小鼠早期胚胎的全胚原位杂交技术 被引量：2

1

作者 肖銮娟 谢琪璇 +7 位作者 高桥祐司 秋山泰身 董少男 黄卉卉 罗峰 叶绍恩 张春雪 秦俊文 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期620-623,共4页

目的:探索一种适合于早期胚胎基因表达型检测的全胚原位杂交技术。方法:收集小鼠囊胚、固定;制备VASP、IL1R2基因特异性地高辛标记的cRNA探针;对囊胚进行杂交前处理、全胚原位杂交、抗体处理、显色以及显色后处理与镜检。结果:VASP、IL... 目的:探索一种适合于早期胚胎基因表达型检测的全胚原位杂交技术。方法:收集小鼠囊胚、固定;制备VASP、IL1R2基因特异性地高辛标记的cRNA探针;对囊胚进行杂交前处理、全胚原位杂交、抗体处理、显色以及显色后处理与镜检。结果:VASP、IL1R2特异性表达在囊胚的内细胞团细胞和滋养层细胞中。结论:小鼠早期胚胎全胚原位杂交技术适用于早期胚胎基因时空表达型的检测。 展开更多

关键词 小鼠 早期胚胎 全胚原位杂交 血管扩张刺激磷蛋白(VASP) 白细胞介素1受体2(IL1R2)

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利用H_2O_2提高GS115rhZP3培养中的溶氧和目的蛋白产量 被引量：1

2

作者 肖銮娟 谢琪璇 +1 位作者 潘善培 唐键 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 2004年第3期390-392,共3页

目的:提高毕赤酵母摇瓶培养中的溶氧,从而提高目的蛋白的表达量.方法:在rhZP3工程菌培养过程分别加入不同浓度的H2O2,甲醇诱导培养后,取培养液上清进行SDS-PAGE电泳和Westernblot,并与不加H2O2的对照组比较,分析H2O2对重组人卵透明带ZP... 目的:提高毕赤酵母摇瓶培养中的溶氧,从而提高目的蛋白的表达量.方法:在rhZP3工程菌培养过程分别加入不同浓度的H2O2,甲醇诱导培养后,取培养液上清进行SDS-PAGE电泳和Westernblot,并与不加H2O2的对照组比较,分析H2O2对重组人卵透明带ZP3蛋白(rhZP3)在毕赤酵母中表达量的影响.结果:H2O2可提高培养基的溶氧量.当H2O2浓度为5mmol/L时,目的蛋白的表达量最高.结论:在rhZP3毕赤酵母工程菌摇瓶培养中,加入H2O2可提高rhZP3的表达量. 展开更多

关键词 过氧化氢 毕赤酵母 溶氧

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重组人卵透明带ZP3蛋白在毕赤酵母中的表达 被引量：12

3

作者 唐键 谢琪璇 +4 位作者 潘善培 肖銮娟 董鲁 张春雪 孙彩军 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期758-762,共5页

利用P .pastoris表达人卵透明带ZP3蛋白。设计特定引物从全长hZP3cDNA上扩增含跨膜区序列的人卵透明带ZP3基因片段 ,并在N末端接上串联组氨酸编码序列的重组基因序列 ;扩增片段插入表达载体pPIC9K中 ;线性化后的重组质粒转入P .pastoris... 利用P .pastoris表达人卵透明带ZP3蛋白。设计特定引物从全长hZP3cDNA上扩增含跨膜区序列的人卵透明带ZP3基因片段 ,并在N末端接上串联组氨酸编码序列的重组基因序列 ;扩增片段插入表达载体pPIC9K中 ;线性化后的重组质粒转入P .pastoris中 ,用高浓度G4 18筛选高拷贝菌株 ,然后甲醇诱导目的蛋白表达。用SDS PAGE和Westernblot分析表达产物。结果发现P .pastoris表达的人ZP3蛋白可以分泌到培养液中 ,并且可溶性好。纯化前后的重组人ZP3蛋白均能与兔抗猪ZP3蛋白抗体发生交叉反应 ,证实表达的目的蛋白具有反应原性。 展开更多

