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蛋白质定量方法的进展 被引量：30
1
作者 胡卓逸 孙承琦 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1990年第1期23-26,共4页
本文在简要比较常用蛋白质定量方法的基础上,结合自己的工作,选择性地叙述了Lowry法、考马斯亮蓝G-250染料测定蛋白质的改进法。还介绍了银染色定量法和4-甲酸喹啉测定蛋白质含量的新方法。
关键词 蛋白 定量方法 CBBG-250
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人参细胞培养物中超氧化物歧化酶的活力测定 被引量：5
2
作者 胡卓逸 史建勋 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第11期687-689,共3页
测定了不同培养期的人参细胞培养物（ＣＭＧＣ）中超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）的活力。实验表明：不同培养期ＣＭＧＣ中ＳＯＤ的活力不同。培养２１ｄ的样品中单位鲜重酶活力单位和蛋白质含量均为最高。
关键词 人参 细胞培养物 超氧化物歧化酶 酶活力
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人参细胞培养物中过氧化氢酶活力的测定 被引量：1
3
作者 胡卓逸 史建勋 丁家宜 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 1997年第6期335-337,共3页
测定了不同生长期的人参细胞培养物中过氧化氢酶的活力，结果表明此酶活力随人参细胞的培养时间而异。酶的单位鲜重活力从10d到21d内较快升高，在抽样测定中以21d时为最高，约为188u／mg人参细胞培养物。
关键词 人参 细胞培养物 过氧化氢酶
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钙调素拮抗剂的研究动态 被引量：6
4
作者 胡卓逸 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1992年第6期427-431,共5页
从钙、钙调素的功能论及钙桔抗剂和钙调素拮抗剂的概念.并着重叙述了国内外钙调素拮抗剂研究中的问题和开发动态。
关键词 钙调素拮抗剂 调钙蛋白
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孔雀绿测定无机磷的改进法
5
作者 胡卓逸 王萍 林香涛 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1989年第2期112-113,共2页
痕量无机磷的测定方法,目前多采用磷钼蓝比色法,在待测液中加入酸性钼酸铵溶液,再加入还原剂,如1,2,4酸、氯化亚锡、抗坏血酸等,使磷钼酸还原成蓝色,根据蓝色深浅进行无机磷定量。
关键词 孔雀绿 无机磷 测定方法
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柱前衍生化高效液相色谱法分析多糖中的单糖组成 被引量：86
6
作者 马定远 陈君 +1 位作者 李萍 胡卓逸 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2002年第6期702-705,共4页
报道了多糖中单糖组成的柱前衍生化高效液相色谱测定方法。采用反向高效液相色谱 2 5 0nm紫外检测和使用梯度洗脱 ,6种还原单糖的 1 苯基 3 甲基 5 吡唑啉酮衍生实现了良好的分离并具有良好的峰形。对单糖组成的定量测定进行了方法... 报道了多糖中单糖组成的柱前衍生化高效液相色谱测定方法。采用反向高效液相色谱 2 5 0nm紫外检测和使用梯度洗脱 ,6种还原单糖的 1 苯基 3 甲基 5 吡唑啉酮衍生实现了良好的分离并具有良好的峰形。对单糖组成的定量测定进行了方法学考察 ,建立了单糖组成分析的数据分析方法 ,并用所建立方法对一个多糖中的单糖组成进行了分析 。 展开更多
关键词 柱前衍生化 分析 组成 单糖 多糖 高效液相色谱
