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大规模网络开放课程(MOOCs)对食品科学高等教育的影响与启示
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作者 穆杨 陈芳怡 +2 位作者 郭思宇 龙彬彬 周梦舟 《中国食品》 2024年第6期44-46,共3页
随着信息技术的迅猛发展,大规模网络开放课程(MOOCs,以下简称“慕课”)作为一种新兴的教育模式,迅速在高等教育领域崭露头角。对于食品科学高等教育而言,慕课的影响可能更为深远。在食品工业日益发展、食品安全问题备受关注的今天,食品... 随着信息技术的迅猛发展,大规模网络开放课程(MOOCs,以下简称“慕课”)作为一种新兴的教育模式,迅速在高等教育领域崭露头角。对于食品科学高等教育而言,慕课的影响可能更为深远。在食品工业日益发展、食品安全问题备受关注的今天,食品科学高等教育肩负着培养高素质专业人才的重任,慕课则以其开放性、优质性和广泛性,为食品科学高等教育带来了新的机遇和挑战。本文从多个角度分析了慕课在食品科学领域的应用与启示,并提出了一些针对慕课的教育改革观点,以期为教育工作者提供有益的参考。 展开更多
关键词 大规模网络开放课程 高等教育 食品科学 教育工作者 信息技术 慕课 优质性 影响与启示
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群体感应在发酵食品中的研究进展
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作者 王文悦 余帆 +8 位作者 易弛 张霖 肖柯 樊鑫 肖俊锋 朱晓青 穆杨 汪超 周梦舟 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期290-299,共10页
微生物在发酵食品中起着重要作用,群体感应作为微生物依赖于细胞密度而调控其生理行为的一种机制,在发酵食品中也应受到关注。近年来有研究表明发酵食品中群体感应的调控与食品品质及风味有着密切的联系。因此,该文综述了群体感应信号... 微生物在发酵食品中起着重要作用,群体感应作为微生物依赖于细胞密度而调控其生理行为的一种机制,在发酵食品中也应受到关注。近年来有研究表明发酵食品中群体感应的调控与食品品质及风味有着密切的联系。因此,该文综述了群体感应信号分子的定义及分类、群体感应对发酵体系中微生物和各种发酵食品的调控作用,最后对群体感应在发酵食品行业中的研究及应用前景进行了总结与展望,以期为发酵食品产业提供新的见解。 展开更多
关键词 群体感应 群体感应信号分子 发酵微生物 发酵食品 调控机制
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乳酸菌的乙醇耐受机制及其在食醋生产中的应用
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作者 张霖 夏程程 +10 位作者 王文悦 余帆 肖柯 易弛 樊鑫 朱晓青 肖俊锋 李琴 汪超 穆杨 周梦舟 《现代食品科技》 CAS 北大核心 2024年第3期91-101,共11页
传统固态发酵食醋因其丰富的菌群在风味、品质等方面有着不可比拟的优势,乳酸菌作为固态食醋发酵中重要的功能微生物,广泛应用于食品、生物等领域。然而,食醋在发酵过程中乳酸菌会受到高乙醇环境的胁迫,因此探究乳酸菌如何在高乙醇环境... 传统固态发酵食醋因其丰富的菌群在风味、品质等方面有着不可比拟的优势,乳酸菌作为固态食醋发酵中重要的功能微生物,广泛应用于食品、生物等领域。然而,食醋在发酵过程中乳酸菌会受到高乙醇环境的胁迫,因此探究乳酸菌如何在高乙醇环境下生存具有积极意义。该研究选择耐乙醇副干酪乳杆菌(PC-5)和不耐乙醇植物乳杆菌(PR-7)作为实验对比菌株,通过检测生物指标发现:在体积分数为8%的乙醇环境下,PC-5的多糖含量占比和细胞膜通透性分别提高至0.56%和75%,且显著高于PR-7。此外,代谢途径中的己糖激酶(Hexokinase,HK)、6-磷酸果糖激酶(6-Phosphofructokinase,PFK)、丙酮酸激酶(Pyruvate Kinase,PK)的活性均高于PR-7,并分别提高至99.82、2.78、3.43 U/mg。最后,在食醋不同发酵阶段中加入PC-5使其与酵母菌实现共同发酵,结果发现:共发酵食醋体系中多酚的生成和总抗氧化能力比单菌发酵分别提升了32.14%和55.56%。因此乳酸菌对食醋发酵有着良好的促进作用,为乳酸菌参与食醋共发酵提供了良好的理论依据。 展开更多
