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基于血清代谢组学探讨化湿定痛汤治疗大鼠膝关节骨性关节炎的机制
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作者 朱佳威 葛海雅 +2 位作者 耿秋东 沈默金 李楠 《河南中医》 2024年第1期48-55,共8页
目的:基于血清代谢组学探讨化湿定痛汤治疗大鼠膝关节骨性关节炎的作用机制。方法:将28只SPF级SD大鼠(雌雄各半)随机分为空白组11只、造模组17只。造模组在第1天和第4天行膝关节腔注射Ⅱ型胶原酶,从而建立大鼠膝关节骨性关节炎模型,空... 目的:基于血清代谢组学探讨化湿定痛汤治疗大鼠膝关节骨性关节炎的作用机制。方法:将28只SPF级SD大鼠(雌雄各半)随机分为空白组11只、造模组17只。造模组在第1天和第4天行膝关节腔注射Ⅱ型胶原酶,从而建立大鼠膝关节骨性关节炎模型,空白组以同样方式注射生理盐水。将16只造模成功的大鼠随机分为模型组和化湿定痛汤组(4.68 mg·kg^(-1)),每组各8只,空白组和模型组大鼠给予等体积生理盐水灌胃,每日1次,持续4周。末次灌胃后,收集各组大鼠血清,ELISA检测白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)浓度;采用高分辨率飞行时间质谱联用仪对血清样本进行质谱检测,通过主成分分析、偏最小二乘法-判别分析方法判断各组样本的聚类情况,进而筛选血清差异代谢物和重要的代谢通路。结果:与空白组比较,模型组大鼠血清IL-1β浓度显著升高(P<0.05);与模型组比较,化湿定痛汤组大鼠血清IL-1β浓度显著降低(P<0.05)。血清代谢组学结果显示,模型组与空白组、化湿定痛汤组的代谢轮廓差异较大;鉴定出28个差异代谢物,包括皮质酮、熊去氧胆酸、对甲酚硫酸盐等;发掘6条重要的代谢通路,如类固醇生成、谷氨酸代谢、丙氨酸代谢等。结论:化湿定痛汤可能通过调节多种血清差异代谢物及多条代谢通路,从而发挥治疗膝关节骨性关节炎的作用。 展开更多
关键词 膝关节骨性关节炎 化湿定痛汤 代谢组学 差异代谢物 类固醇生成 皮质酮 大鼠
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新医科背景下中医骨伤科学专业本科教学的思考与探索
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作者 耿秋东 李楠 《中国当代医药》 2023年第36期182-186,共5页
“新医科”的建设是新时代党和国家保障人民健康的战略安排,也是推动我国高等学校医学教育高质量发展的重要举措。在“新医科”背景下,如何回应人民群众对身体健康的美好生活需要,紧扣医学教育发展的时代要求,对中医骨伤科学专业教学体... “新医科”的建设是新时代党和国家保障人民健康的战略安排,也是推动我国高等学校医学教育高质量发展的重要举措。在“新医科”背景下,如何回应人民群众对身体健康的美好生活需要,紧扣医学教育发展的时代要求,对中医骨伤科学专业教学体系进行整体优化和创新性发展,是高等学校中医骨伤科学教学面临的新的挑战和机遇。对标新医科需求,对当前中医骨伤科学专业教学中存在的热点、痛点、堵点进行分析,加强学科虚拟教研室建设、探索线上线下混合式教学应用、开展虚拟仿真教学实训,可以有效推动中医骨伤科学专业本科教学的高质量发展,进而为建设健康中国培育符合新医科需求的,具有较高人文科学素质和创新精神的中医专门人才。 展开更多
关键词 中医骨伤科学 新医科 教学改革 本科教育
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基于IHH-Gli信号通路探讨龟鹿二仙胶含药血清调控大鼠膝关节软骨细胞肥大分化作用机制
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作者 李晔 耿秋东 +2 位作者 郑珍萍 吴伟欣 李楠 《福建中医药》 2023年第2期26-30,共5页
