miR-27a通过TLR4/NF-κB信号通路对类风湿关节炎滑膜细胞生物学行为的影响

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作者 吴洁 杨学华 +8 位作者 许振丹 范文强 付冬冬 高晓 左淑飞 梁舒 秦艺璐 王培山 郭金燕 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2024年第3期302-306,共5页

目的:探讨miR-27a通过Toll样受体(TLR)4/NF-κB信号通路对类风湿关节炎(RA)滑膜细胞生物学行为的影响。方法:选择行膝关节置换术的30例RA患者(RA组)和同期因创伤急诊截肢的18例患者(对照组)的滑膜组织,采用qRT-PCR法检测miR-27a的表达。... 目的:探讨miR-27a通过Toll样受体(TLR)4/NF-κB信号通路对类风湿关节炎(RA)滑膜细胞生物学行为的影响。方法:选择行膝关节置换术的30例RA患者(RA组)和同期因创伤急诊截肢的18例患者(对照组)的滑膜组织,采用qRT-PCR法检测miR-27a的表达。将RA成纤维样滑膜细胞MH7A分为4组:空白对照组,不进行任何处理;TNF-α组,加入终浓度为20μg/L的TNF-α处理24 h;TNF-α+miR-NC组,加入终浓度为20μg/L的TNF-α处理后转染miR-NC;TNF-α+miR-27a mimic组,加入终浓度为20μg/L的TNF-α处理后转染miR-27a mimic,采用qRT-PCR法检测组织或细胞中miR-27a的表达量,CCK-8法检测细胞增殖情况,克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,Transwell法检测细胞侵袭和迁移能力,Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡情况,双荧光素酶报告实验验证TLR4 mRNA与miR-27a的靶向关系,Western blot法检测细胞中TLR4、NF-κB、磷酸化TLR4(p-TLR4)和磷酸化NF-κB(p-NF-κB)蛋白的表达情况。结果:对照组和RA组滑膜组织中miR-27a的表达量分别为(1.00±0.08)和(0.36±0.05),RA组低于对照组(P<0.001)。与空白对照组比较,TNF-α组和TNF-α+miR-NC组细胞中miR-27a表达量下降,TNF-α+miR-27a mimic组miR-27a表达量升高;与TNF-α组和TNF-α+miR-NC组比较,TNF-α+miR-27a mimic组细胞中miR-27a表达量升高(P<0.05)。与空白对照组比较,TNF-α组和TNF-α+miR-NC组细胞增殖、克隆形成、侵袭和迁移能力增强,细胞凋亡率降低;与TNF-α组和TNF-α+miR-NC组比较,TNF-α+miR-27a mimic组细胞增殖、克隆形成、侵袭和迁移能力减弱,细胞凋亡率升高(P<0.05)。双荧光素酶报告实验证实TLR4是miR-27a的靶基因。与空白对照组比较,TNF-α组和TNF-α+miR-NC组p-TLR4/TLR4、p-NF-κB/NF-κB升高;与TNF-α组和TNF-α+miR-NC组比较,TNF-α+miR-27a mimics组p-TLR4/TLR4、p-NF-κB/NF-κB降低(P<0.05)。结论:miR-27a可能通过抑制TLR4/NF-κB信号通路,降低RA成纤维样滑膜细胞的增殖、侵袭和迁移能力,促进其凋亡。 展开更多

关键词 miR-27a TLR4/NF-κB 类风湿关节炎 滑膜细胞 生物学行为 MH7A细胞

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雷公藤甲素通过抑制细胞铁死亡减轻博来霉素诱发的小鼠肺纤维化

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作者 张致琴 吴洁 +6 位作者 秦艺璐 梁舒 左淑飞 张超 高晓 范文强 张志强 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期662-669,共8页

