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小反刍兽疫病毒H蛋白抗体化学发光免疫分析检测方法的建立 被引量：4
1
作者 钱榜 刘振东 +5 位作者 赵印 李静 PRAJAPATI Meera 李彦敏 孙跃峰 窦永喜 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期120-129,共10页
本研究旨在建立小反刍兽疫病毒H蛋白抗体的化学发光免疫分析检测方法。以H蛋白4个反应原性较好的B细胞表位串联后为检测抗原,在确定抗原包被量和血清稀释度,优化血清和酶标二抗反应时间的基础上,用ROC曲线分析确定检测临界值,建立了小... 本研究旨在建立小反刍兽疫病毒H蛋白抗体的化学发光免疫分析检测方法。以H蛋白4个反应原性较好的B细胞表位串联后为检测抗原,在确定抗原包被量和血清稀释度,优化血清和酶标二抗反应时间的基础上,用ROC曲线分析确定检测临界值,建立了小反刍兽疫病毒H蛋白抗体化学发光免疫分析检测方法,然后对该方法进行敏感性、特异性和重复性评价。结果显示,建立的小反刍兽疫病毒H蛋白抗体化学发光免疫分析检测方法最佳抗原包被浓度为1.5×10^(-6)μg/孔,待检血清最佳稀释度为1∶100;血清及酶标二抗孵育时间均为10 min,检测方法的临界值为S/P=9.77%,批内及批间变异系数均小于10%;与口蹄疫、羊痘、蓝舌病及山羊传染性胸膜肺炎阳性血清不发生交叉反应;用建立的化学发光法和市售小反刍兽疫抗体cELISA试剂盒平行检测247份田间血清,两者相对符合率为94.33%,但化学发光法敏感性更高。研究结果表明,建立的小反刍兽疫病毒H蛋白抗体化学发光免疫分析方法灵敏、特异、稳定,可用于田间血清样品小反刍兽疫抗体检测。 展开更多
关键词 小反刍兽疫病毒 H蛋白 B细胞表位 化学发光免疫分析法
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小反刍兽疫检测方法的研究进展 被引量：2
2
作者 李静 刘振东 +1 位作者 孙跃峰 窦永喜 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期359-365,共7页
小反刍兽疫(PPR)是由小反刍兽疫病毒(PPRV)感染绵羊、山羊等小反刍动物引起的一种高度致死性病毒病,其流行不仅给全球养羊业造成了巨大经济损失,而且严重威胁野生小反刍类动物的生存和繁衍。根除PPR已成为世界各国的共同目标,在此过程... 小反刍兽疫(PPR)是由小反刍兽疫病毒(PPRV)感染绵羊、山羊等小反刍动物引起的一种高度致死性病毒病,其流行不仅给全球养羊业造成了巨大经济损失,而且严重威胁野生小反刍类动物的生存和繁衍。根除PPR已成为世界各国的共同目标,在此过程中除了有效的疫苗作为保障外,准确、快速的检测方法也是必不可少的关键手段,是PPR根除计划的重要组成部分。目前已建立多种PPRV检测方法,在PPR防控中发挥了重要作用。本文对现有PPR检测方法进行了总结和比较,并对未来发展趋势进行了展望,以期为PPR新型检测方法尤其是新型病原和核酸检测方法的建立和试剂研制提供参考。 展开更多
关键词 小反刍兽疫 抗原检测 抗体检测 核酸检测
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猪CD58分子基因克隆、表达及其结构功能预测 被引量：5
3
作者 窦永喜 景志忠 +5 位作者 侯俊玲 骆学农 张强 刘齐 左志林 才学鹏 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期388-394,共7页
CD58在机体免疫系统中具有重要作用,本研究通过对人、绵羊CD58 mRNA序列比对,设计兼并引物,应用反转录PCR技术克隆猪CD58基因,并在大肠杆菌中进行原核表达,同时运用生物信息学方法对其核苷酸序列、编码的氨基酸序列以及蛋白结构进行预... CD58在机体免疫系统中具有重要作用,本研究通过对人、绵羊CD58 mRNA序列比对,设计兼并引物,应用反转录PCR技术克隆猪CD58基因,并在大肠杆菌中进行原核表达,同时运用生物信息学方法对其核苷酸序列、编码的氨基酸序列以及蛋白结构进行预测。结果表明:克隆的猪CD58 cDNA全长800 bp,ORF为735 bp;将其在大肠杆菌中进行表达,产物可被CD58抗血清识别;序列比对结果显示猪、羊和人的CD58核苷酸序列及氨基酸序列同源性并不高,但蛋白结构预测表明三者蛋白结构非常相似,尤其是V区三维结构,这是异种动物淋巴细胞和红细胞发生黏附的分子基础。该研究为CD58作为疫苗佐剂或免疫调节药物在临床中的应用、进一步研究CD58分子结构及CD2-CD58复合物激活免疫系统的机理奠定了基础。 展开更多
