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血清4型禽腺病毒penton蛋白单克隆抗体的制备及鉴定
1
作者 罗思思 邓显文 +7 位作者 谢芝勋 张艳芳 张民秀 谢志勤 谢丽基 李孟 王盛 李小凤 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期3092-3099,共8页
【目的】制备和鉴定血清4型禽腺病毒(FAdV-4)五邻体(penton)蛋白单克隆抗体,为深入探究penton蛋白在FAdV-4感染致病机制中的作用及为抗原检测试剂研发提供抗体材料。【方法】以原核表达的FAdV-4 penton重组蛋白免疫6~8周雌性BALB/c小白... 【目的】制备和鉴定血清4型禽腺病毒(FAdV-4)五邻体(penton)蛋白单克隆抗体,为深入探究penton蛋白在FAdV-4感染致病机制中的作用及为抗原检测试剂研发提供抗体材料。【方法】以原核表达的FAdV-4 penton重组蛋白免疫6~8周雌性BALB/c小白鼠,加强免疫3次后,取鼠脾脏细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行细胞融合,通过penton-酶联免疫吸附剂测定(ELISA)和FAdV4 virus-ELISA方法分别筛选阳性杂交瘤细胞株,对筛选出的单克隆抗体杂交瘤细胞株进行亚类鉴定、特异性和广谱性鉴定及间接免疫荧光和稳定性试验。【结果】亚类鉴定结果表明,筛选获得7株能稳定分泌抗FAdV-4 penton蛋白的杂交瘤细胞株(1D11、2B3、2C4、2C9、6B3、8F12和8G11),其轻链均为Kappa链,重链3株为IgG1,4株为IgG2b;特异性检测结果表明,7株单克隆抗体只与FAdV-4反应,不与其他11种血清型FAdV及NDV、ARV、EDSV和IBV等常见禽病病原体发生交叉反应;广谱性鉴定结果表明,7株单克隆抗体均可与19株FAdV-4分离株结合,广谱性好;间接免疫荧光试验结果表明,7株单克隆抗体均与感染FAdV-4的鸡胚肝细胞(CEL)结合,出现明亮的绿色荧光。对筛选出的3株单克隆抗体(6B3、8F12和8G11)进行稳定性检测,发现其稳定性良好。【结论】通过单克隆抗体制备和鉴定获得3株与FAdV-4蛋白结合效果较好并具有特异性和广谱性的FAdV-4 penton蛋白杂交瘤细胞株(6B3、8F12和8G11),能稳定分泌penton蛋白单克隆抗体,为深入研究penton蛋白在FAdV-4感染致病机制中的作用提供单抗,为FAdV-4抗原检测试剂的研发打下基础。 展开更多
关键词 血清4型禽腺病毒 penton蛋白 单克隆抗体 杂交瘤细胞株
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X蛋白(pX)在血清4型禽腺病毒感染LMH细胞后对Toll样受体的影响
2
作者 李小凤 韦悠 +10 位作者 罗思思 谢志勤 阮志华 张民秀 黄娇玲 李丹 万丽军 李孟 任红玉 谢丽基 谢芝勋 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2023年第12期2814-2821,共8页
【目的】研究X蛋白(Protein X,pX)在血清4型禽腺病毒(Fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)感染LMH细胞后对Toll样受体产生的影响,为进一步阐释FAdV-4感染致病机制和免疫应答机理提供数据参考。【方法】通过PCR扩增X基因编码区序列,与pEF... 【目的】研究X蛋白(Protein X,pX)在血清4型禽腺病毒(Fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)感染LMH细胞后对Toll样受体产生的影响,为进一步阐释FAdV-4感染致病机制和免疫应答机理提供数据参考。【方法】通过PCR扩增X基因编码区序列,与pEF1α-HA载体连接,构建重组表达质粒pEF1α-HA-X。