人尿激酶原cDNA在中国仓鼠卵巢细胞(CHO)中高效表达研究 被引量：3

1

作者 程度胜 俞炜源 +5 位作者 韩素文 李秀珍 李风知 胡宝成 方继明 黄翠芬 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1993年第3期204-209,共6页

通过构建高效表达载体,改进转染方法,与二氢叶酸还原酶(dhfr)基因共扩增等手段在CHO细胞内高效表达了人尿激酶原(Pro-UK)cDNA。首先将pro-UK cDNA插入到SRα启动子的下游,构建成表达质粒pMG10102,在COS-7细胞内进行暂时性表达,结果表明... 通过构建高效表达载体,改进转染方法,与二氢叶酸还原酶(dhfr)基因共扩增等手段在CHO细胞内高效表达了人尿激酶原(Pro-UK)cDNA。首先将pro-UK cDNA插入到SRα启动子的下游,构建成表达质粒pMG10102,在COS-7细胞内进行暂时性表达,结果表明此启动子的表达水平比SV40早期启动子高约5倍。然后将质粒pMG10102和pSV2-dhfr线性化后用磷酸钙共沉淀法转染CHO-dhfr^-细胞,经一系列筛选后获得20个能表达pro-UK的细胞克隆,纤维蛋白溶解平板法(FAPA)测定表达水平为12.5—100IU/10~6 cells/d.再经MTX加压共扩增,得到9株高表达细胞系,其中最高的表达水平达到400—500IU/10~6 cells/d。经2—3个月连续传代,表达水平未下降,表明细胞株是稳定的。Western Blot分析证明细胞分泌的重组pro-UK具有与天然pro-UK相同的分子量,而且培养液中不加蛋白酶抑制剂时,分泌的重组UK大部分为单链(60%以上)。 展开更多

关键词 尿激酶原 尿激酶原基因 CDNA 基因工程 高效表达

下载PDF 职称材料

含不同长度前C序列的乙型肝炎病毒核心抗原基因在重组痘苗病毒中的表达 被引量：1

2

作者 程度胜 韩素文 +1 位作者 项秉一 方继明 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1991年第2期170-175,共6页

<正> 核酸序列分析表明,乙型肝炎(乙肝)病毒核心抗原基因(C基因)编码区内存在两个ATG。目前认为第二个ATG为乙肝病毒C抗原的起始密码子,两个ATG之间的序列称为前C序列,共87bp。Uy、Rutter、Roossinck及景新等的研究表明,含前C序列... <正> 核酸序列分析表明,乙型肝炎(乙肝)病毒核心抗原基因(C基因)编码区内存在两个ATG。目前认为第二个ATG为乙肝病毒C抗原的起始密码子,两个ATG之间的序列称为前C序列,共87bp。Uy、Rutter、Roossinck及景新等的研究表明,含前C序列时,C基因在大肠杆菌中的表达是形成具有HBeAg活性的P25~e膜蛋白,在哺乳动物细胞中的表达则是形成分泌性的HBeAg;不含前C序列时。 展开更多

关键词 乙肝病毒 核心抗原基因 痘苗

下载PDF 职称材料

HBe抗原的研究进展

3

作者 程度胜 石成华 《国外医学（微生物学分册）》 北大核心 1991年第6期245-247,244,共4页

本文介绍了乙型肝炎病毒e抗原与c抗原之间的关系,e抗原在不同生物体系中的表达情况,e抗原决定簇以及e抗原产生的可能机理。

关键词 乙型肝炎 E抗原 研究

下载PDF 职称材料

促胰岛素释放因子的研究进展

4

作者 程度胜 《生物技术通讯》 CAS 1994年第3期122-124,共3页

糖尿病是一种严重影响人类健康的疾病,每年有上千万人饱受Ⅰ或Ⅱ型糖尿病的折磨。由于对糖尿病的病因了解甚少,目前只能通过口服降血糖药和注射胰岛素来控制病情的发展,但不能根治。