关键词 猪CD58 基因克隆 表达 结构预测
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猪粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子基因的克隆、序列分析及蛋白结构预测 被引量：7
4
作者 窦永喜 才学鹏 景志忠 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期474-478,482,共6页
GM-CSF在机体免疫系统中发挥重要的免疫调节作用。用PHA与LPS体外联合刺激猪外周血单个核细胞,采用RT-PCR技术成功克隆了猪GM-CSF基因。序列分析表明,该序列与NCBI/GenBank上登载的序列有两个碱基不同;将猪与人、牛、羊、狗、猫、鼠等... GM-CSF在机体免疫系统中发挥重要的免疫调节作用。用PHA与LPS体外联合刺激猪外周血单个核细胞,采用RT-PCR技术成功克隆了猪GM-CSF基因。序列分析表明,该序列与NCBI/GenBank上登载的序列有两个碱基不同;将猪与人、牛、羊、狗、猫、鼠等动物的GM-CSF基因序列相比较,其一致性分别为82.1%8、5%、88.1%、82.8%、83.7%、70.5%,在氨基酸水平上一致性为70.3%7、0.9%7、8.1%、70.3%7、1.9%、54.4%。然后利用生物信息学和分子生物学软件,对猪GM-CSF的结构进行预测,结果表明,猪GM-CSF为一结构松散的球状蛋白分子。猪GM-CSF基因的成功克隆及其编码蛋白结构的预测为开发高效、低毒且性质稳定的猪GM-CSF产品奠定了基础。 展开更多
关键词 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 基因克隆 序列分析 结构预测
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细胞因子及其应用的研究进展 被引量：9
5
作者 窦永喜 景志忠 才学鹏 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2005年第3期233-238,共6页
　　 概述了细胞因子的特性、分类及其基因转录和表达调控的机理,介绍了一些细胞因子在疾病诊断、治疗和预防方面的作用,对其在免疫学,特别是作为疫苗佐剂方面的应用前景进行了展望。
关键词 细胞因子 分类 转录 表达 疫苗佐剂
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猪繁殖和呼吸系统综合征病毒的分子生物学研究进展 被引量：5
6
作者 窦永喜 王云 《动物医学进展》 CSCD 2001年第4期21-24,共4页
本文综述近年来有关猪繁殖和呼吸系统综合征病毒分子生物学方面的研究概况 ,内容涉及病毒基因组、蛋白及其变异 。
关键词 猪繁殖呼吸综合征病毒 分子生物学 研究进展 病毒基因组 PRRSV
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猪IFN-γ基因的克隆与序列分析 被引量：1
7
作者 窦永喜 侯俊琳 +4 位作者 景志忠 骆学农 贾万忠 蒙学莲 才学鹏 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2003年第9期11-15,共5页
猪IFN γ具有强烈的抗病毒、抗肿瘤和免疫调节作用 ,作为生物药剂和疫苗佐剂具有广阔的应用前景。通过对猪PBMC刺激诱导 ,提取总RNA ,然后采用RT PCR技术成功克隆了猪IFN γ基因。序列分析表明 ,克隆到的基因序列与NCBIGenBank上登载的... 猪IFN γ具有强烈的抗病毒、抗肿瘤和免疫调节作用 ,作为生物药剂和疫苗佐剂具有广阔的应用前景。通过对猪PBMC刺激诱导 ,提取总RNA ,然后采用RT PCR技术成功克隆了猪IFN γ基因。序列分析表明 ,克隆到的基因序列与NCBIGenBank上登载的猪IFN γ基因序列完全一致。该基因的成功克隆为IFN γ的进一步研究和开发奠定了基础。 展开更多