将重组表达质粒pEF1α-HA-X和空质粒pEF1α-HA分别转染LMH细胞,24 h后用FAdV-4感染转染后的细胞,2个处理组分别标记为pEF1α-HA-X+和pEF1α-HA+;同时设立转染后未加病毒刺激组作对照,分别标记为pEF1α-HA-X-和pEF1α-HA-。用Western-blotting和间接免疫荧光验证重组蛋白表达情况,实时荧光定量PCR检测Toll样受体(chTLR1a、chTLR1b、chTLR2a、chTLR2b、chTLR3、chTLR4、chTLR5、chTLR7、chTLR15、chTLR21)和效应因子(IFN-α、IFN-β、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-15)mRNA转录水平的变化。【结果】X基因开放阅读框(ORF)全长540 bp,共编码179个氨基酸残基。Western-blotting结果显示重组X蛋白与HA标签小鼠源单克隆抗体反应,在27 kD处得到单一条带,间接免疫荧光结果可见绿色荧光。实时荧光定量PCR检测发现,与pEF1α-HA-组相比较,pEF1α-HA-X-组chTLR1a和chTLR1b的mRNA转录水平极显著上调(P<0.01,下同),分别为pEF1α-HA-组的9.76和12.34倍;chTLR2a、chTLR2b、chTLR5、chTLR7、chTLR15和chTLR21的mRNA转录水平显著上调(P<0.05,下同)。添加病毒感染后,与pEF1α-HA-X-组相比,pEF1α-HA-X+组chTLR1a和chTLR1b的mRNA转录水平极显著下调,分别下调60.0%和66.7%;chTLR2a、chTLR2b和chTLR3的mRNA转录水平显著提高,分别显著上调2.91、2.01和1.47倍,其他chTLRs的mRNA转录水平下调,但差异不显著(P>0.05);同时,pEF1α-HA-X+组效应因子IFN-α、IFN-β、IL-1β的mRNA转录水平比pEF1α-HA-X-组显著上调,IL-8的mRNA转录水平极显著下调。【结论】在LMH细胞过表达pX并被FAdV-4感染后,pX能激活宿主免疫应答系统,Toll样受体(chTLR2a、chTLR2b和chTLR3)和其效应因子(IFN-α、IFN-β和IL-1β)的mRNA转录水平显著上调以抑制病毒复制,说明pX具备激活宿主细胞天然免疫系统的功能。 展开更多
关键词 FAdV-4 PX TOLL样受体 效应因子 实时荧光定量PCR
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鸡传染性喉气管炎病毒微滴式数字PCR定量检测方法的建立
3
作者 谢志勤 谢芝勋 +14 位作者 张艳芳 范晴 谢丽基 万丽军 罗思思 李孟 张民秀 曾婷婷 黄娇玲 王盛 李丹 韦悠 李小凤 任红玉 阮志华 《西北农业学报》 CAS CSCD 2024年第3期381-388,共8页
旨在建立检测鸡传染性喉气管炎病毒(infectious laryngotracheitis virus, ILTV)绝对定量方法。根据已发表的鸡ILTV的TK基因序列,针对其保守区域分别设计1对特异引物和1条探针,建立检测鸡ILTV的微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR... 旨在建立检测鸡传染性喉气管炎病毒(infectious laryngotracheitis virus, ILTV)绝对定量方法。根据已发表的鸡ILTV的TK基因序列,针对其保守区域分别设计1对特异引物和1条探针,建立检测鸡ILTV的微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)方法,并评价其特异性、敏感性和重复性。结果显示,建立方法的最佳引物浓度为20μmol/μL,最佳探针浓度为10μmol/μL,最佳退火温度为56℃。特异性检测结果显示,建立的方法只检出ILTV,没有检出其他病原株。敏感性检测结果显示,采用建立的方法定量检出ILTV重组质粒标准品的最低限为4.6拷贝/μL。对3个连续稀释的pMD18-ILTV重组质粒DNA进行检测,3次重复检测结果的变异系数均小于5%。对83份病鸡喉拭子、肺及脾组织样品进行检测,采用建立的ddPCR检出ILTV阳性样品10份,荧光定量PCR检出ILTV阳性样品9份,ddPCR的阳性检出率(12.05%)高于荧光定量PCR的阳性检出率(10.84%)。结果表明,建立的ddPCR方法定量检测ILTV特异性强、敏感性高、重复性好,为绝对定量检测ILTV提供更好的技术支撑。 展开更多