目的基于IHH-Gli信号通路探讨龟鹿二仙胶含药血清对大鼠膝关节软骨细胞肥大分化的调控机制。方法取4周龄SPF级SD大鼠膝关节软骨细胞进行传代培养,将第三代生长良好的软骨细胞,设为空白组;采用含10 ng/mL IL-1β的10%FBS/DMEM培养上述第... 目的基于IHH-Gli信号通路探讨龟鹿二仙胶含药血清对大鼠膝关节软骨细胞肥大分化的调控机制。方法取4周龄SPF级SD大鼠膝关节软骨细胞进行传代培养,将第三代生长良好的软骨细胞,设为空白组;采用含10 ng/mL IL-1β的10%FBS/DMEM培养上述第三代软骨细胞12 h后制备大鼠膝关节肥大软骨细胞模型,模型鉴定成功后随机分为模型组、龟鹿组、抑制剂组。空白组、模型组均采用含10%大鼠空白血清DMEM进行培养,龟鹿组和抑制剂组分别采用含10%龟鹿二仙胶大鼠含药血清和含10 nmol/L环巴胺的10%大鼠空白血清DMEM进行培养。培养72 h后在光镜下观察4组软骨细胞形态变化,qRT-PCR法检测4组印度刺猬(IHH)、膜受体Smoothened(Smo)、胶质细胞瘤转录因子(Gli)、Runt相关转录因子2(Runx2)、X型胶原α1(Col10A1)、基质金属蛋白酶13(MMP-13)mRNA相对表达水平,采用Western blot检测等4组IHH、Smo、Gli蛋白表达量。结果与空白组比较,模型组细胞不规则形态增加,细胞间隙变大、数量变少,细胞碎片、悬浮死细胞增多;与模型组比较,龟鹿组、抑制剂组细胞不规则形态减少,细胞间隙变小、数量增多,细胞碎片、悬浮死细胞减少。与空白组比较,模型组、龟鹿组和抑制剂组IHH、Smo、Gli、Runx2、Col10A1、MMP-13 mRNA相对表达水平及IHH、Smo、Gli蛋白表达量均有一定程度提高(P均<0.05);与模型组比较,龟鹿组和抑制剂组IHH、Smo、Gli、Runx2、Col10A1、MMP-13 mRNA相对表达水平及IHH、Smo、Gli蛋白表达量均显著下调(P均<0.05)。结论龟鹿二仙胶含药血清可调节大鼠膝关节肥大软骨细胞的分解合成平衡,改善肥大软骨细胞的失稳态环境,其调控机制可能与IHH-Gli信号通路相关。 展开更多
关键词 膝关节软骨细胞 肥大细胞分化 凋亡 骨关节炎 龟鹿二仙胶
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基于网络药理学探讨龟鹿二仙胶治疗骨关节炎的作用及机制 被引量:3
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作者 耿秋东 葛海雅 +1 位作者 王和鸣 李楠 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2021年第8期1229-1236,共8页
背景:临床研究表明龟鹿二仙胶治疗骨关节炎效果显著,但其药理机制尚不明确。目的:文章运用网络药理学研究方法,分析龟鹿二仙胶治疗骨关节炎的潜在靶点、作用网络及潜在机制。方法:文章借助TCMSP,BATMAN-TCM和TCMID数据库获取龟鹿二仙胶... 背景:临床研究表明龟鹿二仙胶治疗骨关节炎效果显著,但其药理机制尚不明确。目的:文章运用网络药理学研究方法,分析龟鹿二仙胶治疗骨关节炎的潜在靶点、作用网络及潜在机制。方法:文章借助TCMSP,BATMAN-TCM和TCMID数据库获取龟鹿二仙胶的化学成分及对应靶点,OMIM,Gene Cards和Drug Bank数据库检索骨关节炎的已知疾病靶点;运用Perl语言将药物活性成分靶点与疾病靶点相映射得到龟鹿二仙胶治疗骨关节炎的作用靶点,运用Cytoscape3.7.2软件构建“药物-化合物-靶点”作用网络,运用STRING软件构建蛋白相互作用(PPI)网络,对所得PPI网络进行拓扑分析,筛选发挥治疗作用的关键成分与关键靶点;运用R语言对关键靶点进行GO富集分析和KEGG通路富集分析获知其潜在作用机制,构建龟鹿二仙胶“通路-靶点”,获知主要作用通路与靶点之间的关系。结果与结论:①文章预测得到龟鹿二仙胶治疗骨关节炎的有效成分69个,靶点201个,关键成分有槲皮素、山奈酚及β-谷甾醇等6个,关键靶点有白细胞介素6、丝裂原活化蛋白激酶1和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3等20个;②GO和KEGG分析结果显示,龟鹿二仙胶通过以上关键靶点,影响丝裂原活化蛋白激酶信号通路、白细胞介素17信号通路和肿瘤坏死因子信号通路等13个主要通路,集中于调控炎症、软骨代谢、细胞凋亡与增殖等功能来发挥防治骨关节炎的作用;③结果证实,以上关键靶点和通路构建了龟鹿二仙胶防治骨关节炎的作用网络,其多成分-多靶点-多途径的治疗特点为龟鹿二仙胶进一步的基础研究以及临床应用提供了新的思路与线索。 展开更多
