滴耳液进行耳浴,研究组在对照组基础上给予臭氧治疗,比较两组患者的治疗效果,听力恢复情况及复发情况。结果研究组的总有效率显著高于对照组,差异具有统计学意义(χ~2=13.02,P=0.005)。治疗后,两组患者的细菌培养阳性率显著降低,且研究组显著低于对照组,差异具有统计学意义(χ~2=6.49,P=0.000)。研究组患者的骨导听阈和气导听阈降低值均显著大于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论氧氟沙星耳浴联合臭氧治疗慢性化脓性中耳炎具有良好的临床疗效,可以显著改善患者的听力恢复情况。 展开更多
关键词 慢性化脓性中耳炎 抗生素耳浴 臭氧 听力恢复 复发
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鼻内镜外科技术在治疗鼻-鼻窦内翻性乳头状瘤临床应用
15
作者 石达 刘长益 +1 位作者 胡波 王虎 《医学信息（内.外科版）》 2009年第10期939-940,共2页
采用鼻内镜外科治疗鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤25例,观察其临床疗效。随访12～24个月,25例患者中治愈21例(84%),复发4例(16%),其中1例位于额隐窝、3例位于后组筛窦,鼻内镜下将复发肿瘤组织全部切除,随访跟踪1年无复发。认为鼻内镜手术治疗... 采用鼻内镜外科治疗鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤25例,观察其临床疗效。随访12～24个月,25例患者中治愈21例(84%),复发4例(16%),其中1例位于额隐窝、3例位于后组筛窦,鼻内镜下将复发肿瘤组织全部切除,随访跟踪1年无复发。认为鼻内镜手术治疗鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤是一种有效的方法,对肿瘤广泛侵犯上颌窦者应联合柯陆径路效果更佳。 展开更多
关键词 鼻内镜外科技术 内翻性乳头状瘤 鼻良性肿瘤
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国内首株猪德尔塔冠状病毒(Porcine deltacoronavirus)的分离鉴定 被引量：51
16
作者 陈建飞 王潇博 +5 位作者 焦贺勋 时洪艳 张鑫 刘建波 石达 冯力 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期171-174,共4页
猪德尔塔冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)是一种新出现的猪冠状病毒,于2012年首次在香港的猪群中发现。2014年2月美国在腹泻仔猪和母猪的粪便中首次检测到PDCoV,随后,韩国和我国大陆也从腹泻猪的临床样品中检测到PDCoV。目前... 猪德尔塔冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)是一种新出现的猪冠状病毒,于2012年首次在香港的猪群中发现。2014年2月美国在腹泻仔猪和母猪的粪便中首次检测到PDCoV,随后,韩国和我国大陆也从腹泻猪的临床样品中检测到PDCoV。目前,只有美国成功分离到2株PDCoV。为分离鉴定PDCoV,本研究将PDCoV阳性样品无菌处理后接种猪肾细胞(LLC-PK)并连续传代培养。通过细胞病变、RT-PCR、间接免疫荧光和基因序列测定对细胞培养物进行鉴定。结果表明我们成功分离到国内首株PDCoV并将其命名为NH株。M基因的系统发育分析表明NH株与中国、美国及韩国的PDCoV亲源关系较近。本研究为进一步研究PDCoV的致病性和致病机制奠定了基础。 展开更多
关键词 猪德尔塔冠状病毒 细胞培养 分离 鉴定
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2011年猪流行性腹泻病毒的遗传变异分析 被引量：95
17
作者 刘孝珍 陈建飞 +4 位作者 时洪艳 张鑫 石达 刘胜旺 冯力 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期180-183,共4页
为分析猪流行性腹泻病毒(PEDV)的遗传变异情况,本研究设计合成2对扩增S1基因的引物,利用套式RT-PCR方法,对2011年分离的17个PEDV S1基因进行扩增、克隆和序列测定;并将其进行比对和遗传演化分析。结果表明:17个PEDV S1基因序列与参考病... 为分析猪流行性腹泻病毒(PEDV)的遗传变异情况,本研究设计合成2对扩增S1基因的引物,利用套式RT-PCR方法,对2011年分离的17个PEDV S1基因进行扩增、克隆和序列测定;并将其进行比对和遗传演化分析。结果表明:17个PEDV S1基因序列与参考病毒株S1基因核苷酸序列同源性为90.54%～99.96%,与经典病毒株CV777相比,其中有6个S1基因在453 bp～454 bp处存在3个核苷酸的缺失;一个在453 bp～454 bp处缺失6个核苷酸;其它10个S1基因在173 bp～186 bp之间存在12个核苷酸的插入,413 bp～417 bp之间有3个核苷酸的插入,467 bp～468 bp处缺失6个核苷酸,插入和缺失位点与韩国病毒株KNU-0901、KNU-0905、KNU-0801相似。S1基因系统进化树分析表明,PEDV S1基因分为3群,其中7个S1基因属于PEDVⅠ群,另外10个属于PEDVⅢ群。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 遗传变异 S1基因