关键词 鸡传染性喉气管炎病毒 微滴式数字PCR 定量检测
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4株不同基因型新城疫病毒毒力测定及与商品疫苗株抗原性比较
4
作者 黄青红 华俊 +6 位作者 谢丽基 谢芝勋 曾婷婷 李孟 罗思思 李丹 谢志勤 《动物医学进展》 2024年第2期16-21,共6页
为了探究不同基因型和不同来源4株新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)及现有商品疫苗株的抗原性差异,测定4株新城疫病毒的鸡胚最小致死量的平均死亡时间(mean death time,MDT)和1日龄雏鸡脑内接种致病指数(intracerebral pathogen... 为了探究不同基因型和不同来源4株新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)及现有商品疫苗株的抗原性差异,测定4株新城疫病毒的鸡胚最小致死量的平均死亡时间(mean death time,MDT)和1日龄雏鸡脑内接种致病指数(intracerebral pathogenicity index,ICPI),分别制备油乳苗,再与商品疫苗NDV La Sota株、A-Ⅶ株分别接种SPF鸡,收集单因子血清进行HI交叉试验和细胞交叉中和试验。结果显示,基因Ⅵ型NDV B27为中等毒力毒株,基因Ⅶ型NDV B9、基因Ⅸ型NDV B14、基因Ⅻ型NDV GX01为强毒株;HI交叉试验结果显示,基因Ⅵ型NDV B27和基因Ⅸ型NDV B14抗原同源性为0.64,抗原性差异微小,其他毒株之间的抗原同源性为0.69~0.99,抗原差异不大;细胞交叉中和试验结果显示,基因Ⅵ型NDV B27和基因Ⅸ型NDV B14抗原同源性为0.42,基因Ⅵ型NDV B27和基因Ⅱ型疫苗株La Sota抗原同源性为0.47,抗原差异较大,其余毒株及疫苗株La Sota之间抗原差异微小。试验结果可为后续筛选NDV疫苗候选株提供参考。 展开更多
关键词 新城疫病毒 基因型 抗原性 致病指数
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广西鸭源H3N8亚型禽流感病毒的分离鉴定及遗传进化分析
5
作者 李孟 李丹 +8 位作者 谢芝勋 罗思思 张民秀 谢丽基 华俊 粟永春 翟国胜 黄娇玲 陈智武 《安徽农业科学》 CAS 2024年第1期72-77,共6页
[目的]了解广西水禽中分离到的H3N8亚型禽流感病毒的分子遗传进化特征。[方法]将从活禽市场采集的水禽棉拭子样品经处理后接种SPF鸡胚,应用血凝试验和血凝抑制试验对收取尿囊液进行血清学鉴定,然后对分离到的禽流感病毒进行全基因序列... [目的]了解广西水禽中分离到的H3N8亚型禽流感病毒的分子遗传进化特征。[方法]将从活禽市场采集的水禽棉拭子样品经处理后接种SPF鸡胚,应用血凝试验和血凝抑制试验对收取尿囊液进行血清学鉴定,然后对分离到的禽流感病毒进行全基因序列测定和遗传进化分析。[结果]血清学及HA和NA基因测序结果显示,该分离毒株为H3N8亚型禽流感病毒,命名为A/duck/Guangxi/446D28/2021(H3N8)。全基因遗传进化分析显示,其HA蛋白无连续碱性氨基酸插入,符合典型低致病性禽流感病毒的特征;NA蛋白出现耐药性氨基酸位点突变;该毒株8个基因片段在GenBank中比对分析结果显示,其同源性最高的毒株基本主要来自越南和位于我国候鸟迁徙路线上的宁夏及江西等省(区)。[结论]该分离株可能是不同亚型禽流感病毒通过相互基因交换所形成的基因重组体。 展开更多
关键词 禽流感病毒 H3N8 水禽 基因重组
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血清4型禽腺病毒夹心ELISA检测方法的建立
6