关键词 关节 软骨 网络药理学 生物信息学 靶点 成分 途径 代谢 细胞凋亡 炎症 中医药
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肠道菌群与肥胖相关骨关节炎关系的研究进展 被引量:2
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作者 耿秋东 葛海雅 +1 位作者 王和鸣 李楠 《中医正骨》 2020年第5期39-42,共4页
骨关节炎(osteoarthritis,OA)是常见的骨关节疾病,而肥胖是其重要的诱发因素之一。肠道菌群是一个复杂的生态系统,通过与宿主之间的相互作用影响着宿主的健康状况。多项研究表明,肠道菌群及其代谢产物通过与非特异性免疫系统的相互作用... 骨关节炎(osteoarthritis,OA)是常见的骨关节疾病,而肥胖是其重要的诱发因素之一。肠道菌群是一个复杂的生态系统,通过与宿主之间的相互作用影响着宿主的健康状况。多项研究表明,肠道菌群及其代谢产物通过与非特异性免疫系统的相互作用,影响肥胖相关OA的发生与发展。本文从肠道菌群失调、肠道菌群代谢产物、非特异性免疫3个方面对肠道菌群与肥胖相关OA关系的研究进展进行了综述。 展开更多
关键词 骨关节炎 肠道菌群 免疫 先天 肥胖 综述
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超声引导下针刀松解术治疗膝骨关节炎的有效性和安全性Meta分析 被引量:17
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作者 葛海雅 鄢来军 +3 位作者 张燕 黄泽灵 耿秋东 李楠 《中医正骨》 2020年第10期42-46,51,共6页
目的:系统评价超声引导下针刀松解术治疗膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)的有效性和安全性。方法:计算机检索PubMed、Cochrane Library、中国知网、万方数据库、维普网建库至2019年12月31日收录的所有超声引导下针刀松解术治疗KOA... 目的:系统评价超声引导下针刀松解术治疗膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)的有效性和安全性。方法:计算机检索PubMed、Cochrane Library、中国知网、万方数据库、维普网建库至2019年12月31日收录的所有超声引导下针刀松解术治疗KOA的随机对照研究或半随机对照研究文献。筛选文献、提取数据并评价纳入研究的偏倚风险后,采用Revman5.3软件进行Meta分析。结果:最终纳入8篇文献,涉及446例KOA患者。治疗组采用超声引导下针刀松解治疗,对照组采用普通针刀或针刺治疗。Meta分析结果显示,治疗组的膝关节疼痛视觉模拟量表(visual analogue scale,VAS)评分低于对照组[I2=71%,P=0.001;MD=-1.05,95%CI(-1.50,-0.60),P=0.000];剔除2项研究后,重新进行Meta分析,固定效应模型分析结果显示,治疗组的膝关节疼痛VAS评分低于对照组[I2=0%,P=0.580;MD=-0.78,95%CI(-1.00,-0.57),P=0.000];剔除的2项研究与其余6项研究相比,样本量较少,考虑异质性可能是样本量不足造成的。治疗组的膝关节屈伸活动度大于对照组[I2=0%,P=0.840;MD=4.44,95%CI(0.22,8.66),P=0.040],改良美国特种外科医院膝关节评分高于对照组[I2=54%,P=0.140;MD=10.92,95%CI(5.53,16.31),P=0.000],总有效率高于对照组[I2=0%,P=0.530;OR=2.75,95%CI(1.42,5.31),P=0.003],不良反应发生率低于对照组[I2=0%,P=0.650;OR=0.18,95%CI(0.05,0.66),P=0.009]。结论:现有的证据表明,超声引导下针刀松解术是一种治疗KOA的较为安全有效的方法,其疗效和安全性优于普通针刀或针刺治疗。 展开更多
关键词 骨关节炎 超声检查 小刀针 META分析 系统评价
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基于网络药理学方法分析当归-川芎药对治疗骨关节炎的潜在靶点和机制 被引量:12