关键词 乳酸菌 细胞膜 乙醇胁迫 混菌发酵
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甲基乙二醛毒性机制及天然抑制剂的研究进展
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作者 易弛 王文悦 +5 位作者 余帆 樊鑫 朱晓青 肖俊锋 周梦舟 穆杨 《食品研究与开发》 CAS 2024年第9期193-201,共9页
甲基乙二醛(methylglyoxal,MGO)是美拉德反应的中间产物,也是糖酵解的产物。除了人体自身产生的MGO,食品、饮料以及食品加工过程中产生的MGO会在体内积累,MGO积累通常与各种慢性疾病相关,如糖尿病、肾病等。该文从MGO产生及代谢、毒性... 甲基乙二醛(methylglyoxal,MGO)是美拉德反应的中间产物,也是糖酵解的产物。除了人体自身产生的MGO,食品、饮料以及食品加工过程中产生的MGO会在体内积累,MGO积累通常与各种慢性疾病相关,如糖尿病、肾病等。该文从MGO产生及代谢、毒性作用机制、解毒系统的研究现状等方面进行概述,MGO可直接或间接对机体内线粒体、内质网造成损伤,并激活相关信号通路。人体内MGO主要依靠乙二醛酶系统解毒,一些天然化学产物因较高的抗糖基化能力可有效清除外源性MGO,应用于食品体系中提高食品安全性。该文概述天然化学产物清除MGO的研究进展并比较各种天然化学产物抑制MGO机制,以期为开发新的MGO抑制剂提供理论依据。 展开更多
关键词 甲基乙二醛 二羰基化合物 毒性机制 解毒系统 天然化合物MGO抑制剂
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猪干扰素诱导跨膜蛋白3的克隆表达及多克隆抗体制备
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作者 王慧 郑丹阳 +4 位作者 高洁 姜博 臧冉 徐飞飞 穆杨 《动物医学进展》 北大核心 2023年第11期14-19,共6页
为原核表达猪干扰素诱导跨膜蛋白3(swine interferon-induced transmembrane protein 3,SwIFITM3)并制备其多克隆抗体(polyclonal antibody,pAb),从干扰素刺激的猪外周血淋巴细胞中克隆到SwIFITM3编码基因,然后采用大肠埃希氏菌表达系... 为原核表达猪干扰素诱导跨膜蛋白3(swine interferon-induced transmembrane protein 3,SwIFITM3)并制备其多克隆抗体(polyclonal antibody,pAb),从干扰素刺激的猪外周血淋巴细胞中克隆到SwIFITM3编码基因,然后采用大肠埃希氏菌表达系统表达并纯化目的蛋白免疫小鼠制备其pAb;并以制备的pAb为一抗用Western blot检测了猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)感染猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophages,PAMs)中SwIFITM3表达情况。结果显示,获得了438 bp的SwIFITM3基因,将获得的目的基因插入pColdⅠ载体构建重组质粒转入E.coli BL21(DE3)感受态细胞,用0.2 mmol/L IPTG在16℃诱导24 h后获得了大小约19 ku可溶性表达的目的蛋白,以Anti-His单克隆抗体为一抗进行Western blot检测,获得了与预期大小一致的印迹条带;用纯化的目的蛋白腹腔注射免疫小鼠3次,采用间接ELISA方法检测,小鼠血清中SwIFITM3抗体效价最高达1∶1024000;以制备的pAb为一抗的Western blot检测显示PRRSV感染导致PAMs中SwIFITM3蛋白表达显著降低。试验结果为猪IFITM3的生物学功能及相关研究积累了材料。 展开更多
