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绵羊支原体HSP70的原核表达及抗体间接ELISA检测方法的建立
1
作者 李祥龙 章志涛 +3 位作者 孔令丽 罗雨昕 秦泽亮 王冬英 《动物医学进展》 北大核心 2024年第4期16-20,共5页
为建立绵羊支原体(Mycoplasma ovis)的血清学检测方法,根据GenBank收录的绵羊支原体HSP70蛋白C端的基因序列(登录号:CP006935.1),构建了重组原核表达质粒。通过原核表达获取重组蛋白,并将纯化的重组蛋白作为包被抗原,建立了绵羊支原体间... 为建立绵羊支原体(Mycoplasma ovis)的血清学检测方法,根据GenBank收录的绵羊支原体HSP70蛋白C端的基因序列(登录号:CP006935.1),构建了重组原核表达质粒。通过原核表达获取重组蛋白,并将纯化的重组蛋白作为包被抗原,建立了绵羊支原体间接ELISA抗体检测方法。结果显示,成功构建了绵羊支原体HSP70蛋白的重组原核表达质粒;重组蛋白在大肠埃希氏菌BL21(DE3)感受态细胞中,同时以可溶性蛋白和包涵体蛋白的形式表达;以重组蛋白作为包被抗原建立的绵羊支原体间接ELISA抗体检测法,抗原包被最佳浓度为4μg/mL,血清最佳稀释度为1∶100,酶标二抗最佳稀释度为1∶2000。建立的ELISA方法具有良好的特异性、灵敏性和重复性,为绵羊支原体的检测及试剂盒的开发提供了技术支持。 展开更多
关键词 绵羊支原体 热休克蛋白70 原核表达 间接ELISA
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基于三端式磁通门技术的磁力梯度仪 被引量：10
2
作者 章志涛 张松勇 顾伟 《上海海事大学学报》 北大核心 2008年第2期35-38,共4页
针对普通磁力仪测量磁场的梯度存在受背景磁场的影响大,从而导致测量精度低的问题,采用三端式磁通门技术和双探头的结构型式,试制1种三端式磁通门磁力梯度仪,其对背景磁场和磁强梯度均实现闭环测量.试验数据表明,背景磁场的干扰得到有... 针对普通磁力仪测量磁场的梯度存在受背景磁场的影响大,从而导致测量精度低的问题,采用三端式磁通门技术和双探头的结构型式,试制1种三端式磁通门磁力梯度仪,其对背景磁场和磁强梯度均实现闭环测量.试验数据表明,背景磁场的干扰得到有效的消除,从而提高测量精度,且电路的稳定性能良好. 展开更多
关键词 三端式磁通门 磁力梯度仪 背景磁场 闭环测量
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基于小波变换的Stark展宽算法的优化研究
3
作者 章志涛 丁芳 +5 位作者 罗宇 陈夏华 叶大为 张青 胡振华 罗广南 《核聚变与等离子体物理》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期212-218,共7页
为了提升Stark展宽计算等离子体电子密度的准确性,基于小波阈值去噪处理方法,对EAST氘原子光谱信号进行了处理,以信噪比(SNR)和均方根误差(RMSE)作为滤波效果的评价依据,通过对比确定了最优小波基db4,最优小波分解4层。根据噪声估计值... 为了提升Stark展宽计算等离子体电子密度的准确性,基于小波阈值去噪处理方法,对EAST氘原子光谱信号进行了处理,以信噪比(SNR)和均方根误差(RMSE)作为滤波效果的评价依据,通过对比确定了最优小波基db4,最优小波分解4层。根据噪声估计值计算适合的阈值参数进行信号重构,并将经过去噪处理后的数据应用到后期Stark展宽算法计算等离子体密度的分析过程中。结果表明,小波硬阈值去噪能够有效提高光谱信号信噪比、降低均方根误差,在消除光谱信号中噪声的同时,最大程度保留了有用的光谱细节特征信息,进而有利于光谱数据的建模效果,获得更为准确的等离子体电子密度。 展开更多
关键词 小波变换 EAST 偏滤器光谱信号 Stark展宽 电子密度
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大片形吸虫丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶2A的原核表达及不同时期表达水平分析
4