关键词 人卵透明带ZP3蛋白 表达 毕赤酵母 表达载体

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骨髓间充质干细胞对免疫损伤卵巢的修复作用 被引量：9

4

作者 李威娜 谢琪璇 +5 位作者 秦俊文 黄伟 叶绍恩 罗峰 张春雪 肖銮娟 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期825-829,共5页

目的探讨骨髓间充质干细胞移植对免疫损伤卵巢的修复作用。方法 6～8周龄的野生型健康ICR雌性小鼠随机分为3组,每组各12只。A组不作任何处理,B、C组利用猪卵巢蛋白主动免疫建立免疫损伤卵巢模型。而后C组腹腔移植来自GFP转基因小鼠的骨... 目的探讨骨髓间充质干细胞移植对免疫损伤卵巢的修复作用。方法 6～8周龄的野生型健康ICR雌性小鼠随机分为3组,每组各12只。A组不作任何处理,B、C组利用猪卵巢蛋白主动免疫建立免疫损伤卵巢模型。而后C组腹腔移植来自GFP转基因小鼠的骨髓MSCs细胞,A、B组各注射等体积的PBS。MSCs移植后按既定时间处死小鼠,利用PCR检测卵巢中GFP基因以判断MSCs是否到达卵巢;通过对卵巢组织切片HE染色以及细胞凋亡分析来检测MSCs是否对免疫损伤卵巢有修复作用及其机制。结果 PCR结果表明MSCs经腹腔移植可直接到达免疫损伤卵巢;MSCs移植可促进免疫损伤卵巢组织的修复;相应地,移植组颗粒细胞的凋亡比非移植组明显减少。结论腹腔移植MSCs可促进免疫损伤卵巢的修复,其机制可能与减少颗粒细胞凋亡有关。 展开更多

关键词 骨髓间充质干细胞 卵巢 免疫损伤 修复

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卵透明带DNA避孕疫苗pVAX1-pZP3α的构建及其在体外的表达 被引量：6

5

作者 刘红军 潘善培 +2 位作者 谢琪璇 肖銮娟 董鲁 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 2003年第1期79-85,共7页

　目的:构建pVAX1-pZP3α,探讨其在体外的表达,研制卵透明带DNA避孕疫苗.方法:利用基因工程的方法构建卵透明带DNA避孕疫苗pVAX1-pZP3α,用脂质体法转染Hela细胞并采用RT-PCR和Westernblot检测卵透明带抗原pZP3α的体外表达.结果:构建... 　目的:构建pVAX1-pZP3α,探讨其在体外的表达,研制卵透明带DNA避孕疫苗.方法:利用基因工程的方法构建卵透明带DNA避孕疫苗pVAX1-pZP3α,用脂质体法转染Hela细胞并采用RT-PCR和Westernblot检测卵透明带抗原pZP3α的体外表达.结果:构建了卵透明带DNA避孕疫苗pVAX1-pZP3α,并在体外表达系统检测到卵透明带抗原pZP3αmRNA和pZP3α的表达.结论:正确构建了卵透明带DNA避孕疫苗pVAX1-pZP3α. 展开更多

关键词 pVAX1-pZP3α 猪卵透明带 DNA疫苗 避孕疫苗 基因工程 基因表达 抗原免疫

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人精子顶体反应3种检测方法的比较与评价 被引量：7

6

作者 张韫 谢琪璇 +3 位作者 潘善培 张春雪 肖銮娟 彭雅林 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 2005年第6期419-421,425,共4页

目的:寻找简便和准确的精子顶体反应检测方法。方法:正常人精液标本液化后混合,分成6组,分别用金霉素染色法、考马斯亮蓝染色法和酸性磷酸酶检测法对孕酮诱导顶体反应前后的人精子进行形态学观察并且对顶体反应率进行数据统计。结果:经... 目的:寻找简便和准确的精子顶体反应检测方法。方法:正常人精液标本液化后混合,分成6组,分别用金霉素染色法、考马斯亮蓝染色法和酸性磷酸酶检测法对孕酮诱导顶体反应前后的人精子进行形态学观察并且对顶体反应率进行数据统计。结果:经考马斯亮蓝和金霉素染色后,发生顶体反应的精子和没有发生顶体反应的精子均有明显的形态差异;经考马斯亮蓝染色、金霉素荧光染色和酸性磷酸酶测试法检验,孕酮诱导组与阴性对照组的精子顶体反应率均有明显差异(P<0.05)。结论:3种方法均可作为顶体反应的检测手段,但考马斯亮蓝染色更为简便和稳定。 展开更多