作者 梁思敏 谢芝勋 +7 位作者 罗思思 邓显文 韦悠 谢志勤 李小凤 万丽军 范晴 任红玉 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期434-438,共5页
为建立一种血清4型禽腺病毒(FAd V-4)夹心ELISA快速检测方法,本研究以FAdV-4多抗作为捕获抗体,FAdV-4 Penton蛋白单克隆抗体作为检测抗体,通过优化反应条件,建立了检测FAdV-4的夹心ELISA方法,对其进行特异性、敏感性、重复性检验和临床... 为建立一种血清4型禽腺病毒(FAd V-4)夹心ELISA快速检测方法,本研究以FAdV-4多抗作为捕获抗体,FAdV-4 Penton蛋白单克隆抗体作为检测抗体,通过优化反应条件,建立了检测FAdV-4的夹心ELISA方法,对其进行特异性、敏感性、重复性检验和临床样品检测。方阵试验结果显示,FAdV-4多抗最佳稀释度为1∶2000,单抗最佳稀释度为1∶32000。该方法可特异性检测近年流行的高致病性FAdV-4毒株,而对之前的FAdV-4、其他血清型FAdV和常见禽病病原体不发生交叉反应。敏感性结果显示,该法对9.7×10^(2)TCID_(50)/mL FAdV-4仍可检出。重复性结果显示,批内和批间试验的变异系数均小于5.0%。用建立的夹心ELISA方法与荧光PCR同时对100份肛口拭子样品进行检测,两者检测结果相符。上述结果表明,本研究建立的夹心ELISA检测方法特异性强、敏感性高、重复性好,可用于FAdV-4的大批量检测。 展开更多
关键词 血清4型禽腺病毒 夹心ELISA 检测
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Ⅰ群禽腺病毒五邻体基因的克隆及原核表达 被引量：16
7
作者 罗思思 谢芝勋 +5 位作者 邓显文 刘加波 庞耀珊 谢志勤 谢丽基 彭宜 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期154-157,共4页
根据GenBank中I群禽腺病毒(AAV)基因组序列,设计了1对特异性引物。以CELO毒株基因组DNA为模板,通过PCR扩增出结构蛋白五邻体基因(penton),将其克隆到原核表达载体pGEX-4T-1的EcoR I和Xho I位点,构建了原核表达载体pGEX-penton。将其转... 根据GenBank中I群禽腺病毒(AAV)基因组序列,设计了1对特异性引物。以CELO毒株基因组DNA为模板,通过PCR扩增出结构蛋白五邻体基因(penton),将其克隆到原核表达载体pGEX-4T-1的EcoR I和Xho I位点,构建了原核表达载体pGEX-penton。将其转化到感受态细胞DH5α中,经IPTG诱导,SDS-PAGE分析,获得了45.9 ku的融合蛋白。用不同的IPTG浓度和时间诱导表达,得出诱导的最佳IPTG浓度为1.5 mmol/L,最佳时间为4 h。用尿素提取包涵体表达产物,得到penton纯化蛋白,浓度为2.98 mg/mL。经Western-bolt分析,该蛋白具有良好的反应原性。 展开更多
关键词 Ⅰ群禽腺病毒 克隆 PENTON 原核表达
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Ⅰ群禽腺病毒Hexon蛋白的截短表达与鉴定 被引量：6
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作者 罗思思 谢芝勋 +4 位作者 刘加波 庞耀珊 邓显文 谢志勤 谢丽基 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期550-555,共6页
本研究利用PCR方法扩增出Ⅰ群禽腺病毒FAVⅠhexon基因主要抗原区,连接于表达载体pGEX-4T-1中,构建成重组质粒pGEX-hexon,并转化大肠杆菌DH5α,用IPTG诱导表达,对表达的Hexon蛋白进行SDS-PAGE电泳和Western-blot分析。结果显示,试验成功... 本研究利用PCR方法扩增出Ⅰ群禽腺病毒FAVⅠhexon基因主要抗原区,连接于表达载体pGEX-4T-1中,构建成重组质粒pGEX-hexon,并转化大肠杆菌DH5α,用IPTG诱导表达,对表达的Hexon蛋白进行SDS-PAGE电泳和Western-blot分析。结果显示,试验成功扩增获得hexon基因主要抗原区序列,大小为1020bp。重组蛋白主要以包涵体形式存在,融合蛋白大小为63.1ku,与预测值相符。经Western-blot分析,表明重组蛋白与FAVⅠ的阳性血清发生特异性反应,具有良好的反应原性,为FAVⅠ诊断试剂盒的研制奠定基础。 展开更多