关键词 促胰岛素 口服降血糖药 释放因子 胰高血糖素 前胰高血糖素原 功能关系 基因表达 内分泌激素 对应位置 调节体

下载PDF 职称材料

TPO模拟肽与人IgG1 Fc片段的融合表达及其生物学特性研究 被引量：6

5

作者 李越希 李朝 +3 位作者 陶开华 贾向红 程度胜 黄培堂 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期424-430,共7页

依据本室获得的人TPO模拟肽序列 ,合成了该模拟肽的DNA序列 ,分别连接至 4种不同长度的人IgG1Fc基因片段的 5′端 ,并克隆至质粒表达载体pET2 8a(+) ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,筛选获得了 4种重组工程菌 ,其中3种分别高效表达了 3种不... 依据本室获得的人TPO模拟肽序列 ,合成了该模拟肽的DNA序列 ,分别连接至 4种不同长度的人IgG1Fc基因片段的 5′端 ,并克隆至质粒表达载体pET2 8a(+) ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,筛选获得了 4种重组工程菌 ,其中3种分别高效表达了 3种不同长度的融合蛋白 ,而第 4种工程菌未表达。表达的 3种融合蛋白的分子量分别约为2 8kD、12kD和 12kD ,表达量约占菌体蛋白总量的 30 %左右 ,纯化获得了 3种TPO模拟肽融合蛋白。 3种融合蛋白均有较好的体外活性 ,维持TPO依赖细胞Ba F3-mp1生长的EC5 0分别为 :13、10、10nmol L。用血小板减少症小鼠动物模型 ,测定了它们的体内活性 ,3种融合蛋白均有升高血小板和缩短血小板恢复时间的功能 ,分别比TPO模拟肽活性提高了 18、8、8倍 ;而对白细胞及红细胞无显著影响。分别用 3种融合蛋白免疫BALB c小鼠 ,均未刺激小鼠产生抗TPO模拟肽抗体 ,并显示了较好的应用潜力。 展开更多

关键词 TPO模拟肽 人IgG1Fc片段 融合表达 生物学特性

下载PDF 职称材料

ω-芋螺毒素MVIIC的N及C端修饰对折叠及活性影响 被引量：2

6

作者 戴秋云 刘凤云 +4 位作者 周艳荣 程度胜 陈添弥 黄培堂 黄翠芬 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期66-70,共5页

合成了 ω-芋螺毒素 MVIIC的三种 N及 C端修饰肽 ,应用高压液相色谱、CD及生物体内活性实验 ,研究了其 N及 C端修饰对折叠及活性的影响 .结果表明 :MVIIC N端用 Phe及 Ser修饰后降低其线性肽形成正确折叠的比例及结构的稳定性 ,对小鼠... 合成了 ω-芋螺毒素 MVIIC的三种 N及 C端修饰肽 ,应用高压液相色谱、CD及生物体内活性实验 ,研究了其 N及 C端修饰对折叠及活性的影响 .结果表明 :MVIIC N端用 Phe及 Ser修饰后降低其线性肽形成正确折叠的比例及结构的稳定性 ,对小鼠的脑室给药活性也相应降低 ;C端酰胺转为电负性羧基端后活性降低 ,CD谱存在显著差异 . 展开更多

关键词 ω-芋螺毒素 MVⅡC 修饰 折叠 活性 N端 C端

下载PDF 职称材料

用mRNA差异显示方法寻找小鼠胸腺基质细胞差异表达基因 被引量：2

7

作者 贾熙华 应翔宇 +2 位作者 程度胜 黄培堂 陈慰峰 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期301-304,共4页

