Survivin启动子介导的溶瘤腺病毒载体抗肿瘤研究

1

作者 章康健 刘锡君 +5 位作者 张静 钱静 岳学田 李娜 何国清 王毅刚 《浙江理工大学学报（自然科学版）》 2009年第4期592-596,共5页

肿瘤特异性启动子用于调控溶瘤腺病毒载体靶向于肿瘤细胞,从而实现对肿瘤组织的特异性杀伤,肿瘤特异性启动子的应用已成为靶向基因病毒治疗中的一个重要策略。利用肿瘤靶向人源Survivin启动子构建的重组腺病毒Ad.SP-E1A展开对多种肿瘤... 肿瘤特异性启动子用于调控溶瘤腺病毒载体靶向于肿瘤细胞,从而实现对肿瘤组织的特异性杀伤,肿瘤特异性启动子的应用已成为靶向基因病毒治疗中的一个重要策略。利用肿瘤靶向人源Survivin启动子构建的重组腺病毒Ad.SP-E1A展开对多种肿瘤细胞和正常细胞杀伤实验研究,结果发现:Ad.SP-E1A具有较高的肿瘤靶向杀伤能力以及对正常细胞无毒副作用,为基因病毒治疗平台中选择高效安全的腺病毒载体提供参考。 展开更多

关键词 溶瘤腺病毒载体 肿瘤特异性启动子 SURVIVIN 肿瘤靶向性

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MG132抑制肝癌细胞Bel-7404生长的机制研究 被引量：6

2

作者 张静 李伟 +5 位作者 章康健 刘锡君 孔彦平 牛娜 蒋海 周秀梅 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2010年第6期627-634,共8页

MG132(Z-Leu-leu-leu-CHO)是一种蛋白酶体抑制剂,它可逆地抑制蛋白酶体活性,从而抑制泛素-蛋白酶体通路所介导的蛋白质降解,诱导细胞凋亡.实验研究MG132抑制肝癌细胞Bel-7404生长的机制.采用不同浓度梯度和时间梯度,通过荧光显微镜、透... MG132(Z-Leu-leu-leu-CHO)是一种蛋白酶体抑制剂,它可逆地抑制蛋白酶体活性,从而抑制泛素-蛋白酶体通路所介导的蛋白质降解,诱导细胞凋亡.实验研究MG132抑制肝癌细胞Bel-7404生长的机制.采用不同浓度梯度和时间梯度,通过荧光显微镜、透射电子显微镜、Hoechst33342染色、MTT检测、AnnexinⅤ/PI流式细胞术、Westernblot分别检测MG132对Bel-7404细胞的形态学变化、细胞内质网压力变化、自噬泡形成、凋亡小体形成、细胞存活率、细胞凋亡水平、凋亡及自噬信号途径中相关蛋白质表达的影响.结果显示,MG132能明显抑制Bel-7404细胞生长.通过增加内质网压力激活Caspase-12,也可通过线粒体途径调节Bcl-2/Bax水平,促进细胞色素c的释放,两者皆可激活下游效应Caspase-3,剪切PARP,诱导细胞凋亡.同时,MG132可诱导Beclin1和LC3B的上调,促使Bel-7404细胞发生自噬,可在透射电镜下观察到自噬泡形成.上述结果表明,MG132作用Bel-7404细胞涉及两类细胞程序性死亡途径:细胞凋亡和自噬. 展开更多

关键词 蛋白酶体抑制剂 肝癌细胞 凋亡 自噬 内质网应激

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蛋白酶体抑制剂MG132诱导肝癌细胞Hep3B凋亡的机制 被引量：3