关键词 猪IFN-γ 猪干扰素-γ 基因克隆 序列分析 RT-PCR 疫苗佐剂 生物制剂
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猪IFN-γ基因的融合表达及其表达产物的生物学特性
8
作者 窦永喜 翟军军 +3 位作者 李健 潘晓梅 景志忠 才学鹏 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期525-530,共6页
依照猪IFN-γ(pIFN-γ)成熟蛋白基因序列设计引物,将已扩增的pIFN-γ基因克隆至原核表达载体pGEX-4T-1中,构建了GST-pIFN-γ融合表达载体,该载体转化宿主菌BL21后用IPTG进行诱导表达并对诱导表达条件进行了筛选和优化,筛选出最佳诱导表... 依照猪IFN-γ(pIFN-γ)成熟蛋白基因序列设计引物,将已扩增的pIFN-γ基因克隆至原核表达载体pGEX-4T-1中,构建了GST-pIFN-γ融合表达载体,该载体转化宿主菌BL21后用IPTG进行诱导表达并对诱导表达条件进行了筛选和优化,筛选出最佳诱导表达条件后大量诱导表达,可溶性的表达产物经GST琼脂糖凝胶亲和纯化;包涵体经DOC洗涤、SKL变性溶解、透析复性进行纯化。经SDS-PAGE和Western-blot分析,证实得到了高纯度的融合蛋白,该蛋白的分子质量为42ku。选择FMDV和PRV两种不同的病毒(RNA病毒和DNA病毒)进行GST-pIFN-γ抗病毒活性测定。结果表明,GST-pIFN-γ融合蛋白可有效抑制这两种病毒引起的细胞病变,其对FMDV的抑制作用远远大于对PRV的抑制。对GST-pIFN-γ融合蛋白的稳定性及机体毒副作用的研究表明,该pIFN-γ的稳定性有较大提高,而毒副作用大大降低。 展开更多
关键词 猪 IFN-Γ基因 融合表达 蛋白纯化 生物学活性
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CD_(58)免疫增强作用的研究 被引量：2
9
作者 窦永喜 刘百林 《甘肃畜牧兽医》 2001年第5期3-4,共2页
从绵羊血红细胞膜上提取CD58,经鉴定其活性为 12个活性单位 /mL。将提取的CD58用于免疫 ,观察CD58的免疫增强作用 ,同时对后海穴在免疫中的作用进行了探讨。结果表明 。
关键词 CD58 免疫增强 后海穴
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CpG模体的免疫激活机制及应用
10
作者 窦永喜 景志忠 张玉德 《生命的化学》 CAS CSCD 2004年第1期27-30,共4页
CpG模体是一些在机体内外具有强烈免疫激活功能的寡聚脱氧核苷酸短序列。文章综述了近年来有关CpG模体作用机制及其应用方面的研究进展。在机制方面 ,着重对CpGDNA细胞激活和信号转导两方面进行了详尽的阐述 ;在应用方面 ,重点介绍了其... CpG模体是一些在机体内外具有强烈免疫激活功能的寡聚脱氧核苷酸短序列。文章综述了近年来有关CpG模体作用机制及其应用方面的研究进展。在机制方面 ,着重对CpGDNA细胞激活和信号转导两方面进行了详尽的阐述 ;在应用方面 ,重点介绍了其作为疫苗佐剂和免疫性疾病治疗药物的研究现状。 展开更多
关键词 CPG 免疫激活 佐剂
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猪伪狂犬病的研究进展 被引量：3
11
作者 窦永喜 《甘肃畜牧兽医》 2001年第3期29-31,共3页
关键词 猪 伪狂犬病 研究进展
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分子工具在寄生虫学研究中的应用
12
作者 窦永喜 才学鹏 《寄生虫与医学昆虫学报》 CAS 2009年第4期255-260,共6页