目的:探讨雷公藤甲素(TPL)对博来霉素(BLM)诱导肺纤维化小鼠的改善效果,揭示铁死亡参与TPL改善肺纤维化的潜在机制。方法:选择SPF级小鼠,随机分为3组:对照组、模型组(BLM处理组)和实验组(BLM+TPL处理组),每组10只。Day 0,模型组和实验... 目的:探讨雷公藤甲素(TPL)对博来霉素(BLM)诱导肺纤维化小鼠的改善效果,揭示铁死亡参与TPL改善肺纤维化的潜在机制。方法:选择SPF级小鼠,随机分为3组:对照组、模型组(BLM处理组)和实验组(BLM+TPL处理组),每组10只。Day 0,模型组和实验组小鼠气管灌注BLM水溶液(50μL,5 mg/kg),对照组小鼠接受等体积的生理盐水。Day 1起,实验组小鼠开始灌胃TPL悬液(200μL,0.25 mg/kg),每3 d一次,共7次,对照组和模型组分别接受等体积生理盐水。Masson染色检测肺组织纤维化,TUNEL染色检测肺组织细胞凋亡;体外CCK8法检测细胞活力,流式细胞术及活死染色检测细胞凋亡,免疫荧光法检测细胞脂质过氧化,Western blot检测肺组织及细胞中目的蛋白表达。结果:TPL处理通过下调肺组织中Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达(P<0.05),显著降低BLM诱导小鼠肺部纤维化程度(P<0.01);同时,TPL处理可显著上调肺组织中谷胱甘肽过氧化酶4(GPX4)和铁死亡抑制蛋白1(FSP1)表达(P<0.05),下调转铁蛋白受体1(TfR1)表达(P<0.05),从而抑制BLM诱导的肺部细胞铁死亡和凋亡(P<0.01)。体外研究结果表明,TPL处理可显著抑制肺上皮细胞凋亡(P<0.01),进一步检测发现TPL处理可显著降低BLM诱导的肺泡上皮细胞内脂质过氧化(P<0.01),显著上调细胞内GPX4和FSP1蛋白表达(P<0.01),下调TfR1蛋白表达(P<0.05),通过抑制细胞铁死亡来显著降低BLM诱导的肺上皮细胞凋亡率。结论:TPL可在体内外通过抑制BLM诱导的细胞铁死亡,改善肺部细胞活力,降低细胞凋亡率,从而减轻肺小鼠纤维化程度。本研究为临床使用TPL治疗肺间质病变提供理论依据。 展开更多

关键词 雷公藤甲素 肺纤维化 肺间质病变 铁死亡 博来霉素

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血清和尿液联合检测免疫球蛋白结合蛋白1在狼疮性肾炎中的预测价值

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作者 边彩月 秦艺璐 +3 位作者 梁舒 高晓 吴洁 范文强 《实用临床医药杂志》 CAS 2024年第10期83-86,95,共5页

目的探讨血清和尿液联合检测免疫球蛋白结合蛋白1(IGBP1)在狼疮性肾炎(LN)中的预测价值。方法选取2021年1月—2022年12月LN患者60例为LN组,选取同期诊治的系统性红斑狼疮(SLE)患者60例作为SLE组,比较2组血清IGBP1、尿IGBP1水平,并分析血... 目的探讨血清和尿液联合检测免疫球蛋白结合蛋白1(IGBP1)在狼疮性肾炎(LN)中的预测价值。方法选取2021年1月—2022年12月LN患者60例为LN组,选取同期诊治的系统性红斑狼疮(SLE)患者60例作为SLE组,比较2组血清IGBP1、尿IGBP1水平,并分析血清IGBP1、尿IGBP1单独及二者联合检测对LN的预测价值。结果LN组血清IGBP1、尿IGBP1水平高于SLE组,差异有统计学意义(P<0.05)。二元Logistic回归分析结果显示,血清IGBP1、尿IGBP1是LN的影响因素(P<0.05)。受试者工作特征(ROC)曲线分析显示,血清IGBP1、尿IGBP1、联合检测LN的曲线下面积(AUC)分别为0.856、0.834、0.902,约登指数分别为0.533、0.533、0.666,血清IGBP1的敏感度、特异度分别为85.0%、68.3%,尿IGBP1的敏感度、特异度分别为53.3%、100.0%,联合检测的敏感度、特异度分别78.3%、88.3%。结论血清IGBP1、尿IGBP1在LN患者中呈高表达,二者联合对LN具有较高的预测价值。 展开更多