3

作者 张静 刘锡君 +3 位作者 李伟 孔彦平 章康健 周秀梅 《浙江理工大学学报（自然科学版）》 2010年第5期799-804,共6页

研究探讨蛋白酶体抑制剂MG132(Z-Leu-leu-leu-CHO)诱导肝癌细胞Hep3B凋亡的作用与机制。实验采用不同浓度梯度和时间梯度,通过荧光显微镜、Hoechst33342染色、MTT检测和Western印迹分别检测MG132对Hep3B细胞的形态、凋亡小体形成、细胞... 研究探讨蛋白酶体抑制剂MG132(Z-Leu-leu-leu-CHO)诱导肝癌细胞Hep3B凋亡的作用与机制。实验采用不同浓度梯度和时间梯度,通过荧光显微镜、Hoechst33342染色、MTT检测和Western印迹分别检测MG132对Hep3B细胞的形态、凋亡小体形成、细胞存活率、细胞凋亡相关蛋白表达的影响。结果表明,MG132能够选择性抑制肝癌细胞生长,对正常肝细胞没有明显影响。此外,MG132可以通过内质网应激途径诱导肝癌细胞Hep3B凋亡,呈现剂量和时间的双重依赖性。提示通过抑制蛋白酶体来达到诱导肿瘤细胞凋亡的方法是可行的,MG132此类药物的研究与应用将为肿瘤治疗提供新的选择。 展开更多

关键词 蛋白酶体抑制剂 肝癌细胞 凋亡 内质网应激 CASPASE-12

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新型结肠癌个性化治疗重组溶瘤腺病毒Ad-CEA-ZD55-ST13的构建 被引量：1

4

作者 岳学田 张立堂 +4 位作者 王毅刚 武玉梅 李娜 仰毅 章康健 《浙江理工大学学报（自然科学版）》 2009年第4期567-570,共4页

一种新型的重组溶瘤腺病毒Ad-CEA-ZD55-ST13被成功构建。该病毒利用CEA(carcinoembryonic antigen)启动子和ST13基因特异性增强ZD55系统的肿瘤靶向性。实验表明,重组溶瘤腺病毒Ad-CEA-ZD55-ST13能在结肠癌细胞株SW620中增殖;Ad-CEA-ZD55... 一种新型的重组溶瘤腺病毒Ad-CEA-ZD55-ST13被成功构建。该病毒利用CEA(carcinoembryonic antigen)启动子和ST13基因特异性增强ZD55系统的肿瘤靶向性。实验表明,重组溶瘤腺病毒Ad-CEA-ZD55-ST13能在结肠癌细胞株SW620中增殖;Ad-CEA-ZD55-ST13增加ST13基因在HCT116细胞中的表达量;Ad-CEA-ZD55-ST13比对照病毒Ad-CEA-ZD55-EGFP对HCT116的杀伤作用强。 展开更多

关键词 结肠癌 CEA启动子 ST13 靶向基因-病毒疗法

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c-MYC调节的miRNA-92b在结直肠癌发生发展中的功能及机制探究（英文） 被引量：2

5

作者 尹晓飞 吴帅 +5 位作者 杨远勤 方先龙 徐海能 刘新垣 郑树 章康健 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2016年第7期673-683,共11页

micro RNAs(miRNAs)在参与癌症发生、发展过程中起着十分重要的作用.目前,miR-92b在结直肠癌中的作用及相关机制还未见报道.本研究探讨了miR-92b在结直肠癌发生发展中的功能及潜在机制.采用RT-qPCR方法发现,miR-92b在人结直肠癌临床样... micro RNAs(miRNAs)在参与癌症发生、发展过程中起着十分重要的作用.目前,miR-92b在结直肠癌中的作用及相关机制还未见报道.本研究探讨了miR-92b在结直肠癌发生发展中的功能及潜在机制.采用RT-qPCR方法发现,miR-92b在人结直肠癌临床样本中与癌旁组织相比显著高表达.通过结肠癌细胞株SW620稳转细胞及裸鼠皮下成瘤模型,发现过表达miR-92b可以显著促进细胞增殖及体内肿瘤生长.同时还发现miR-92b可以分泌形式存在于胞外及外周血中,提示miR-92b是一个具有分泌特性的micro RNA.在分子机理方面,c-MYC可通过调节miR-92b的启动子活性从而促进后者转录,并且c-MYC在结直肠癌组织样本中也存在高表达.进一步,通过在线预测、报告质粒活性检测及蛋白质印迹技术证实FBXW7是一个新的miR-92b靶基因.由于FBXW7已报道为c-MYC泛素降解过程中的关键泛素化连接酶之一,本研究结果提示结直肠癌中c-MYC、miR-92b及FBXW7三者间可能存在分子调节环路.综上所述,本研究为miR-92b在结直肠癌中的功能及机制提供了新的视角,并为miR-92b在结直肠癌早期诊断中的应用提供了新的参考. 展开更多

