包涵体蛋白复性的几种方法 被引量：25

1

作者 罗惠霞 李敏 王玉炯 《生物技术通报》 CAS CSCD 2007年第5期96-98,共3页

外源基因在大肠杆菌中高水平表达时,通常会形成无活性的蛋白聚集体即包涵体。包涵体富含表达的重组蛋白,经分离、变性溶解后须再经过一个合适的复性过程实现变性蛋白的重折叠,才能够得到生物活性蛋白。

关键词 包涵体 复性

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运用均匀设计法优化rPA(K)在原核系统中的表达条件 被引量：2

2

作者 罗惠霞 李敏 +1 位作者 王玉炯 马春骥 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期94-99,共6页

运用均匀设计法对影响rPA(K)在大肠杆菌中表达的因素进行了优化设计,摸索出了对表达产物进行诱导表达的最佳优化表达条件。结果如下:溶解氧为90%,IPTG诱导时间为5.3h、IPTG终浓度为0.1mmol/L、培养基为HD、pH值为6.0、诱导温度为25℃。... 运用均匀设计法对影响rPA(K)在大肠杆菌中表达的因素进行了优化设计,摸索出了对表达产物进行诱导表达的最佳优化表达条件。结果如下:溶解氧为90%,IPTG诱导时间为5.3h、IPTG终浓度为0.1mmol/L、培养基为HD、pH值为6.0、诱导温度为25℃。目的蛋白平均密度从0.16提高到0.48,是优化前的3倍。 展开更多

关键词 RPA(K) 均匀设计 优化表达

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rPA(K)原核表达产物的复性与纯化 被引量：1

3

作者 罗惠霞 李敏 +1 位作者 王玉炯 田楠 《河北师范大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2009年第1期100-106,共7页

为探索新型rPA(K)在原核系统中表达产物的纯化和复性,采用不同的洗涤剂(脲、Triton X-100、乙醇)依次洗涤包涵体,又经硫酸铵沉淀,得到了经初纯后纯度较高的包涵体.结果表明,经2 mol/L脲1、mL/L TritonX-100、200 mL/L乙醇洗涤,15%饱和... 为探索新型rPA(K)在原核系统中表达产物的纯化和复性,采用不同的洗涤剂(脲、Triton X-100、乙醇)依次洗涤包涵体,又经硫酸铵沉淀,得到了经初纯后纯度较高的包涵体.结果表明,经2 mol/L脲1、mL/L TritonX-100、200 mL/L乙醇洗涤,15%饱和度的硫酸铵沉淀后,包涵体的纯度由16.0%提高到56.6%.在此基础上,利用稀释复性和透析复性2种方法对包涵体进行复性,以恢复产物的天然构象,获得具有生物学活性的目的蛋白.结果如下:采用透析复性法,rPA(K)的比活可达1.33×105IU/mg;采用稀释复性法,rPA(K)的比活可达1.06×105IU/mg.利用S.TagTMrEK纯化试剂盒对目的产物进行进一步纯化,并对rEK和MgCl22种洗脱剂的洗脱效果进行了比较.SDS-PAGE结果显示,MgCl2洗脱后的产物,分子量未发生变化,仍为43 ku,其纯度为72%;而rEK洗脱后的产物,其纯度达到了72%,且分子量减小至约40 ku,表明去除了融合蛋白中的非目的片段. 展开更多

关键词 RPA(K) 包涵体 纯化 复性

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Reteplase(K)原核分泌表达载体的构建及其初步表达 被引量：1

4

作者 罗惠霞 李敏 王玉炯 《生物学杂志》 CAS CSCD 2010年第5期7-10,30,共5页

在原核表达载体pErA(K)的基础上,构建新型原核分泌表达载体pBrA(K),并实现其在原核表达系统中的表达。用限制性内切酶NcoI,XhoⅠ同时双酶切获得目的基因rPA(K)后,以T4连接酶将其连接到pET-20b(+)上,构建新型原核分泌表达载体pBrA(K)并... 在原核表达载体pErA(K)的基础上,构建新型原核分泌表达载体pBrA(K),并实现其在原核表达系统中的表达。用限制性内切酶NcoI,XhoⅠ同时双酶切获得目的基因rPA(K)后,以T4连接酶将其连接到pET-20b(+)上,构建新型原核分泌表达载体pBrA(K)并实现了在大肠杆菌中表达,经纤维蛋白平板检测存在于重组菌株培养液上清中的分泌蛋白有溶纤活性。ELISA结果显示表达产物与抗t-PA抗体呈现特异性阳性反应,进一步参考标准曲线得出样品中rPA(K)的平均含量为51 ng/mL。实验结果证明新型原核分泌表达载体pBrA(K)构建成功,并实现了其在原核表达系统中的表达,为新型rPA(K)的表达优化及后续的纯化研究工作奠定了基础。 展开更多