关键词 精子 顶体反应 考马斯亮蓝染色法 金霉素荧光染色 酸性磷酸酶

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重组人巨细胞病毒(HCMV)嵌合肽在毕赤酵母中的表达 被引量：3

7

作者 董鲁 谢琪璇 +2 位作者 潘善培 肖銮娟 刘红军 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 2003年第1期73-78,共6页

　目的:在巴斯德毕赤酵母中表达人巨细胞病毒gp52C末端和pp150C末端串联片段的嵌合肽.方法:用SacⅠ和BglⅡ分别酶切CMVp-pPIC9K重组质粒,电打孔法导入毕赤酵母GS115后,在缺组氨酸的MD板上筛选出转化子,然后根据甲醇利用快速型(Mut+)和... 　目的:在巴斯德毕赤酵母中表达人巨细胞病毒gp52C末端和pp150C末端串联片段的嵌合肽.方法:用SacⅠ和BglⅡ分别酶切CMVp-pPIC9K重组质粒,电打孔法导入毕赤酵母GS115后,在缺组氨酸的MD板上筛选出转化子,然后根据甲醇利用快速型(Mut+)和甲醇利用缓慢型(Muts)菌株的不同生长特点,筛选出Mut+和Muts型转化子,用PCR法进一步鉴定阳性克隆.分别用甲醇诱导Mut+和Muts型转化子表达目的蛋白4d,取培养产物冻干浓缩,进行SDS-PAGE和Westernblotting,筛选出能特异表达目的蛋白的菌株,分析蛋白的含量及纯度.结果:重组人巨细胞病毒可在甲醇利用快速型毕赤酵母中有效表达,其表达量约占培养上清分泌蛋白的76 5%.结论:重组人巨细胞病毒(HCMV)嵌合肽可在真核细胞毕赤酵母中成功表达. 展开更多

关键词 重组人巨细胞病毒 HCMV 嵌合肽 毕赤酵母 基因表达 基因工程 病毒检测

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不同人群血清中抗透明带抗体的检测 被引量：5

8

作者 谢琪璇 肖銮娟 +1 位作者 张春雪 潘善培 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期41-42,共2页

为了探讨抗透明带抗体的临床意义 ,本研究用纯化的猪卵透明带ZP3抗原制备抗卵透明带抗体酶联免疫检测试剂盒 ,采用ELISA方法检测不同人群血中抗透明带抗体 ,并用阳性血清与人卵巢组织切片进行免疫组化分析。结果显示不同年龄组妇女抗透... 为了探讨抗透明带抗体的临床意义 ,本研究用纯化的猪卵透明带ZP3抗原制备抗卵透明带抗体酶联免疫检测试剂盒 ,采用ELISA方法检测不同人群血中抗透明带抗体 ,并用阳性血清与人卵巢组织切片进行免疫组化分析。结果显示不同年龄组妇女抗透明带抗体阳性率差异不显著 (P >0 0 5 ) ,不孕组阳性率 15 % ,与其他组相比有显著性差异 (P <0 0 5 )。ELISA检测到的透明带抗体阳性血清不与人卵巢组织切片中的透明带产生肉眼可见的沉淀反应。除了早孕组和老龄妇女 ,任何年龄阶段的女性均可出现抗透明带自身抗体 ,鉴于这些抗体不引起周期紊乱现象 ,却可能阻止受精 。 展开更多

关键词 血清 抗透明带抗体 检测 检测 不孕 避孕疫苗

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壳聚糖-卵透明带DNA纳米微囊的制备及其体外表达 被引量：3

