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微卫星技术筛选大黄鱼耐低温标记 被引量：5
1
作者 穆方申 苗亮 +3 位作者 李明云 胡谋 陈炯 张浩 《生物学杂志》 CAS CSCD 2017年第1期34-38,共5页
为筛选大黄鱼耐低温性状相关分子标记,对大黄鱼进行降温实验(15℃降至6℃)后用SSR标记对低温敏感个体和低温耐受个体进行扩增分析。结果显示:10对SSR引物共扩增到39个条带,仅标记KPC43的扩增条带在低温敏感和低温耐受个体间的出现频率... 为筛选大黄鱼耐低温性状相关分子标记,对大黄鱼进行降温实验(15℃降至6℃)后用SSR标记对低温敏感个体和低温耐受个体进行扩增分析。结果显示:10对SSR引物共扩增到39个条带,仅标记KPC43的扩增条带在低温敏感和低温耐受个体间的出现频率存在显著差异。标记KPC43共扩增到3个等位基因,其中KPC43170bp在低温耐受组中出现的频率(80.0%)显著高于低温敏感组(23.33%),该条带与大黄鱼耐低温能力存在极显著正相关(P<0.01),相关系数为0.498;KPC43150bp在低温敏感组中出现的频率(76.67%)显著高于低温耐受组(30.0%),与大黄鱼耐低温能力存在极显著负相关(P<0.01),相关系数达到-0.417。序列比对显示KPC43170bp仅核心序列比KPC43150bp多了10个(TG)重复。推测SSR标记KPC43可能与大黄鱼耐低温性状相关基因连锁,其核心序列的重复次数可能与该基因的表达活性有关,从而影响大黄鱼个体的耐低温能力。 展开更多
关键词 大黄鱼 耐低温 微卫星标记
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光唇鱼(Acrossocheilus fasciatus)Leptin基因克隆及禁食-再投喂对其表达的影响 被引量：1
2
作者 穆方申 苗亮 +3 位作者 李明云 侯红红 李笑萌 徐玉敏 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期822-829,共8页
瘦素(Leptin)是在动物摄食和能量代谢调节中具有重要作用的一种蛋白。为研究光唇鱼(Acrossocheilus fasciatus)中Leptin基因(AfLep)的结构和功能,作者克隆了其c DNA序列全长。结果显示AfLep由1315个核苷酸组成,含1个长度为516bp的开放... 瘦素(Leptin)是在动物摄食和能量代谢调节中具有重要作用的一种蛋白。为研究光唇鱼(Acrossocheilus fasciatus)中Leptin基因(AfLep)的结构和功能,作者克隆了其c DNA序列全长。结果显示AfLep由1315个核苷酸组成,含1个长度为516bp的开放阅读框,预测编码蛋白由171个氨基酸残基组成并具有长度为20aa的信号肽。系统进化树中AfLep与其他鲤科鱼类的Leptin蛋白聚为一簇,与齐口裂腹鱼(Schizothorax prenanti)进化相关性最高。多重序列比对显示AfLep与齐口裂腹鱼Leptin蛋白相似性最高(86.7%),与鲤科其他鱼类间的相似性均在80%以上。AfLep具有脊椎动物Leptin蛋白的4个保守?螺旋结构,其三级结构与人Leptin相似。AfLep在光唇鱼肝脏中的表达量最高,其次是脑和肾,其他组织中仅有微弱表达。实时荧光定量PCR检测显示禁食后光唇鱼肝脏AfLep表达量降低(P<0.05),禁食1d、3d、7d时的表达量分别比与禁食前降低了58.25%、73.82%和92.05%;禁食1d和3d的鱼经再投喂后肝脏AfLep表达量均显著升高(P<0.05),但禁食7d的鱼再投喂后AfLep表达量仅略有升高(P>0.05)。上述结果表明AfLep参与了光唇鱼的摄食管理和能量代谢调控。 展开更多
关键词 光唇鱼 LEPTIN基因 组织表达 禁食-再投喂
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“东海1号”大黄鱼选育F_4代遗传多样性的AFLP分析 被引量：1
3
作者 侯红红 苗亮 +2 位作者 李明云 穆方申 徐玉敏 《宁波大学学报（理工版）》 CAS 2018年第4期31-35,共5页