关键词 组织型纤溶酶激活剂(t-PA) RPA(K) 原核分泌表达

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组蛋白乙酰化/去乙酰化在真核基因转录调控中的作用 被引量：1

5

作者 罗惠霞 王玉炯 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 2004年第2期19-21,共3页

真核生物中 ,染色质的基本单位是核小体。核小体由H2 A ,H2 B ,H3 ,H4构成的核心组蛋白八聚体及缠绕于其上的DNA构成。最近的研究结果表明 ,核心组蛋白的乙酰化 去乙酰化过程是调控基因活性的一个关键步骤[1] 。而含有组蛋白去乙酰化酶... 真核生物中 ,染色质的基本单位是核小体。核小体由H2 A ,H2 B ,H3 ,H4构成的核心组蛋白八聚体及缠绕于其上的DNA构成。最近的研究结果表明 ,核心组蛋白的乙酰化 去乙酰化过程是调控基因活性的一个关键步骤[1] 。而含有组蛋白去乙酰化酶活性的分子有两类 :一类是与酵母RPD3同源的分子 ,另一类是与RPD3不同源的分子。它们各有其不同的来源 ,存在于各自的复合物中 ,催化不完全相同的组蛋白或其他蛋白质去乙酰化 ;这些去乙酰化酶与基因转录的调控存在着密切的关系 ,主要是介导基因转录的抑制。 展开更多

关键词 组蛋白乙酰化酶 组蛋白去乙酰化 基因转录 转录调控 真核基因

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生物技术专业《生命科学进展》双语教学初探 被引量：2

6

作者 罗惠霞 《生物学杂志》 CAS CSCD 2011年第1期102-104,共3页

为提高学生的外语水平,适应社会经济高速发展对人才的更高要求,通过对《生命科学进展》课程进行了双语教学的实践探索,探讨了教学手段和方法的改革,教学效果调查评估结果显示,认为课程总评及满意程度达良好及以上等级的学生占94%,表明... 为提高学生的外语水平,适应社会经济高速发展对人才的更高要求,通过对《生命科学进展》课程进行了双语教学的实践探索,探讨了教学手段和方法的改革,教学效果调查评估结果显示,认为课程总评及满意程度达良好及以上等级的学生占94%,表明开展的《生命科学进展》双语教学活动所采用的教学方法和手段基本适合学生目前的英语和专业知识水平,《生命科学进展》双语教学改革实践是成功的。 展开更多

关键词 双语教学 意义 实施效果

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新型rPA(K)原核表达载体的构建及初步表达

7

作者 罗惠霞 李敏 +1 位作者 王玉炯 李稷亮 《河北师范大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2008年第1期94-97,108,共5页

利用PCR技术,获得了rPA(K)cDNA片段,将其克隆至pET-30a(+),成功构建了新型的rPA(K)原核载体pLrA(K),并实现了其在大肠杆菌中的初步表达,经IPTG(终浓度为1 mmol/L)分别于37℃诱导1,2,3 h后,以Bio-Rad凝胶成像仪分析目的蛋白,相对含量分别... 利用PCR技术,获得了rPA(K)cDNA片段,将其克隆至pET-30a(+),成功构建了新型的rPA(K)原核载体pLrA(K),并实现了其在大肠杆菌中的初步表达,经IPTG(终浓度为1 mmol/L)分别于37℃诱导1,2,3 h后,以Bio-Rad凝胶成像仪分析目的蛋白,相对含量分别是19%,15.8%和24.3%,平均密度分别是0.13,0.14和0.16,IPTG诱导3 h后蛋白表达量最高.ELISA结果显示表达产物与抗t-PA抗体呈现特异性阳性反应,进一步参考标准曲线得出样品中rPA(K)的平均含量为210μg/L. 展开更多