9

作者 孙彩军 潘善培 +4 位作者 王彬 谢琪璇 肖銮娟 唐键 蔡继业 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 2004年第1期102-109,共8页

　目的:发展壳聚糖-卵透明带口服DNA粘膜免疫避孕疫苗.方法:首先利用基因工程技术构建含卵透明带特异抗原pZP3αDNA的真核质粒表达载体pVAX1-pZP3α,然后用壳聚糖C390包被pVAX1-pZP3α重组质粒制备免疫微囊,测定免疫微囊对质粒DNA的包裹... 　目的:发展壳聚糖-卵透明带口服DNA粘膜免疫避孕疫苗.方法:首先利用基因工程技术构建含卵透明带特异抗原pZP3αDNA的真核质粒表达载体pVAX1-pZP3α,然后用壳聚糖C390包被pVAX1-pZP3α重组质粒制备免疫微囊,测定免疫微囊对质粒DNA的包裹率,用原子力显微镜(AFM)观察壳聚糖-DNA微囊的形态结构,并体外转染HeLa细胞,用间接免疫荧光法(IIF)检测pZP3α的瞬时表达.结果:pZP3αDNA正确插入到载体pVAX1中并与壳聚糖C390形成纳米免疫微囊,对重组质粒pVAX1-pZP3α的包裹率达90%以上.AFM成像技术显示这些微囊的直径为100nm到300nm不等,平均为224 6nm,形状为球形、椭圆形等.体外转染HeLa细胞用IIF法检测到了抗原pZP3α在细胞内的表达.结论:壳聚糖-卵透明带口服DNA纳米免疫微囊制备成功,为进一步发展更安全、方便、有效的卵透明带DNA避孕疫苗打下了基础. 展开更多

关键词 卵透明带 DNA疫苗 壳聚糖 纳米微囊 免疫避孕

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一种快速筛选巴氏毕赤酵母高表达克隆的新方法 被引量：3

10

作者 谢琪璇 肖銮娟 +3 位作者 潘善培 余巍 彭雅林 张春雪 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 2004年第6期713-716,共4页

　目的:为了准确、快捷地筛选到高表达的毕赤酵母工程菌株。方法:利用毕赤酵母的生理特点和免疫印迹的特异性,将转化子接种到MM板上至形成克隆,贴上NC膜,待NC膜被分泌产物湿润后,揭下NC膜,进行ELISA-dot鉴定,选出高表达克隆进行扩增、培... 　目的:为了准确、快捷地筛选到高表达的毕赤酵母工程菌株。方法:利用毕赤酵母的生理特点和免疫印迹的特异性,将转化子接种到MM板上至形成克隆,贴上NC膜,待NC膜被分泌产物湿润后,揭下NC膜,进行ELISA-dot鉴定,选出高表达克隆进行扩增、培养,并作SDS-PAGE和Westernblotting进一步确定。结果:该法的筛选结果与SDS-PAGE和Westernblotting相符。结论:与传统方法相比,该法具有高通量,快速,简便的优点,适合毕赤酵母工程菌株的筛选。 展开更多

关键词 毕赤酵母 克隆技术 菌株筛选 斑点印迹

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人巨细胞病毒重组基因表达质粒的构建 被引量：3

11

作者 郑育声 谢琪璇 +2 位作者 潘善培 芦春斌 肖銮娟 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期716-718,共3页