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冬虫夏草及其菌丝的药理学研究进展 被引量：26
7
作者 马定远 李萍 +1 位作者 季晖 胡卓逸 《中药材》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期455-458,共4页
补益类中药冬虫夏草具有广泛的药理作用,其免疫调节功能在多种疾病的防治中发挥重要作用。从已发表的论文来看,虫草中既有免疫促进成分,也有免疫抑制成分,可能是其发挥免疫调节作用的物质基础。
关键词 药理学研究 冬虫夏草 补益类中药 免疫调节作用 药理作用 免疫抑制 免疫调节功能 菌丝 成分 防治
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魔芋多糖的抗衰老作用 被引量：26
8
作者 古元冬 史建勋 胡卓逸 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 1999年第2期127-128,共2页
关键词 魔芋多糖 抗衰老作用 实验研究
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假单胞菌海因酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达 被引量：6
9
作者 李志强 刘景晶 +2 位作者 胡卓逸 王正华 明欣 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期227-230,共4页
目的 :构建海因酶基因工程菌 ,以便实现对羟基苯甘氨酸的工业化生产。方法 :利用PCR技术从恶臭假单胞菌 (Pseudomonasputida) 980 1中扩增得到海因酶基因 ,将该基因插入pMD18 T质粒 ,转化大肠杆菌 (Es cherichiacoli) ,通过地高辛标记... 目的 :构建海因酶基因工程菌 ,以便实现对羟基苯甘氨酸的工业化生产。方法 :利用PCR技术从恶臭假单胞菌 (Pseudomonasputida) 980 1中扩增得到海因酶基因 ,将该基因插入pMD18 T质粒 ,转化大肠杆菌 (Es cherichiacoli) ,通过地高辛标记原位杂交和海因酶活力测定两种方法 ,筛选出具有海因酶活力的阳性转化子。结果 :工程菌E .coliBL2 1/pMD dht的海因酶活力达到 170 0U/L ,比野生菌恶臭假单胞 980 1菌的酶活力提高 8倍。SDS PAGE显示海因酶的单体分子量约为 5 3KDa ,海因酶的表达量约占菌体总可溶性蛋白的 2 0 %。结论 展开更多
关键词 海因酶 恶臭假单胞菌 基因克隆 基因表达 大肠杆菌
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人源血管内皮生长因子突变体的克隆、分离纯化及活性研究 被引量：4
10
作者 周红霞 周梅仙 +2 位作者 吴洁 胡卓逸 刘景晶 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期273-276,共4页
目的：为获得大量人源血管内皮生长因子突变体（hVEGF121’）的重组蛋白，本文研究了其发酵条件，分离纯化方法．并初步考察了其生物活性。方法：应用PCR介导的定点突变方法，将hVEGF121中对其活性影响较小的1-8位和115～12l位两个肽段... 目的：为获得大量人源血管内皮生长因子突变体（hVEGF121’）的重组蛋白，本文研究了其发酵条件，分离纯化方法．并初步考察了其生物活性。方法：应用PCR介导的定点突变方法，将hVEGF121中对其活性影响较小的1-8位和115～12l位两个肽段替换成破伤风毒素（TT）的两个强表位肽段618-627位和831-837位，构建高效表达的pET28a／hVEGF121’重组质粒，考察诱导条件对目的蛋白表达量的影响；所得包含体经过DEAE-Cellulose离子交换柱纯化；初步比较了VEGF121和突变体VEGF121’的免疫和杭肿瘤效果。结果：最佳表达条件为：乳糖诱导时间6h，诱导浓度2mmol／L；离子交换纯化后可得到电泳纯的突变体hVEGF121’；初步的动物免疫发现突变体VEGF121’和VEGF121有相近的免疫滴度，但前者杭肿瘤效果更显著。结论：经发酵纯化后得到重组人源血管内皮生长因子突变体（hVEGF121’）的纯品，并初步展现良好的抗肿瘤效果. 展开更多