关键词 免疫球蛋白结合蛋白1 血清 尿液 系统性红斑狼疮 狼疮性肾炎 联合检测

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骨髓间充质干细胞来源外泌体的微小RNA-22-3p参与抑制环磷酰胺诱导卵巢颗粒细胞损伤的机制研究

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作者 吴洁 刘彦礼 +4 位作者 秦艺璐 张胜辉 张瑞云 秦玉飞 范文强 《实用临床医药杂志》 CAS 2024年第4期39-44,共6页

目的分析骨髓间充质干细胞来源的外泌体微小RNA-22-3p(miR-22-3p)对卵巢早衰的影响。方法选取接受体外受精或者第二代试管婴儿治疗的卵巢早衰患者以及接受同样治疗的因男性因素不孕的正常志愿者提供卵泡液;通过差速离心法分离骨髓间充... 目的分析骨髓间充质干细胞来源的外泌体微小RNA-22-3p(miR-22-3p)对卵巢早衰的影响。方法选取接受体外受精或者第二代试管婴儿治疗的卵巢早衰患者以及接受同样治疗的因男性因素不孕的正常志愿者提供卵泡液;通过差速离心法分离骨髓间充质干细胞来源外泌体;分离外泌体的形态学、粒子大小以及标志蛋白通过透射电子显微镜、NanoSight LM10分析仪以及蛋白免疫印迹方法进行分析。将颗粒细胞经环磷酰胺(CTX)、外泌体、miR-22-3p模拟物以及相应对照处理,分为CTX组、Control组、外泌体孵育组、PBS处理组、CTX+miR-22-3p组、CTX+miR-NC组、CTX+Exosomes组以及CTX+PBS组;采用蛋白免疫印迹法和定量实时聚合酶链反应(qRT-PCR)检测基因表达水平;利用二苯基四氮唑溴盐(MTT)试剂以及流式分析仪检测细胞活力和凋亡。结果提取的外泌体具有典型的杯状囊泡,外泌体标志蛋白簇状分化抗原63(CD63)和簇状分化抗原9(CD9)表达在所提取的细胞上清外泌体中,外泌体粒子大小为80~150 nm;miR-22-3p在卵巢早衰患者和CTX诱导的卵巢颗粒细胞中显著低表达(P<0.05),在骨髓间充质干细胞来源外泌体孵育卵巢颗粒细胞中显著高表达(P<0.05);颗粒细胞活力在CTX组低于对照组,但在CTX+miR-22-3p组或CTX+Exosomes组高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);颗粒细胞凋亡率在CTX组高于对照组,但在CTX+miR-22-3p组或CTX+Exosomes组低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论骨髓间充质干细胞来源的外泌体miR-22-3p抑制CTX诱导的卵巢颗粒细胞损伤。 展开更多

关键词 卵巢早衰 环磷酰胺 微小RNA-22-3p 外泌体 骨髓间充质干细胞

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妊娠期原发性干燥综合征合并视神经脊髓炎谱系疾病危重症1例 被引量：1

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作者 吴洁 张雯 +2 位作者 梁舒 秦艺璐 范文强 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期1118-1124,共7页