关键词 miR-92b 结直肠癌 分泌型micro RNA C-MYC FBXW7

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冬凌草甲素诱导乳腺癌Bcap37细胞凋亡的探索 被引量：7

6

作者 余越美 严巧灵 +2 位作者 章康健 岳学田 周秀梅 《浙江理工大学学报（自然科学版）》 2013年第3期377-382,共6页

探讨冬凌草甲素(oridonin)对人乳腺癌细胞Bcap-37的增殖、凋亡以及引起细胞凋亡机制。以不同浓度的Ori处理Bcap-37细胞,通过MTT法检测细胞生长抑制率;应用流式细胞分析术检测细胞凋亡;Western Blot检测细胞发生凋亡的机制。结果是48～96... 探讨冬凌草甲素(oridonin)对人乳腺癌细胞Bcap-37的增殖、凋亡以及引起细胞凋亡机制。以不同浓度的Ori处理Bcap-37细胞,通过MTT法检测细胞生长抑制率;应用流式细胞分析术检测细胞凋亡;Western Blot检测细胞发生凋亡的机制。结果是48～96μmol/L的Ori可显著抑制Bcap-37细胞的增殖(P<0.05)。48μmol/L的Ori作用24h后,细胞的增值抑制率达到了40%,而96μmol/L的Ori只需处理12h,增值抑制率竟达到了50%。96μmol/L Ori处理24h后,Bcap-37细胞的凋亡率为21.6%。Western Blot检测到了Fas的上调,细胞色素c的释放和随后Caspase 9的激活及其下游信号蛋白Caspase 3和它的底物PARP,ICAD的剪切。进一步检测到Survivin的下调和GADD34的上调。基于这些实验结果,推测冬凌草甲素作为一种潜在的抗乳腺癌制剂,诱导乳腺癌细胞Bcap37发生凋亡的发生可能与Survivin和GADD34相关。 展开更多

关键词 冬凌草甲素 细胞凋亡 乳腺癌 CASPASE SURVIVIN GADD34

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高效表达Smad2蛋白的A549细胞模型的建立 被引量：4

7

作者 袁素敬 梁余培 +1 位作者 陈勇毅 章康健 《浙江理工大学学报（自然科学版）》 2013年第3期372-376,共5页

将携带Smad2-Flag基因的慢病毒包装系列质粒转染293T细胞,进行慢病毒包装。用收集并纯化好的慢病毒感染A549细胞,流式分选筛选出GFP阳性的细胞,用Flag抗体和Smad2抗体进行Western blot鉴定。流式分选得到的GFP阳性的A549细胞经Western b... 将携带Smad2-Flag基因的慢病毒包装系列质粒转染293T细胞,进行慢病毒包装。用收集并纯化好的慢病毒感染A549细胞,流式分选筛选出GFP阳性的细胞,用Flag抗体和Smad2抗体进行Western blot鉴定。流式分选得到的GFP阳性的A549细胞经Western blot鉴定能高效表达外源Smad2-Flag融合蛋白,同时空载慢病毒处理的GFP阳性细胞并不表达Smad2-Flag蛋白。结果表明成功构建了高效表达Smad2蛋白的A549细胞系,为进一步研究超级干扰素抗肺癌的分子机制奠定了基础。 展开更多

关键词 A549细胞株 慢病毒 GFP SMAD2

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三种连接子多肽对抗癌融合蛋白翻译后剪切效果比较研究

8

作者 李红艳 周志明 +5 位作者 潘强 杨冬梅 顾锦法 沈佳妮 王世兵 章康健 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2014年第6期558-566,共9页