关键词 干扰素诱导跨膜蛋白3 原核表达 多克隆抗体 猪繁殖与呼吸综合征病毒
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内分泌代谢疾病与男性不育症 被引量:1
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作者 罗凌波 穆杨 杨菁 《生殖医学杂志》 CAS 2023年第1期133-137,共5页
不育症是指规律性生活下未采取避孕措施一年以上而未怀孕,其中男性因素占比约为50%。在男性不育症中,内分泌代谢改变起着重要的作用。肥胖患者外周芳香化酶含量升高,使得睾酮转化为雌激素,肥胖还会介导炎症和内质网应激,并改变脂肪因子... 不育症是指规律性生活下未采取避孕措施一年以上而未怀孕,其中男性因素占比约为50%。在男性不育症中,内分泌代谢改变起着重要的作用。肥胖患者外周芳香化酶含量升高,使得睾酮转化为雌激素,肥胖还会介导炎症和内质网应激,并改变脂肪因子如瘦素、脂联素和补体C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白3(CTRP3)分泌从而影响男性生育能力。糖尿病患者睾丸糖代谢异常,间质细胞功能异常,氧化应激水平加剧,这些都会导致男性不育症的发生,此外,糖尿病还会改变睾丸表观遗传学,并通过下调睾丸血管内皮生长因子(VEGF)表达降低男性生育力。除了肥胖和糖尿病,甲状腺功能异常(包括亢进和减低)也会通过影响睾酮分泌、调节细胞周期蛋白酶抑制因子、上调cAMP合成和Ca 2+释放等途径影响精液质量。 展开更多
关键词 不育症 肥胖 糖尿病 甲状腺疾病
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发酵乳杆菌对灭菌豆浆中晚期糖化终末产物形成的影响
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作者 张霖 肖柯 +8 位作者 王文悦 易弛 余帆 肖俊峰 樊鑫 朱晓青 李琴 周梦舟 穆杨 《食品研究与开发》 CAS 2024年第6期9-15,共7页
豆浆含有优质蛋白质、必需脂肪酸和大量维生素,其经过巴氏杀菌或超高温处理会促进还原糖和蛋白质之间的糖基化反应,产生糖基化产物和晚期糖化终末产物(advanced glycation end products,AGEs),进而对人类健康造成威胁。为提高豆浆的品质... 豆浆含有优质蛋白质、必需脂肪酸和大量维生素,其经过巴氏杀菌或超高温处理会促进还原糖和蛋白质之间的糖基化反应,产生糖基化产物和晚期糖化终末产物(advanced glycation end products,AGEs),进而对人类健康造成威胁。为提高豆浆的品质,该文利用发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)发酵豆浆,探究发酵乳杆菌对灭菌豆浆AGEs含量的影响。结果表明,经L.fermentum发酵灭菌后的豆浆,荧光强度降低12%~17%。发酵豆浆可减少羰基化对蛋白二级结构的破坏,α-螺旋转变成β-折叠和无规卷曲。同时,发酵使灭菌豆浆的异黄酮含量从274.43μg/mL提升至351.83μg/mL;发酵乳杆菌发酵豆浆与豆浆相比,可显著提高抗氧化活性。综上所述,乳酸菌可抑制食品加工过程中AGEs的形成。 展开更多
关键词 发酵豆浆 发酵乳杆菌 蛋白二级结构 异黄酮生物转化 蛋白非酶糖化反应
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普罗布考对H_(2)O_(2)诱导的TM3小鼠睾丸间质细胞内氧化应激和细胞凋亡的影响