关键词 Ⅰ群禽腺病毒 Hexon蛋白 克隆 表达
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Ⅰ群禽腺病毒五邻体蛋白间接ELISA检测方法的建立 被引量：10
9
作者 罗思思 谢芝勋 +5 位作者 谢志勤 刘加波 庞耀珊 邓显文 谢丽基 范晴 《中国家禽》 北大核心 2012年第3期10-13,共4页
为建立一种简便、快速检测Ⅰ群禽腺病毒(FAVI)抗体的间接ELISA方法,以表达和纯化的FAVI五邻体重组蛋白作为抗原,优化反应条件,建立了FAVI间接penton-ELISA抗体检测的方法。抗原最佳包被浓度为1.5μg/孔,最适包被条件为37℃,2h后4℃过夜... 为建立一种简便、快速检测Ⅰ群禽腺病毒(FAVI)抗体的间接ELISA方法,以表达和纯化的FAVI五邻体重组蛋白作为抗原,优化反应条件,建立了FAVI间接penton-ELISA抗体检测的方法。抗原最佳包被浓度为1.5μg/孔,最适包被条件为37℃,2h后4℃过夜;血清最佳稀释度为1∶100;酶标二抗的最佳工作浓度为1∶2000;ELISA阴、阳性临界值为0.335。用penton-ELISA方法检测100份鸡血清样品,阳性率为41%。 展开更多
关键词 Ⅰ群禽腺病毒 五邻体 ELISA
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鸡传染性支气管炎病毒RT-LAMP可视化检测方法的建立 被引量：5
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作者 罗思思 谢芝勋 +6 位作者 庞耀珊 谢志勤 邓显文 刘加波 谢丽基 彭宜 范晴 《中国农学通报》 CSCD 2012年第20期83-87,共5页
为建立一种能快速检测鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的方法。根据GenBank中IBV的基因保守序列,设计一套环介导等温扩增(LAMP)特异性引物,建立了IBVRT-LAMP可视化检测方法;该法对IBVRNA最小检测限为10fg,而常规RT-PCR为1pg,灵敏度高于常规PC... 为建立一种能快速检测鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的方法。根据GenBank中IBV的基因保守序列,设计一套环介导等温扩增(LAMP)特异性引物,建立了IBVRT-LAMP可视化检测方法;该法对IBVRNA最小检测限为10fg,而常规RT-PCR为1pg,灵敏度高于常规PCR法100倍;对其他常见鸡病原体检测结果均为阴性;可通过肉眼观察颜色直接判定结果;本研究建立的IBVRT-LAMP方法简便、快捷、特异、灵敏,且只需一个可控温的水浴锅在1h内即可完成全部反应,更适合基层业务部门及养殖场的检测,为IBV感染的快速检测提供新方法。 展开更多
关键词 传染性支气管炎病毒 环介导等温扩增 可视化检测
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H6亚型禽流感病毒的分离鉴定与生物学特性分析 被引量：4
11
作者 罗思思 谢芝勋 +6 位作者 周辰瑜 刘加波 谢志勤 庞耀珊 邓显文 谢丽基 范晴 《中国家禽》 北大核心 2015年第2期54-56,共3页