目的寻找并初步分析小鼠胸腺基质细胞差异表达基因。方法来源于小鼠胸腺基质细胞系的两株亚克隆细胞 4 ( 5 )和 4 ( 12 ) ,前者可诱导前体 T细胞的进一步成熟 ,分别提取该两株细胞的总 RNA,利用 m RNA差异显示方法( DD- PCR)筛选 4 ( 5 ... 目的寻找并初步分析小鼠胸腺基质细胞差异表达基因。方法来源于小鼠胸腺基质细胞系的两株亚克隆细胞 4 ( 5 )和 4 ( 12 ) ,前者可诱导前体 T细胞的进一步成熟 ,分别提取该两株细胞的总 RNA,利用 m RNA差异显示方法( DD- PCR)筛选 4 ( 5 )细胞特异表达的基因片段。结果得到了 17个 4 ( 5 )细胞特异表达的基因片段 ( expressed sequences tag,EST) ,其中 14个代表了尚未登录的小鼠新基因 ,另外 3个则分别与小鼠的 cytochrome C oxidase,Hsp65 ,Eps8基因高度同源。结论 DD- PCR方法是一种优良的寻找新基因的方法 ,小鼠胸腺基质细胞可能分泌或表达更多的新因子或分子。 展开更多

关键词 DD-PCR 表达序列标签 EST 胸腺基质细胞 mRNA 小鼠

下载PDF 职称材料

重组人表皮生长因子凝胶剂的研制 被引量：5

8

作者 陆兵 谢英华 +1 位作者 程度胜 朱厚础 《药学实践杂志》 CAS 2001年第3期143-145,共3页

目的 :研制用于创伤修复的重组人表皮生长因子 (recombinanthumanepidermalgrowthfactor ,rhEGF)凝胶剂。方法 :以卡泊姆为水溶性凝胶基质制备rhEGF的凝胶剂 ,并以大鼠皮肤急性创伤模型和大鼠皮肤烫伤模型评价了rhEGF凝胶剂在创伤修复... 目的 :研制用于创伤修复的重组人表皮生长因子 (recombinanthumanepidermalgrowthfactor ,rhEGF)凝胶剂。方法 :以卡泊姆为水溶性凝胶基质制备rhEGF的凝胶剂 ,并以大鼠皮肤急性创伤模型和大鼠皮肤烫伤模型评价了rhEGF凝胶剂在创伤修复中的效果。结果 :所得rhEGF凝胶剂制备工艺简单、质量可靠、使用方便 ,对于大鼠皮肤急性创伤和大鼠皮肤烫伤具有明显的疗效。结论 展开更多

关键词 卡泊姆 凝胶剂 创伤修复 重组人表皮生长因子 药效学 试验

下载PDF 职称材料

长株潭空气污染指数相关性研究及季节调整 被引量：5

9

作者 陈黎明 程度胜 《统计与决策》 CSSCI 北大核心 2014年第14期139-142,共4页

文章运用皮尔逊相关系数、Spearman秩相关系数和格兰杰因果检验对长株潭三市2010-2012年空气污染指数进行相关性研究，结果表明，长株潭三市空气污染指数间存在显著相关性和格兰杰因果关系。并以长沙2005～2012年空气污染指数为例，进... 文章运用皮尔逊相关系数、Spearman秩相关系数和格兰杰因果检验对长株潭三市2010-2012年空气污染指数进行相关性研究，结果表明，长株潭三市空气污染指数间存在显著相关性和格兰杰因果关系。并以长沙2005～2012年空气污染指数为例，进行季节调整，分离出空气污染指数的季节要素。发现在夏季和冬季，季节要素能解释12％～15％的空气污染指数变动。 展开更多

关键词 长株潭 空气污染指数 相关性研究 季节调整

下载PDF 职称材料

人尿激酶原cDNA序列缺失突变体的构建及表达 被引量：1

10

作者 韩素文 俞炜源 +1 位作者 程度胜 胡宝成 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第2期127-131,共5页

采用ＰＣＲ重叠延伸法和基因重组技术构建了人尿激酶原ｃＤＮＡ序列中缺失１５０～１５６位氨基酸的突变体，以ＣＯＳ７细胞中获得暂时性表达以及在ＣＨＯ细胞中稳定高效表达，其表达水平为４５０～５００ＩＵ／１０６ｃｅｌ／２４ｈ... 采用ＰＣＲ重叠延伸法和基因重组技术构建了人尿激酶原ｃＤＮＡ序列中缺失１５０～１５６位氨基酸的突变体，以ＣＯＳ７细胞中获得暂时性表达以及在ＣＨＯ细胞中稳定高效表达，其表达水平为４５０～５００ＩＵ／１０６ｃｅｌ／２４ｈ，表达产物经ＳＤＳＰＡＧＥ电转溶实验和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析证明，细胞分泌的ＰｒｏＵＫ突变体与天然ＰｒｏＵＫ以及完整全长ＤＮＡ序列表达ＰｒｏＵＫ的分子量相同，为５４ｋＤａ，绝大多数为单链，比完整ｃＤＮＡ序列表达产物的单链比例明显增高。 展开更多