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作者 罗凌波 穆杨 杨菁 《生殖医学杂志》 CAS 2023年第3期420-426,共7页
目的探究普罗布考对过氧化氢(H_(2)O_(2))介导的小鼠睾丸间质细胞系(TM3)损伤的影响。方法体外培养TM3细胞,分为3组:对照组、H_(2)O_(2)损伤模型组和普罗布考处理组。CCK8检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率,活性氧(ROS)检测试剂... 目的探究普罗布考对过氧化氢(H_(2)O_(2))介导的小鼠睾丸间质细胞系(TM3)损伤的影响。方法体外培养TM3细胞,分为3组:对照组、H_(2)O_(2)损伤模型组和普罗布考处理组。CCK8检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率,活性氧(ROS)检测试剂盒检测细胞内ROS水平,ELISA测定细胞上清睾酮水平,实时荧光定量PCR检测细胞内睾酮合成酶类固醇激素合成急性调节蛋白(StAR)和17β-羟基类固醇脱氢酶(HSD-17β)、细胞凋亡指标Bax、Caspase3和氧化应激相关指标核因子E2相关因子2(NRF2)、血红素加氧酶-1(HO-1)的mRNA水平,Western blot检测细胞内Bax和Caspase3蛋白表达改变。结果与对照组比较,H_(2)O_(2)损伤模型组细胞存活率显著降低、凋亡率显著升高(P<0.05),Bax和Caspase3表达显著上调(P<0.05),细胞内ROS水平显著升高、NRF2和HO-1水平显著降低(P<0.05),睾酮分泌量和睾酮合成酶表达显著降低(P<0.05);与H_(2)O_(2)损伤模型组比较,普罗布考处理组细胞存活率显著升高、凋亡率显著下降(P<0.05),Bax和Caspase3表达显著下调(P<0.05),细胞内ROS水平显著下降、NRF2和HO-1水平显著升高(P<0.05),睾酮分泌量和睾酮合成酶表达增高(P<0.05)。结论普罗布考可以减轻H_(2)O_(2)诱导的TM3细胞凋亡和睾酮合成异常,这种保护作用可能与普罗布考的抗氧化和抗凋亡效应有关。 展开更多
关键词 普罗布考 过氧化氢 TM3小鼠睾丸间质细胞 氧化应激 细胞凋亡
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犊牛腹泻病原的分离鉴定 被引量:9
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作者 穆杨 柯霓霞 +2 位作者 许信刚 董小静 张耀相 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2007年第5期79-80,共2页
关键词 犊牛腹泻 分离鉴定 病原 致病微生物 实验室诊断 常见病 养牛业 陕西省
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三种佐剂对鸡体液免疫影响的比较 被引量:7
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作者 穆杨 周丽梅 +4 位作者 侯宏虎 吕娟 李楠 李煜隆 黄强力 《动物医学进展》 CSCD 2007年第10期37-39,共3页
佐剂是疫苗的重要组成部分,不同佐剂对体液免疫会产生不同的作用。选择合适的佐剂不仅可以增强疫苗的免疫效果,而且可以提高机体的抵抗力。本试验选用白油佐剂、弗氏佐剂和蜂胶佐剂分别与灭活的新城疫病毒制成疫苗,免疫雏鸡,探讨不同佐... 佐剂是疫苗的重要组成部分,不同佐剂对体液免疫会产生不同的作用。选择合适的佐剂不仅可以增强疫苗的免疫效果,而且可以提高机体的抵抗力。本试验选用白油佐剂、弗氏佐剂和蜂胶佐剂分别与灭活的新城疫病毒制成疫苗,免疫雏鸡,探讨不同佐剂对鸡体液免疫的影响。结果表明,试验组鸡抗体水平高,饲养至61日龄均未发生新城疫,其中弗氏佐剂的效果最好,蜂胶佐剂的效果次之,油佐剂的效果最次。 展开更多