为了解低致病性禽流感病毒(LPAIVs)在广西地区家禽中的流行情况,对广西地区活禽市场的家禽进行LPAIVs流行病学监测,分离鉴定出7株H6亚型禽流感病毒(AIV)。通过在广西地区活禽市场采集家禽咽喉和泄殖腔棉拭子样品,将其接种SPF鸡胚,收集... 为了解低致病性禽流感病毒(LPAIVs)在广西地区家禽中的流行情况,对广西地区活禽市场的家禽进行LPAIVs流行病学监测,分离鉴定出7株H6亚型禽流感病毒(AIV)。通过在广西地区活禽市场采集家禽咽喉和泄殖腔棉拭子样品,将其接种SPF鸡胚,收集尿囊液进行HA和HI试验,结果显示这7株只与H6亚型AIV的阳性血清发生反应,产生血凝抑制现象,初步鉴定为H6亚型AIV。通过HA和NA基因的克隆与测序鉴定,进一步确定为H6亚型AIV,与NA基因存在5种组合,包括H6N1、H6N2、H6N5、H6N6和H6N8。鸡致病性试验表明分离株可感染但不致死SPF鸡,并通过咽喉和泄殖腔排毒,结合HA裂解位点附近的氨基酸序列,表明所分离到的7株H6亚型AIV符合LPAIV的特征。 展开更多
关键词 H6亚型禽流感病毒 分离 鉴定
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Ⅰ群禽腺病毒100K蛋白主要抗原区基因片段的表达及鉴定 被引量：3
12
作者 罗思思 谢芝勋 +6 位作者 刘加波 谢丽基 庞耀珊 邓显文 谢志勤 范晴 彭宜 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期22-25,共4页
利用PCR技术对Ⅰ群禽腺病毒(FAVⅠ)100K蛋白主要抗原区片段进行扩增,得到约1062bp的基因片段;将其克隆到原核表达载体pGEX-4T-1,经测序及序列分析确证其正确插入到表达载体,成功构建重组表达载体pGEX-100K。重组质粒转化大肠杆菌DH5α,... 利用PCR技术对Ⅰ群禽腺病毒(FAVⅠ)100K蛋白主要抗原区片段进行扩增,得到约1062bp的基因片段;将其克隆到原核表达载体pGEX-4T-1,经测序及序列分析确证其正确插入到表达载体,成功构建重组表达载体pGEX-100K。重组质粒转化大肠杆菌DH5α,用IPTG诱导表达,对表达的蛋白用SDS-PAGE电泳和Western-blot分析。结果表明,100K蛋白主要抗原区基因片段得到良好的表达,表达的蛋白以可溶形式存在,分子质量约为64.5ku,与预测值相符;表达的100K蛋白与FAVⅠ阳性血清发生特异性结合,具有良好的反应原性,为FAVⅠ诊断试剂盒的研制奠定基础。 展开更多
关键词 Ⅰ群禽腺病毒 100K 表达
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基于SWOT分析模型下对于北京市无障碍设施建设研究
13
作者 张伊阳 艾菲拉·阿卜杜拉 +1 位作者 罗思思 杨蕙萌 《中文科技期刊数据库（文摘版）社会科学》 2024年第3期0148-0151,共4页
据最新数据显示,我国残障人口数量约8500多万,无障碍环境建设是关乎残障人群的生活舒适度与幸福感的重要机制。《“十四五”残疾人保障和发展规划》中提出残疾人事业是中国特色社会主义事业的重要组成部分,扶残助残是社会文明进步的重... 据最新数据显示,我国残障人口数量约8500多万,无障碍环境建设是关乎残障人群的生活舒适度与幸福感的重要机制。《“十四五”残疾人保障和发展规划》中提出残疾人事业是中国特色社会主义事业的重要组成部分,扶残助残是社会文明进步的重要标志。无障碍环境建设目前仍面临地区发展不平衡不充分、质量有待提升、制度保障有待加强、公共污名效应影响巨大等诸多挑战。基于以上背景,选取“北京市无障碍设施建设研究”主题展开研究,运用比较分析、问卷调查、SWOT分析等方法,调研并探究北京市无障碍设计中的现状与问题,提出若干无障碍环境建设发展建议。 展开更多
关键词 无障碍环境 公共污名效应 SWOT分析模型
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鸡毒支原体弱毒F株与强毒株二重荧光定量PCR鉴别检测方法的建立 被引量：5
14
作者 罗思思 谢芝勋 +5 位作者 邓显文 谢丽基 谢志勤 庞耀珊 刘加波 范晴 《中国家禽》 北大核心 2012年第18期20-24,共5页