关键词 尿激酶原 CDNA 突变体 构建 表达 基因工程

下载PDF 职称材料

利用大肠杆菌鞭毛展示的随机肽库筛选TNF-α拮抗肽 被引量：1

11

作者 李朝 周艳荣 +1 位作者 程度胜 黄培堂 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期556-560,共5页

TNF α是一种在机体抗感染、抗肿瘤过程中发挥重要作用的细胞因子 ,其对机体具有保护和损伤两方面的作用 ,为了探讨新的抑制TNF α所致炎症损伤等反应的手段 ,构建了细菌鞭毛递呈的随机肽库 ,利用构建得到的肽库 ,进行TNF α特异性结合... TNF α是一种在机体抗感染、抗肿瘤过程中发挥重要作用的细胞因子 ,其对机体具有保护和损伤两方面的作用 ,为了探讨新的抑制TNF α所致炎症损伤等反应的手段 ,构建了细菌鞭毛递呈的随机肽库 ,利用构建得到的肽库 ,进行TNF α特异性结合肽的筛选工作。经过 5轮筛选及DNA测序 ,共得到 6条小肽编码序列。其中 2条序列中含有一V N WG的相同序列框架。进行 6条序列与TNF α结合力的确证后 ,选择了其中的 4条肽序列进行人工化学合成、纯化及鉴定。利用L92 9细胞及MTT法对 4条小肽进行活性测定 ,检测其对TNF α的抑制活性。结果表明 ,在TNF α对L92 9细胞毒性为 30 %左右时 ,含同源序列框架的 2条肽可抑制 90 %左右的TNF 展开更多

关键词 大肠杆菌鞭毛 随机肽库 筛选 TNF-α拮抗肽

下载PDF 职称材料

血纤蛋白粘附肽与低分子量单链尿激酶融合产物活性分析 被引量：1

12

作者 张用书 李秀珍 +1 位作者 程度胜 刘凤云 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第4期415-418,共4页

人工合成了血纤蛋白粘附肽基因，构建了粘附肽与低分子量单链尿激酶ｃＤＮＡ的融合基因，在大肠杆菌中表达了融合基因。融合基因表达产物的抗原性和天然尿激酶相同，并具有尿激酶的溶纤活性和粘附肽的抗纤维蛋白单体聚合的功能。

关键词 低分子量 单链尿激酶 血纤蛋白粘附肽 融合基因

下载PDF 职称材料

β-环糊精及其衍生物在生物制药领域中的应用 被引量：11

13

作者 张钰 程度胜 《生物技术通讯》 CAS 2003年第5期433-435,共3页

β-环糊精及其衍生物近年来一直是人们研究的热点,研究人员尝试将其应用到制药、食品、化工和农业等领域。本文介绍了β-环糊精及其衍生物的结构和理化性质,并综述了它们在生物制药领域中的应用,重点介绍了在生物药物制剂方面的进展。

关键词 Β-环糊精 衍生物 生物制药 理化性质

下载PDF 职称材料

α-芋螺毒素的研究现况 被引量：1

14

作者 李赏 程度胜 陈添弥 《中国海洋药物》 CAS CSCD 1998年第2期33-37,共5页

α-芋螺毒素是近年来研究得较多的一种海洋生物神经毒素,它特异性竞争结合烟碱型乙酰胆碱受体,化学结构独特。本文介绍有关α-芋螺毒素的种类、结构特征、生物学活性和制备方法等方面的研究进展及其在生物化学、生物学以及新药开发等方... α-芋螺毒素是近年来研究得较多的一种海洋生物神经毒素,它特异性竞争结合烟碱型乙酰胆碱受体,化学结构独特。本文介绍有关α-芋螺毒素的种类、结构特征、生物学活性和制备方法等方面的研究进展及其在生物化学、生物学以及新药开发等方面的应用前景。 展开更多