原发性干燥综合征(primary Sj?gren’s syndrome,pSS)的中枢神经系统受累少见,常表现为脑白质病变、视神经脊髓炎谱系疾病(neuromyelitis optica spectrum disorder,NMOSD)或横贯性脊髓炎。NMOSD是一类免疫介导的中枢神经系统炎性脱髓... 原发性干燥综合征(primary Sj?gren’s syndrome,pSS)的中枢神经系统受累少见,常表现为脑白质病变、视神经脊髓炎谱系疾病(neuromyelitis optica spectrum disorder,NMOSD)或横贯性脊髓炎。NMOSD是一类免疫介导的中枢神经系统炎性脱髓鞘病变,发病特点为高复发、高致残。pSS合并NMOSD患者病情更严重、预后更差。本研究报道1例pSS合并NMOSD妊娠期危重症的病例,患者为有pSS病史的30岁孕妇,被诊断为NMOSD,在妊娠期接受甲泼尼龙琥珀酸钠、丙种球蛋白和硫酸羟氯喹片联合治疗,治疗后患者出现口干、吞咽困难、腰背以下部位麻木感基本消失。患者于院外未规律服药,右下肢出现无力、不能活动,左下肢活动尚可,偶伴麻木感。后急诊入院,紧急行剖宫产分娩一健康男婴后,患者病情加重,高热伴双下肢瘫痪无力,无法自主大小便。患者再次接受甲泼尼龙琥珀酸钠、丙种球蛋白治疗,但症状改善不佳。首次给予利妥昔单抗输注后患者出现尿路感染,予控制感染后继续规律输注利妥昔单抗,后期患者行走略跛,能够控制排尿和排便,可正常工作。该病例表明,pSS合并NMOSD的妊娠期患者可考虑给予甲泼尼龙琥珀酸钠、丙种球蛋白和硫酸羟氯喹片联合治疗。利妥昔单抗可以明显改善NMSOD患者产后瘫痪、二便失禁等症状,但同时可能有感染的风险。 展开更多

关键词 妊娠 视神经脊髓炎 干燥综合征 危重病 利妥昔单抗

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微小RNA-106a-5p/集落刺激因子1轴对狼疮性肾炎患者免疫球蛋白G诱导的足细胞损伤的影响 被引量：1

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作者 秦艺璐 边彩月 +4 位作者 左淑飞 吴洁 梁舒 许振丹 范文强 《实用临床医药杂志》 2023年第20期48-53,58,共7页

目的探讨微小RNA-106a-5p/集落刺激因子1(miR-106a-5p/CSF1)轴对狼疮性肾炎(LN)患者免疫球蛋白G(LN-IgG)诱导的足细胞损伤的影响。方法采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)和Western blot法检测LN患者和健康志愿者血清及LN-IgG或... 目的探讨微小RNA-106a-5p/集落刺激因子1(miR-106a-5p/CSF1)轴对狼疮性肾炎(LN)患者免疫球蛋白G(LN-IgG)诱导的足细胞损伤的影响。方法采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)和Western blot法检测LN患者和健康志愿者血清及LN-IgG或阴性对照(NC)-IgG(提取自健康志愿者)诱导的足细胞中miR-106a-5p和CSF1的表达。采用双荧光素酶报告实验检测miR-106a-5p与CSF1的靶向关系。采用CCK-8实验、流式细胞术、酶联免疫吸附试验(ELISA)和Western blot实验检测miR-106a-5p或CSF1表达修饰后的足细胞活性、凋亡、炎症反应和自噬。结果与健康志愿者相比,LN患者体内miR-106a-5p低表达,而CSF1高表达,差异有统计学意义(P<0.05);miR-106a-5p在LN-IgG诱导的足细胞中表达降低,而CSF1表达上调,差异有统计学意义(P<0.05)。功能实验表明,过表达miR-106a-5p可逆转LN-IgG诱导的足细胞活性抑制以及凋亡促进,同时抑制LN-IgG诱导细胞中白细胞介素-6(IL-6)以及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量的升高,同时诱导足细胞自噬,差异有统计学意义(P<0.05)。CSF1是miR-106a-5p的功能靶标。实验结果显示,在LN-IgG诱导的足细胞中,上调CSF1抑制miR-106a-5p过表达介导细胞活力增强、凋亡抑制、炎症反应以及自噬增强,差异有统计学意义(P<0.05)。结论miR-106a-5p通过靶向抑制CSF1减弱LN-IgG诱导的足细胞凋亡和炎症反应以及促进足细胞自噬,表明miR-106a-5p可能是延迟或缓解LN的有效治疗靶标。 展开更多