研究根据基因库中鸡毒支原体(MG)S6毒株和F株的基因保守序列,设计了2对特异性引物和2条用不同荧光基团标记的TaqMan探针,对反应条件和试剂浓度进行优化,建立能鉴别鸡毒支原体(MG)强、弱毒株的二重荧光定量PCR检测方法,与其它禽类呼吸道... 研究根据基因库中鸡毒支原体(MG)S6毒株和F株的基因保守序列,设计了2对特异性引物和2条用不同荧光基团标记的TaqMan探针,对反应条件和试剂浓度进行优化,建立能鉴别鸡毒支原体(MG)强、弱毒株的二重荧光定量PCR检测方法,与其它禽类呼吸道病原体无交叉反应,对MG模板的灵敏度检测限为10拷贝/μL,对MG强弱毒模板以不同的浓度进行组合,仍可有效地检测到毒株,批内和批间重复变异系数小,特异性强、灵敏度高、稳定性好。研究建立的二重荧光定量PCR方法可用于MG强、弱毒株的鉴别检测,为该病的防控与净化提供良好工具。 展开更多
关键词 鸡毒支原体 二重荧光PCR 鉴别检测
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Ⅰ群禽腺病毒33K基因的原核表达与鉴定 被引量：1
15
作者 罗思思 谢芝勋 +6 位作者 刘加波 谢丽基 庞耀珊 邓显文 谢志勤 范晴 彭宜 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期7-12,共6页
33K蛋白是Ⅰ群禽腺病毒(fowl adenovirus groupⅠ,FAVⅠ)的非结构蛋白,在感染的过程中起重要作用。为了构建原核表达载体pGEX-33K作为诊断抗原,本研究根据GenBank中FAVⅠ33K基因序列,设计1对特异性引物。用PCR方法扩增目的片段,将其克... 33K蛋白是Ⅰ群禽腺病毒(fowl adenovirus groupⅠ,FAVⅠ)的非结构蛋白,在感染的过程中起重要作用。为了构建原核表达载体pGEX-33K作为诊断抗原,本研究根据GenBank中FAVⅠ33K基因序列,设计1对特异性引物。用PCR方法扩增目的片段,将其克隆至原核表达载体pGEX-4T-1,构建了重组质粒pGEX-33K。将其转化大肠杆菌感受态细胞DH5α,经IPTG诱导和SDS-PAGE分析,pGEX-33K表达的分子量为36.7KD,表达产物主要以可溶性的形式存在于菌体中;最佳IPTG诱导浓度为0.75mmol/L,最佳诱导时间为4h;经Western Blot鉴定,pGEX-33K重组蛋白可与FAVⅠ阳性血清发生特异性反应,为FAVⅠ抗体ELISA鉴别诊断试剂盒的研究奠定基础。 展开更多
关键词 Ⅰ群禽腺病毒 33K蛋白 原核表达
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鸡毒支原体LAMP可视化检测方法的建立 被引量：1
16
作者 罗思思 谢芝勋 +6 位作者 邓显文 谢志勤 庞耀珊 谢丽基 刘加波 范晴 彭宜 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第9期30-33,共4页
为建立一种鸡毒支原体(MG)的快速检测方法,本研究根据GenBank中MG的基因保守序列,设计1套特异性环介导等温扩增(LAMP)引物,优化反应条件,建立了MG LAMP的可视化检测方法。该方法的敏感性可达10fg/μL,高于常规PCR方法100倍;其特异性好,... 为建立一种鸡毒支原体(MG)的快速检测方法,本研究根据GenBank中MG的基因保守序列,设计1套特异性环介导等温扩增(LAMP)引物,优化反应条件,建立了MG LAMP的可视化检测方法。该方法的敏感性可达10fg/μL,高于常规PCR方法100倍;其特异性好,对其他的鸡常见病原体的检测结果均为阴性。MG LAMP反应只需一个可控温的水浴锅,在1h内完成全部反应,通过肉眼观察颜色直接判定结果。本研究建立的LAMP方法具有灵敏度高、特异性好、操作简便的优点,可用于MG感染的快速检测。 展开更多
关键词 鸡毒支原体 环介导等温扩增 可视化检测
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职业院校大学生创新创业能力“五位一体”培养模式研究 被引量：14
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作者 罗思思 林幼文 《教育与职业》 北大核心 2018年第19期74-77,共4页
