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人诱导多能干细胞来源的心脏前体细胞移植治疗大鼠急性心肌梗死
1
作者 罗润娇 艾雪峰 +7 位作者 李凯祥 卢婷婷 刘明璐 陈颖 王湘莹 王会景 付炜 王伟 《组织工程与重建外科》 CAS 2023年第3期213-222,共10页
目的探索人诱导多能干细胞来源的心脏前体细胞移植治疗大鼠急性心肌梗死的效果。方法利用免疫荧光染色鉴定人诱导多能干细胞的多能性,利用GiWi法在体外将其分化为心脏前体细胞,再继续分化为心肌细胞,利用流式细胞术及免疫荧光染色对所... 目的探索人诱导多能干细胞来源的心脏前体细胞移植治疗大鼠急性心肌梗死的效果。方法利用免疫荧光染色鉴定人诱导多能干细胞的多能性,利用GiWi法在体外将其分化为心脏前体细胞,再继续分化为心肌细胞,利用流式细胞术及免疫荧光染色对所获得的心脏前体细胞和心肌细胞进行分化效率及形态学鉴定。通过结扎大鼠冠状动脉左前降支制备急性心肌梗死模型,利用TTC染色、超声心动图评估造模情况。将心脏前体细胞移植到心肌梗死边缘区,术后1周、4周利用超声心动图检测心功能;利用HE、Masson染色评估梗死区域大小以及纤维化程度;利用免疫荧光染色评估心脏前体细胞的体内存活及分化情况。结果人诱导多能干细胞高表达干性标志物OCT4、SOX2、Nanog以及Tra-1-60。心脏前体细胞的体外分化效率高达77.8%,表达心脏前体细胞特异性标志物Isl1;并可进一步分化为心肌细胞,其效率高达83.3%,同时高表达cTnT、α-actinin等心肌特异性标志物。大鼠急性心肌梗死模型制备成功,TTC染色见梗死区发白,左室射血分数降低。体内移植后4周,与模型组相比,细胞组心功能改善明显,心室扩张减弱,纤维化减轻;移植细胞体内存活并分化为心肌细胞。结论人诱导多能干细胞来源的心脏前体细胞体外分化效率高,体内移植后可存活并分化为心肌细胞,可抑制心室重构,改善心功能。 展开更多
关键词 诱导多能干细胞 心脏前体细胞 心肌梗死 细胞移植
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术后红细胞分布宽度峰值和达峰时间与先天性心脏病患儿术后结局的关系
2
作者 卢婷婷 罗润娇 +3 位作者 姜磊 黄坚鹄 杨寅愉 王伟 《中国体外循环杂志》 2023年第3期136-140,163,共6页
目的探讨先天性心脏病(CHD)儿童接受心脏手术治疗后红细胞分布宽度(RDW)峰值及达峰时间与CHD患儿手术后结局的关系。方法纳入2006年1月1日至2017年12月31日在上海儿童医学中心因先天性心脏病接受心脏手术治疗的12857名患者,收集患者基... 目的探讨先天性心脏病(CHD)儿童接受心脏手术治疗后红细胞分布宽度(RDW)峰值及达峰时间与CHD患儿手术后结局的关系。方法纳入2006年1月1日至2017年12月31日在上海儿童医学中心因先天性心脏病接受心脏手术治疗的12857名患者,收集患者基本信息及实验室检查指标。以logistic回归模型分析术后RDW峰值及达峰时间与术后结局(死亡、急性肾损伤、ICU住院时间>72 h、呼吸机使用时间>72 h、术后住院时间>10 d)的关系。结果术后RDW峰值及达峰时间均与死亡无关;术后RDW达峰时间与呼吸机使用时间>72 h也无关;术后RDW峰值升高和达峰时间缩短是患儿发生急性肾损伤、ICU住院时间>72 h、术后住院时间>10 d的危险因素。结论CHD患儿术后RDW峰值及达峰时间与其术后结局显著相关,可通过检测这两个参数预测患儿预后。 展开更多
关键词 先天性心脏病 红细胞分布宽度 术后红细胞分布宽度峰值 达峰时间 术后结局
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利用hiPSC-CPCs结合纤维蛋白凝胶构建3D心肌微组织