关键词 微小RNA-106a-5p 狼疮性肾炎 集落刺激因子1 自噬 凋亡 足细胞

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槲皮素通过调控miR-431-5p/鼠双微基因4信号通路抑制类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞侵袭和促进凋亡 被引量：2

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作者 梁舒 左淑飞 +4 位作者 崔玉荣 秦艺璐 高晓 韩琛 范文强 《实用临床医药杂志》 2023年第12期50-56,共7页

目的 探讨槲皮素对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(RA-FLSs)侵袭和凋亡的影响以及分子机制。方法 收集27例RA患者和25例非RA患者的滑膜组织。分析miR-431-5p和鼠双微基因4(MDM4) mRNA表达及其蛋白表达。将miR-431-5p抑制剂、miR-NC、MDM... 目的 探讨槲皮素对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(RA-FLSs)侵袭和凋亡的影响以及分子机制。方法 收集27例RA患者和25例非RA患者的滑膜组织。分析miR-431-5p和鼠双微基因4(MDM4) mRNA表达及其蛋白表达。将miR-431-5p抑制剂、miR-NC、MDM4过表达载体和pcDNA 3.1(+)载体转染至RA-FLSs,转染后48 h,在每孔中添加槲皮素,并收集细胞,测定细胞活力、细胞凋亡率和侵袭细胞数。采用双荧光素酶实验分析miR-431-5p和MDM4的结合关系。结果 miR-431-5p在RA滑膜组织和RA-FLSs中表达下调,在槲皮素诱导的RA-FLSs中上调,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-431-5p低表达或者MDM4过表达减弱了槲皮素对RA-FLSs凋亡的促进作用及对侵袭的抑制作用(P<0.05)。miR-431-5p在RA-FLSs中结合MDM4,且miR-431-5p通过MDM4调控RA-FLSs的凋亡和侵袭(P<0.05)。结论 槲皮素通过介导miR-431-5p/MDM4信号通路来调控RA-FLSs侵袭和凋亡,提示槲皮素可能是治疗RA的替代药物。 展开更多

关键词 类风湿关节炎 槲皮素 微小RNA-431-5p 鼠双微基因4 成纤维样滑膜细胞 侵袭 凋亡

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微小RNA-6779-5p对白细胞介素-1β诱导软骨细胞损伤的影响及机制研究

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作者 左淑飞 梁舒 +5 位作者 秦艺璐 吴洁 张超 郭占非 边彩月 范文强 《实用临床医药杂志》 2023年第12期69-75,79,共8页