IL-24和Smac为靶向癌症的多基因治疗研究中重要的候选基因.在构建IL-24和Smac双基因表达载体过程中,选择一个稳定高效的连接子非常关键.利用三个不同的连接子多肽序列IETD、EEED、F2A构建三个真核表达质粒pcDNA3.1(+)-IL-24-IETD-Smac、... IL-24和Smac为靶向癌症的多基因治疗研究中重要的候选基因.在构建IL-24和Smac双基因表达载体过程中,选择一个稳定高效的连接子非常关键.利用三个不同的连接子多肽序列IETD、EEED、F2A构建三个真核表达质粒pcDNA3.1(+)-IL-24-IETD-Smac、pcDNA3.1(+)-IL-24-EEED-Smac、pcDNA3.1(+)-IL-24-F2A-Smac,并联合5-氟尿嘧啶(5-FU)处理研究各连接子介导的融合蛋白剪切效果.上述实验结果表明,在三种IL-24-linker-Smac双基因表达载体中,F2A连接子剪切效果最佳且与caspase活性成正相关.IETD、EEED连接子介导的融合蛋白都有一定的剪切,但IETD/EEED多肽影响了上游IL-24蛋白的半衰期,加速了剪切后IL-24蛋白的泛素化降解.本研究为构建靶向癌症应用的双基因或多基因载体提供了设计参考. 展开更多

关键词 连接子多肽 IETD EEED F2A caspase活性

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C19orf18蛋白的表达与纯化及多克隆抗体制备

9

作者 童霄霞 杨远勤 +3 位作者 陈勉 王怀远 胡海军 章康健 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期176-182,共7页

旨在得到较高浓度和纯度的C19orf18蛋白,再将得到的目的蛋白用于制备其特异性的多克隆抗体。利用PCR技术扩增出C19orf18基因的胞内段和胞外段,中间用柔性肽连接,再将目的片段克隆到p ET28a(+)与p ET32a(+)载体上,通过诱导表达少量的目... 旨在得到较高浓度和纯度的C19orf18蛋白,再将得到的目的蛋白用于制备其特异性的多克隆抗体。利用PCR技术扩增出C19orf18基因的胞内段和胞外段,中间用柔性肽连接,再将目的片段克隆到p ET28a(+)与p ET32a(+)载体上,通过诱导表达少量的目的蛋白,筛选出表达量较高的载体,再用筛选得到的表达量较高的载体大量表达目的蛋白,通过镍柱纯化得到较纯的C19orf18蛋白。用得到的蛋白免疫新西兰白兔,得到的抗血清先经过Protein A纯化,再进行抗原亲和纯化得到C19orf18蛋白多克隆抗体。结果显示,载体p ET28a-C19orf18蛋白表达量高于p ET32a-C19orf18,经过镍柱纯化后得到了较高浓度与纯度的目的蛋白,利用得到的目的蛋白作为抗原成功制备了其特异性的多克隆抗体。在原核细胞中成功表达了C19orf18重组蛋白,并得到了其特异性多克隆抗体,所制备的多克隆抗体可应用于ELISA、蛋白免疫印迹实验。 展开更多

关键词 C19orf18蛋白 原核表达 抗原亲和纯化

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GSK-3抑制剂增强携带TRAIL的溶瘤腺病毒对肝癌细胞的杀伤作用

10

作者 谢国良 肖连立 +5 位作者 李新 何国清 陈磊 席璐 章康健 王毅刚 《浙江理工大学学报（自然科学版）》 2011年第2期235-240,共6页

研究携带TRAIL基因的溶瘤腺病毒联合化疗药物GSK-3抑制剂(氯化锂和SB-415286)对人肝癌细胞的体外杀伤作用。采用MTT法检测病毒ZD55-TRAIL联合化疗药物氯化锂和SB-415286对肝癌细胞株HepG-2、BEL-7404以及正常细胞株L02、QSG-7701增殖的... 研究携带TRAIL基因的溶瘤腺病毒联合化疗药物GSK-3抑制剂(氯化锂和SB-415286)对人肝癌细胞的体外杀伤作用。采用MTT法检测病毒ZD55-TRAIL联合化疗药物氯化锂和SB-415286对肝癌细胞株HepG-2、BEL-7404以及正常细胞株L02、QSG-7701增殖的抑制作用,并通过结晶紫实验检测进一步证明联合用药的杀伤作用和安全性;利用Hoechst33342染色对肝癌细胞株BEL-7404的细胞凋亡进行形态学观察;通过Western blot检测肝癌细胞HepG-2细胞凋亡信号通路的变化。结果表明:低剂量的氯化锂和SB-415286能显著提高ZD55-TRAIL对肝癌细胞株HepG-2、BEL-7404的杀伤作用,对人体肝正常细胞株L02、QSG-7701无明显的抑制作用。说明GSK-3抑制剂能够解除肝癌细胞对TRAIL的抗性,增强携带TRAIL基因的溶瘤腺病毒对肝癌细胞的杀伤。 展开更多