关键词 组织型纤溶酶原激活剂 RPA(K) 原核表达

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rPA(K)的原核表达及其产物的初步纯化

8

作者 罗惠霞 李敏 +1 位作者 王玉炯 石晶 《生物技术通报》 CAS CSCD 2007年第6期120-124,共5页

rPA(K)是经过缺失/定点突变技术所获得的t-PA突变体。本实验以IPTG诱导,实现了rPA(K)在原核系统中的表达。实验证明目的产物的表达形式为包涵体,且当以IPTG诱导3h时,表达量最高,为41%。此后对该表达产物进行了初步纯化,即通过对不同超... rPA(K)是经过缺失/定点突变技术所获得的t-PA突变体。本实验以IPTG诱导,实现了rPA(K)在原核系统中的表达。实验证明目的产物的表达形式为包涵体,且当以IPTG诱导3h时,表达量最高,为41%。此后对该表达产物进行了初步纯化,即通过对不同超声破碎次数,包涵体洗涤液(脲,Triton X-100,乙醇)的不同浓度对纯化的影响因素进行了摸索。结果表明,超声2次,2M脲,0.5%Triton X-100,20%乙醇对目的蛋白纯化的效果最好,从而为进一步的纯化和复性奠定基础。 展开更多

关键词 RPA(K) 包涵体 初步纯化

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植物叶片相对电导率测定方法比较研究 被引量：210

9

作者 陈爱葵 韩瑞宏 +3 位作者 李东洋 凌连莲 罗惠霞 唐上剑 《广东教育学院学报》 2010年第5期88-91,共4页

对简易浸泡和常规抽气两种测定植物叶片相对电导率的方法进行比较研究,结果显示:利用浸泡法(处理12 h)与抽气法(处理3 h)所测得的叶片相对电导率值呈极显著正相关,说明两种测定方法考察植物叶片膜透性的整体变化趋势具有一致性.经方差... 对简易浸泡和常规抽气两种测定植物叶片相对电导率的方法进行比较研究,结果显示:利用浸泡法(处理12 h)与抽气法(处理3 h)所测得的叶片相对电导率值呈极显著正相关,说明两种测定方法考察植物叶片膜透性的整体变化趋势具有一致性.经方差分析结果显示,两种测定方法测定值间的差异均不显著(P=0.12).因此,考虑到用浸泡法比抽气法操作方便、更加节省材料处理时间,建议浸泡方法在实验室分析技术中推广使用. 展开更多

关键词 相对电导率 植物叶片 浸泡法 抽气法

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基于模糊理论的交通控制系统研究 被引量：5

10

作者 席晓慧 罗惠霞 王永玲 《西北大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期361-365,共5页

目的提出以车辆在交叉口延误作为模糊输入的交通信号模糊控制策略。方法通过对车辆在交叉口延误时间的估算,制订模糊控制规则来控制交叉口的信号灯,能有效地减少车辆在交叉口的延误时间。结果给出了车辆在交叉口延误时间的计算方法、模... 目的提出以车辆在交叉口延误作为模糊输入的交通信号模糊控制策略。方法通过对车辆在交叉口延误时间的估算,制订模糊控制规则来控制交叉口的信号灯,能有效地减少车辆在交叉口的延误时间。结果给出了车辆在交叉口延误时间的计算方法、模糊控制规则的定义和解模糊的方法,并以实例验证了这种方法的可靠性。结论提供了一种解决城市交通堵塞问题的途径,验证结果证明是可靠的。 展开更多

关键词 交通工程 交叉口延误 模糊规则 模糊控制

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衬底温度对ZnO薄膜的结构和发光性能的影响 被引量：1

11

作者 朱冠芳 姚合宝 +2 位作者 郑新亮 罗惠霞 于海萍 《西北大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期31-34,共4页

目的研究衬底温度对ZnO薄膜结构和发光性能的影响及薄膜结构与发光性能两者之间的关系。方法在玻璃衬底上采用射频磁控溅射法,固定其他工艺参数、改变衬底温度制备ZnO薄膜。对薄膜进行XRD谱和室温光致发光(PL)谱研究。结果衬底温度在25... 目的研究衬底温度对ZnO薄膜结构和发光性能的影响及薄膜结构与发光性能两者之间的关系。方法在玻璃衬底上采用射频磁控溅射法,固定其他工艺参数、改变衬底温度制备ZnO薄膜。对薄膜进行XRD谱和室温光致发光(PL)谱研究。结果衬底温度在25℃到250℃之间,随着温度的升高,结晶质量变好,且紫外发光相对明显增强。在衬底温度为250℃时,结晶质量和发光性能均达到最优化。继续升高衬底温度,结晶质量和发光性能都下降。结论衬底温度对ZnO薄膜的制备有着重要的影响;薄膜发光性能与结晶质量密切相关,结晶质量越好,紫外发光相对强度越大。 展开更多

