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XN-1000全自动血细胞分析仪体液模式检测性能验证 被引量：1
1
作者 高远梅 秦旖璐 《国际检验医学杂志》 CAS 2017年第12期1685-1687,共3页
目的对XN-1000全自动血细胞分析仪(XN-1000分析仪)体液模式检测性能进行验证。方法对XN-1000分析仪体液模式检测白细胞总数(WBC-BF)、红细胞总数(RBC-BF)、单个核细胞百分比(MN%)、多个核红细胞百分比(PMN%)进行性能验证,包括本底计数... 目的对XN-1000全自动血细胞分析仪(XN-1000分析仪)体液模式检测性能进行验证。方法对XN-1000分析仪体液模式检测白细胞总数(WBC-BF)、红细胞总数(RBC-BF)、单个核细胞百分比(MN%)、多个核红细胞百分比(PMN%)进行性能验证,包括本底计数、精密度、携带污染率、线性范围;与XT-4000i全自动血细胞分析仪和镜检法检测结果比较,验证准确度。结果稀释液WBC-BF、RBC-BF本底计数均为0.00。WBC-BF、RBC-BF检测携带污染率分别为0.1%、0.0%。WBC-BF、RBCBF检测变异系数分别为0.68%和2.50%。WBC-BF、RBC-BF、PMN%、MN%检测结果与镜检法检测结果的回归方程相关系数平方(R^2)分别为0.998 7、0.974 3、0.931 3和0.901 4。结论 XN-1000分析仪体液模式检测性能较好,可用于临床体液标本的检测。 展开更多
关键词 全自动血细胞分析仪 体液 性能评价
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GPER促进乳腺癌相关成纤维细胞的有氧糖酵解 被引量：1
2
作者 秦旖璐 余滕骅 +5 位作者 文思阳 彭美茜 赵茂嘉 刘水清 吴诚义 柳满然 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期1298-1303,共6页
为探讨GPER基因的活化对人乳腺癌相关成纤维细胞(CAF)有氧糖酵解的影响,本研究构建GPERsi RNA慢病毒,转染CAF细胞,以构建GPER敲低的稳定细胞系;对照组(CAF-shNC)和GPER-shRNA慢病毒感染组(CAF-shGPER组),经嘌呤霉素筛选后,实时荧光定量... 为探讨GPER基因的活化对人乳腺癌相关成纤维细胞(CAF)有氧糖酵解的影响,本研究构建GPERsi RNA慢病毒,转染CAF细胞,以构建GPER敲低的稳定细胞系;对照组(CAF-shNC)和GPER-shRNA慢病毒感染组(CAF-shGPER组),经嘌呤霉素筛选后,实时荧光定量PCR和蛋白印迹法检测GPER的m RNA及蛋白的表达;用GPER特异性激动剂G1 (1μmol/L)处理以上两组细胞,得到G1+CAF-shNC和G1+CAFsh GPER,应用蛋白印迹法分别检测以上4组细胞中GPER下游基因p-PKA和p-CREB的表达;采用实时荧光定量PCR和蛋白印迹法检测CREB糖酵解相关靶基因PDK4和LDHB的表达,应用葡萄糖、乳酸检测试剂盒检测4组细胞中葡萄糖消耗,乳酸生成情况。最终,成功构建GPER敲低的CAF稳定细胞系;GPER特异性激动剂G1可明显上调CAF-shNC组中GPER mRNA和蛋白水平;G1+CAF-shNC与CAF-shNC和G1+CAFsh GPER组相比,GPER下游基因PKA和CREB的磷酸化水平显著增加(p<0.05);CREB糖酵解相关靶基因PDK4和LDHB的mRNA和蛋白水平明显上调(p<0.05);葡萄糖消耗量和乳酸生成量明显增加(p<0.05)。由此可得,在人乳腺癌相关成纤维细胞中,GPER特异性激动剂G1活化GPER促进CAF的有氧糖酵解。 展开更多
关键词 人乳腺癌相关成纤维细胞 G蛋白偶联雌激素受体 有氧糖酵解
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Drosha通过调控微RNA-195-5P促进胃癌细胞的迁移和侵袭 被引量：2
3
