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超临界二氧化碳萃取的猪松质骨
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作者 罗旭江 鲜海 +10 位作者 彭礼庆 沈师 张彬 高超 王振勇 眭翔 黄靖香 韩刚 刘舒云 郭全义 鲁晓波 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2020年第10期1508-1514,共7页
背景:近年来国外使用超临界流体进行生物材料处理的研究较多,但是超临界流体应用于骨组织清洗的研究少见,国内相关报道更少。目的:评估超临界二氧化碳萃取技术处理猪股骨松质骨的有效性及对骨生物学性能的影响。方法:分别制备超临界二... 背景:近年来国外使用超临界流体进行生物材料处理的研究较多,但是超临界流体应用于骨组织清洗的研究少见,国内相关报道更少。目的:评估超临界二氧化碳萃取技术处理猪股骨松质骨的有效性及对骨生物学性能的影响。方法:分别制备超临界二氧化碳萃取前(对照组)及萃取后猪股骨骨块(实验组),检测两组骨密度、微观结构、最大抗压强度、弹性模量、骨组织组成成分、胶原含量与组织学分析。将骨髓间充质干细胞分别接种于两组骨块上,培养1 d后,扫描电镜观察材料骨小梁微孔结构及骨材料-细胞复合物中细胞黏附及生长情况。将两组骨块分别植入SD大鼠皮下,术后1,2,4周组织学观察皮下包埋炎症反应。动物实验方案已经解放军总医院伦理委员会批准。结果与结论:①两组材料孔径大小、骨密度、最大抗压强度、弹性模量、胶原含量比较差异均无显著性意义(P>0.05);②扫描电镜显示,对照组材料孔隙连通欠佳,有软组织残留;实验组材料孔隙相互连通、结构完整;③傅里叶红外光谱及X射线衍射分析显示,两组骨组织材料具有相似的吸收峰及衍射峰,热重分析显示超临界二氧化碳萃取可减少骨组织水分含量;④苏木精-伊红染色显示实验组骨无软组织残留,骨陷凹内细胞残留明显减少,对照组有软组织及细胞残留;天狼星红及改良Masson染色显示实验组骨胶原结构完整,胞质成分减少,对照组胞质成分残留明显;⑤扫描电镜显示,对照组骨无明显细胞黏附,实验组骨可见明显细胞黏附生长;⑥实验组骨组织植入皮下的血管周围炎症反应明显轻于对照组骨组织;⑦结果表明,超临界二氧化碳萃取技术是一种有效、环保的骨组织处理技术,在不影响其胶原结构及含量、力学性能的基础上,能够有效去除猪股骨松质骨细胞及软组织,保留骨孔隙结构完整,增加细胞黏附及生长,有效减低炎性排斥反应。 展开更多
关键词 超临界二氧化碳 同种异体骨 猪松质骨 骨缺损 骨生物材料 清洗 脱脂 脱细胞
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不同交联密度甲基丙烯酰酯明胶/脱细胞半月板细胞外基质复合水凝胶的性能 被引量：3
2
作者 周建 田壮 +9 位作者 田沁玉 罗旭江 彭礼庆 李坤 眭翔 黄靖香 刘舒云 郝利波 郭全义 姚琦 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2020年第16期2493-2499,共7页
背景:交联后的聚合物链对水凝胶的基本性质和细胞相容性存在显著影响,而交联密度可明显改变聚合物链的形成情况,有关交联密度对水凝胶性能影响的针对性研究较少。目的:制备一种细胞相容良好性的复合水凝胶,探究交联密度对该水凝胶性能... 背景:交联后的聚合物链对水凝胶的基本性质和细胞相容性存在显著影响,而交联密度可明显改变聚合物链的形成情况,有关交联密度对水凝胶性能影响的针对性研究较少。目的:制备一种细胞相容良好性的复合水凝胶,探究交联密度对该水凝胶性能的影响。方法:配制甲基丙烯酰酯明胶溶液,然后加入脱细胞半月板细胞外基质溶液与LAP溶液,制备预凝胶溶液,采用蓝光对溶液进行交联,交联时间分别为10,30,60s,检测3种水凝胶的压缩弹性模量、溶胀倍率与降解性能。将半月板纤维软骨细胞加入预凝胶溶液中,采用蓝光对溶液进行交联,交联时间分别为10,30,60 s,检测培养对应时间的细胞活性、形态与聚集。