现代分子技术对寄生虫的基础研究和应用研究都有着重要的影响，尤其是PCR相关技术有着更广泛的应用，因为PCR反应能够极其敏感的从少量的寄生虫材料中扩增到所需的DNA片段，另外高分辨率的电泳技术和基因组方法应用也越来越多。本文对... 现代分子技术对寄生虫的基础研究和应用研究都有着重要的影响，尤其是PCR相关技术有着更广泛的应用，因为PCR反应能够极其敏感的从少量的寄生虫材料中扩增到所需的DNA片段，另外高分辨率的电泳技术和基因组方法应用也越来越多。本文对核酸技术如聚合酶链式反应、突变扫描技术、指纹技术的发展和应用进行了综述，并着重强调了这些核酸技术在寄生虫方面的用途和潜力。 展开更多
关键词 寄生虫学 分子工具 聚合酶链式反应 突变扫描技术 指纹技术
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猪带绦虫45W-4BX和TSOL18的高效表达及免疫效果研究 被引量：13
13
作者 骆学农 郑亚东 +7 位作者 胡志敏 丁军涛 张少华 侯俊玲 窦永喜 郭爱疆 景志忠 才学鹏 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期212-217,共6页
RT-PCR扩增45W-4B和TSOL18基因,PCR截去45W-4B基因的N端信号肽和C端疏水氨基酸序列形成45W-4BX。将45W-4BX和TSOL18 PCR产物分别亚克隆入pGEX-4T-1,用IPTG诱导表达,取产物进行SDS-PAGE和Western blot分析。纯化表达产物制成油佐剂疫苗... RT-PCR扩增45W-4B和TSOL18基因,PCR截去45W-4B基因的N端信号肽和C端疏水氨基酸序列形成45W-4BX。将45W-4BX和TSOL18 PCR产物分别亚克隆入pGEX-4T-1,用IPTG诱导表达,取产物进行SDS-PAGE和Western blot分析。纯化表达产物制成油佐剂疫苗分别免疫家猪,用25 000枚猪带绦虫成熟虫卵进行攻击感染,ELISA检测各组的抗体水平,90 d后剖检计算各组的减虫率。结果表明,45W-4BX和TSOL18基因在大肠杆菌中分别以可溶性和包涵体形式获得高效表达,并能被囊虫病人血清所识别。重组蛋白免疫猪15 d血清抗体即为阳性,30 d左右达到峰值。2种重组抗原的减虫率均在88%以上,与囊虫粗抗原免疫效果相当。这为进一步研制基于45W-4BX和TSOL18的猪囊虫重组基因工程疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 TAENIA solium TSOL18 45W-4BX VACCINE protective EFFICACY
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猪带绦虫六钩蚴TSO18基因的克隆和表达 被引量：11
14
作者 骆学农 郑亚东 +3 位作者 吴旭刚 窦永喜 景志忠 才学鹏 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第3期262-264,共3页
关键词 猪带绦虫 六钩蚴 分子生物学技术 公共卫生问题 免疫相关基因 健康危害 经济损失 免疫预防 猪囊虫病 抗原成分 研究领域 体外克隆 表达产物 感染率 囊尾蚴 寄生虫
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猪白介素-18基因的克隆及其序列分析 被引量：29
15
作者 景志忠 窦永喜 +2 位作者 侯俊琳 蒙学莲 才学鹏 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2004年第7期3-7,共5页
通过对猪PBMC刺激诱导 ,提取总RNA ,然后采用RT PCR技术克隆了猪白介素 18(pIL 18)基因。序列分析结果表明 ,克隆的 pIL 18基因序列与GenBank上登录的 pIL 18基因序列完全一致 ,与其他各物种的IL 18基因间具有较大的种属差异性。该基... 通过对猪PBMC刺激诱导 ,提取总RNA ,然后采用RT PCR技术克隆了猪白介素 18(pIL 18)基因。序列分析结果表明 ,克隆的 pIL 18基因序列与GenBank上登录的 pIL 18基因序列完全一致 ,与其他各物种的IL 18基因间具有较大的种属差异性。该基因在国内的成功克隆为IL 展开更多
关键词 猪白介素-18基因 克隆 RT-PCR 同源性分析
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猪囊尾蚴磷蛋白在毕赤酵母中的表达及初步应用 被引量：11