关键词 芋螺毒素 研究现况 神经毒素 烟碱型乙酰胆碱受体 生物学活性 新药开发 特异性 竞争结合 生物化学 海洋生物

下载PDF 职称材料

噬菌体羧基端展示系统 被引量：6

15

作者 郭强 程度胜 《生物技术通讯》 CAS 2002年第4期322-324,共3页

噬菌体羧基端展示系统在一些方面是优于氨基端展示系统的,它可以用于构建和筛选cDNA噬菌体表面展示库,研究需要有自由羧基端时的蛋白质相互作用以及难以分泌的胞内蛋白的展示。特别是构建和筛选cDNA噬菌体表面展示库,将会成为该类展示... 噬菌体羧基端展示系统在一些方面是优于氨基端展示系统的,它可以用于构建和筛选cDNA噬菌体表面展示库,研究需要有自由羧基端时的蛋白质相互作用以及难以分泌的胞内蛋白的展示。特别是构建和筛选cDNA噬菌体表面展示库,将会成为该类展示系统的最重要的应用领域和进一步发展完善的动力。 展开更多

关键词 噬菌体 羧基端展示系统 CDNA

下载PDF 职称材料

尿激酶B链cDNA及其与水蛭素12肽cDNA融合基因的构建

16

作者 李秀珍 刘凤云 +1 位作者 李风知 程度胜 《生物技术通讯》 CAS 1994年第4期181-183,共3页

尿激酶原是一种溶栓效果好、副作用小的溶栓药物。研究证明尿激酶B链,即低分子量单链尿激酶,具有与尿激酶原相同的溶栓特性,对血栓溶解具有特异性,引起系统性出血的副作用较小,有可能成为一种较为理想的溶栓药物。它的氨基酸序列相当于... 尿激酶原是一种溶栓效果好、副作用小的溶栓药物。研究证明尿激酶B链,即低分子量单链尿激酶,具有与尿激酶原相同的溶栓特性,对血栓溶解具有特异性,引起系统性出血的副作用较小,有可能成为一种较为理想的溶栓药物。它的氨基酸序列相当于尿激酶原的144～411aa,国外已通过缺失突变获得了它的结构基因,并在中国仓鼠卵巢细胞中表达成功。由于尿激酶B链分子量较小,且含尿激酶原的酶活功能区, 展开更多

关键词 尿激酶原 B链cDNA 融合基因 缺失突变 水蛭素 溶栓效果 溶栓药物 结构基因 序列分析 平末端

下载PDF 职称材料

TNF-α拮抗肽拮抗机制的计算机模拟研究

17

作者 李朝 岳俊杰 +1 位作者 程度胜 黄培堂 《生物技术通讯》 CAS 2004年第5期464-466,共3页

为了了解从肽库中筛选到的TNF-α拮抗肽的作用机制,用分子模拟程序模建了4条肽序列(TBP1、2、3、6)的结构,然后利用分子对接程序建立了它们与TNF-α作用的理论模型。在得到的模型中,拮抗肽TBP2、3与TNF-α相互作用的区域位于TNF-α分子... 为了了解从肽库中筛选到的TNF-α拮抗肽的作用机制,用分子模拟程序模建了4条肽序列(TBP1、2、3、6)的结构,然后利用分子对接程序建立了它们与TNF-α作用的理论模型。在得到的模型中,拮抗肽TBP2、3与TNF-α相互作用的区域位于TNF-α分子中形成三聚体的区域,提示这些肽是通过影响TNF-α三聚体的形成而发挥作用的。 展开更多