关键词 溶瘤腺病毒 TRAIL 氯化锂 SB-415286 联合抑癌

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Survivin介导的条件复制型溶瘤腺病毒表达IL-24蛋白对人肝癌细胞PLC作用机制探究

11

作者 蒋海 丁鑫鑫 +2 位作者 刘鸿 谢宏霞 章康健 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2010年第5期738-743,共6页

条件复制型溶瘤腺病毒Ad.sp-E1A_((△24)-IL-24对人肝癌细胞株PLC的作用机制尚不清楚。采用流式细胞仪检测PLC经PBS、Ad.sp-E1A_((△24)以及Ad.sp-E1A_((△24)-IL-24处理48h后细胞周期的变化;利用Western blot检测PLC经PBS、Ad.sp-E1A_(... 条件复制型溶瘤腺病毒Ad.sp-E1A_((△24)-IL-24对人肝癌细胞株PLC的作用机制尚不清楚。采用流式细胞仪检测PLC经PBS、Ad.sp-E1A_((△24)以及Ad.sp-E1A_((△24)-IL-24处理48h后细胞周期的变化;利用Western blot检测PLC经PBS、Ad.sp-E1A_((△24)以及Ad.sp-E1A_((△24)IL-24处理24 h、48h后细胞中凋亡信号相关蛋白表达量的变化。实验结果表明:Ad.sp-E1A_((△24)和Ad.sp-E1A_((△24)-IL-24能将PLC细胞周期阻滞在S期,其值分别为43.74%±6.61%,49.48%±7.60%,两者与未感染病毒的对照组(18.91%±1.83%)进行统计学差异分析,P值均<0.05;同时,Western blot检测发现随着处理时间的增加,病毒处理组中CHOP的表达量、caspase 12的剪切水平及STAT3、p38 MAPK的磷酸化水平都有明显提高,尤其以Ad.sp-E1A_((△24)-IL-24处理组较为明显。SOCS3的表达量病毒处理组与对照组没有显著差异。上述结果表明重组腺病毒Ad.sp-E1A_((△24)-IL-24能有效阻滞PLC细胞周期在S期,并可能通过内质网压力、STAT3与MAPK信号通路等多种途径诱发PLC细胞凋亡。 展开更多

关键词 溶瘤腺病毒 人肝癌细胞 IL-24基因 细胞凋亡 靶向基因-病毒治疗

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雷帕霉素联合ZD55-TRAIL病毒对肿瘤抑制及其机制探讨

12

作者 刘锡君 李新 +4 位作者 郑水娣 钟丹 章康健 王世兵 周秀梅 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2011年第6期688-691,共4页

溶瘤腺病毒的肿瘤靶向性研究一直是一个热点。目前已有商业化的ONYX-015、H101溶瘤腺病毒。在此基础上，科学家又进一步发展形成基因一病毒治疗方案，如文中应用的ZD55-TRAIL病毒。本研究利用刘新垣实验室提供的携带TRAIL（TNF-related ... 溶瘤腺病毒的肿瘤靶向性研究一直是一个热点。目前已有商业化的ONYX-015、H101溶瘤腺病毒。在此基础上，科学家又进一步发展形成基因一病毒治疗方案，如文中应用的ZD55-TRAIL病毒。本研究利用刘新垣实验室提供的携带TRAIL（TNF-related apoptosis-inducing ligand，TNF相关的凋亡诱导配体）的溶瘤腺病毒ZD55-TRAILt^[1]联合雷帕霉素杀伤肿瘤细胞。ZD55-TRAIL是删除了腺病毒E1B-55KD， 展开更多

关键词 溶瘤腺病毒 雷帕霉素 肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体 E4orf1

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CRISPR/Cas9切割痘病毒DNA抑制病毒复制 被引量：2

13

作者 王娇娇 张新敏 +3 位作者 倪爱民 章康健 刘新垣 刘锡君 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2016年第4期405-412,共8页