应用扩增片段长度多态性(AFLP)技术对以岱衢洋野生大黄鱼为亲本、通过群体选育方法获得的"东海1号"大黄鱼选育系F4代进行了遗传多样性分析.结果显示:16对AFLP选择性扩增引物组合在选育F4代的20尾个体中共扩增出736个位点,其... 应用扩增片段长度多态性(AFLP)技术对以岱衢洋野生大黄鱼为亲本、通过群体选育方法获得的"东海1号"大黄鱼选育系F4代进行了遗传多样性分析.结果显示:16对AFLP选择性扩增引物组合在选育F4代的20尾个体中共扩增出736个位点,其中多态位点292个,多态率为39.67%;各引物对的Nei’s遗传多样性指数范围为0.090 4~0.203 7,平均值为0.139 9;Shannon多样性范围为0.132 0~0.304 7,平均值为0.209 9;其遗传多样性水平与原始亲本群体相当.表明若群体选育方法得当,多代选育后仍能维持较好的遗传多样性水平. 展开更多
关键词 大黄鱼 扩增片段长度多态性(AFLP)技术 遗传多样性
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香鱼成熟卵母细胞过熟进程中卵膜超微结构变化
4
作者 徐玉敏 苗亮 +5 位作者 李明云 安钦 李笑萌 穆方申 侯红红 陈炯 《生物学杂志》 CAS CSCD 2016年第5期5-7,共3页
香鱼成熟卵母细胞能较长时间维持受精能力,但随时间延迟受精能力逐渐降低直至消失。为探索其机制,采用透射电镜技术观察了香鱼卵母细胞过熟进程中卵膜超微结构的变化。结果显示:处于滤泡内时,成熟卵母细胞表面的放射膜(Zona radiate,ZR... 香鱼成熟卵母细胞能较长时间维持受精能力,但随时间延迟受精能力逐渐降低直至消失。为探索其机制,采用透射电镜技术观察了香鱼卵母细胞过熟进程中卵膜超微结构的变化。结果显示:处于滤泡内时,成熟卵母细胞表面的放射膜(Zona radiate,ZR)分为3层,从外到内依次是放射外膜1(ZR1)、放射膜2(ZR2)、放射膜3(ZR3),其中ZR1最厚;放射膜外有一层胶膜(Jelly coat,JC)。排出后的成熟卵母细胞放射膜ZR1消失,仅ZR2和ZR3两层,但放射膜外面的胶膜层依然存在,此时ZR2很薄,ZR3层次明暗分明,包含明暗相间的各5条带并且完全不透明,在与卵膜垂直的方向上形成亮区(Light region,LR)和暗区(Dark region,DR)。随着排卵后的时限延长,至48 h后,卵的胶膜层消失,放射膜压缩,内部出现孔道(Pore canals,PC);60 h后胶膜层孔道数量增多,孔径变大;至96 h时孔道变长,贯穿ZR3的1/2;至104 h时ZR2基本解体,孔道继续伸长并贯穿ZR3,至此成熟卵母细胞彻底凋亡。 展开更多
关键词 香鱼 卵母细胞 过熟 卵膜 透射电镜
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象山港黄墩支港菲律宾蛤仔种群COI和ITS1基因序列特征及遗传多样性分析
5
作者 李明云 王礼闪 +2 位作者 苗亮 穆方申 杜静雅 《宁波大学学报（理工版）》 CAS 2020年第6期1-6,共6页
为了解象山港黄墩支港菲律宾蛤仔种质资源的遗传多样性现状,采用COI和ITS1分子标记对该种群进行了基因序列特征和遗传多样性分析.结果表明:在该种群30个个体中扩增得到的COI基因序列长度均为709 bp,ITS1序列长度范围在693~729 bp(共有74... 为了解象山港黄墩支港菲律宾蛤仔种质资源的遗传多样性现状,采用COI和ITS1分子标记对该种群进行了基因序列特征和遗传多样性分析.结果表明:在该种群30个个体中扩增得到的COI基因序列长度均为709 bp,ITS1序列长度范围在693~729 bp(共有746个位点).COI基因序列的位点中有670个保守位点(占94.50%)、39个变异位点(占5.50%);ITS1序列的位点中有保守位点671个(占89.95%)、变异位点62个(占8.31%)和缺失/插入位点13个(占1.74%).COI基因序列的保守性高于ITS1序列.在COI基因序列中碱基(A+T)的占比(65.84%)高于(C+G),而ITS1序列中则是碱基(A+T)占比(37.59%)低于(C+G).COI和ITS1序列的遗传距离分析均显示群体内遗传分化不明显.基于COI基因序列和ITS1序列构建的遗传进化树显示:各科贝类分别相聚,象山港菲律宾蛤仔位于帘蛤科的分支中,其COI序列与杂色蛤进化关系最近.遗传进化树中各种贝类的聚类关系与传统分类学结果相一致,可作为分类的参考. COI和ITS1序列的平均核苷酸差异数分别为5.497和6.549,核苷酸多样性指数分别为0.007 75和0.009 73,单倍型数目分别为21和28,单倍型多样性分别为0.963和0.993,根据COI和ITS1两个序列计算得到的菲律宾蛤仔象山港群体单倍型多样性均大于0.5,核苷酸多样性指数均大于0.005,表明该种群遗传多样性丰富,并处于稳定状态.本研究结果补充了菲律宾蛤仔遗传多样性方面的研究资料,并可为象山港菲律宾蛤仔种质资源保护和遗传育种提供理论基础. 展开更多