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作者 葛海雅 鄢来军 +3 位作者 张燕 耿秋东 黄泽灵 李楠 《中医正骨》 2020年第9期1-8,共8页
目的:探讨当归-川芎药对治疗骨关节炎(osteoarthritis,OA)的作用靶点和机制。方法:通过中药系统药理学数据库与分析平台(Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform,TCMSP)检索、筛选当归和川... 目的:探讨当归-川芎药对治疗骨关节炎(osteoarthritis,OA)的作用靶点和机制。方法:通过中药系统药理学数据库与分析平台(Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform,TCMSP)检索、筛选当归和川芎的活性成分及作用靶点。在GeneCards数据库检索OA的相关基因,通过R软件与当归、川芎的作用靶点相交叠,筛选当归-川芎药对治疗OA的关键靶点。分别利用Cytoscape软件和STRING数据库构建药物-成分-靶点-疾病网络和关键靶点蛋白相互作用网络。最后利用R软件进行关键靶点基因GO功能富集分析与KEGG通路富集分析。结果:共筛选出当归-川芎药对的9个活性成分及对应的29个关键靶点。建立的药物-成分-靶点-疾病网络共包含36个节点、71条边,当归的2个活性成分对应15个靶点,川芎的7个活性成分对应14个靶点。建立的靶点蛋白相互作用网络包含25个节点、102条边,其中的关键靶点蛋白包括半胱氨酸蛋白酶3(caspase 3,CASP3)、JUN、雌激素受体1(estrogen receptor alpha,ESR1)、前列腺素内过氧化物合酶2(prostaglandin-endoperoxide synthase 2,PTGS2)、丝裂原活化蛋白激酶14(mitogen-activated protein kinase 14,MAPK14)。GO功能富集分析与KEGG通路富集分析显示,当归-川芎药对治疗OA关键靶点基因的生物学过程和功能主要集中在核受体功能、转录因子活性、类固醇激素受体活性、固醇类激素结合、细胞凋亡等,相关的信号通路主要包括Apoptosis-multiple species信号通路、白细胞介素17信号通路、血管内皮生长因子信号通路、p53信号通路等。结论:当归-川芎药对治疗OA具有多成分-多靶点-多途径的特点,可能通过CASP3、JUN、ESR1、PTGS2、MAPK14等靶点及Apoptosis-multiple species、白细胞介素17、血管内皮生长因子、p53等信号通路发挥治疗作用。 展开更多
关键词 骨关节炎 当归 川芎 药对 网络药理学
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消肿散外敷对大鼠急性软组织损伤消肿镇痛作用的实验研究 被引量:6
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作者 卢文亚 耿秋东 +5 位作者 葛海雅 李楠 黄剑云 吴天林 张纪浩 李昌宁 《中外医学研究》 2019年第23期171-173,共3页
目的:研究消肿散的消肿镇痛作用及对急性软组织损伤修复进程的影响,为消肿散的临床运用提供依据。方法:造模后,将40只大鼠随机分为两组,即消肿散组和空白对照组,每组随机分为4个小组,分别为1 d组、3 d组、6 d组、10 d组。消肿散组用消... 目的:研究消肿散的消肿镇痛作用及对急性软组织损伤修复进程的影响,为消肿散的临床运用提供依据。方法:造模后,将40只大鼠随机分为两组,即消肿散组和空白对照组,每组随机分为4个小组,分别为1 d组、3 d组、6 d组、10 d组。消肿散组用消肿散外敷进行治疗,空白对照组用生理盐水外敷,将两组中的1 d组、3 d组、6 d组、10 d组分别于第1、3、6、10天分批处死,取损伤处肌肉组织,动态观察大鼠损伤程度评分及组织HE染色结果。结果:两组中的1 d组在损伤程度评分方面比较,差异无统计学意义(P>0.05),造模成功。消肿散组中3 d组、6 d组、10 d组的损伤程度评分均低于空白对照组中3 d组、6 d组、10 d组,差异均有统计学意义(P<0.05)。消肿散组中3 d组、6 d组、10 d组的损伤修复进程均优于空白对照组中3 d组、6 d组、10 d组。结论:消肿散具有消肿镇痛,加快损伤肌肉组织修复的作用,能够加快急性软组织损伤的恢复,值得在临床加以推广运用。 展开更多