目的 分析微小RNA-6779-5p(miR-6779-5p)在白细胞介素-1β(IL-1β)刺激的软骨细胞中对细胞增殖和凋亡的影响以及相关的分子机制。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法分析RNA的表达量。将miR-6779-5p模拟物、白细胞介素1受体... 目的 分析微小RNA-6779-5p(miR-6779-5p)在白细胞介素-1β(IL-1β)刺激的软骨细胞中对细胞增殖和凋亡的影响以及相关的分子机制。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法分析RNA的表达量。将miR-6779-5p模拟物、白细胞介素1受体相关激酶3(IRAK3)过表达载体以及各自对照转染CHON-001细胞,采用10 ng/mL的IL-1β刺激细胞。应用功能试验分析miR-6779-5p和IRAK3对IL-1β诱导的细胞损伤的影响;采用免疫印迹试验分析核因子-κB(NF-κB)通路的相关蛋白表达;鉴定miR-6779-5p和IRAK3的关系。结果 miR-6779-5p在骨关节炎患者中表达下调,而IRAK3表达上调,差异有统计学意义(P<0.05);miR-6779-5p和IRAK3的RNA水平在不同浓度IL-1β诱导的CHON-001细胞中也有相同的表达趋势,差异有统计学意义(P<0.05)。IL-1β处理后,CHON-001细胞的活力(100.00%对比51.00%)和EdU阳性率降低(43.00%对比25.00%),细胞凋亡率增加(6.43%对比18.60%),差异有统计学意义(P<0.05),但这些影响在miR-6779-5p过表达后缓解(细胞活力:52.00%对比85.00%;EdU阳性率:25.67%对比38.67%;细胞凋亡率:18.70%对比12.10%),差异均有统计学意义(P<0.05)。miR-6779-5p靶向结合IRAK3。IRAK3表达上调在IL-1β诱导的CHON-001细胞中逆转miR-6779-5p过表达对细胞的影响,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-6779-5p模拟物在IL-1β诱导的软骨细胞中减少p-P65和P65比值(2.06对比1.34)以及p-IκBα和IκBα的比值(2.42对比1.42),差异有统计学意义(P<0.05),但IRAK3过表达缓解了这些影响(p-P65和P65比值:1.30对比1.88;p-IκBα和IκBα的比值:1.45对比2.16),差异有统计学意义(P<0.05)。结论 miR-6779-5p通过抑制IRAK3/NF-κB通路的激活来挽救IL-1β诱导的软骨细胞损伤,表明miR-6779-5p可能是治疗骨关节炎的潜在靶点。 展开更多

关键词 骨关节炎 白细胞介素-1Β 软骨细胞 细胞增殖 细胞凋亡 微小RNA-6779-5p 白细胞介素1受体相关激酶3 核因子-κB通路

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miR-26a-5p通过JAK2/STAT3信号通路对人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞凋亡的影响 被引量：4

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作者 吴洁 杨学华 +8 位作者 马玲 范文强 付冬冬 高晓 左淑飞 梁舒 秦艺璐 王培山 郭金燕 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期460-468,共9页

目的:探讨miR-26a-5p对人类风湿关节炎(RA)-成纤维样滑膜细胞(FLSs)凋亡及炎性因子分泌的影响,阐明其作用机制。方法:分离RA患者的膝关节滑膜组织RA-FLSs,将miR-26a-5p模拟物(mimic)、抑制物(inhibitor)及阴性对照转染RA-FLSs,采用实时... 目的:探讨miR-26a-5p对人类风湿关节炎(RA)-成纤维样滑膜细胞(FLSs)凋亡及炎性因子分泌的影响,阐明其作用机制。方法:分离RA患者的膝关节滑膜组织RA-FLSs,将miR-26a-5p模拟物(mimic)、抑制物(inhibitor)及阴性对照转染RA-FLSs,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测转染效果,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测细胞培养液中白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6 (IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,CCK-8法检测各组细胞增殖活性,AnnexinⅤ-FITC/PI与Hoechst 33342染色检测各组细胞凋亡情况,Western blotting法检测各组细胞中凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤2 (Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)与酪氨酸激酶2 (JAK2)/信号传导及转录活化因子3 (STAT3)信号通路相关蛋白表达水平。结果:与空白对照组和NC-mimic组比较,miR-26a-5p mimic组RA-FLSs中miR-26a-5p mRNA表达水平升高(P<0.05),RA-FLSs增殖活性降低(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05),细胞中Bcl-2、 JAK2、 p-JAK2、 STAT3和p-STAT3蛋白表达水平降低(P<0.05),Bax蛋白表达水平升高(P<0.05);与空白对照组和NC-inhibitor组比较,miR-26a-5p inhibitor组RA-FLSs中miR-26a-5p mRNA表达水平降低(P<0.05), RA-FLSs细胞增殖活性升高(P<0.05),细胞凋亡率降低(P<0.05), Bcl-2、 JAK2、p-JAK2、STAT3和p-STAT3蛋白表达水平升高(P<0.05), Bax蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论:过表达miR-26a-5p能够抑制RA-FLSs细胞增殖,促进细胞凋亡,其作用机制可能与抑制JAK2/STAT3信号通路的激活有关。 展开更多