目的　用基因工程技术克隆人巨细胞病毒 (Humancytomegalovirus ,HCMV)中抗原性较强的蛋白片段—gp5 2C末端和pp15 0C末端的DNA序列 ,插入pPIC9K质粒 ,构建适于酵母表达系统的重组表达质粒。方法　根据人巨细胞病毒糖蛋白gp5 2和磷酸蛋... 目的　用基因工程技术克隆人巨细胞病毒 (Humancytomegalovirus ,HCMV)中抗原性较强的蛋白片段—gp5 2C末端和pp15 0C末端的DNA序列 ,插入pPIC9K质粒 ,构建适于酵母表达系统的重组表达质粒。方法　根据人巨细胞病毒糖蛋白gp5 2和磷酸蛋白pp15 0C末端的cDNA序列 ,设计出 2对引物。利用PCR的方法 ,以病毒培养液上清为模板 ,进行二轮PCR扩增 ,把两个目的基因串联在一起 ,将所得的DNA片段经EcoRⅠ和NotⅠ双酶切后用T4连接酶与pPIC9K质粒进行连接 ,然后导入大肠杆菌DH5α ,筛选出阳性转化子 ,并用PCR和双酶切鉴定阳性重组子。结果　从人巨细胞病毒培养液上清中扩增出目的基因 ,PCR反应和双酶切鉴定结果与预期相符。 展开更多

关键词 基因表达 人巨细胞病毒 重组PCR 质粒pPIC9K

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重组人巨细胞病毒嵌合肽基因在毕赤酵母中的克隆和表达 被引量：2

12

作者 谢琪璇 余巍 +3 位作者 潘善培 肖銮娟 彭雅林 张春雪 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期29-34,共6页

为了在毕赤酵母中表达带有组氨酸纯化标记的重组人巨细胞病毒嵌合肽 (rHCMVp) ,根据其基因序列 ,设计引物从pPIC9K rHCMVp上扩增得到目的基因片段 ,并导入毕赤酵母诱导型表达载体pPICZαA中。通过电击将线性化的重组质粒转化到毕赤酵母... 为了在毕赤酵母中表达带有组氨酸纯化标记的重组人巨细胞病毒嵌合肽 (rHCMVp) ,根据其基因序列 ,设计引物从pPIC9K rHCMVp上扩增得到目的基因片段 ,并导入毕赤酵母诱导型表达载体pPICZαA中。通过电击将线性化的重组质粒转化到毕赤酵母X33细胞中 ,筛选获得表达量较高的重组菌株 ,研究了该菌株生长的培养条件 ,包括不同诱导时间、甲醇浓度、pH值对人巨细胞病毒嵌合肽表达的影响。 2L发酵罐进行了高密度发酵 ,经 1 %的甲醇、pH6 0的条件下诱导48h ,最终菌体密度OD60. 0 达到 1 80 ,每升发酵液中含目的蛋白 78. 7mg ,产量比摇瓶提高了 4 8倍。rHCMVp可通过高密度发酵大量获得。 展开更多

关键词 人巨细胞病毒 HCMV 克隆和表达 诱导型 目的基因 毕赤酵母 重组质粒 嵌合肽 表达载体 表达量

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重组人卵透明带蛋白(rhZP3)的生物活性研究 被引量：2

13

作者 谢琪璇 李文星 +4 位作者 潘善培 张春雪 肖銮娟 马丽 史卫卫 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第12期20-23,共4页

为了研究毕赤酵母表达的重组人卵透明带蛋白(rhZP3)的生物活性,分别用空白培养液,含孕酮或rhZP3的培养液对人精子进行顶体诱发实验,用考马斯亮蓝染色法对顶体状态进行评价;用不同浓度的rhZP3以及空白培养液分别处理精子,然后再与卵子进... 为了研究毕赤酵母表达的重组人卵透明带蛋白(rhZP3)的生物活性,分别用空白培养液,含孕酮或rhZP3的培养液对人精子进行顶体诱发实验,用考马斯亮蓝染色法对顶体状态进行评价;用不同浓度的rhZP3以及空白培养液分别处理精子,然后再与卵子进行结合实验,观察经过不同处理的精子在精卵结合中的情况;用抗rhZP3抗血清与阴性血清分别处理卵子,再与精子进行结合实验,观察经过不同处理后的卵子在精卵结合中的情况。rhZP3诱发顶体反应实验结果显示,rhZP3处理组与空白对照组之间差异显著(P<0.01);精卵结合实验结果显示,各实验组和对照组之间存在显著性差异(P<0.01),rhZP3、抗rhZP3抗体均能抑制精卵结合。实验结果表明,rhZP3具有天然人卵透明带蛋白相似的活性。 展开更多