作者 章志涛 李祥龙 +2 位作者 孔令丽 罗雨昕 王冬英 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期1107-1117,共11页
【目的】克隆大片形吸虫丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶2A(Ser/Thr protein phosphatases 2A,PP2A)基因并构建原核表达载体,获得原核表达蛋白,为探究PP 2 A基因功能及其在大片形吸虫的发育中的作用奠定基础。【方法】提取大片形吸虫成虫虫体... 【目的】克隆大片形吸虫丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶2A(Ser/Thr protein phosphatases 2A,PP2A)基因并构建原核表达载体,获得原核表达蛋白,为探究PP 2 A基因功能及其在大片形吸虫的发育中的作用奠定基础。【方法】提取大片形吸虫成虫虫体组织总RNA,应用RT-PCR方法扩增PP 2 A基因的完整编码区序列,并以双酶切的方式连接pET-28a(+)载体;经酶切、测序鉴定后获得阳性质粒pET-28a-PP2A,将pET-28a-PP2A重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行IPTG诱导表达,并对重组蛋白的诱导条件进行优化;通过SDS-PAGE及Western blotting检测大片形吸虫PP 2 A基因的表达效果;应用实时荧光定量PCR检测PP 2 A基因在大片形吸虫虫卵、囊蚴、6周龄童虫和成虫阶段中的表达情况。【结果】克隆的大片形吸虫PP 2 A基因编码区序列长1161 bp,编码386个氨基酸,分子式为C_(1980)H_(3105)N_(535)O_(566)S_(24),分子质量为44.23 ku。生物信息学分析结果显示,大片形吸虫PP 2 A基因编码的蛋白为PP2Ac,分子功能为信号转导(GO:0004871),生物学过程为蛋白去磷酸化(GO:0006470),细胞组分为细胞质(GO:0005829)。PP2A蛋白无信号肽,不存在跨膜结构域,为亲水性蛋白,共含有37个磷酸位点。SDS-PAGE和Western blotting结果显示,大片形吸虫PP2A在30℃、0.8 mmol/L IPTG诱导6 h时表达量最大,表达产物主要以包涵体的形式存在,且Western blotting检测结果显示,重组蛋白可被抗His标签识别;实时荧光定量PCR结果显示,PP 2 A基因在大片形吸虫6周龄童虫阶段表达量最高,极显著高于其他阶段(P<0.01);在囊蚴阶段的表达量最低,与虫卵阶段差异不显著(P>0.05)。【结论】本研究成功构建了大片形吸虫PP2A原核表达载体并获得相应蛋白,为研究PP 2 A基因在大片形吸虫生长发育中的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 大片形吸虫 丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶2A(PP2A) 原核表达
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梨形虫和伊氏锥虫双重PCR检测方法的建立
5
作者 孔令丽 李祥龙 +2 位作者 章志涛 罗雨昕 王冬英 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2023年第4期72-76,共5页
为了建立梨形虫(Piroplasmida)和伊氏锥虫(Trypanosoma evansi)的双重PCR检测方法,试验根据梨形虫的18S rRNA基因和伊氏锥虫的kDNA基因设计两对特异性引物,以吕氏泰勒虫和伊氏锥虫阳性样品DNA为模板进行单重PCR和双重PCR,并对双重PCR的... 为了建立梨形虫(Piroplasmida)和伊氏锥虫(Trypanosoma evansi)的双重PCR检测方法,试验根据梨形虫的18S rRNA基因和伊氏锥虫的kDNA基因设计两对特异性引物,以吕氏泰勒虫和伊氏锥虫阳性样品DNA为模板进行单重PCR和双重PCR,并对双重PCR的退火温度进行优化,对本研究建立并优化的双重PCR方法进行特异性试验、敏感性试验及临床样品的检测。结果表明:本研究建立的双重PCR方法能够扩增出350 bp和600 bp的特异性目的条带,而无浆体、肝簇虫、弓形虫和埃立克体样品均呈阴性,梨形虫和伊氏锥虫最低检测浓度分别为54.70 fg/μL和14.30 fg/μL,用本试验建立的方法对临床样品的检测结果与对照方法(巢式PCR)检测结果一致。说明本研究成功建立了灵敏、快速、简便、特异性高的双重PCR检测方法,能够用于梨形虫和伊氏锥虫的临床检测及流行病学调查。 展开更多