关键词 血管内皮生长因子 突变体 纯化 免疫原性 抗肿瘤
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重组乳酸乳球菌X-脯氨酰二-肽酰基-氨基肽酶的纯化及动力学特性(英文) 被引量：4
11
作者 唐松山 吴洁 +3 位作者 谢燕飞 明欣 胡卓逸 刘景晶 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期144-150,共7页
重组的乳酸乳球菌X 脯氨酰 二肽酰基 氨基肽酶是一个工具酶 ,它对基因构建的神经肽或活性多肽的转活具有重要意义 .通过细菌细胞的破碎 ,洗涤 ,冷冻离心 ,透析 ,DEAE 纤维素 5 2柱层析等工艺过程达到电泳纯 .该酶比活为 11.92 6U mg ... 重组的乳酸乳球菌X 脯氨酰 二肽酰基 氨基肽酶是一个工具酶 ,它对基因构建的神经肽或活性多肽的转活具有重要意义 .通过细菌细胞的破碎 ,洗涤 ,冷冻离心 ,透析 ,DEAE 纤维素 5 2柱层析等工艺过程达到电泳纯 .该酶比活为 11.92 6U mg ,纯化倍数为 14.37倍和总活性收率为5 5 .5 6% .通过SDS PAGE和凝胶柱层析法 ,测得该二肽酶有单肽链组成 ,分子量 89KD .在该酶的动力学研究中 ,针对特异性底物L 甘氨酰 L 脯氨酰 对 硝基苯胺 ,求得该酶的米氏方程式 1 V =0 0 4 8 [S]+ 0 2 5 66(r =0 994 ) .它的Km 值为 0 1871mmol L ,最大反应速度Vmax为 3 897μmol·L-1·min-1.该酶可被苯甲酰基磺酰氟 ,胰蛋白酶抑制剂和Mn2 +,Ba2 +,Cu2 +andZn2 +等金属离子抑制 ,但可被Mg2 +激活 .进一步试验显示 ,当Cu2 +和Zn2 +浓度增加到 3 72 6mmol L ,抑制作用明显增强 .低浓度的EDTA Na2 (≤ 0 62 12mmol L)不影响酶的活性 .因此 ,该X 脯氨酰 二肽酰基 展开更多
关键词 X-脯氨酰-二肽酰基-氨基肽酶 金属离子非依赖性 丝氨酸蛋白酶 动力学特性 纯化 重组乳酸乳球菌
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海因酶产生菌的微孔快速筛选法 被引量：12
12
作者 罗雪 冯瑞山 胡卓逸 《华西医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期462-463,480,共3页
目的　建立微孔快速筛选法以筛选海因酶活力较高的菌株。方法　比较底物对羟基苯海因的多种有机溶剂对酶反应的影响。结果　筛选出一株酶活力较高的海因酶产生菌腐臭假单胞菌 95 0 5 (Pseudomonasputida95 0 5 )。发现吐温 - 80 (1% )... 目的　建立微孔快速筛选法以筛选海因酶活力较高的菌株。方法　比较底物对羟基苯海因的多种有机溶剂对酶反应的影响。结果　筛选出一株酶活力较高的海因酶产生菌腐臭假单胞菌 95 0 5 (Pseudomonasputida95 0 5 )。发现吐温 - 80 (1% )能很好溶解底物 ,促进酶反应。结论　为从大批量菌株中快速筛选出较高酶活力的菌株提供了一种新的方法。 展开更多
关键词 对羟基苯海因 海因酶 微孔快速筛选 吐温-80
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N端延伸的人肠生长激素类似物基因的合成、克隆及融合表达 被引量：3
13
作者 李泰明 胡卓逸 +3 位作者 刘景晶 马小驹 周慧 闵伟伟 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期373-377,共5页