关键词 消肿散 急性软组织损伤 筋伤 中医
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消肿散对大鼠急性软组织损伤PGE2、IL-6及IL-1β影响的实验研究 被引量:4
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作者 卢文亚 耿秋东 +4 位作者 葛海雅 黄剑云 吴天林 张纪浩 李昌宁 《中国中医药现代远程教育》 2020年第17期128-131,共4页
目的本研究通过动态观察消肿散对大鼠血清中炎症因子PGE2、IL-6和IL-1β的表达量的影响,探讨该方治疗本病的作用机制。方法首先从50只大鼠中随机选出5只作为空白组,其余大鼠造模,造模后从中选出5只作为模型组进行模型鉴定。鉴定完成后... 目的本研究通过动态观察消肿散对大鼠血清中炎症因子PGE2、IL-6和IL-1β的表达量的影响,探讨该方治疗本病的作用机制。方法首先从50只大鼠中随机选出5只作为空白组,其余大鼠造模,造模后从中选出5只作为模型组进行模型鉴定。鉴定完成后将剩余的40只大鼠随机分为消肿散组和模型组,然后将这2组再随机分为4个小组:1 d组、3 d组、6 d组和10 d组,每个小组5只。给予消肿散组大鼠消肿散外敷,模型组生理盐水外敷,将2组大鼠于以上时相点分批处死并制作标本。用ELISA法检测血清中PGE2、IL-6和IL-1β的含量,最后统计分析数据。结果消肿散组与模型组大鼠血清中PGE2、IL-6和IL-1β的表达量均先上升,在第3天达到峰值,后下降直至第10天。干预1 d后,2组大鼠血清中以上炎症因子的表达量比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);干预3 d后,与1 d组比较,2组大鼠血清中以上炎症因子的表达量均上升,且消肿散组低于模型组,两组比较差异有统计学意义(P<0.01);干预7、10 d后,2组均有明显降低,且消肿散组低于模型组,2组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论消肿散所具有的消肿、镇痛等治疗作用,与其能降低血清中PGE2、IL-6和IL-1β等炎性因子的表达量有关,本课题为消肿散在临床推广运用提供了一定的科学依据。 展开更多
关键词 急性软组织损伤 消肿散 PGE2 IL-6 IL-1Β 动物实验
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基于PERK/eIF2α信号通路探讨龟鹿二仙胶含药血清对脂多糖诱导大鼠退变软骨细胞凋亡的作用机制
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作者 耿秋东 李晔 +6 位作者 沈默金 郑珍萍 吴伟欣 牛素生 张燕 王和鸣 李楠 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期3570-3576,共7页
目的:观察龟鹿二仙胶含药血清对脂多糖(LPS)诱导的大鼠退变软骨细胞中蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)/真核起始因子2α(eIF2α)信号通路相关蛋白表达的影响,探讨龟鹿二仙胶治疗KOA的作用机制。方法:制备龟鹿二仙胶含药血清及空白血清。采... 目的:观察龟鹿二仙胶含药血清对脂多糖(LPS)诱导的大鼠退变软骨细胞中蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)/真核起始因子2α(eIF2α)信号通路相关蛋白表达的影响,探讨龟鹿二仙胶治疗KOA的作用机制。方法:制备龟鹿二仙胶含药血清及空白血清。采用4周龄SD大鼠膝关节软骨提取软骨细胞并进行体外培养,用甲苯胺蓝染色法对软骨细胞进行鉴定。采用CCK-8法筛选最佳含药血清浓度进行后续实验。