作者 彭美茜 徐丽云 +5 位作者 杨丹 赵茂嘉 秦旖璐 刘水清 曾欢 柳满然 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期925-932,共8页
目的 :探讨Drosha对胃癌MGC-803和SGC-7901细胞迁移和侵袭能力的影响及其可能的作用机制。方法:将携带有Drosha-shRNA的重组慢病毒感染胃癌MGC-803和SGC-7901细胞,以感染携带有阴性对照(negative control,NC)-shRNA的重组慢病毒作为对... 目的 :探讨Drosha对胃癌MGC-803和SGC-7901细胞迁移和侵袭能力的影响及其可能的作用机制。方法:将携带有Drosha-shRNA的重组慢病毒感染胃癌MGC-803和SGC-7901细胞,以感染携带有阴性对照(negative control,NC)-shRNA的重组慢病毒作为对照。采用实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法检测转入Drosha-shRNA后对MGC-803和SGC-7901细胞中Drosha mRNA和蛋白表达的影响,Transwell小室迁移和侵袭实验分别检测Drosha下调对MGC-803和SGC-7901细胞迁移和侵袭能力的影响;实时荧光定量PCR检测Drosha下调的MGC-803和SGC-7901细胞中微RNA-195-5P(microRNA-195-5P,miR-195-5P)的表达水平。在Drosha下调的胃癌细胞中采用脂质体法同时转入miR-195-5P-inhibitor,实时荧光定量PCR检测miR-195-5P的下调效果,Transwell小室迁移和侵袭实验分别检测下调miR-195-5P表达对细胞迁移和侵袭能力的影响。采用脂质体法将miR-195-5P-mimics转染MGC-803和SGC-7901细胞,实时荧光定量PCR检测miR-195-5P过表达的效果,Transwell小室迁移和侵袭实验分别检测miR-195-5P过表达对胃癌细胞迁移和侵袭能力的影响。结果 :感染Drosha-shRNA重组慢病毒后,MGC-803和SGC-7901细胞中Drosha mRNA和蛋白表达水平均较对照组明显下调(P值均<0.01),细胞的迁移和侵袭能力均明显被抑制(P值均<0.05),miR-195-5P的表达水平明显上调(P值均<0.001)。成功在Drosha下调的胃癌MGC-803和SGC-7901细胞中下调miR-195-5P的表达水平(P值均<0.05),miR-195-5P表达下调可以恢复Drosha下调对胃癌细胞迁移和侵袭能力的影响(P值均<0.05)。成功将miR-195-5P-mimics瞬时转入MGC-803和SGC-7901细胞,MGC-803和SGC-7901细胞中miRNA-195-5P的表达水平明显上调(P值均<0.01),细胞的迁移和侵袭能力均明显降低(P值均<0.01)。结论 :Drosha可促进胃癌细胞的迁移和侵袭能力。Drosha与miR-195-5P的表达呈负相关性,Drosha通过调控miR-195-5P的表达促进胃癌细胞的迁移和侵袭。 展开更多
关键词 胃肿瘤 细胞运动 基因表达 DROSHA 微RNA-195-5P
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低氧下氧化型ATM通过胞内柠檬酸累积促进人乳腺癌细胞的迁移和侵袭 被引量：1
4
作者 万雪颖 彭美茜 +5 位作者 秦旖璐 朱鹏鹏 乔伊娜 杨丽萍 曾欢 柳满然 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2020年第5期785-793,共9页