3
作者 卢婷婷 罗润娇 +8 位作者 谭瑶 颜冰倩 陈颖 刘明璐 王会景 王湘莹 李凯祥 王伟 付炜 《组织工程与重建外科》 CAS 2023年第2期101-110,共10页
目的利用人诱导多能干细胞来源心肌前体细胞(Human induced pluripotent stem cell-derived cardiac progenitor cells,hiPSCs-CPCs)结合纤维蛋白凝胶构建3D心肌微组织用于研究心脏发育及药物筛选。方法首先利用化学分化法获得hiPSC-CP... 目的利用人诱导多能干细胞来源心肌前体细胞(Human induced pluripotent stem cell-derived cardiac progenitor cells,hiPSCs-CPCs)结合纤维蛋白凝胶构建3D心肌微组织用于研究心脏发育及药物筛选。方法首先利用化学分化法获得hiPSC-CPCs,并对其进行鉴定,然后将其混于纤维蛋白凝胶构建3D微组织,待hiPSC-CPCs分化成心肌细胞后获得心肌微组织;观察心肌微组织随培养时间延长的形态变化;分别于第15天和第30天对心肌微组织进行冰冻切片,使用免疫荧光对获得的心肌微组织进行心肌鉴定,并统计分析心肌微组织中心肌细胞的肌节长度、Z带宽度和排列情况;使用钙成像技术检测第15天和第30天心肌微组织的钙信号变化;使用MUSCLEMOTION ImageJ macro插件分析第15天和第30天的心肌微组织的收缩情况,并利用该软件检测心肌微组织对药物的反应。结果使用化学分化法可高效分化获得hiPSC-CPCs,将其与纤维蛋白凝胶结合可成功构建3D微组织,且该微组织培养至第10天可成功获得具有自发跳动能力的心肌微组织,继续培养至第30天,心肌微组织形态仍可维持,未出现溶解情况;免疫荧光结果显示,心肌微组织可高表达心肌标志物c Tn T和α-actinin,随着培养时间延长,肌节更趋于成熟状态;钙成像结果显示,可顺利检测到心肌微组织的钙信号变化,且随着培养时间延长,钙信号变化一致性明显提升;MUSCLEMOTION ImageJ macro结果显示,随着培养时间延长,心肌微组织收缩频率降低、收缩幅度增强,且异丙肾上腺素能成功激动心肌微组织,且随培养时间的延长,心肌微组织对异丙肾上腺素的反应更加灵敏。结论将hiPSC-CPCs混于纤维蛋白凝胶中可成功构建可持续培养的3D心肌微组织,其钙信号及收缩易于检测,且对药物反应敏感,有望成为研究心脏发育和药物筛选的有利工具。 展开更多
关键词 人诱导多能干细胞来源心肌前体细胞 人诱导多能干细胞来源心肌细胞 纤维蛋白凝胶 心肌微组织
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儿童先天性心脏病术后医院感染风险因素分析 被引量：1
4
作者 罗润娇 杜欣为 +3 位作者 龚霄雷 陈一玮 郝泽东 王伟 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期51-57,共7页
目的探讨先天性心脏病(CHD)患儿手术前中性粒细胞淋巴细胞比值(NLR)及其他因素与术后医院感染的关系。方法收集2006至2017年行心脏手术患儿11937例,根据NLR随年龄增长分布的变化拐点及发生医院感染与否将患儿分为<224天感染组和未感... 目的探讨先天性心脏病(CHD)患儿手术前中性粒细胞淋巴细胞比值(NLR)及其他因素与术后医院感染的关系。方法收集2006至2017年行心脏手术患儿11937例,根据NLR随年龄增长分布的变化拐点及发生医院感染与否将患儿分为<224天感染组和未感染组及≥224天感染组和未感染组,分析其术后医院感染的风险因素。结果11937例患儿中男6746例、女5191例,中位年龄316.0(175.0~838.0)d。