关键词 菲律宾蛤仔 象山港黄墩支港 序列特征 遗传多样性 线粒体细胞色素氧化酶I(COI) 内转录间隔区1(ITS1)
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急性镉胁迫对大弹涂鱼血清铁代谢指标的影响 被引量：1
6
作者 杜静雅 苗亮 +3 位作者 李明云 穆方申 侯红红 赵亮 《生物学杂志》 CAS CSCD 2017年第6期37-41,共5页
研究了不同浓度(0.05、0.25、0.5和5 mg/L)的急性镉胁迫(0~24 h)对大弹涂鱼血清铁含量、总铁结合力、铁蛋白含量等铁代谢指标的影响。结果显示:镉胁迫后大弹涂鱼血清铁浓度均呈先降低后升高的变化(P<0.05),并且镉浓度越高血清铁的变... 研究了不同浓度(0.05、0.25、0.5和5 mg/L)的急性镉胁迫(0~24 h)对大弹涂鱼血清铁含量、总铁结合力、铁蛋白含量等铁代谢指标的影响。结果显示:镉胁迫后大弹涂鱼血清铁浓度均呈先降低后升高的变化(P<0.05),并且镉浓度越高血清铁的变化幅度越大,4个浓度组血清铁的最低值均出现在胁迫后6 h时,24 h时均显著高于胁迫前(P<0.05)。总铁结合力在镉胁迫后呈先降后升的变化,但低浓度下变化差异不显著(P>0.05)。除最高浓度组外,其他浓度组24 h时的总铁结合力均已回升到或超过胁迫前的水平。浓度较低的2个镉胁迫组中血清铁蛋白浓度均未出现显著变化,而另2个浓度较高的组则在胁迫12 h后显著升高(P<0.05),并且升高幅度与镉浓度和胁迫时间均呈正相关,研究结果可为深入研究镉通过干扰铁代谢对大弹涂鱼产生毒性的机理提供参考资料。 展开更多
关键词 大弹涂鱼 镉胁迫 铁代谢指标
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镉胁迫对香鱼热休克转录因子1基因组织表达的影响 被引量：1
7
作者 李笑萌 苗亮 +3 位作者 李明云 徐玉敏 穆方申 陈炯 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期574-580,共7页
[目的]克隆香鱼热休克转录因子1(Heat shock transcription factor1,HSF1)基因,并探究镉胁迫对其表达的影响。[方法]利用3’RACE和5’RACE技术克隆香鱼HSF1基因c DNA全长,并进行序列分析,通过半定量PCR(RTPCR)检测HSF1在各组织中的表达... [目的]克隆香鱼热休克转录因子1(Heat shock transcription factor1,HSF1)基因,并探究镉胁迫对其表达的影响。[方法]利用3’RACE和5’RACE技术克隆香鱼HSF1基因c DNA全长,并进行序列分析,通过半定量PCR(RTPCR)检测HSF1在各组织中的表达情况,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测分析镉胁迫后HSF1表达量的变化。[结果]香鱼HSF1基因c DNA序列全长2 127 bp(不含poly A),含一个1 587bp、编码528个氨基酸的开放阅读框(ORF);预测其编码蛋白分子量为57.956 87 k Da,等电点为4.56。与虹鳟进化关系最近。反转录PCR(RT-PCR)显示香鱼HSF1基因在鳃中表达量最低、肌肉中次之,其余组织中基本一致。qRT-PCR结果显示镉胁迫后香鱼肝、心和肌肉中HSF1基因表达量均显著增加,脾、肾和鳃中表达量均显著减少。[结论]HSF1基因参与香鱼镉胁迫应激反应。 展开更多
关键词 热休克转录因子1 镉胁迫 实时荧光定量PCR 组织表达
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