关键词 梨形虫 伊氏锥虫 PCR 检测方法 应用
原文传递
三端式磁通门技术在空运杂散磁场检测中的运用
6
作者 田俊荣 张松勇 章志涛 《机电设备》 2012年第S1期74-77,共4页
IATA DGR(国际航空运输协会《危险品运输规则》)对第9类杂项危险品中磁性物质的定义以及磁性危险品磁场强度检测方法和检测用仪器都了明确规定,本文对一种基于三端式磁通门技的高灵敏度磁通门磁场计的基本工原理及电路结构进行了阐,并... IATA DGR(国际航空运输协会《危险品运输规则》)对第9类杂项危险品中磁性物质的定义以及磁性危险品磁场强度检测方法和检测用仪器都了明确规定,本文对一种基于三端式磁通门技的高灵敏度磁通门磁场计的基本工原理及电路结构进行了阐,并分析其在空运杂散磁场检测中的运用方法及准确性。 展开更多
关键词 三端式磁通门 空运杂散磁场检测 灵敏度
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小波阈值去噪在偏滤器光谱信号处理中的应用 被引量：9
7
作者 章志涛 丁芳 +4 位作者 罗宇 陈夏华 叶大为 胡振华 罗广南 《量子电子学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期307-315,共9页
等离子体发射光谱是研究托卡马克等离子体物理过程的重要诊断手段之一。边界等离子体中存在着复杂的原子分子物理过程,部分较弱的粒子光谱信号混杂着大量噪声,能否有效去除噪声、提高信号质量对后续利用其分析理解实验中相关物理过程具... 等离子体发射光谱是研究托卡马克等离子体物理过程的重要诊断手段之一。边界等离子体中存在着复杂的原子分子物理过程,部分较弱的粒子光谱信号混杂着大量噪声,能否有效去除噪声、提高信号质量对后续利用其分析理解实验中相关物理过程具有重要意义。以仿真信号和真实托卡马克实验中钨原子光谱数据作为研究对象,采用信噪比(SNR)和均方根误差(RMSE)作为滤波效果的评价依据,对小波阈值去噪处理方法的去噪效果进行了研究。仿真实验对比分析表明:选取sym8小波基、4层小波分解、启发式阈值计算以及渐进半软阈值函数进行小波去噪时,可获得最大信噪比19.2166,最小均方根误差0.0290。进而将这些最佳匹配参数应用于实测偏滤器钨原子光谱信号处理中,也取得较好的去噪效果。结果表明:小波阈值去噪能够有效地消除偏滤器钨原子光谱信号中的噪声,同时较好地保留有用信号,避免信号失真,显著提高了信号质量。 展开更多
关键词 光谱学 偏滤器钨原子光谱信号 小波变换 阈值去噪 信噪比 均方根误差
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运输应激对小鼠肠道的病理损伤及Bcl-2和Bax表达的影响 被引量：8
8
作者 温宇婷 刘犇 +3 位作者 章志涛 张雯苑 梅婷 彭瑞妮 《中国畜牧杂志》 CAS 北大核心 2020年第5期157-162,共6页
为了探究运输应激对小鼠小肠结构和Bcl-2和Bax表达的影响,本研究以16只ICR小鼠为试验对象,将其随机分为对照组(24℃环境下饲养,除了禁食禁水外不做任何处理)和处理组(人工模拟运输应激,处理条件为35℃、160 r/min摇床处理2h),采集十二... 为了探究运输应激对小鼠小肠结构和Bcl-2和Bax表达的影响,本研究以16只ICR小鼠为试验对象,将其随机分为对照组(24℃环境下饲养,除了禁食禁水外不做任何处理)和处理组(人工模拟运输应激,处理条件为35℃、160 r/min摇床处理2h),采集十二指肠、空肠和回肠,HE染色观察小肠病理变化,同时采用免疫组织化学和Western Blot探讨运输应激对小鼠肠道Bcl-2和Bax表达的影响。结果表明:与对照组相比,处理组小鼠小肠组织形态结构损害明显,表现为小肠绒毛断裂、小肠黏膜细胞和隐窝细胞脱落以及淋巴细胞浸润;免疫组化定位发现,对照组Bcl-2和Bax表达强度不高,处理组Bcl-2在损伤的肠黏膜上皮细胞中高表达,Bax在肠腺细胞胞质中高表达;与对照组相比,处理组十二指肠和回肠Bcl-2和Bax的表达量增加(P<0.05),十二指肠Bcl-2/Bax比值降低(P>0.05),空肠和回肠Bcl-2/Bax比值升高(P>0.05)。综上,运输应激会破坏肠道结构的完整性,运输后肠道Bcl-2和Bax蛋白的表达发生变化,表明运输应激对肠道的损伤作用与细胞凋亡途径有关,通过Bcl-2和Bax 2种蛋白进行调节。 展开更多