发生医院感染1325例(占11.1%),其中<224天830例(19.15%)、≥224天495例(6.51%)。<224天患儿的医院感染率高于≥224天患儿,差异有统计学意义(P<0.001)。二分类logistic回归分析发现,NLR高、体外循环持续时间长、术前有感染、STS风险评级≥3是<224天患儿术后发生医院感染的独立风险因素(P<0.05);而年龄大、淋巴细胞白细胞比值(LWR)异常是<224天患儿术后发生医院感染的独立保护因素(P<0.05)。心脏手术史、术前有感染、STS风险评级≥3、ALT异常、AST异常是≥224天患儿术后发生医院感染的独立风险因素(P<0.05);而年龄大、BMI-Z评分高以及LWR异常是≥224天患儿术后发生医院感染的独立保护因素(P<0.05)。NLR预测<224天患儿术后发生医院感染的曲线下面积(AUC)为0.594(95%CI:0.572~0.617);当NLR>0.542时,其诊断医院感染的灵敏度为41.8%、特异度为73.6%。结论近年CHD患儿术后感染率有所降低。年龄小、BMI-Z评分低、术前感染、手术复杂、手术时间长和NLR升高是CHD患儿术后感染的风险因素。 展开更多
关键词 血中性粒细胞淋巴细胞比值 医院感染 心脏手术 儿童
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基于hiPSC-CM的新型明胶水凝胶构建体外心肌微组织研究 被引量：2
5
作者 刘明璐 姜思涵 +7 位作者 谭瑶 陈颖 罗润娇 卢婷婷 王会景 付炜 游正伟 王伟 《组织工程与重建外科》 CAS 2022年第3期219-226,共8页
目的 探索应用新型明胶水凝胶复合人诱导多能干细胞来源心肌细胞(hiPSC-CMs)构建体外心肌微组织的可行性。方法 制备一种新型明胶水凝胶,以冷冻扫描电镜观察其表面结构,以循环拉伸试验测定其机械强度。在该材料上种植hiPSC-CMs,评估该... 目的 探索应用新型明胶水凝胶复合人诱导多能干细胞来源心肌细胞(hiPSC-CMs)构建体外心肌微组织的可行性。方法 制备一种新型明胶水凝胶,以冷冻扫描电镜观察其表面结构,以循环拉伸试验测定其机械强度。在该材料上种植hiPSC-CMs,评估该材料的细胞相容性及其沟槽结构对心肌细胞的影响。将交联明胶水凝胶与hiPSC-CMs混合制备心肌微组织,探索构建体外心肌微组织过程中和冻存后心肌细胞的活性。结果 冷冻扫描电镜显示,新型明胶水凝胶表面呈现均匀的疏松多孔结构。循环拉伸试验显示,新型明胶水凝胶具有良好的机械性能。细胞试验显示,心肌细胞在该材料上生长良好,其沟槽结构对心肌细胞的有序排列有一定的引导作用。新型明胶水凝胶与hiPSC-CMs混合构建心肌微组织的实验结果表明,明胶水凝胶对心肌细胞具有良好的保护作用,对冻存复苏的心肌细胞具有一定的细胞保护作用。结论 新型明胶水凝胶具有疏松多孔的表面微结构、良好的力学性能和细胞相容性,对体外构建心肌微组织中的细胞和冻存后的细胞具有保护作用,未来有望用于组织工程领域,进行器官再生、药物筛选、体外建模等方面的研究。 展开更多
关键词 明胶水凝胶 人诱导多能干细胞来源心肌细胞 心肌微组织丝
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Torin1、Nutlin-3a促进人诱导多能干细胞来源早期心肌细胞成熟的初步研究 被引量：2
6
作者 陈颖 杨礼 +7 位作者 宫艺其 谭瑶 王会景 刘明璐 卢婷婷 罗润娇 王伟 付炜 《组织工程与重建外科》 CAS 2021年第6期511-519,共9页