用10μg/mL LPS诱导F2代软骨细胞复制退变软骨细胞模型,将细胞分为空白组、模型组、龟鹿二仙胶组、PERK抑制剂组,干预24 h后,分别采用CCK-8法检测软骨细胞活性;TUNEL法检测软骨细胞凋亡情况;RT-qPCR法检测软骨细胞PERK、eIF2α、前凋亡基因C/EBP同源蛋白(CHOP)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)mRNA的表达;Western Blot检测软骨细胞p-PERK、p-eIF2α、CHOP、Bax、活化的Caspase-3(Cleaved-Caspase-3)、Bcl-2蛋白的表达情况。结果:与空白组比较,模型组软骨细胞活性显著降低(P<0.05),软骨细胞凋亡数增多,PERK、eIF2α、CHOP、Bax、Caspase-3 mRNA及p-PERK、p-eIF2α、CHOP、Bax、Cleaved-Caspase-3蛋白表达量显著上调(P<0.01),Bcl-2 mRNA和蛋白表达显著下调(P<0.01);与模型组比较,龟鹿二仙胶组和抑制剂组软骨细胞活性显著提升(P<0.05,P<0.01),软骨细胞凋亡数减少,PERK、eIF2α、CHOP、Bax、Caspase-3 mRNA及p-PERK、p-eIF2α、CHOP、Bax、Cleaved-Caspase-3蛋白表达量显著下调(P<0.01),Bcl-2 mRNA和蛋白表达显著上调(P<0.01)。结论:龟鹿二仙胶含药血清能显著改善大鼠退变软骨细胞活性及细胞凋亡情况,其作用机制可能是通过调控PERK/eIF2α信号通路相关蛋白的表达水平,进而发挥了软骨保护作用。 展开更多
关键词 龟鹿二仙胶 膝骨关节炎 软骨细胞 凋亡 内质网应激
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化湿定痛汤对木瓜蛋白酶诱导的膝骨关节炎大鼠血清IL-1、IL-6、IL-10的影响 被引量:19
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作者 耿秋东 张应生 +5 位作者 卢文亚 葛海雅 刘东波 秦俊育 王和鸣 李楠 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期4654-4657,共4页
目的:研究化湿定痛汤对木瓜蛋白酶诱导的膝骨关节炎(KOA)的治疗作用,并探讨其作用机制。方法:40只SD大鼠随机分出16只空白组,另24只大鼠建立KOA大鼠模型,空白组和模型组各取8只比较,鉴定造模成功。将空白组和模型组大鼠各8只用0.9%氯化... 目的:研究化湿定痛汤对木瓜蛋白酶诱导的膝骨关节炎(KOA)的治疗作用,并探讨其作用机制。方法:40只SD大鼠随机分出16只空白组,另24只大鼠建立KOA大鼠模型,空白组和模型组各取8只比较,鉴定造模成功。将空白组和模型组大鼠各8只用0.9%氯化钠溶液灌胃、中药组大鼠8只用化湿定痛汤灌胃,给药4周取材。股骨髁、胫骨软骨进行HE染色,ELISA检测血清白细胞介素(IL)-1、IL-6、IL-10水平。结果:模型组Mankin’s评分显著高于空白组(P<0.05)。HE染色显示中药组软骨表层较模型组光滑,移行层较完整,细胞排列相对均匀。中药组IL-1、IL-6含量均显著低于模型组(P<0.05)、IL-10含量显著高于模型组(P<0.05)。结论:化湿定痛汤能在一定程度上延缓KOA大鼠软骨退化,这可能与其降低了KOA大鼠血清IL-1、IL-6水平及提升了血清IL-10水平有关。 展开更多
关键词 膝骨关节炎 化湿定痛汤 大鼠 白细胞介素-1 白细胞介素-6 白细胞介素-10
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痹痿同治法对脂多糖诱导大鼠退变软骨细胞炎症和凋亡的影响 被引量:1
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作者 耿秋东 牛素生 +2 位作者 张燕 王和鸣 李楠 《北京中医药大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第11期1142-1150,共9页