结果与结论:①交联60 s水凝胶的压缩模明显高于交联10,30 s的水凝胶(P<0.05);②交联10 s水凝胶的溶胀倍率明显高于交联30,60 s的水凝胶(P<0.05),交联30,60 s的水凝胶的溶胀倍率比较差异无显著性意义(P>0.05);③随着交联时间的延长,水凝胶的降解时间延长,交联60 s的水凝胶需要80 min完全降解,交联10 s的水凝胶50 min就可以完全降解;④培养24h后,3组水凝胶中的细胞活性均在95%以上,各组之间无差异(P>0.05);⑤培养1 d时,3组水凝胶中的细胞均呈球形且均匀分布;4 d时,3组细胞均开始伸展,交联10 s水凝胶中有较小的细胞团;7 d时,3组细胞树突状伸展更为明显,其中交联10 s水凝胶中形成了较为明显的细胞团;⑥培养1,7,14 d时,交联10 s水凝胶中的细胞活性均在85%以上。培养1 d时,交联10 s水凝胶中的细胞呈球形分布,且分布均匀;培养28 d时,细胞呈树突状伸展,并聚集形成网状结构;⑦结果表明,甲基丙烯酰酯明胶/脱细胞半月板细胞外基质复合水凝胶的性能可通过调整交联密度进行优化。 展开更多
关键词 水凝胶 甲基丙烯酰酯明胶 脱细胞外基质 性能 交联密度 细胞相容性 光交联 半月板
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脱细胞猪皮基质构建组织工程半月板支架
3
作者 王皓 陈明学 +10 位作者 李俊康 罗旭江 彭礼庆 李获 黄波 田广招 刘舒云 眭翔 黄靖香 郭全义 鲁晓波 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2021年第22期3473-3478,共6页
背景:半月板损伤的再生修复目前仍然是一个科学性难题,构建具有良好生物力学性能与细胞相容性的组织工程支架至关重要。目的:制备脱细胞猪皮基质支架,评价其生物力学性能和细胞相容性。方法:采用胰蛋白酶、Triton X-100、十二烷基磺酸... 背景:半月板损伤的再生修复目前仍然是一个科学性难题,构建具有良好生物力学性能与细胞相容性的组织工程支架至关重要。目的:制备脱细胞猪皮基质支架,评价其生物力学性能和细胞相容性。方法:采用胰蛋白酶、Triton X-100、十二烷基磺酸钠组合对猪皮进行脱细胞处理,获得脱细胞猪皮基质,采用DAPI染色观察脱细胞效果,扫描电镜观察其微观结构。通过组织学染色、胶原和糖胺多糖定量及生物力学检测对比脱细胞猪皮基质与天然半月板的差异。将第3代骨髓间充质干细胞接种于脱细胞猪皮基质上,培养3 d后分别进行扫描电镜、死/活细胞染色和鬼笔环肽染色观察。结果与结论:①DAPI染色显示,脱细胞猪皮基质无细胞核结构;扫描电镜显示,脱细胞猪皮基质表面较为粗糙,表面纤维呈拓扑学结构;②组织学染色显示,天然半月板组织含有丰富的细胞外基质,半月板细胞在基质中均匀分布,胶原纤维致密且排列规则,胶原成分主要以Ⅰ型胶原纤维为主,含有糖胺多糖成分;脱细胞猪皮基质无细胞核,呈疏松的纤维条索状,有较多的孔隙结构,胶原成分主要以Ⅰ型胶原纤维为主,含有糖胺多糖成分;③脱细胞猪皮基质的胶原含量、拉伸弹性模量与天然半月板比较差异无显著性意义(P>0.05),糖胺多糖含量、压缩弹性模量低于天然半月板(P<0.05),并且脱细胞猪皮基质的生物力学性能足够承受膝关节的负荷、保持支架的完整;④扫描电镜显示,骨髓间充质干细胞黏附分布在猪皮基质的孔隙结构中,细胞呈椭圆形,聚集生长;⑤死/活细胞染色显示,脱细胞猪皮基质上的骨髓间充质干细胞具有较高的活性(94.0±3.8)%;⑥鬼笔环肽/DAPI染色显示,骨髓间充质干细胞在脱细胞猪皮基质上呈现出很好的铺展状;⑦结果表明,脱细胞猪皮基质与天然半月板具有类似的胶原成分,呈现出良好的生物力学性能和细胞相容性,有利于细胞的黏附和生长。 展开更多
关键词 半月板 组织工程 脱细胞支架 猪皮基质 胶原 细胞外基质
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人关节软骨细胞外基质来源组织工程支架的制备和评估 被引量：7
4
作者 彭礼庆 罗旭江 +6 位作者 张彬 沈师 黄波 高超 鲁晓波 刘舒云 郭全义 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2019年第34期5436-5441,共6页