该研究主要探讨低氧下共济失调毛细血管扩张突变(ataxia-telangiectasia mutated,ATM)蛋白激酶活化通过糖代谢重塑对人乳腺癌MCF7及MDA-MB-231细胞迁移和侵袭的影响。构建靶向ATM基因的慢病毒载体(shATM)及其阴性对照病毒(shNC),感染人... 该研究主要探讨低氧下共济失调毛细血管扩张突变(ataxia-telangiectasia mutated,ATM)蛋白激酶活化通过糖代谢重塑对人乳腺癌MCF7及MDA-MB-231细胞迁移和侵袭的影响。构建靶向ATM基因的慢病毒载体(shATM)及其阴性对照病毒(shNC),感染人乳腺癌MCF7和MDA-MB-231细胞,建立ATM基因稳定沉默细胞系。实验设阴性对照组(shNC)、ATM基因沉默组(shATM)以及ATM特异性抑制剂KU60019处理组,利用实时荧光定量PCR检测ATM下调效果;Western blot检测常氧及低氧下ATM、p-ATM、γ-H2AX、p-CHK2(T68)的蛋白表达水平,利用伤口划痕愈合及Transwell实验分别检测细胞迁移和侵袭能力的改变,用糖代谢相关试剂盒检测糖代谢过程中相关底物的变化。结果表明,低氧处理12 h时(此时尚未发生DNA损伤),人乳腺癌MCF7和MDA-MB-231细胞p-ATM(即氧化型ATM)表达量显著增加,其迁移和侵袭能力增加。糖代谢改变表现为葡萄糖消耗量、丙酮酸产量、乙酰辅酶A产量明显高于乳酸生成量;进而检测三羧酸循环(tricarboxylic acid cycle,TCA)产物,发现与柠檬酸相比,下游琥珀酸和延胡索酸产生了较大程度的累积。而shATM和KU60019细胞处理组能有效抑制p-ATM的表达量、细胞迁移和侵袭能力、葡萄糖消耗、丙酮酸产量、乙酰辅酶A产量,但对于乳酸产量的抑制作用并不明显;TCA中柠檬酸的产量的降低程度明显大于其下游琥珀酸和延胡索酸的降低量。在低氧下,shATM细胞中补充外源性柠檬酸,肿瘤细胞的迁移侵袭能力均得到一定程度回补。研究结果揭示,低氧情况下,氧化型ATM的表达量明显增加,并通过胞内柠檬酸的累积促进人乳腺癌细胞的迁移和侵袭。 展开更多
关键词 乳腺癌 糖代谢 氧化型ATM 柠檬酸 细胞迁移 细胞侵袭
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Mirtron类microRNA6894-5p过表达促进胃癌细胞的迁移、侵袭和增殖
5
作者 赵茂嘉 彭美茜 +4 位作者 秦旖璐 刘水清 陈燕林 杨丽萍 柳满然 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2018年第8期1350-1356,共7页
该文主要探讨Mirtron类micro RNA6894-5p过表达对胃癌细胞迁移、侵袭和增殖的影响。将miRNA6894-5p的模拟物分别转染进入胃癌MGC803和SGC7901细胞中,构建miRNA6894-5p过表达的细胞系;实时荧光定量PCR测miRNA6894-5p的RNA表达;Transwell... 该文主要探讨Mirtron类micro RNA6894-5p过表达对胃癌细胞迁移、侵袭和增殖的影响。将miRNA6894-5p的模拟物分别转染进入胃癌MGC803和SGC7901细胞中,构建miRNA6894-5p过表达的细胞系;实时荧光定量PCR测miRNA6894-5p的RNA表达;Transwell实验检测细胞迁移侵袭能力;Cell Counting Kit 8实验检测细胞的增殖能力;荧光素酶报告基因实验检测miRNA6894-5p与肝配蛋白A3的靶向关系;实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法进一步检测miRNA6894-5p过表达后EFNA3的m RNA和蛋白的变化。结果显示,成功构建miRNA6894-5p过表达模型的胃癌细胞系;与相应阴性对照组相比,过表达miRNA6894-5p可提高细胞迁移侵袭能力(P<0.05)和增强细胞增殖能力(P<0.05);荧光素酶报告基因实验证实,miRNA6894-5p靶向作用于肝配蛋白A3,过表达miRNA6894-5p后肝配蛋白A3的m RNA及蛋白水平显著下降(P<0.05)。该研究结果显示,Mirtron类miRNA6894-5p在人胃癌细胞中过表达可促进胃癌细胞的迁移、侵袭和增殖。 展开更多
关键词 mirtron类 microRNA6894-5p 肝配蛋白A3 细胞迁移 细胞侵袭 细胞增殖
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