目的 探讨痹痿同治法方药化湿定痛汤合龟鹿二仙胶对骨关节炎的可能作用机制。方法 制备化湿定痛汤合龟鹿二仙胶含药血清及空白血清。采用4周龄SD大鼠膝关节软骨建立稳定的软骨细胞体外培养体系,采用免疫组化染色法对F2代软骨细胞进行鉴... 目的 探讨痹痿同治法方药化湿定痛汤合龟鹿二仙胶对骨关节炎的可能作用机制。方法 制备化湿定痛汤合龟鹿二仙胶含药血清及空白血清。采用4周龄SD大鼠膝关节软骨建立稳定的软骨细胞体外培养体系,采用免疫组化染色法对F2代软骨细胞进行鉴定。鉴定成功后分别用4个体积分数的含药血清(5%、10%、15%、20%)和空白血清处理软骨细胞(5×103个/孔),培养24、48、72 h后,CCK-8法检测软骨细胞活性,选择提升软骨细胞活性的最佳含药血清体积分数进行后续实验。用10 mg/L脂多糖诱导F2代软骨细胞,复制退变软骨细胞模型,将细胞分为空白组、模型组、化湿定痛汤合龟鹿二仙胶含药血清组(简称“含药血清组”)。干预24 h后,采用CCK-8法检测各组软骨细胞活性,ELISA法检测各组细胞培养液上清中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平,qRT-PCR法检测各组软骨细胞B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)mRNA的表达,Western blotting检测各组软骨细胞Bcl-2、Bax、切割型Caspase-3蛋白的表达情况。结果 与空白组比较,模型组软骨细胞活性降低(P<0.01),细胞上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α水平升高(P<0.01),Bax、Caspase-3 mRNA的表达及Bax、切割型Caspase-3蛋白的表达上调(P<0.01),Bcl-2 mRNA和蛋白的表达下调(P<0.01)。与模型组比较,含药血清组软骨细胞活性升高(P<0.05),细胞上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α水平下降(P<0.05),Bax、Caspase-3 mRNA的表达及Bax、切割型Caspase-3蛋白的表达下调(P<0.05),Bcl-2 mRNA和蛋白的表达上调(P<0.05)。结论 痹痿同治法能改善软骨细胞生存的炎症微环境,提升软骨细胞活性,改善软骨细胞凋亡情况,进而发挥对大鼠退变软骨细胞的保护作用,延缓骨关节炎发病进程。 展开更多
关键词 痹痿同治法 化湿定痛汤 龟鹿二仙胶 软骨细胞 骨关节炎 大鼠
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基于Ras/Raf/Mek/Erk信号通路探讨化湿定痛汤减轻膝骨关节炎大鼠滑膜炎症的机制 被引量:6
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作者 葛海雅 李楠 +3 位作者 张燕 耿秋东 黄泽灵 赵常云蕾 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期4428-4432,共5页
目的:基于Ras/Raf/Mek/Erk信号通路探讨化湿定痛汤对膝骨关节炎(KOA)大鼠滑膜炎症的可能作用机制。方法:采用膝关节腔注射Ⅱ型胶原酶建立KOA模型,将38只大鼠随机分为空白组、模型组、化湿定痛汤组及Mek抑制剂组。空白组和模型组给予0.9... 目的:基于Ras/Raf/Mek/Erk信号通路探讨化湿定痛汤对膝骨关节炎(KOA)大鼠滑膜炎症的可能作用机制。方法:采用膝关节腔注射Ⅱ型胶原酶建立KOA模型,将38只大鼠随机分为空白组、模型组、化湿定痛汤组及Mek抑制剂组。空白组和模型组给予0.9%氯化钠溶液灌胃,化湿定痛汤组给予化湿定痛汤4.68 mg·kg^(-1)·d^(-1)灌胃,Mek抑制剂组给予腹腔注射PD98059 1 mg·kg^(-1)·d^(-1),连续28 d。观察大鼠膝关节直径变化,MRI观察大鼠膝关节影像学变化,HE染色观察大鼠关节软骨及滑膜病理改变,Western Blot检测大鼠滑膜中Ras、Raf、p-Mek、p-Erk蛋白表达,RT-qPCR检测大鼠滑膜中Ras、Raf、Mek、Erk的mRNA表达。结果:与空白组比较,模型组大鼠膝关节核磁共振评分(MOAKS)显著升高(P<0.01)。与模型组比较,化湿定痛汤组及Mek抑制剂组大鼠第35天膝关节直径显著减小(P<0.01,P<0.05),滑膜组织炎症浸润减轻,Ras、Mek、Erk mRNA和Ras、Raf、p-Mek、p-Erk蛋白表达显著降低(P<0.01,P<0.05)。结论:化湿定痛汤可能通过调节大鼠膝关节滑膜中Ras/Raf/Mek/Erk信号通路改善炎症损伤。 展开更多
关键词 化湿定痛汤 膝骨关节炎 滑膜 Ras/Raf/Mek/Erk信号通路 炎症