当前,CRISPR/Cas9系统靶向痘苗病毒的相关研究鲜有报道。该文采用了CRISPR/Cas9基因组定点编辑技术,以痘病毒为研究对象。在重组痘病毒WR-EGFP中针对EGFP基因序列设计不同靶点g RNAs,转染Cas9/g RNA质粒,同时感染WR-EGFP痘病毒,随后观察... 当前,CRISPR/Cas9系统靶向痘苗病毒的相关研究鲜有报道。该文采用了CRISPR/Cas9基因组定点编辑技术,以痘病毒为研究对象。在重组痘病毒WR-EGFP中针对EGFP基因序列设计不同靶点g RNAs,转染Cas9/g RNA质粒,同时感染WR-EGFP痘病毒,随后观察EGFP荧光表达、提取病毒基因组,通过PCR进行切口鉴定并运用错配酶切法验证CRISPR/Cas9对痘病毒靶点DNA切割的切口修复情况。与单独感染WR-EGFP组相比,转染了Cas9/g RNA174和Cas9/g RNA175质粒的EGFP荧光强度明显降低,表明CRISPR/Cas9抑制WR-EGFP病毒中EGFP基因的表达。相对定量PCR及错配酶切实验结果显示,CRISPR/Cas9切割靶点导致WR-EGFP病毒基因组产生了切口,并且存在DNA错配修复现象。最后,通过结晶紫染色法测定痘病毒的滴度,结果显示,经CRISPR/Cas9处理组的痘病毒滴度显著下降,即CRISPR/Cas9能够使痘病毒的复制能力显著地降低。综上所述,CRISPR/Cas9切割痘病毒基因组DNA并且抑制痘病毒复制。 展开更多

关键词 CRISPR/Cas9 痘病毒 靶向切割 病毒复制

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A33启动子结肠癌特异性探究及SV40增强子对其转录活性影响 被引量：1

14

作者 钟丹 郑水娣 +2 位作者 谌贺宽子 袁素敬 章康健 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2011年第11期1241-1247,共7页

为了探究A33核心启动子结肠癌特异性及SV40增强子对其转录水平的影响,该研究通过构建A33核心启动子和带SV40增强子的A33核心启动子(eA33)的荧光素酶报告基因载体pGL3-A33和pGL3-eA33,与内参照pRL-SV40质粒共转染至不同的细胞系中,利用... 为了探究A33核心启动子结肠癌特异性及SV40增强子对其转录水平的影响,该研究通过构建A33核心启动子和带SV40增强子的A33核心启动子(eA33)的荧光素酶报告基因载体pGL3-A33和pGL3-eA33,与内参照pRL-SV40质粒共转染至不同的细胞系中,利用双荧光素酶检测系统检测分析了A33和eA33启动子在不同细胞系中的转录活性。结果显示,A33核心启动子在结肠癌细胞系中具有转录活性低,但结肠癌特异性好的特点,而在其他类型癌细胞中基本没有活性。同时发现,eA33在各类癌细胞中的转录水平与A33相比,均呈大幅度提高,有显著性差异(P<0.01),但SV40增强子能显著增强A33启动子转录活性的同时减低了其结肠癌特异性。这为靶向癌症基因—病毒治疗策略在结肠癌的生物治疗应用中寻找结肠癌特异性的启动子奠定了研究基础。 展开更多

关键词 A33核心启动子 SV40增强子 结肠癌特异性 基因-病毒治疗

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携带mK5基因的重组腺病毒联合多西他赛对LNCaP细胞的体外抗癌作用探究 被引量：1

15

作者 胡云 方先龙 +4 位作者 顾锦法 杨圆圆 李慧 刘新垣 章康健 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2019年第5期892-901,共10页