目的探索Torin1、Nutlin-3a对促进人诱导多能干细胞来源早期心肌细胞成熟的影响。方法将Torin1和Nutlin-3a作用于3T3细胞,通过细胞免疫荧光、流式细胞分析技术等验证其抑制细胞增殖的效果;再将药物作用于人诱导多能干细胞来源的早期心... 目的探索Torin1、Nutlin-3a对促进人诱导多能干细胞来源早期心肌细胞成熟的影响。方法将Torin1和Nutlin-3a作用于3T3细胞,通过细胞免疫荧光、流式细胞分析技术等验证其抑制细胞增殖的效果;再将药物作用于人诱导多能干细胞来源的早期心肌细胞,利用Western blot检测心肌细胞成熟相关蛋白的表达情况;利用qRT-PCR检测心肌细胞成熟相关基因mRNA的表达情况;利用细胞免疫荧光染色观察心肌细胞的形态、肌节发育情况;利用膜片钳电生理技术评估心肌细胞动作电位的相关指标,包括频率、振幅、动作电位时程等,评价其成熟情况。结果细胞免疫荧光、流式细胞分析技术显示,Nutlin-3a和Torin1可以抑制3T3细胞的增殖,使细胞退出细胞周期。Western blot检测结果显示,Nutlin-3a组和Torin1组cTnT、cTnI蛋白表达量相比DMSO组有增高的趋势。qRT-PCR结果表明,Torin1处理后的心肌细胞增殖存在减少趋势,并且可能更多地以脂代谢为能量代谢方式,心肌特异性标志表达量增高提示心肌细胞内结构可能更加成熟。免疫荧光染色结果显示,与对照组相比,实验组细胞形态趋近长棒型,其中Torin1组心肌细胞肌节更加丰富,排列更加规整,更加接近成熟心肌细胞形态。膜片钳电生理实验结果分析显示,Torin1组和Nutlin-3a组振幅、最大去极化速率、动作电位平台期、APD30、APD70、APD90、阈电位绝对值相比对照组有增大的趋势,Torin1组和Nutlin-3a组动作电位频率相比对照组有减少的趋势,表明Torin1和Nutlin-3a处理人诱导多能干细胞来源的早期心肌细胞,可能促进心肌细胞动作电位成熟。结论用Torin1和Nutlin-3a处理人诱导多能干细胞来源的早期心肌细胞,可一定程度上改善细胞成熟的相关指标,mTOR信号通路可能是心肌细胞成熟的关键调控通路。 展开更多
关键词 心肌细胞 成熟 干细胞 雷帕霉素靶蛋白信号通路 细胞周期
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p53 modRNA促进人诱导多能干细胞来源早期心肌细胞分化成熟的初步研究 被引量：1
7
作者 陈颖 杨礼 +7 位作者 宫艺其 谭瑶 王会景 刘明璐 卢婷婷 罗润娇 王伟 付炜 《组织工程与重建外科》 CAS 2022年第2期89-98,共10页
目的探索p53 modRNA对促进人诱导多能干细胞来源早期心肌细胞分化成熟的影响。方法将p53 modRNA转染至人诱导多能干细胞来源的早期心肌细胞,利用qRT-PCR检测心肌细胞成熟相关基因mRNA的表达情况;利用Western blot检测心肌细胞成熟相关... 目的探索p53 modRNA对促进人诱导多能干细胞来源早期心肌细胞分化成熟的影响。方法将p53 modRNA转染至人诱导多能干细胞来源的早期心肌细胞,利用qRT-PCR检测心肌细胞成熟相关基因mRNA的表达情况;利用Western blot检测心肌细胞成熟相关蛋白的表达情况;利用细胞免疫荧光染色观察心肌细胞的形态、肌节发育情况。结果qRT-PCR结果表明,p53 modRNA处理过后的心肌细胞增殖相关基因表达减少,脂代谢基因表达水平增高,且心肌特异性基因表达量增高,提示心肌细胞内结构可能更加成熟。Western blot结果显示,转染组cTnI蛋白表达量相比未转染组有增高趋势。免疫荧光染色结果显示,与未转染组相比,转染组细胞形态趋近长棒型,心肌细胞肌节排列更加整齐且数量丰富,更接近成熟心肌细胞形态。结论用p53 modRNA处理人诱导多能干细胞来源的早期心肌细胞,可一定程度上改善细胞成熟的相关指标。 展开更多
关键词 心肌细胞 成熟 干细胞 细胞周期
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