关键词 miR-26a-5p 类风湿关节炎 成纤维样滑膜细胞 细胞凋亡 炎性因子

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miR-335-5p对骨关节炎软骨细胞增殖和凋亡的分子机制研究 被引量：3

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作者 吴洁 范文强 +3 位作者 许振丹 梁舒 秦艺璐 王培山 《中华全科医学》 2021年第5期745-748,874,共5页

目的研究miR-335-5p对骨关节炎(OA)软骨细胞增殖和凋亡的影响及其可能机制。方法体外分离培养OA软骨细胞及正常软骨细胞,qRT-PCR法检测细胞中miR-335-5p表达,蛋白印迹法检测Tnfrsf1a蛋白表达。将OA软骨细胞分为anti-miR-NC组、anti-miR-... 目的研究miR-335-5p对骨关节炎(OA)软骨细胞增殖和凋亡的影响及其可能机制。方法体外分离培养OA软骨细胞及正常软骨细胞,qRT-PCR法检测细胞中miR-335-5p表达,蛋白印迹法检测Tnfrsf1a蛋白表达。将OA软骨细胞分为anti-miR-NC组、anti-miR-335-5p组、anti-miR-335-5p+si-NC组和anti-miR-335-5p+si-Tnfrsf1a组,MTT法、流式细胞术及蛋白印迹法分别检测细胞增殖、凋亡及p53和Survivin蛋白表达。双荧光素酶报告基因检测实验miR-335-5p与Tnfrsf1a靶向关系。2组间比较行成组t检验;多组间比较行单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验。结果与正常软骨细胞比较,OA软骨细胞中miR-335-5p表达降低(0.31±0.08 vs. 1.00±0.00,t=25.875,P<0.05),Tnfrsf1a蛋白表达升高(0.95±0.18 vs. 0.18±0.03,t=12.659,P<0.05)。与anti-miR-NC组比较,anti-miR-335-5p组OA软骨细胞OD值降低(0.27±0.01 vs. 0.34±0.01,t=14.849,P<0.05),凋亡率升高[(19.18±0.88)%vs.(6.89±0.33)%,t=39.230,P<0.05],p53蛋白表达显著升高(P<0.05),Survivin蛋白表达显著降低(P<0.05)。miR-335-5p靶向负调控Tnfrsf1a表达。与miR-335-5p+si-NC组比较,miR-335-5p+si-Tnfrsf1a组OA软骨细胞OD值升高,凋亡率降低,p53蛋白表达显著降低,Survivin蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论敲减miR-335-5p可靶向Tnfrsf1a抑制OA软骨细胞增殖并促进其凋亡,miR-335-5p有可能成为OA治疗的新靶点。 展开更多

关键词 miR-335-5p Tnfrsf1a 骨关节炎 增殖 凋亡

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丹酚酸C通过上调转录因子-E2相关因子信号通路抑制类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞炎症及促进凋亡

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作者 吴洁 左淑飞 +3 位作者 梁舒 高晓 秦艺璐 范文强 《中华风湿病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第10期673-682,I0003,I0004,共12页