关键词 运输应激 小肠 BCL-2 BAX 小鼠
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运输应激对山羊小肠黏膜结构及其免疫相关细胞数量的影响 被引量：2
9
作者 高霖 刘犇 +5 位作者 彭瑞妮 章志涛 张雯苑 李国生 梅婷 邹剑伟 《中国畜牧杂志》 CAS 北大核心 2020年第4期173-177,共5页
为研究运输应激对山羊小肠黏膜结构及免疫状态的影响,试验将18只健康赣西山羊随机平均分成3组,即对照组、2 h运输处理组和6 h运输处理组,采用苏木精-伊红(HE)、甲苯胺蓝-高锰酸钾(MTB)、过碘酸-雪夫氏(PAS)3种染色方法及图像分析法研究... 为研究运输应激对山羊小肠黏膜结构及免疫状态的影响,试验将18只健康赣西山羊随机平均分成3组,即对照组、2 h运输处理组和6 h运输处理组,采用苏木精-伊红(HE)、甲苯胺蓝-高锰酸钾(MTB)、过碘酸-雪夫氏(PAS)3种染色方法及图像分析法研究不同处理山羊小肠黏膜结构及免疫相关细胞数量的变化。结果表明:运输处理组山羊小肠绒毛高度/隐窝深度极显著小于对照组;与对照组相比,运输处理组山羊各段小肠绒毛上皮内淋巴细胞、杯状细胞、肥大细胞数量均极显著增加。综上,说明短时间和长时间运输应激均对山羊小肠黏膜结构及免疫状态有明显影响。 展开更多
关键词 运输应激 山羊 小肠 黏膜结构 淋巴细胞 杯状细胞 肥大细胞
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运输应激对山羊免疫器官的病理损伤及热休克蛋白表达的影响 被引量：2
10
作者 郑文亚 彭瑞妮 +6 位作者 刘犇 张雯苑 梅婷 章志涛 李国生 邹剑伟 崔燕 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第12期2353-2361,共9页
本试验旨在研究运输应激对山羊免疫器官的病理损伤及热休克蛋白表达的影响。选取12只体质量相近的健康公山羊为实验动物,随机分为3组,对照组、运输应激2 h组和运输应激6 h组,以速度35~45 km/h模拟公路运输。运输结束后,立即采集所有山... 本试验旨在研究运输应激对山羊免疫器官的病理损伤及热休克蛋白表达的影响。选取12只体质量相近的健康公山羊为实验动物,随机分为3组,对照组、运输应激2 h组和运输应激6 h组,以速度35~45 km/h模拟公路运输。运输结束后,立即采集所有山羊淋巴结和脾脏,应用HE染色、醋酸铀枸橼酸铅染色、免疫组织化学和Western blot等方法,分析运输应激山羊淋巴结和脾脏的病理变化及HSP27、HSP70和HSP90等3种热休克蛋白的表达情况。光镜观察显示,运输应激2 h组山羊淋巴结和脾脏均出现急性病理变化,淋巴小结和脾小结增生明显,淋巴结的髓索变粗,髓窦中有淡红色红染物质,脾脏红髓的红细胞急剧增多;运输应激6 h组淋巴细胞胞核出现核碎片,脾脏红髓的红细胞比2 h组有所减少。电镜观察发现,淋巴结和脾脏的淋巴细胞病变明显,发生凋亡或坏死。免疫组化显示,在淋巴结和脾脏中,HSP27主要分布在弥散淋巴组织,HSP70和HSP90主要分布在淋巴小结或脾小结。Western blot结果显示,与对照组相比,运输应激2h组与6h组淋巴结和脾脏中HSP90表达量分别显著和极显著升高(P<0.05,P<0.01),运输应激2 h组脾脏HSP27和淋巴结HSP70的表达量都显著升高(P<0.05);与对照组相比,运输应激2 h组和6 h组脾脏HSP70表达量分别下降(P>0.05)和极显著下降(P<0.01)。运输应激对山羊淋巴结和脾脏造成一定的病理损伤,3种热休克蛋白在淋巴结和脾脏都有表达,运输前后和不同运输时间3种热休克蛋白表达量发生了变化。 展开更多
关键词 运输应激 热休克蛋白 脾脏 淋巴结 山羊
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