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化湿补肾法对膝骨关节炎大鼠软骨修复机制的研究 被引量:3
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作者 葛海雅 张应生 +5 位作者 卢文亚 耿秋东 秦鋑育 刘东波 王和鸣 李楠 《北京中医药大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期152-158,共7页
目的探讨化湿补肾法治疗膝骨关节炎(KOA)的机制。方法将48只SPF级SD大鼠随机分为空白组、模型组、化湿定痛汤组、龟鹿二仙胶组、化湿补肾法组,采用木瓜蛋白酶关节腔注射建立膝骨关节炎模型,造模成功后各组大鼠灌胃相应药物,化湿定痛汤... 目的探讨化湿补肾法治疗膝骨关节炎(KOA)的机制。方法将48只SPF级SD大鼠随机分为空白组、模型组、化湿定痛汤组、龟鹿二仙胶组、化湿补肾法组,采用木瓜蛋白酶关节腔注射建立膝骨关节炎模型,造模成功后各组大鼠灌胃相应药物,化湿定痛汤组灌胃化湿定痛汤4.68 g/(kg·d),龟鹿二仙胶组灌胃龟鹿二仙胶汤2.7 g/(kg·d),化湿补肾法组灌胃化湿补肾法中药7.38 g/(kg·d),连续灌胃28 d,于第28天对大鼠进行取材,取右侧股骨行HE染色观察软骨形态,取右侧胫骨平台滑膜、关节液用ELISA检测前列腺素-2(PGE-2)、环氧化和酶-2(COX-2)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达,取右胫骨平台软骨用qPCR检测p38、p53、Ⅱ型胶原的表达。结果 HE染色形态结果表明化湿补肾法组、龟鹿二仙胶组、化湿定痛汤组均优于模型组。与龟鹿二仙胶组相比,化湿补肾法组PGE-2、COX-2、IL-1β、TNF-α表达量下降(P<0.05),软骨的p38、p53表达降低(P<0.05),Ⅱ型胶原表达升高(P<0.05)。结论化湿补肾法可有效减轻滑膜和关节液中炎症因子表达,增加软骨细胞合成代谢,抑制软骨细胞凋亡,从而促进关节软骨的修复,延缓KOA的进程。 展开更多
关键词 化湿补肾法 化湿定痛汤 龟鹿二仙胶 膝骨关节炎 大鼠
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龟鹿二仙胶对膝骨关节炎大鼠软骨细胞IHH-GLI信号通路的影响
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作者 郑珍萍 吴伟欣 +3 位作者 李晔 王和鸣 耿秋东 李楠 《中华中医药杂志》 CAS 2024年第4期1747-1752,共6页
目的:观察龟鹿二仙胶含药血清对白介素-1β(IL-1β)诱导大鼠肥大软骨细胞印度刺猬蛋白-胶质细胞瘤转录因子(IHH-GLI)信号通路的作用,探讨龟鹿二仙胶对膝骨关节炎(KOA)的影响。方法:制备含药血清,提取大鼠软骨细胞,分为空白组、模型组、... 目的:观察龟鹿二仙胶含药血清对白介素-1β(IL-1β)诱导大鼠肥大软骨细胞印度刺猬蛋白-胶质细胞瘤转录因子(IHH-GLI)信号通路的作用,探讨龟鹿二仙胶对膝骨关节炎(KOA)的影响。方法:制备含药血清,提取大鼠软骨细胞,分为空白组、模型组、龟鹿组、抑制剂组,构建大鼠KOA软骨细胞肥大模型,免疫荧光观察GLI入核情况。CCK-8检测含药血清干预最佳时效及量效关系。含药血清干预24 h后,Real-time PCR、Western Blot检测软骨细胞IHH、平滑蛋白(Smo)、Runt相关转录因子2(Runx2)、X型胶原(COL10A1)和基质金属蛋白酶13(MMP-13)的mRNA及蛋白表达情况。结果:荧光显微镜下,模型组GLI信号进入细胞核。与模型组比较,龟鹿组及抑制剂组IHH、Smo、Runx2、COL10A1、MMP-13 mRNA表达显著降低(P<0.01,P<0.05),IHH、Smo、Runx2蛋白表达显著下降(P<0.05,P<0.01)。结论:龟鹿二仙胶调控肥大软骨细胞的分解合成代谢平衡,减少细胞外基质的降解和钙化,改善失稳态环境,可能与其抑制IHH-GLI信号通路有关。 展开更多
关键词 膝骨关节炎 软骨细胞肥大 龟鹿二仙胶 IHH-GLI信号通路
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