16
作者 苏彩霞 才学鹏 +3 位作者 韩雪清 骆学农 郑亚东 窦永喜 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期424-427,共4页
将猪囊虫磷蛋白P2基因克隆到毕赤酵母表达系统分泌性表达载体pPIC9K中 ,构建了重组表达载体pPIC9K P2。经测序证明基因序列完全正确 ,从而大量制备重组质粒pPIC9K P2 ,并用SalⅠ、BglⅡ两种内切酶分别线性化 ,然后分别电转化毕赤酵母菌... 将猪囊虫磷蛋白P2基因克隆到毕赤酵母表达系统分泌性表达载体pPIC9K中 ,构建了重组表达载体pPIC9K P2。经测序证明基因序列完全正确 ,从而大量制备重组质粒pPIC9K P2 ,并用SalⅠ、BglⅡ两种内切酶分别线性化 ,然后分别电转化毕赤酵母菌种GS115 ,采用G418抗性梯度筛选得到高拷贝重组菌株 ,利用MM和MD培养基鉴定重组菌株Mut表型 ,然后用甲醇进行诱导表达 ;并对表达产物通过SDS PAGE、Western blot和ELISA分析 ,结果表明 ,重组菌株成功地分泌表达了分子量大小为 12 6kD ,表达量占分泌总蛋白的 3 3 % ,且具有免疫反应活性的重组磷蛋白 。 展开更多
关键词 猪囊尾蚴磷蛋白 毕赤酵母 表达 囊虫病
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猪带绦虫不同阶段45W-4BX和18kD基因联合表达及保护性分析 被引量：7
17
作者 骆学农 郑亚东 +4 位作者 窦永喜 郭爱疆 侯俊琳 景志忠 才学鹏 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期385-390,共6页
【目的】获得不同发育阶段基因联合表达的具有良好免疫保护性的重组抗原,为研制高效的猪囊虫基因工程疫苗奠定基础。【方法】PCR扩增截去45W-4B基因的信号肽和C端17个疏水氨基酸序列,经BamH I和EcoR I酶切后与表达载体pGEX-4T-1连接转化... 【目的】获得不同发育阶段基因联合表达的具有良好免疫保护性的重组抗原,为研制高效的猪囊虫基因工程疫苗奠定基础。【方法】PCR扩增截去45W-4B基因的信号肽和C端17个疏水氨基酸序列,经BamH I和EcoR I酶切后与表达载体pGEX-4T-1连接转化BL21感受态细胞,酶切及PCR扩增鉴定阳性克隆。测序正确的质粒经EcoR I和Not I酶切处理后与截去信号肽的18 kD基因连接,构建双基因融合表达载体pGEX-4BX/18。用IPTG诱导的表达产物,进行SDS-PAGE电泳、Western blot分析活性。分别用300μg重组GST-4BX、GST-4BX/18蛋白免疫猪,间接ELISA测定抗体水平。感染后90 d剖检计算各组的减虫率,比较评价重组抗原的免疫保护性。【结果】4BX/18 kD在大肠杆菌中获得高效表达,表达产物为50 kD的融合蛋白,并能被人囊虫和感染初期的猪囊虫阳性血清所识别。重组抗原免疫猪后45 d抗体达到峰值,联合表达重组抗原的减虫率为97%,GST-4BX免疫组的减虫率为95%。【结论】重组抗原4BX和4BX/18kD均具有较好的免疫保护效果,有望利用它们研制出抗猪囊尾蚴病的高效疫苗。 展开更多
关键词 猪带绦虫 45W-4BX 18kD 联合表达 免疫保护性分析
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小反刍兽疫病毒P基因的克隆及其结构与功能分析 被引量：7
18
作者 翟军军 窦永喜 +4 位作者 张海瑞 毛立 蒙学莲 骆学农 才学鹏 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期2355-2362,共8页