目的探讨丹酚酸C(SalC)对RA成纤维样滑膜细胞(FLSs)的作用,及转录因子-E2相关因子(Nrf2)信号通路在其中所扮演的角色。方法用丹酚酸C 0.1、1、5、10、20μmol/L分别处理RA-FLSs 24~72 h,之后用CCK8检测细胞活性。根据半抑制浓度(IC50)值... 目的探讨丹酚酸C(SalC)对RA成纤维样滑膜细胞(FLSs)的作用,及转录因子-E2相关因子(Nrf2)信号通路在其中所扮演的角色。方法用丹酚酸C 0.1、1、5、10、20μmol/L分别处理RA-FLSs 24~72 h,之后用CCK8检测细胞活性。根据半抑制浓度(IC50)值,选取实验所需的时间和剂量处理RA-FLSs。用伤口划痕实验和Transwell小室技术检测细胞迁移及侵袭能力。ELISA检测TNF-α,IL-1β及IL-6水平,蛋白质印迹实验检测MMP-9和MMP-13的表达及细胞凋亡相关蛋白及Nrf2及介导的相关基因的表达。用ML385干扰Nrf2,实验分成3组RA-FLSs、RA-FLSs+丹酚酸C(10μmol/L)、RA-FLSs+丹酚酸C(10μmol/L)+ML385(2μmol/L),测量迁移及侵袭能力,并检测凋亡、炎性及Nrf2信号通路相关蛋白的表达。统计学分析采用方差分析,两两比较采用Turkey检验。结果与对照组相比,丹酚酸C处理后RA-FLS的细胞迁移水平(丹酚酸C 0.1μmol/L,0.75±0.05;丹酚酸C 5μmol/L,0.50±0.05;丹酚酸C 10μmol/L,0.26±0.05)显著性减少(t=7.65,P<0.001;t=14.25,P<0.001;t=20.67,P<0.001)和侵袭能力(丹酚酸C 0.1μmol/L,0.75±0.11;丹酚酸C 5μmol/L,0.49±0.06;丹酚酸C 10μmol/L,0.26±0.07)显著性降低(t=4.93,P<0.001;t=10.32,P<0.001;t=14.96,P<0.001),MMP-9(丹酚酸C 0.1μmol/L,0.72±0.10;丹酚酸C 5μmol/L,0.48±0.08;丹酚酸C 10μmol/L,0.27±0.06)水平显著性降低(t=5.60,P<0.001;t=11.03,P<0.001;t=5.94,P<0.001)及MMP-13(丹酚酸C 0.1μmol/L,0.77±0.06;丹酚酸C 5 mol/L,0.58±0.06;丹酚酸C 10μmol/L,0.32±0.13)水平显著性减少(t=8.66,P<0.001;t=11.03,P<0.001;t=14.22,P<0.001),促进细胞凋亡。丹酚酸C显著性降低促炎性细胞因子的水平(P<0.001),激活Nrf2信号通路蛋白Nrf2,过氧化氢酶(CAT),醌NADH脱氢酶1(NQO1)、超氧化物歧化酶1(SOD1)及谷胱甘肽合成酶(GSS)的表达(P<0.001)。用ML385干扰Nrf2后,显著性逆转丹酚酸C对Nrf2通路蛋白Nrf2(0.68±0.06;t=5.08,P<0.001),CAT(1.44±0.12;t=4.77,P<0.001),NQO1(0.65±0.12;t=5.04,P<0.001),SOD1(1.43±0.10;t=6.36,P<0.001)及GSS(1.42±0.10;t=7.60,P<0.001)的水平,及TNF-α[(260±22)pg/ml;t=13.75,P<0.001],IL-1β[(701±30)pg/ml;t=12.98,P<0.001],IL-6[(180.3±10.2)pg/ml;t=16.38,P<0.001]炎症因子的水平。除此之外ML385阻碍丹酚酸C对细胞迁移和侵袭的抑制作用(0.70±0.09;t=11.24,P<0.001;0.64±0.04;t=8.03,P<0.001)及对凋亡的诱导作用(24.4±1.8;t=23.02,P<0.001)。结论丹酚酸C可能通过上调Nrf2信号通路,抑制细胞活力及炎症反应,促进凋亡。丹酚酸C是治疗RA的有效潜在药物,但有待进一步动物及临床深入研究。 展开更多

关键词 关节炎 类风湿 成纤维样滑膜细胞 丹酚酸C 转录因子-E2相关因子 炎性因子 凋亡

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