关键词 佐剂 新城疫病毒 体液免疫
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不同佐剂新城疫疫苗对鸡体液免疫的影响 被引量:6
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作者 穆杨 周丽梅 +3 位作者 吕娟 李楠 李煜隆 黄强力 《中国家禽》 北大核心 2007年第19期12-14,共3页
佐剂是疫苗研究的重要组成部分。选择合适的佐剂不仅可以增强疫苗的免疫效果,而且可以提高机体的抵抗力。不同佐剂对体液免疫会产生不同的作用。本研究选用白油佐剂、弗氏佐剂和蜂胶佐剂与新城疫病毒抗原混合制成疫苗,免疫雏鸡,探讨不... 佐剂是疫苗研究的重要组成部分。选择合适的佐剂不仅可以增强疫苗的免疫效果,而且可以提高机体的抵抗力。不同佐剂对体液免疫会产生不同的作用。本研究选用白油佐剂、弗氏佐剂和蜂胶佐剂与新城疫病毒抗原混合制成疫苗,免疫雏鸡,探讨不同佐剂对鸡体液免疫的影响。结果表明,三种佐剂疫苗均有保护力,试验鸡饲养至61日龄均未发生新城疫,其中弗氏佐剂的效果最好,蜂胶佐剂的效果次之,油佐剂组检测到雏鸡61日龄时仍未出现抗体高峰值。 展开更多
关键词 佐剂 新城疫病毒 体液免疫
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抗独特型抗体研究进展 被引量:6
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作者 穆杨 周恩民 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期1691-1698,共8页
免疫系统是生物体体内执行免疫功能的组织系统,由免疫器官(组织)、免疫细胞和免疫分子组成。机体的免疫功能包括体液免疫和细胞免疫两大部分,两者相互独立又紧密配合,发挥免疫防御、免疫自稳和免疫监视等重要作用。
关键词 抗独特型抗体 体液免疫功能 独特型网络 抗体可变区 抗原刺激 免疫防御 免疫监视 免疫细胞 免疫分子 免疫应答
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马立克病肿瘤相关抗原间接ELISA检测方法的建立 被引量:2
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作者 穆杨 王玉东 +5 位作者 张彦明 李崴 李玉清 郑增忍 高敬 童德文 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第7期538-542,共5页
用自制并纯化的马立克病肿瘤相关表面抗原(MATSA)免疫SPF级BALB/c小鼠制备阳性对照抗体,以SPF级BALB/c小鼠血清为阴性对照抗体,筛选间接ELISA检测MATSA抗体的最佳反应条件。结果,包被液为0.1 mol/L pH 9.6的碳酸盐缓冲液,抗原包被... 用自制并纯化的马立克病肿瘤相关表面抗原(MATSA)免疫SPF级BALB/c小鼠制备阳性对照抗体,以SPF级BALB/c小鼠血清为阴性对照抗体,筛选间接ELISA检测MATSA抗体的最佳反应条件。结果,包被液为0.1 mol/L pH 9.6的碳酸盐缓冲液,抗原包被浓度为4μg/mL,封闭液为含10 g/L BSA的PBST,抗血清稀释比例为1:800,酶标抗体稀释比例为1:1200,酶标抗体作用时间为37℃温育45 min,底物作用时间为37℃温育15 min,终止液为2 mol/L H2SO4,洗涤4次,每次1min为最佳反应条件。将建立的方法应用于MATSA单克隆抗体研制过程中阳性克隆的筛选,成功获得了MATSA的单克隆抗体,表明该优化条件为间接ELISA检测MATSA抗体的最佳反应条件。 展开更多
关键词 马立克病肿瘤相关表面抗原 间接ELISA 条件 筛选