关键词 ZNO薄膜 衬底温度 光致发光 激子发射

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rPA(K)的定点突变及其真核表达载体在COS-7细胞中的瞬时表达 被引量：1

12

作者 李敏 马爱瑛 +3 位作者 王玉炯 李稷亮 周栋 罗惠霞 《宁夏大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2008年第4期340-342,共3页

采用定点突变技术,对真核表达载体pCSRK上的目的片段rPA(K)进行突变,获得了含有突变体rPA(KN)(N184→Q)的真核表达载体pCSRKN.酶切和测序结果证明,成功去除了184位的糖基化位点.用LipofectamineTM2000 Reagent将pCSRKN转染至COS-7细胞,... 采用定点突变技术,对真核表达载体pCSRK上的目的片段rPA(K)进行突变,获得了含有突变体rPA(KN)(N184→Q)的真核表达载体pCSRKN.酶切和测序结果证明,成功去除了184位的糖基化位点.用LipofectamineTM2000 Reagent将pCSRKN转染至COS-7细胞,取转染后不同培养时间上清,以FAPA法进行检测.结果表明,表达产物具有良好的溶圈活性,从而验证了pCSRKN在真核系统表达的可行性. 展开更多

关键词 组织型纤溶酶原激活剂 rPA(KN) 突变体 瞬时表达

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适宜集成的KHN滤波器设计 被引量：3

13

作者 李永安 罗惠霞 《电讯技术》 2007年第5期71-73,共3页

为了获得高精度的电压模KHN滤波器,以Deboo积分器为原型,先给出一种高精度、易集成的变形Deboo积分器,再借助Meson公式,用变形Deboo积分器设计出极点频率为31.8 kHz、品质因素为1、通带增益为2的通用电压模KHN滤波器。该电路不仅可同时... 为了获得高精度的电压模KHN滤波器,以Deboo积分器为原型,先给出一种高精度、易集成的变形Deboo积分器,再借助Meson公式,用变形Deboo积分器设计出极点频率为31.8 kHz、品质因素为1、通带增益为2的通用电压模KHN滤波器。该电路不仅可同时实现高通、带通和低通输出,且极点频率与品质因素能实现正交、精确调节,电路的参数取决于电阻比,两积分电容接地,因而适合单片集成技术。计算机仿真结果与理论分析一致。 展开更多

关键词 KHN滤波器 电压模式 变形Deboo积分器 Mason公式

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少数民族预科生英语习得过程中的文化导入 被引量：1

14

作者 霍侠 艾晓燕 +2 位作者 杨东梅 王锡成 罗惠霞 《兰州教育学院学报》 2013年第2期61-64,共4页

语言与文化的关系,决定语言教学与文化教学的关系。适当地导入英语语言文化知识在少数民族预科生英语习得过程中发挥着重要的作用。结合教材和教学实际论述预科英语教学中文化导入的重要性、教学原则和课堂教学策略,目的在于提高预科学... 语言与文化的关系,决定语言教学与文化教学的关系。适当地导入英语语言文化知识在少数民族预科生英语习得过程中发挥着重要的作用。结合教材和教学实际论述预科英语教学中文化导入的重要性、教学原则和课堂教学策略,目的在于提高预科学生的英语语言能力和跨文化交际能力。 展开更多

关键词 民族预科 英语教学 文化导入 教学策略

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多跳无线网络中基于身份的解决方案 被引量：2

15

作者 于雍 雷凤宇 +1 位作者 王寿武 罗惠霞 《系统仿真学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期1725-1732,共8页