背景:软骨细胞外基质作为一种天然材料,为依赖组织生长的细胞提供了理想的微环境,已成为一种理想的软骨修复支架材料。目的:将人关节软骨来源的细胞外基质制备成软骨组织工程支架,评价其理化性质及生物学性能。方法:收集人源性关节软骨... 背景:软骨细胞外基质作为一种天然材料,为依赖组织生长的细胞提供了理想的微环境,已成为一种理想的软骨修复支架材料。目的:将人关节软骨来源的细胞外基质制备成软骨组织工程支架,评价其理化性质及生物学性能。方法:收集人源性关节软骨组织,予粉碎成匀浆、去细胞处理、冷冻干燥法制备成软骨组织工程支架。观察:①扫描电镜观察支架形态;②支架的孔隙率、吸水率测定,测量支架力学性质;③支架的成分:使用组织化学和免疫组织化学法染色观察;④支架细胞毒性:用人软骨细胞外基质支架浸提液与常规细胞培养液做对比,培养兔软骨细胞不同时间后使用MTT比色法检测;⑤细胞黏附及增殖情况:使用扫描电镜及共聚焦显微镜观察人软骨细胞与支架共培养后细胞黏附增殖情况,支架细胞复合体切片染色观察。结果与结论:①制备而成的支架呈三维多孔海绵状纵行取向形态,支架孔隙周围有软骨纤维,支架苏木精-伊红染色未见细胞核、番红O及天狼星红染色均证实支架含有胶原和软骨基质成分;②支架的孔隙率为(91.8±2.9)%、吸水率为(93.5±1.4)%;③人软骨细胞外基质支架浸提液经MTT检测,对软骨无细胞毒性;④共培养后,人软骨细胞在支架孔隙周壁上黏附、增殖且分布均匀。结果表明,人软骨细胞外基质多孔取向支架的成分与天然软骨近似,结构可供细胞均匀黏附、增殖良好,组织相容性好,可作为一种组织工程修复软骨缺损的支架材料。 展开更多
关键词 组织工程 细胞外基质 支架 软骨 同种异体
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汽车发动机烧机油故障检修技术 被引量：3
5
作者 张建峰 罗旭江 《内燃机与配件》 2016年第12期82-83,共2页
本文首先叙述了汽车发动机烧机油故障的表现和常见原因,以及如何对其进行维修与日常保养。其次,说明了汽车发动机烧机油故障辨别和预防方法。最后,通过大众捷达以及华晨金杯二种车型的故障案例,详细的分析了发动机烧机油故障的诊断方法... 本文首先叙述了汽车发动机烧机油故障的表现和常见原因,以及如何对其进行维修与日常保养。其次,说明了汽车发动机烧机油故障辨别和预防方法。最后,通过大众捷达以及华晨金杯二种车型的故障案例,详细的分析了发动机烧机油故障的诊断方法,即通过一些故障外在现象查找对应故障发生此现象的原因,并对检测诊断方案和分析出的问题进行讨论研究,得出最佳的维修方案。希望本文能对读者诊断汽车发动机烧机油故障有所帮助。 展开更多
关键词 烧机油 故障诊断 故障排除 案例分析
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3D打印制备PLGA/脱细胞软骨细胞外基质支架材料及其理化特性研究 被引量：8
6
作者 张彬 沈师 +11 位作者 鲜海 代永静 郭维民 李旭 张学亮 王振勇 李浩江 彭礼庆 罗旭江 刘舒云 鲁晓波 郭全义 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期1011-1018,共8页
目的采用低温沉积3D打印技术制备聚乳酸-羟基乙酸共聚物[poly(lactic-co-glycolic acid),PLGA]支架,复合脱细胞软骨细胞外基质(decellularized articular cartilage extracellular matrix,DACECM)制备PLGA/DACECM组织工程软骨支架,探讨... 目的采用低温沉积3D打印技术制备聚乳酸-羟基乙酸共聚物[poly(lactic-co-glycolic acid),PLGA]支架,复合脱细胞软骨细胞外基质(decellularized articular cartilage extracellular matrix,DACECM)制备PLGA/DACECM组织工程软骨支架,探讨其理化特性。方法利用低温沉积3D打印技术制备PLGA支架。采用改良式物理、化学脱细胞方法制备DACECM混悬液。利用冷冻干燥和物理化学法交联技术制备DACECM取向支架,同法将DACECM混悬液与PLGA支架复合制备PLGA/DACECM取向支架。通过大体观察、扫描电镜观察3种支架宏观、微观结构,组织学及免疫组织化学染色定性分析DACECM取向支架成分,生物力学试验检测3种支架压缩模量。于SD大鼠皮下包埋3种支架,HE染色观察免疫排斥反应。分离培养新西兰大白兔软骨细胞,制备3种细胞-支架复合物,扫描电镜观察细胞在支架上的生长黏附情况。取鼠L-929成纤维细胞分别于3种支架浸提液进行培养,以DMEM培养液培养细胞作为对照,细胞计数试剂盒8(cell counting kit 8,CCK-8)法检测细胞增殖情况。