目的:合成、克隆及融合表达N端延伸2个Pro,并由Gly取代N端第2个氨基酸Ala的人肠生长激素类似物PP-h[Gly2]GLP-2,初步测定其促肠生长的生物学活性。方法:合成长度分别为53,54及53个碱基的三段寡核苷酸,以中段寡核苷酸为模板,两端寡核苷... 目的:合成、克隆及融合表达N端延伸2个Pro,并由Gly取代N端第2个氨基酸Ala的人肠生长激素类似物PP-h[Gly2]GLP-2,初步测定其促肠生长的生物学活性。方法:合成长度分别为53,54及53个碱基的三段寡核苷酸,以中段寡核苷酸为模板,两端寡核苷酸为引物,经PCR合成PP-h[Gly2]GLP-2基因,克隆于pUC18载体。经测序正确后,将该基因与融合表达载体pED连接构建融合表达质粒pEDGLP-2,转化E.coliBL21(DE3),进行诱导表达,用SDS-PAGE分析。融合蛋白经分离纯化和酸切割后,分离获得PP-h[Gly2]GLP-2,用电喷雾质谱法测定其相对分子质量,并对雄性SD大鼠皮下给药14 d,初步测定其促肠生长活性。结果:诱导后融合蛋白表达量占菌体可溶性总蛋白的40%以上。电喷雾质谱法测得:经酸切割获得的PP-h[Gly2]GLP-2的相对分子质量为3 947.97 Da,与预测值3 947.38 Da基本一致。初步动物实验结果显示,0.5 mg/(kg.d)剂量组小肠增重百分比为41.65%,与PBS组相比具有显著差异。结论:制备获得的人肠生长激素类似物PP-h[Gly2]GLP-2,与设计的相对分子质量一致,有明显的促肠生长活性。 展开更多
关键词 人肠生长激素类似物 融合表达 促肠生长活性
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聚乙二醇对溶菌酶和粒细胞集落刺激因子的初步化学修饰 被引量：4
14
作者 吴洁 胡卓逸 +1 位作者 吕小斌 刘景晶 《中国生化药物杂志》 CAS CSCD 2004年第1期8-10,共3页
目的考察聚乙二醇 (PEG)修饰对溶菌酶和粒细胞集落刺激因子 (G CSF)活性的影响。方法以不同方法活化的PEG修饰溶菌酶 ,通过正交试验和单因素考察确定合适的修饰条件 ;溶菌酶活力测定采用溶壁小球菌法 ,抗原性测定采用试管沉淀法 ;G CSF... 目的考察聚乙二醇 (PEG)修饰对溶菌酶和粒细胞集落刺激因子 (G CSF)活性的影响。方法以不同方法活化的PEG修饰溶菌酶 ,通过正交试验和单因素考察确定合适的修饰条件 ;溶菌酶活力测定采用溶壁小球菌法 ,抗原性测定采用试管沉淀法 ;G CSF活性测定以小鼠血浆中中性粒细胞数目增殖情况反映。结果当偶联上一个PEG分子时 ,溶菌酶的活性保留 13% ,抗原性显著减弱 ;G CSF经PEG修饰后对小鼠中性粒细胞数目的增加有显著促进作用 ,且作用时间明显延长。结论PEG修饰对G 展开更多
关键词 溶菌酶 粒细胞集落刺激因子 聚乙二醇 化学修饰
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假单胞菌海因酶基因在大肠杆菌中的高效表达(英文) 被引量：4
15
作者 李志强 胡卓逸 刘景晶 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期145-150,共6页
为实现利用生物酶转化法进行D 对羟基苯甘氨酸的工业化生产 ,构建了 3株海因酶基因工程菌 .利用PCR技术从恶臭假单胞菌 (Pseudomonasputida)CPU 980 1染色体DNA中扩增得到长约1.8kb的含编码区和自身启动子的海因酶全基因 .通过将海因酶... 为实现利用生物酶转化法进行D 对羟基苯甘氨酸的工业化生产 ,构建了 3株海因酶基因工程菌 .利用PCR技术从恶臭假单胞菌 (Pseudomonasputida)CPU 980 1染色体DNA中扩增得到长约1.8kb的含编码区和自身启动子的海因酶全基因 .通过将海因酶全基因插入pMD18 T质粒、海因酶基因的编码区与pET 17 b质粒重组、海因酶基因编码区和T7强启动子一起插入pMD18 T质粒分别得到重组质粒pMD dht、pET dht和pMD T7 dht.将上述重组质粒分别转化大肠杆菌 (Escherichiacoli) ,通过地高辛标记菌落原位杂交和海因酶活力测定两种方法 ,筛选出具有海因酶活力的阳性转化子 .结果表明 ,大肠杆菌的RNA聚合酶能够识别和结合来自恶臭假单胞菌海因酶基因的自身启动子 ,该启动子在大肠杆菌中能够工作 .基因工程菌E .coliBL2 1 pMD dht、E .coliBL2 1 pET dht和E .coliBL2 1 pMD T7 dht的海因酶活力分别为 170 0U L、190 0U L和 2 5 0 0U L ,比野生菌P .putidaCPU 980 1的海因酶活力分别提高了 8倍、9倍和 12倍 .薄层扫描结果显示 ,这些工程菌的海因酶表达量分别约占菌体总可溶性蛋白质的 2 0 %、31%和 5 7%.SDS PAGE显示 ,海因酶的单体分子量约为 5 0kD .经工程菌E .coliBL2 1 pMD T7 dht催化 ,底物对羟基苯海因的转化率在 13h内可达到 展开更多