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2011年～2012年G9型猪轮状病毒流行病学调查及VP7基因遗传进化分析 被引量：13
18
作者 王璐 时洪艳 +6 位作者 陈建飞 张鑫 史楠 石达 刘随新 张莎 冯力 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期276-279,共4页
为分析G9型猪轮状病毒(RV)的遗传变异情况,本研究根据GenBank中VP7序列设计合成一对扩增VP7基因的引物,采用PCR方法对2011年～2012年分离的部分RV VP7基因进行扩增、克隆和序列测定,并进行比对和遗传进化分析。结果表明:531份病料中RV... 为分析G9型猪轮状病毒(RV)的遗传变异情况,本研究根据GenBank中VP7序列设计合成一对扩增VP7基因的引物,采用PCR方法对2011年～2012年分离的部分RV VP7基因进行扩增、克隆和序列测定,并进行比对和遗传进化分析。结果表明:531份病料中RV阳性份数为39,阳性率为7.34%;而在检测的121个猪场中,共有23个猪场显示阳性,猪场阳性率为19%。VP7基因全长1 062 bp,含有一个982 bp的开放阅读框,编码326个氨基酸。与参考病毒株VP7全长基因核苷酸比较,同源性为91.5%～99.3%。在31 nt、56 nt、75 nt、82 nt、191 nt、215 nt等位置均存在点突变,无插入和缺失。核苷酸系统发育进化树表明:黑龙江省哈尔滨市、桦南、绥化,辽宁省大连市、内蒙古自治区采集病料样品的基因间差异较小,与采集自中国广西、浙江、贵州、北京的病料样品基因相比差异性较大,这表明VP7基因存在地域差异。 展开更多
关键词 轮状病毒 VP7基因 G9 遗传变异
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2012年猪嵴病毒流行病学调查及3D基因的遗传变异分析 被引量：11
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作者 张莎 石达 +7 位作者 陈建飞 时红艳 张鑫 刘孝珍 刘随新 王璐 陈洪岩 冯力 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期95-98,共4页
为了解猪嵴病毒(PKV)的流行及变异情况,本研究根据PKV的3D基因保守区域核苷酸序列设计一对特异性引物,并利用RT-PCR方法对2012年来自24个省市84个猪场的病料样品共计236份进行3D基因的检测。结果显示:在236份病料中,共有63份为PKV阳性,... 为了解猪嵴病毒(PKV)的流行及变异情况,本研究根据PKV的3D基因保守区域核苷酸序列设计一对特异性引物,并利用RT-PCR方法对2012年来自24个省市84个猪场的病料样品共计236份进行3D基因的检测。结果显示:在236份病料中,共有63份为PKV阳性,阳性率为36.69%;而在检测的84个猪场中,共有36个猪场显示PKV阳性,猪场阳性率为42.85%。此外,对2012年分离的9个PKV部分3D基因进行测序分析,并与GenBank中登录的人、牛、猪以及鼠等嵴病毒株相关序列进行遗传变异分析。结果表明9个PKV 3D基因与国内外其他PKV株无论是在核苷酸水平上还是在氨基端水平上均具有较高的同源性,表明PKV的3D基因具有较高的保守性,可以作为病原检测的靶基因。 展开更多
关键词 猪嵴病毒 流行病学调查 3D基因 遗传变异
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猪流行性腹泻病毒M蛋白单克隆抗体的制备及鉴定 被引量：10
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作者 张志榜 陈建飞 +4 位作者 时洪艳 杨斌 石达 陈小金 冯力 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期568-570,共3页
为制备猪流行性腹泻病毒(PEDV)抗M蛋白单克隆抗体(MAb),本研究以截短表达的His-M重组蛋白免疫BALB/c小鼠;以截短表达的GST-M重组蛋白作为包被抗原,采用常规的淋巴细胞杂交瘤技术制备杂交瘤细胞,通过间接ELISA进行筛选,得到一株稳定分泌... 为制备猪流行性腹泻病毒(PEDV)抗M蛋白单克隆抗体(MAb),本研究以截短表达的His-M重组蛋白免疫BALB/c小鼠;以截短表达的GST-M重组蛋白作为包被抗原,采用常规的淋巴细胞杂交瘤技术制备杂交瘤细胞,通过间接ELISA进行筛选,得到一株稳定分泌抗M蛋白MAb。MAb亚类鉴定为IgG2b型,轻链为κ链,杂交瘤细胞培养上清和诱导的小鼠腹水抗体效价分别为1∶3000和1∶2×105。Westernblot试验表明该MAb能够识别重组及天然的PEDVM蛋白。间接免疫荧光试验表明该MAb能够与PEDV感染的VeroE6细胞产生特异性免疫荧光。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 M蛋白 单克隆抗体
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