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传染性胃肠炎病毒陕西分离株S基因主要抗原位点基因的克隆与序列分析 被引量:4
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作者 穆杨 丛日华 梁宁 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期17-21,共5页
根据GenBank公布的猪传染性胃肠炎病毒S基因的序列,设计合成1对特异性引物,通过RT-PCR从用细胞增殖的TGEV病毒液中扩增编码S基因B、C抗原位点的基因片段,然后将获得的片段克隆至pMD18-T载体上,构建重组质粒。通过PCR、酶切和测序鉴定重... 根据GenBank公布的猪传染性胃肠炎病毒S基因的序列,设计合成1对特异性引物,通过RT-PCR从用细胞增殖的TGEV病毒液中扩增编码S基因B、C抗原位点的基因片段,然后将获得的片段克隆至pMD18-T载体上,构建重组质粒。通过PCR、酶切和测序鉴定重组质粒,将测序结果与GenBank公布的21个相关序列进行多序列比较并绘制进化树。所克隆的TGEV陕西分离株S基因B、C抗原位点基因片段长度为765 bp,与参考毒株的核苷酸同源性为96.1%~99.9%。进化树分析表明,分离株与中国的H株、HN2002株、TS株,美国的Miller M60株、Miller M6株及英国的FS772株亲缘关系较近,与H株的亲缘关系最近。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 S基因 克隆 序列分析
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马立克氏病肿瘤细胞表面抗原的提取与鉴定 被引量:2
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作者 穆杨 王玉东 +4 位作者 张彦明 童德文 李崴 李玉清 郑增忍 《中国农学通报》 CSCD 2005年第5期48-49,103,共3页
用MDVGA株感染1日龄SPF雏鸡,饲养至发病后获得MD肿瘤细胞,采用木瓜蛋白酶消化法从MD肿瘤细胞上提取马立克氏病肿瘤相关的表面抗原,经间接荧光抗体染色和间接ELISA鉴定,证明获得的粗提物中含有马立克氏病肿瘤相关的表面抗原,为进行马立... 用MDVGA株感染1日龄SPF雏鸡,饲养至发病后获得MD肿瘤细胞,采用木瓜蛋白酶消化法从MD肿瘤细胞上提取马立克氏病肿瘤相关的表面抗原,经间接荧光抗体染色和间接ELISA鉴定,证明获得的粗提物中含有马立克氏病肿瘤相关的表面抗原,为进行马立克氏病肿瘤相关的表面抗原的进一步研究奠定了基础。 展开更多
关键词 马立克氏病 表面抗原 肿瘤细胞 鉴定 提取 间接ELISA 荧光抗体染色 SPF雏鸡 酶消化法 相关 粗提物 MD 日龄 发病 木瓜
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猪血管内皮细胞体外培养方法的建立 被引量:4
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作者 穆杨 张彦明 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期46-49,共4页
实验研究了猪血管内皮细胞体外培养方法并对培养的细胞进行了鉴定。获得了传代培养的猪血管内皮细胞。结果表明:用Ⅰ型胶原酶和胰酶消化分离,均可获得接种量的原代培养物,但Ⅰ型胶原酶消化效果更好;原代或早期传代培养物中有时混入的成... 实验研究了猪血管内皮细胞体外培养方法并对培养的细胞进行了鉴定。获得了传代培养的猪血管内皮细胞。结果表明:用Ⅰ型胶原酶和胰酶消化分离,均可获得接种量的原代培养物,但Ⅰ型胶原酶消化效果更好;原代或早期传代培养物中有时混入的成纤维细胞可用柠檬酸胰酶有效清除。在不用贴附基质和内皮细胞生长因子(ECGF)的条件下,向生长液中加入胰岛素可成功的培养内皮细胞。该细胞在体外培养时贴壁生长,单层细胞呈"铺路石"状排列,细胞间存在接触抑制;第Ⅷ因子相关抗原免疫荧光染色阳性,证明培养的细胞为血管内皮细胞。 展开更多