职业院校大学生创新创业能力培养的关键在于建立政府与行业部门、职业院校、项目教学、专业教育与创新创业教育内容相结合、社会资源融合互通的"五位一体"培养模式,其践行路径为:以学习为主要标准,实现人才的分层次选拔;以实... 职业院校大学生创新创业能力培养的关键在于建立政府与行业部门、职业院校、项目教学、专业教育与创新创业教育内容相结合、社会资源融合互通的"五位一体"培养模式,其践行路径为:以学习为主要标准,实现人才的分层次选拔;以实践为依托,实现知识的活学活用;以竞赛为载体,提升团队合作能力;以制度和文化为支撑,将示范和辐射相结合,有效提升大学生创新创业能力。 展开更多
关键词 职业院校 五位一体 创新创业能力 培养模式
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当代工笔花鸟画中宋代花鸟画构图技巧的延续和发展 被引量：4
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作者 罗思思 《艺术科技》 2015年第3期98-98,共1页
工笔花鸟画在中国的历史非常悠久,从战国开始就有它的踪影,而工笔花鸟画的鼎盛时期应该是在宋代,当时宋徽宗的提倡,成就"宣和画院"的辉煌时期。构图技巧是工笔画中比较重要的一个步骤,了解宋代花鸟画构图特点和技巧,对当代工... 工笔花鸟画在中国的历史非常悠久,从战国开始就有它的踪影,而工笔花鸟画的鼎盛时期应该是在宋代,当时宋徽宗的提倡,成就"宣和画院"的辉煌时期。构图技巧是工笔画中比较重要的一个步骤,了解宋代花鸟画构图特点和技巧,对当代工笔花鸟画的延续和发展有非常重要的作用。 展开更多
关键词 当代工笔花鸟画 宋代花鸟画构图技巧 延续和发展
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舰船电子设备的抗强冲击试验分析 被引量：1
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作者 罗思思 《舰船科学技术》 北大核心 2018年第7X期115-117,共3页
采用传统方法分析抗强冲击试验对设备质量研究较为单一,造成分析结果不准确。依据高强度冲击特点对舰船电子设备抗强冲击试验进行分析,可提高分析结果精准度。根据高强度冲击特点,将设备质量分为3个等级,并在这3个等级下对轻量级、中量... 采用传统方法分析抗强冲击试验对设备质量研究较为单一,造成分析结果不准确。依据高强度冲击特点对舰船电子设备抗强冲击试验进行分析,可提高分析结果精准度。根据高强度冲击特点,将设备质量分为3个等级,并在这3个等级下对轻量级、中量级和水下爆炸等冲击行为进行试验研究,根据研究结果获取舰船电子设备抗强冲击程度。通过试验分析结果可知,依据高强度冲击特点试验分析方法结果较为准确,最高可达到89%,为舰船电子设备安装提供支持。 展开更多
关键词 舰船 电子设备 抗强冲击 设备质量 水下爆炸
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中国画花鸟画的“意写观”的辨析 被引量：2
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作者 罗思思 罗涛 《艺术家》 2021年第4期26-27,共2页
花鸟画是中国画的一种,主要以花、鸟、虫等为描绘对象。花鸟画的画法有工笔、写意、兼工带写三种,工笔花鸟画通过线条勾勒所描绘的对象,再分层着色,当然也有没骨画法,即不用线条勾勒,用直接着色的方式进行绘画创作;写意花鸟画主要利用... 花鸟画是中国画的一种,主要以花、鸟、虫等为描绘对象。花鸟画的画法有工笔、写意、兼工带写三种,工笔花鸟画通过线条勾勒所描绘的对象,再分层着色,当然也有没骨画法,即不用线条勾勒,用直接着色的方式进行绘画创作;写意花鸟画主要利用水墨或色墨,采用简练概括的手法来描绘对象;工笔和写意两种技法相互结合称为兼工带写。中国花鸟画集中体现了国人与审美客体中自然生物的审美关系,具备较强的抒情性,能在一定程度上体现时代精神、间接地反映社会实践生活,具有鲜明的特点。花鸟画经过漫长的历史发展,积累了非常丰富的创作经验,是世界艺术格局中非常璀璨的明珠。本文对中国花鸟画的"意写观"展开了探析,希望能为花鸟画的研究提供借鉴。 展开更多
关键词 中国画 花鸟画 意写观
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