关键词 人卵透明带 重组蛋白 生物活性 顶体反应 精卵结合

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猪卵透明带ZP3α真核表达载体的构建及体外瞬时表达 被引量：2

14

作者 孙彩军 潘善培 +2 位作者 谢琪璇 肖銮娟 唐键 《生物技术》 CAS CSCD 2004年第2期3-5,共3页

目的 :构建猪卵透明带ZP3α真核表达载体 ,为探讨卵透明带DNA疫苗避孕疫苗奠定基础。方法 :采用PCR法获得了去除N端信号肽序列和C端跨膜区序列的猪卵透明带ZP3α的cDNA序列片段 ,以专门用于发展DNA疫苗的质粒pVAX1为载体构建了真核细胞... 目的 :构建猪卵透明带ZP3α真核表达载体 ,为探讨卵透明带DNA疫苗避孕疫苗奠定基础。方法 :采用PCR法获得了去除N端信号肽序列和C端跨膜区序列的猪卵透明带ZP3α的cDNA序列片段 ,以专门用于发展DNA疫苗的质粒pVAX1为载体构建了真核细胞表达质粒pVAX1-pZP3α。通过脂质体转染将之导入HeLa细胞进行体外瞬时表达 ,然后采用RT -PCR和间接免疫荧光技术 (IIF)检测pZP3α在mRNA水平的转录和蛋白质水平上的表达。结果 :真核细胞表达质粒pVAX1-pZP3α构建成功 ,用RT -PCR和IIF技术检测到了pZP3α在HeLa细胞中的转录与表达。结论 :真核表达载体pVAX1-pZP3α的成功构建和表达为研制开发有效的人用卵透明带DNA避孕疫苗奠定了基础。 展开更多

关键词 猪卵透明带 zP3α 真核表达栽体 DNA疫苗 免疫避孕

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蛋白质快速定量法及其在rhZP3纯化中的应用 被引量：1

15

作者 谢琪璇 郑育声 +3 位作者 彭雅林 肖銮娟 余巍 潘善培 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第12期1208-1210,共3页

目的　建立层析过程中洗脱峰蛋白质含量的快速定量法。方法　利用蛋白质的紫外吸收原理和层析软件的积分功能,即A2 80 和峰面积计算层析过程中洗脱峰蛋白质含量。结果　洗脱峰大小与蛋白质含量呈线性关系,洗脱峰蛋白质含量可用方程X =Y ... 目的　建立层析过程中洗脱峰蛋白质含量的快速定量法。方法　利用蛋白质的紫外吸收原理和层析软件的积分功能,即A2 80 和峰面积计算层析过程中洗脱峰蛋白质含量。结果　洗脱峰大小与蛋白质含量呈线性关系,洗脱峰蛋白质含量可用方程X =Y A进行估算,X为待测蛋白含量(mg) ,Y为洗脱峰面积(mAU×ml) ,A为1g L待测蛋白在层析系统的紫外吸收值(mAU)。将其应用于重组人卵透明带ZP3蛋白(rhZP3 )的纯化,用该方程估算的纯化蛋白含量与用Low ry法测定结果相似。结论　该法简便、快速、重复性好,具有一定实用价值。 展开更多

关键词 层析 蛋白 定量 重组人卵透明带ZP3蛋白 纯化

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小鼠骨髓间充质干细胞多潜能性的鉴定 被引量：1

16

作者 黄伟 谢琪璇 +3 位作者 秦俊文 李威娜 张春雪 肖銮娟 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期136-140,共5页

目的:鉴定小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)的多分化潜能的起因。方法:从成年小鼠骨髓股骨、胫骨中分离MSCs,并进行原代培养,分别于0、2、4、6、8、10 d提取总RNA,通过RT-PCR检测多潜能特征基因和相关因子、3个胚层特征基因的mRNA的表达情况... 目的:鉴定小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)的多分化潜能的起因。方法:从成年小鼠骨髓股骨、胫骨中分离MSCs,并进行原代培养,分别于0、2、4、6、8、10 d提取总RNA,通过RT-PCR检测多潜能特征基因和相关因子、3个胚层特征基因的mRNA的表达情况,以判断MSCs的特性。结果:小鼠MSCs中表达多能性标记基因Oct-4和nanog,并且表达与多能性相关的转录因子Klf4和c-Myc。外胚层的nestin、中胚层的SM22a和内胚层的CYP51标记基因均有表达。结论:贴壁纯化的小鼠MSCs除了具有多能性的干细胞,还可能含有各胚层的原始细胞。 展开更多