关键词 血管 内皮细胞 体外培养 分离培养
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高脂饮食诱导大鼠生精功能障碍 被引量:5
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作者 穆杨 闫文杰 +1 位作者 尹太郎 杨菁 《医学研究杂志》 2015年第12期88-91,共4页
目的观察给予高脂饮食对大鼠生精功能的影响。方法健康成年雄性SD大鼠20只随机分为正常对照组和高脂饮食模型组。正常对照组给予正常饮食喂养,高脂饮食模型组大鼠给予高脂饮食喂养,8周后观察其生精功能的变化。结果与正常组大鼠相比,高... 目的观察给予高脂饮食对大鼠生精功能的影响。方法健康成年雄性SD大鼠20只随机分为正常对照组和高脂饮食模型组。正常对照组给予正常饮食喂养,高脂饮食模型组大鼠给予高脂饮食喂养,8周后观察其生精功能的变化。结果与正常组大鼠相比,高脂饮食组大鼠的睾丸重量/体重下降,组织学分析显示睾丸生精小管直径、生精细胞计数、间质细胞计数均下降,血清性激素水平明显异常。同时,高脂饮食组大鼠睾丸凋亡增强。结论高脂饮食可诱导大鼠生精功能障碍。 展开更多
关键词 高脂饮食 生精障碍 凋亡
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二甲双胍对H_(2)O_(2)诱导的TM3小鼠睾丸间质细胞氧化应激和细胞凋亡的影响 被引量:9
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作者 穆杨 杨菁 《生殖医学杂志》 CAS 2021年第5期644-648,共5页
目的探讨二甲双胍对H_(2)O_(2)诱导的TM3小鼠睾丸间质细胞损伤的作用。方法将TM3小鼠睾丸间质细胞随机分为4组,分别为正常对照组、二甲双胍组、H_(2)O_(2)模型组以及H_(2)O_(2)+二甲双胍组。各组细胞培养24 h后,利用CCK-8法检测细胞存活... 目的探讨二甲双胍对H_(2)O_(2)诱导的TM3小鼠睾丸间质细胞损伤的作用。方法将TM3小鼠睾丸间质细胞随机分为4组,分别为正常对照组、二甲双胍组、H_(2)O_(2)模型组以及H_(2)O_(2)+二甲双胍组。各组细胞培养24 h后,利用CCK-8法检测细胞存活率,ELISA检测TM3细胞睾酮的分泌情况,实时定量PCR检测睾酮合成酶StAR、P450scc、17β-HSD的mRNA表达情况,采用比色法检测超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性及丙二醛(MDA)含量,Western blot检测TM3细胞内凋亡相关蛋白Cleaved-caspase3的表达情况。结果与正常对照组相比,H_(2)O_(2)模型组TM3细胞的睾酮水平显著降低,睾酮合成酶StAR、P450scc和17β-HSD的mRNA表达水平显著降低,细胞内SOD和CAT活性显著降低,细胞存活率亦显著降低(P均<0.05),MDA含量及Cleaved-caspase3表达水平显著升高(P<0.05)。与H_(2)O_(2)模型组相比,H_(2)O_(2)+二甲双胍组TM3细胞的睾酮水平显著升高,睾酮合成酶的mRNA表达水平显著升高,SOD和CAT活性显著升高,细胞存活率显著提高(P均<0.05),MDA含量及Cleaved-caspase3表达水平显著降低(P<0.05)。结论二甲双胍可减轻H_(2)O_(2)诱导的TM3小鼠睾丸间质细胞功能损伤。 展开更多
关键词 二甲双胍 H_(2)O_(2) TM3小鼠睾丸间质细胞 细胞损伤
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关中黑猪IL-5 cDNA的克隆表达与多克隆抗体制备 被引量:1