结合组合公钥的思想提出了一个较实用的基于身份的加密方案(IBE方案)——L-IBE方案。在安全性方面,L-IBE具有标准模型下可证明安全性,即在标准模型下有效的实现了DDH问题到新IBE方案的IND-sID-CPA攻击者的归约,并通过对比可知,其在模型... 结合组合公钥的思想提出了一个较实用的基于身份的加密方案(IBE方案)——L-IBE方案。在安全性方面,L-IBE具有标准模型下可证明安全性,即在标准模型下有效的实现了DDH问题到新IBE方案的IND-sID-CPA攻击者的归约,并通过对比可知,其在模型、难题假设和归约程度方面优势明显。通过仿真表明,和已有的知名方案相比,L-IBE方案在计算效率(加解密计算开销)、密文长度和密钥长度方面具有更好的性能指标。由于L-IBE方案无需在线可信第三方即可实现节点间安全认证,适用于无固定基础设施支撑的多跳无线电网络密钥管理。 展开更多

关键词 组合公钥 基于身份的加密 判定的双线性Diffie-Hellman假设 多跳无线电网络

原文传递

最优化理论视域下大学英语课程思政深化路径研究 被引量：1

16

作者 艾晓燕 朱海燕 罗惠霞 《高教学刊》 2023年第27期182-185,共4页

大学英语课程思政是当前我国外语教学研究的热点和新模态,具有重要地位。最优化理论由苏联著名教育家巴班斯基提出,旨在用最优化的教学方式,取得最优化的教学效果。基于此理论,结合教学实践,该文从教学目标、教学内容、教学方法、教学... 大学英语课程思政是当前我国外语教学研究的热点和新模态,具有重要地位。最优化理论由苏联著名教育家巴班斯基提出,旨在用最优化的教学方式,取得最优化的教学效果。基于此理论,结合教学实践,该文从教学目标、教学内容、教学方法、教学设计与评价及教学条件等方面提出大学英语课程思政深化路径,一是明确教学目标,落实立德树人;二是深挖教学内容,活学活用教材;三是采用多元教学法,拓展立体教育;四是加强教学过程设计,细化教学评价;五是优化教学条件,整合教学资源。 展开更多

关键词 最优化理论 大学英语 课程思政 教学资源 深化路径

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二阶压控电压源LPF的进一步探讨 被引量：1

17

作者 李永安 罗惠霞 《宝鸡文理学院学报（自然科学版）》 CAS 1999年第1期33-34,共2页

以物理概念为基础，利用数学手段证明了二阶压控电压源ＬＰＦ转化为正弦波振荡器的条件，同时给出了振荡频率的计算式。

关键词 低通滤波器 正统波振荡器 压控电压源 LPF

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咳嗽变异性哮喘患儿体质的研究 被引量：1

18

作者 何胜晓 罗惠霞 李学麟 《中医药通报》 2007年第1期48-50,共3页

目的:探讨CVA患儿的体质特点和体质构成特点。方法:通过对纳入研究的样本分为CVA组和对照组分别进行体质分型,结果运用SPSS/PC10．0统计软件包进行分析处理。结果:两组儿童调和质人数和非调和质人数比较,CVA组和对照组儿童的体质分型分... 目的:探讨CVA患儿的体质特点和体质构成特点。方法:通过对纳入研究的样本分为CVA组和对照组分别进行体质分型,结果运用SPSS/PC10．0统计软件包进行分析处理。结果:两组儿童调和质人数和非调和质人数比较,CVA组和对照组儿童的体质分型分层比较中,非调和质及肺脾质儿童比较,差异均极其显著(P＜0．01)。结论:1、两组儿童体质构成存在差异。2、本研究所采用的体质分型标准在CVA患儿的体质研究中可以在一定程度和范围内采用。3、CVA患儿病因上可能存在体质发病途径。 展开更多

关键词 哮喘 中医药疗法 体质 分型 儿童

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电磁波在湍流介质中的衰减效应

19

作者 李应乐 黄际英 罗惠霞 《西北大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期256-258,共3页

研究了大气湍流对电磁波的衰减,得出了有关精确表达式,计算结果表明自由空间的平均大气起伏常数为10-17,应用所得结果导出了闪烁指数理论公式,数值计算与文献一致。

关键词 电磁波 湍流 闪烁

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介质磁化的进一步讨论 被引量：2

20

作者 罗惠霞 李应乐 《玉林师范学院学报》 2000年第3期45-,共1页

本文给出了如何由磁化电流求磁化强度矢量，得到 Ｔ Ｍ与Ｂ的对偶关系。

关键词 磁化强度 介质

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