关键词 骨髓间充质干细胞 原代细胞培养 RT-PCR 基因表达

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重组人卵透明带蛋白(rhZP3)对人精子顶体反应的诱导作用 被引量：1

17

作者 谢琪璇 史卫卫 +4 位作者 张韫 李文星 张春雪 肖銮娟 潘善培 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期746-750,共5页

目的:观察重组人卵透明带蛋白(rhZP3)对人精子顶体反应的诱导作用。方法:正常生育力人精子经过获能后,分别用BSA、孕酮和含不同浓度的重组人ZP3蛋白的培养液共孵育,诱导精子顶体反应,对实验组和对照组的精子的顶体发生状态用考马斯亮蓝... 目的:观察重组人卵透明带蛋白(rhZP3)对人精子顶体反应的诱导作用。方法:正常生育力人精子经过获能后,分别用BSA、孕酮和含不同浓度的重组人ZP3蛋白的培养液共孵育,诱导精子顶体反应,对实验组和对照组的精子的顶体发生状态用考马斯亮蓝染色法进行评价。结果:精子与培养液共孵育30 min后,rhZP3组与BSA组之间差异有显著性(P<0.05),顶体反应率随rhZP3质量浓度增加而升高。结论:重组人ZP3蛋白对人精子顶体反应有显著的诱导效应,且在一定范围内与质量浓度成正相关,重组人ZP3蛋白具有发展精子顶体反应试剂盒的潜能。 展开更多

关键词 重组人透明带蛋白 精子 顶体反应

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球状脂联素对卵巢微血管内皮细胞增殖、迁移及管状结构形成的影响 被引量：1

18

作者 陈雷 卢小圣 +3 位作者 李雅兰 毛周飞 肖銮娟 禹艳红 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期614-621,共8页

目的分离并鉴定小鼠卵巢微血管内皮细胞,并利用卵巢微血管内皮细胞研究球状脂联素对小鼠卵巢血管新生的影响。方法采用Percoll密度梯度离心法分离纯化小鼠卵巢微血管内皮细胞,并采用免疫荧光检测细胞表面的卵泡刺激素受体、黄体生成素... 目的分离并鉴定小鼠卵巢微血管内皮细胞,并利用卵巢微血管内皮细胞研究球状脂联素对小鼠卵巢血管新生的影响。方法采用Percoll密度梯度离心法分离纯化小鼠卵巢微血管内皮细胞,并采用免疫荧光检测细胞表面的卵泡刺激素受体、黄体生成素受体以及血管内皮细胞标记v WF;通过血管生成因子(VEGFA)处理检测卵巢微血管内皮细胞在Matrigel上的毛细管形成特性。重组的球状脂联素蛋白处理卵巢微血管内皮细胞,通过MTS检测细胞增殖;细胞划痕愈合法检测细胞迁移;Matrigel基质胶的血管形成,Western blot检测单磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK)磷酸化激活。结果分离出的细胞表现为卵泡刺激素受体阴性,黄体生成素受体阳性,v WF阳性,且VEGFA能够促进血管生长,具有卵巢特异的血管内皮生长特性。高剂量浓度(1μg/m L和3μg/m L)的重组的脂联素球状结构域蛋白处理后卵巢微血管内皮细胞数量分别增加(158.72±14.50)%和(186.50±4.20)%,促进细胞增殖(P<0.01);高剂量浓度(1μg/m L和3μg/m L)的重组的脂联素球状结构域蛋白处理后卵巢微血管划痕愈合率分别为(49.43±3.43)%(P<0.05)和(69.67±1.2)%(P<0.01);3μg/m L的脂联素处理卵巢微血管内皮细胞形成的毛细管状长度为对照组的7.63±0.66倍(P<0.01)。3μg/m L的球状脂联素蛋白处理饥饿处理后的卵巢微血管内皮细胞培养15 min后p AMPK/AMPK、30 min后p AMPK/AMPK显著高于未加入蛋白处理的对照(P<0.01)。Compound C抑制了球状脂联素促进的卵巢微血管内皮细胞的管状结构形成及AMPK磷酸化激活。结论成功分离了卵巢微血管内皮细胞,球状脂联素蛋白能够通过激活AMPK信号途径促进卵巢微血管内皮细胞的血管新生。 展开更多