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作者 穆杨 刘园园 +3 位作者 李亮亮 刘阳 尚川川 周恩民 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期953-957,共5页
目的克隆关中黑猪IL-5 cDNA,构建该基因的不同表达质粒,获得表达的IL-5并制备其多克隆抗体。方法提取佛波酯(PHA)刺激的关中黑猪外周血单个核细胞(PBMC)总RNA,RT-PCR克隆猪IL-5基因(sIL-5),鉴定后将sIL-5基因分别克隆到pQE30、pET-32a和... 目的克隆关中黑猪IL-5 cDNA,构建该基因的不同表达质粒,获得表达的IL-5并制备其多克隆抗体。方法提取佛波酯(PHA)刺激的关中黑猪外周血单个核细胞(PBMC)总RNA,RT-PCR克隆猪IL-5基因(sIL-5),鉴定后将sIL-5基因分别克隆到pQE30、pET-32a和pEGFP-N1中,构建重组表达质粒pQE-sIL-5和pET-sIL-5及pEGFP-sIL-5,将pEGFP-sIL-5瞬时转染PK-15细胞,将pQE-sIL-5和pET-sIL-5分别转化JM109和BL21,用1 mmol/L IPTG诱导目的蛋白表达,SDS-PAGE和Western blot法鉴定表达蛋白后,通过镍柱纯化目的蛋白。用纯化的BL21表达的IL-5免疫小鼠,制备其多克隆抗体,用纯化的JM109表达的IL-5通过优化的间接ELISA检测抗体效价。结果成功获得关中黑猪的IL-5基因(登录号KC660157),大小405 bp,与GenBank中猪IL-5参考序列同源性99.75%,仅25位的T变成C,但编码的氨基酸完全相同;荧光显微镜观察发现pEGFP-sIL-5在PK-15细胞中得到表达;SDS-PAGE结果显示JM109表达的目的蛋白的相对分子质量(M_r)约15 000,而BL21表达的目的蛋白M_r约30000,Western blot法检测结果表明,表达的目的蛋白均具有良好的反应原性;免疫小鼠后获得了IL-5的多克隆抗体,抗体效价最高可达1:12 800。结论克隆了关中黑猪IL-5基因片段并成功表达,获得了IL-5的多克隆抗体。 展开更多
关键词 IL-5 表达 多克隆抗体 ELISA
原文传递
人大血管内皮细胞培养条件的完善 被引量:2
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作者 穆杨 丛日华 张彦明 《动物医学进展》 CSCD 2002年第1期82-84,共3页
本研究的目的是确定支持人大血管内皮细胞增殖 的最适培养条件。以人隐静脉内皮 细胞(HSVEC)和人脐静脉内皮细胞(HUVEC)为研究对象,研究了基础培养基(14种)、胎牛血 清(FBS)和有丝分裂原(3种)的影响与细... 本研究的目的是确定支持人大血管内皮细胞增殖 的最适培养条件。以人隐静脉内皮 细胞(HSVEC)和人脐静脉内皮细胞(HUVEC)为研究对象,研究了基础培养基(14种)、胎牛血 清(FBS)和有丝分裂原(3种)的影响与细胞增殖的关系。另外还测定了几种胞外基质(ECM )包被的培养皿的效果。结果表明,促进细胞增殖最有效的培养基为MCDB131。与更常用的M1 19培养基相比,MCDB131可使细胞增殖提高 2.3倍。与不加血清的培养基相比,培养基中加 入20%FBS可使细胞增殖提高7.5倍。肝素(50 μg/mL)和内皮细胞生长补充物(ECGS)(50 μg/ mL)能显著提高细胞增殖。上皮细胞生长因子(EGF)不能提高细胞增殖。与生长在用纤 维粘连蛋白,层粘连蛋白,明胶或胶原I和IV包被的培养板上的细胞相比,生长在未包被的 培养板上的内皮细胞在增殖和形态方面无统计学差异。HSVEC和HUVEC增殖最大的培养条件为 MCDB131培养基中加入2 mmol/L谷氨酰胺,20% FBS,50 μg/mL 肝素和50 μg/mL ECGS 。ECM包被培养皿无增殖作用。 展开更多
关键词 人血管内皮细胞 培养基 生长因子 细胞外基质 细胞增殖 细胞培养
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