结果大体观察和扫描电镜观察示,PLGA支架表面较光滑,可见大孔;DACECM取向支架表面粗糙,为疏松多孔相互连通的三维立体结构;PLGA/DACECM取向支架表面粗糙,大孔与小孔相互连通,具有垂直三维立体结构。组织学及免疫组织化学定性分析显示,DACECM脱细胞完全,保留了软骨基质的糖胺聚糖和Ⅱ型胶原蛋白成分。生物力学检测示,DACECM取向支架压缩模量显著低于其余2种支架(P<0.05),PLGA支架和PLGA/DACECM取向支架间差异无统计学意义(P>0.05)。SD大鼠皮下包埋实验示,DACECM取向支架和PLGA/DACECM取向支架的免疫排斥反应明显低于PLGA支架。细胞-支架复合物扫描电镜观察示,软骨细胞在PLGA支架上未见明显黏附,大量软骨细胞在PLGA/DACECM取向支架和DACECM取向支架表面黏附、生长。CCK-8检测示,随培养时间延长,各组细胞数量均呈递增趋势,各时间点组间吸光度(A)值比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 PLGA/DACECM取向支架具有无细胞毒性、优良的理化性能,有望成为一种组织工程软骨支架材料。 展开更多
关键词 软骨组织工程 支架材料 3D打印技术 聚乳酸-羟基乙酸共聚物 脱细胞软骨细胞外基质 理化特性
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静电纺丝聚己内酯/Ⅰ型胶原纳米纤维取向性补片用于肩袖修复 被引量：6
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作者 高超 李超明 +10 位作者 徐玉龙 王振勇 李浩江 罗旭江 彭礼庆 张彬 沈师 刘舒云 眭翔 郭全义 杨建华 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期628-633,共6页
目的利用静电纺丝技术制备聚己内酯(polycaprolactone,PCL)/Ⅰ型胶原纳米纤维取向性补片,对其进行理化表征和生物性能评价,探讨其作为肩袖修复人工合成材料的可行性。方法利用静电纺丝技术分别使用质量比10%PCL静电纺丝溶液制备单纯PCL... 目的利用静电纺丝技术制备聚己内酯(polycaprolactone,PCL)/Ⅰ型胶原纳米纤维取向性补片,对其进行理化表征和生物性能评价,探讨其作为肩袖修复人工合成材料的可行性。方法利用静电纺丝技术分别使用质量比10%PCL静电纺丝溶液制备单纯PCL纳米纤维补片(对照组),以及含25%Ⅰ型胶原的PCL混合静电纺丝溶液制备PCL/Ⅰ型胶原纳米纤维补片(实验组)。取两种补片行大体及扫描电镜观察支架形态及微观结构并测量纤维直径和孔隙率,行单轴拉伸试验检测补片的力学性能,使用傅氏转换红外线光谱分析仪对补片成分进行分析,测量补片表面接触角。将两种补片浸提液与第3代兔肌腱干细胞复合培养,细胞计数试剂盒8(cell counting kit 8,CCK-8)法检测材料毒性和细胞增殖情况,以正常培养细胞作为空白对照组;将兔肌腱干细胞复合于两种补片上,体外培养3 d后进行死/活细胞染色,共聚焦激光扫描显微镜下观察细胞在补片上的黏附和活性。结果大体及扫描电镜观察示,两种补片纤维均呈取向性排列,实验组补片纤维直径显著小于对照组(t=26.907,P=0.000),孔隙率显著大于对照组(t=2.506,P=0.032)。实验组补片的纤维拉伸强度和杨氏模量均显著高于对照组,差异有统计学意义(t=3.705,P=0.029;t=4.064,P=0.034)。红外光谱分析示,实验组补片中PCL和Ⅰ型胶原成功混合。实验组补片表面接触角为(73.88±4.97)°,为亲水的;而对照组补片表面接触角为(128.46±5.10)°,为疏水的;两组表面接触角比较差异有统计学意义(t=21.705,P=0.002)。随培养时间延长,各组细胞吸光度(A)值均逐渐增加,各时间点实验组和对照组A值比较差异均无统计学意义(P>0.05)。共聚焦激光扫描显微镜观察示,培养3 d,兔肌腱干细胞在两种补片表面均可黏附、生长,实验组补片表面黏附的细胞数量多于对照组,且活性更好。结论利用静电纺丝技术制备的PCL/Ⅰ型胶原纳米纤维取向性补片具有优良的理化性能及细胞黏附性能,无细胞毒性,未来可作为肩袖修复理想的组织工程补片。 展开更多
关键词 静电纺丝 肩袖补片 肌腱组织工程 聚己内酯 Ⅰ型胶原
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