关键词 球状脂联素 卵巢 血管新生 血管内皮细胞 AMPK

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小鼠白细胞介素5真核表达质粒pVAX-1mIL-5的构建及其体外表达 被引量：1

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作者 何柳媚 潘善培 +3 位作者 谢琪璇 肖銮娟 彭雅琳 董志炜 《生殖医学杂志》 CAS 2005年第2期78-82,共5页

目的构建能表达小鼠白细胞介素5(mIL-5)的质粒并鉴定其蛋白的体外瞬时表达。方法以含有mIL-5cDNA序列的质粒为模板,通过聚合酶链反应(PCR)扩增获得小鼠IL-5基因片段后,定向插入真核表达载体pVAX1中,获得重组表达质粒pVAX1mIL-5。通过双... 目的构建能表达小鼠白细胞介素5(mIL-5)的质粒并鉴定其蛋白的体外瞬时表达。方法以含有mIL-5cDNA序列的质粒为模板,通过聚合酶链反应(PCR)扩增获得小鼠IL-5基因片段后,定向插入真核表达载体pVAX1中,获得重组表达质粒pVAX1mIL-5。通过双酶切、PCR及插入片段序列测定对质粒进行鉴定。采用间接免疫荧光技术检测pVAX1mIL-5在HeLa细胞的瞬时表达。结果酶切、PCR及测序鉴定证实,插入片段正确,间接免疫荧光检测表明其可以在HeLa细胞中瞬时表达。结论构建的真核表达质粒pVAX1mIL-5可以在HeLa细胞中瞬时表达小鼠IL-5的蛋白,为下一步利用IL-5作为DNA疫苗黏膜免疫佐剂研究奠定了基础。 展开更多

关键词 白细胞介素5 质粒构建 体外表达 黏膜免疫 佐剂

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杆状病毒表达的hZP3 B细胞表位嵌合肽的免疫活性研究

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作者 曹佐武 杨林 +4 位作者 郑辉 刘穗玲 肖銮娟 谢琪璇 王自能 《中山大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期70-73,共4页

为研究杆状病毒系统表达的人透明带ZP3的B细胞表位嵌合肽(BCP)的免疫原性及其抗血清与人透明带的免疫交叉反应,重组z3bcp病毒用于感染sf9细胞以表达BCP。Tricine＿SDS＿PAGE用于分离感染液中的小相对分子质量表达产物,表达产物用于免疫... 为研究杆状病毒系统表达的人透明带ZP3的B细胞表位嵌合肽(BCP)的免疫原性及其抗血清与人透明带的免疫交叉反应,重组z3bcp病毒用于感染sf9细胞以表达BCP。Tricine＿SDS＿PAGE用于分离感染液中的小相对分子质量表达产物,表达产物用于免疫小鼠制备抗血清,免疫细胞化学试验用于检验抗血清与人卵泡透明带的交叉反应性。结果显示,sf9细胞被z3bcp病毒感染后,培养液中分离出一条相对分子质量约为6000的特异带,而正常sf9细胞中没有等同的带。免疫细胞化学试验结果显示,该特异肽的抗血清能与人透明带特异结合,表明人透明带BCP嵌合肽在杆状病毒系统中成功表达,表达产物具有抗原性,抗血清能与人透明带特异结合。 展开更多

关键词 人透明带3 嵌合肽 免疫细胞化学试验 杆状病毒 透明带避孕疫苗

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