【目的】对小反刍兽疫病毒P基因进行克隆,并对其结构和功能的关系进行分析,为研究小反刍兽疫病毒P蛋白的功能及其在病毒增殖过程中的作用奠定基础。【方法】利用RT-PCR的方法对小反刍兽疫P基因全长进行克隆,通过生物学软件对其核苷酸序... 【目的】对小反刍兽疫病毒P基因进行克隆,并对其结构和功能的关系进行分析,为研究小反刍兽疫病毒P蛋白的功能及其在病毒增殖过程中的作用奠定基础。【方法】利用RT-PCR的方法对小反刍兽疫P基因全长进行克隆,通过生物学软件对其核苷酸序列和氨基酸序列进行了比对,利用I-TASSER进行三级结构预测,然后分析其结构和功能之间的关系。【结果】P基因和MV、CDV、RPV、DMV和PDV的P基因的相似性分别为62.9%、63.3%、64.4%、65.1%和60.4%,氨基酸的相似性分别为45.9%、46.2%、50.6%、50.3%和47.0%。三级结构表明该蛋白由3个结构域构成,中间是由多个α-螺旋构成的结构域,主要行使与L大蛋白和RNA结合的功能,两边分别是N-端和C-端结构域,C-端结构域含有3个α-螺旋,分别位于458—468aa、492—499aa和503—505aa位,主要作为N蛋白α-螺旋的结合位点。【结论】本研究成功地克隆小反刍兽疫病毒P基因,分析和预测了p蛋白的结构和功能的关系,为其进一步的生物学功能研究及其应用奠定了基础。 展开更多
关键词 小反刍兽疫病毒 P蛋白 克隆 结构与功能 分析
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CpG DNA重组质粒对猪O型口蹄疫病毒抗原的免疫佐剂效应 被引量：8
19
作者 景志忠 蒙学莲 +7 位作者 窦永喜 陈国华 房永祥 黄银君 王超英 刘西兰 张军 才学鹏 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期862-866,共5页
作者应用含CpG基序序列的重组质粒（即CpG DNA）作为免疫佐剂,评价其对猪O型口蹄疫病毒抗原疫苗的免疫增强效果。结果表明：CpG DNA重组质粒与猪口蹄疫灭活病毒抗原疫苗配伍免疫小鼠,CpG DNA重组质粒对小鼠具有较强的免疫佐剂效应,能促... 作者应用含CpG基序序列的重组质粒（即CpG DNA）作为免疫佐剂,评价其对猪O型口蹄疫病毒抗原疫苗的免疫增强效果。结果表明：CpG DNA重组质粒与猪口蹄疫灭活病毒抗原疫苗配伍免疫小鼠,CpG DNA重组质粒对小鼠具有较强的免疫佐剂效应,能促进口蹄疫病毒抗原诱导产生较高水平的特异性抗体,其抗体滴度是空载体疫苗对照的2倍。CpG DNA重组质粒与商品化猪口蹄疫灭活疫苗配伍免疫试验猪,其增强抗原诱导的特异性抗体滴度最高可达标准疫苗的4倍以上,也显著高于空载体疫苗对照 与病毒纯化抗原配伍免疫动物,攻毒后其免疫保护效力的PD50高达13.00,远高于标准疫苗对照（PD504.69）。在CpG DNA重组质粒剂量选择试验中,含低剂量的CpG DNA疫苗（50、200μg.头份-1）都比高剂量组（500μg.头份-1）诱导的抗体滴度高,其中50和200μg.头份-1的CpG DNA剂量,在接种后14~32 d诱导的抗体滴度高达1∶1500,是标准疫苗的4~5倍,而500μg.头份-1剂量诱导的抗体仅是标准疫苗的2倍,说明CpG DNA重组质粒在低剂量时即可发挥强烈的佐剂效应。研究表明CpG DNA对猪O型口蹄疫病毒抗原疫苗有较强的免疫佐剂效应,且使用剂量低,应用前景广阔。 展开更多
关键词 CPGDNA O型口蹄疫病毒 抗原 佐剂效应
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羊痘病毒P32基因的克隆与原核表达 被引量：18
20
作者 陈轶霞 郑亚东 +3 位作者 窦永喜 乔军 景志忠 才学鹏 《动物医学进展》 CSCD 2007年第1期31-34,共4页
根据发表的羊痘病毒P32基因,设计一对特异性引物,PCR扩增P32全长基因,将其克隆入pMD-18-T载体,获得重组质粒pMD-P32。再将P32基因亚克隆入原核表达栽体pGEX-4T-1,获得重组表达质粒pGEX-P32,转化大肠埃希菌BL21后用IPTG诱导,表达产物经SD... 根据发表的羊痘病毒P32基因,设计一对特异性引物,PCR扩增P32全长基因,将其克隆入pMD-18-T载体,获得重组质粒pMD-P32。再将P32基因亚克隆入原核表达栽体pGEX-4T-1,获得重组表达质粒pGEX-P32,转化大肠埃希菌BL21后用IPTG诱导,表达产物经SDS-PAGE分析。结果表明,P32全长基因在大肠埃希菌中以融合形式成功表达,分子质量为58ku左右,与预期大小相符。 展开更多
关键词 羊痘病毒 P32基因 克隆 表达
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