关键词 TNF-α 拮抗肽 拮抗机制 计算机模拟研究 肽库 作用机制 TBP 分子对接 序列 相互作用

下载PDF 职称材料

低分子量单链尿激酶与血纤蛋白粘附肽融合基因的构建、表达及产物活性分析

18

作者 张用书 李秀珍 +1 位作者 程度胜 刘凤云 《生物技术通讯》 CAS 1997年第Z1期185-186,共2页

低分子量单链尿激酶(scu-PA-32)可通过激活纤溶酶原转变成纤溶酶溶解血栓,其溶栓具有一定的选择性,出血副作用比双链尿激酶小,但缺少对纤维蛋白的特异亲和力;2种血纤蛋白粘附肽(四肽A4;十二肽A12)都可和纤维蛋白特异性地结合,具有抗纤... 低分子量单链尿激酶(scu-PA-32)可通过激活纤溶酶原转变成纤溶酶溶解血栓,其溶栓具有一定的选择性,出血副作用比双链尿激酶小,但缺少对纤维蛋白的特异亲和力;2种血纤蛋白粘附肽(四肽A4;十二肽A12)都可和纤维蛋白特异性地结合,具有抗纤维蛋白单体聚合的功能,并因此有一定的抗血栓形成作用。 展开更多

关键词 尿激酶 融合基因 血纤蛋白 粘附肽 活性分析 低分子量 抗纤维蛋白 医学科学院 工程研究 单链

下载PDF 职称材料

分析EST寻找小鼠胸腺基质细胞表达基因

19

作者 贾熙华 应翔宇 +1 位作者 程度胜 黄培堂 《生物技术通讯》 CAS 2001年第4期247-249,共3页

网上生物信息量的膨胀导致新基因寻找手段的改变。借助mRNA差异显示技术获得的 17个表达序列标签(EST) ,通过对美国国家生物技术信息中心 (NCBI)的非冗余序列库 (NT)和小鼠EST库的BLAST同源检索 ,发现有 4个序列与已知基因高度同源 ,其... 网上生物信息量的膨胀导致新基因寻找手段的改变。借助mRNA差异显示技术获得的 17个表达序列标签(EST) ,通过对美国国家生物技术信息中心 (NCBI)的非冗余序列库 (NT)和小鼠EST库的BLAST同源检索 ,发现有 4个序列与已知基因高度同源 ,其中的DHPs和Eps8两个基因是首次在小鼠胸腺基质细胞中发现。它们可能与T细胞在胸腺内的发育分化有关。其它EST则为新基因。本结果也为下一步新基因的克隆及功能研究提供了有益的线索。 展开更多

关键词 信息库 表达序列标签 同源检索 EST 小鼠 胸腺基质细胞 基因表达谱

下载PDF 职称材料

水蛭素12肽和尿激酶B链融合基因的构建与表达

20

作者 刘凤云 李秀珍 +1 位作者 李凤知 程度胜 《生物技术通讯》 CAS 1994年第2期94-94,共1页

尿激酶原是一种溶栓效果好、副作用小的溶栓药物。经研究证明尿激酶B链(即pro-UK的144-411aa)具有与尿激酶原相似的溶栓性,即对血栓溶解具有特异性,引起系统性出血副作用小。水蛭素是一种分离自医用水蛭、由65个氨基酸残基组成的单链多... 尿激酶原是一种溶栓效果好、副作用小的溶栓药物。经研究证明尿激酶B链(即pro-UK的144-411aa)具有与尿激酶原相似的溶栓性,即对血栓溶解具有特异性,引起系统性出血副作用小。水蛭素是一种分离自医用水蛭、由65个氨基酸残基组成的单链多肽,能特异、高亲和性地抑制凝血酶的活性,研究证明它各方面的性能都优于肝素。近年来,通过多肽合成方式对水蛭素结构与功能进行了大量研究,确定水蛭素C端12肽是一个具有抗栓功能的结构片段。由于它对凝血酶的高度亲和性。 展开更多

关键词 尿激酶原 水蛭素 融合基因 B链 医用水蛭 溶栓效果 血栓溶解 溶栓药物 多克隆位点 重组菌

下载PDF 职称材料