该文通过携带mK5基因的溶瘤腺病毒OncoAd-mK5联合多西他赛(docetaxel, DTX)处理前列腺癌细胞株LNCaP,以探究两者联合作用的体外抗癌效果。采用CCK-8法分别检测OncoAdmK5、docetaxel以及两者联合用药对LNCaP增殖的抑制作用;用显微镜分别... 该文通过携带mK5基因的溶瘤腺病毒OncoAd-mK5联合多西他赛(docetaxel, DTX)处理前列腺癌细胞株LNCaP,以探究两者联合作用的体外抗癌效果。采用CCK-8法分别检测OncoAdmK5、docetaxel以及两者联合用药对LNCaP增殖的抑制作用;用显微镜分别观察OncoAd-mK5、多西他赛单独作用及两者联合作用引起的细胞形态学变化;利用Hoechst 33258染色、流式细胞术检测各处理组细胞的凋亡情况;Western blot检测E1A、m K5以及凋亡相关蛋白Caspase-8、XIAP、PARP的蛋白质表达水平;实时荧光定量PCR(Q-PCR)分析处理组细胞的血管内皮细胞生长因子(VEGF)mRNA水平变化。结果表明:感染复数(multiplicity of infection, MOI)=4的溶瘤腺病毒OncoAd-mK5与5 nmol/L的docetaxel能够协同抑制LNCaP的生长,且两者联合处理组的细胞凋亡现象比单独作用的效果更明显,这一新的药物组合为前列腺癌的临床治疗提供了参考。 展开更多

关键词 多西他赛 OncoAd-mK5 前列腺癌 VEGF 抗癌作用

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控制溶瘤腺病毒YSCH-01复制的抗病毒药物筛选探究

16

作者 刘敏 钱伟 +3 位作者 张婷婷 方先龙 章康健 陶均佳 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2023年第4期626-634,共9页

该文目的是通过体外实验筛选能够有效抑制重组溶瘤腺病毒YSCH-01复制的药物,为该产品的临床安全使用提供指导。首先,选取了文献中常见的5种潜在可以抑制腺病毒的药物,采用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)杀伤实验测试了这5... 该文目的是通过体外实验筛选能够有效抑制重组溶瘤腺病毒YSCH-01复制的药物,为该产品的临床安全使用提供指导。首先,选取了文献中常见的5种潜在可以抑制腺病毒的药物,采用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)杀伤实验测试了这5种药物对人源细胞的自身毒性,排除了细胞毒性最强的赛度替尼。然后,采用结晶紫染色法检测了剩余4种药物对YSCH-01病毒杀伤细胞能力的抑制效果。同时,测定了这4种药物对YSCH-01病毒复制能力的抑制效果。结果显示,西多福韦和司他夫定显著地降低YSCH-01病毒的复制和杀伤能力,更昔洛韦次之。最后,进一步确定了西多福韦和司他夫定对YSCH-01病毒的半数抑制浓度,计算出这2种药物的安全指数(safety index,SI)值。上述研究表明,西多福韦和司他夫定对人源细胞不良影响小,对溶瘤腺病毒YSCH-01抑制能力强,可作为溶瘤腺病毒YSCH-01在临床应用中的安全备用药物。 展开更多

关键词 溶瘤腺病毒 YSCH-01 病毒复制 西多福韦 司他夫定 更昔洛韦

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BATF2对Wnt信号通路影响的研究

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作者 郑水娣 吴帅 +2 位作者 桂镜华 贾晓渊 章康健 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期343-348,共6页

Wnt信号通路在各种生物体内高度进化保守,与癌症的发生发展密切相关。BATF2是一个新近发现的基因,研究表明其具有抑癌基因的作用。目前,BATF2与Wnt信号通路的关系尚不清楚,该文用荧光素酶报告基因检测、Real-time PCR和Western blot发现... Wnt信号通路在各种生物体内高度进化保守,与癌症的发生发展密切相关。BATF2是一个新近发现的基因,研究表明其具有抑癌基因的作用。目前,BATF2与Wnt信号通路的关系尚不清楚,该文用荧光素酶报告基因检测、Real-time PCR和Western blot发现BATF2能影响Wnt信号通路。过表达BATF2可明显下调TCF4/β-catenin的转录活性和Wnt信号通路下游基因的表达,可以下调细胞核中的β-catenin。推测BATF2可能通过下调细胞核中的β-catenin来实现对Wnt信号通路的下调。上述结果为抑制Wnt信号通路用于肿瘤治疗提供了一定的依据。 展开更多

关键词 BATF2 WNT信号通路 TCF4/β-catenin转录活性 Β-CATENIN

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