关键词 假单胞菌 海因酶基因 大肠杆菌 高效表达
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人肠生长激素工程菌高效表达培养工艺的研究 被引量：2
16
作者 李泰明 胡卓逸 +3 位作者 刘景晶 王旻 张彦凯 吴洁 《药物生物技术》 CAS CSCD 2004年第6期368-372,共5页
为了优化含有人肠生长激素 (rh[Gly2 ]GLP 2 )基因的融合表达工程菌 pED h[Gly2 ]GLP 2高效表达的最适培养工艺条件 ,文章通过摇瓶培养研究了包括培养基组成、初始 pH值、接种量、诱导剂 ,诱导剂浓度、诱导时机及诱导后培养时间等因素... 为了优化含有人肠生长激素 (rh[Gly2 ]GLP 2 )基因的融合表达工程菌 pED h[Gly2 ]GLP 2高效表达的最适培养工艺条件 ,文章通过摇瓶培养研究了包括培养基组成、初始 pH值、接种量、诱导剂 ,诱导剂浓度、诱导时机及诱导后培养时间等因素对蛋白表达量的影响 ,确定了该工程菌表达目的蛋白的最佳条件 ,目的蛋白表达量可达 4 0 %以上 。 展开更多
关键词 工程菌pED-h[Gly^2]GLP-2 重组融合蛋白类 表达条件
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钙调素拮抗剂──双苄基异喹啉类化合物结构与活性关系的研究 被引量：9
17
作者 陈少林 胡卓逸 +2 位作者 郝志奇 蔡惠明 黄文龙 《生物化学杂志》 CSCD 1990年第5期413-416,共4页
双苄基异喹啉类化合物拮抗钙调素(CaM),抑制CaM激活的环核苷酸磷酸二酯酶(PDE),研究表明:蝙蝠葛碱和小檗胺分子中12位羟墓被芳香基团酯化或醚化时,芳香基团的电子云分布状态变化能增加或降低分子的拮抗活性;取代基中的次甲基数增加可以... 双苄基异喹啉类化合物拮抗钙调素(CaM),抑制CaM激活的环核苷酸磷酸二酯酶(PDE),研究表明:蝙蝠葛碱和小檗胺分子中12位羟墓被芳香基团酯化或醚化时,芳香基团的电子云分布状态变化能增加或降低分子的拮抗活性;取代基中的次甲基数增加可以增强分子的拮抗活性。分子非极性端引入含氮基团,化合物的拮抗活性较低。测试的化合物中,E_6D_(12)和D_(14)的拮抗CaM活性较强,IC_(50)分别为0.58μmol/L0.58μmol/L和0.53μmol/L。实验结果表明,分子的拮抗活性与分子非极性端的疏水性、电子云分布状态以及分子空间结构等多种结构性质相关。 展开更多
关键词 钙调素 钙调素拮抗剂 双苄基异喹啉
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棉酚抗生育新机制——对磷脂酶A_2活力的抑制作用(英文) 被引量：2
18
作者 刘猛六 徐卉平 胡卓逸 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期442-446,共5页
采用微孔比色法及荧光分析法 ,研究抗男性生育化合物棉酚与猪胰腺磷脂酶A2 (phospho lipaseA2 ,PLA2 ,EC3 1 1 4 )温育并透析前后对酶活力及荧光的影响 .结果表明 ,棉酚与PLA2 不可逆地结合明显地降低了PLA2 活力及荧光强度 .棉酚对酶... 采用微孔比色法及荧光分析法 ,研究抗男性生育化合物棉酚与猪胰腺磷脂酶A2 (phospho lipaseA2 ,PLA2 ,EC3 1 1 4 )温育并透析前后对酶活力及荧光的影响 .结果表明 ,棉酚与PLA2 不可逆地结合明显地降低了PLA2 活力及荧光强度 .棉酚对酶活力抑制作用的IC50 为 35μmol L ;当其浓度达到 80 μmol L时 ,能够完全抑制PLA2 ( 4 11μmol L)对合成底物 2 硫代十六酰乙基磷酸胆碱(HEPC ,0 .2 5mmol L)的水解作用 .PLA2 的最大激发波长与发射波长分别为 2 75nm ,34 3nm ,荧光强度与酶浓度呈良好的线性关系 .棉酚对PLA2 的荧光具有较强的淬灭作用 .由于PLA2 与男性生育密切相关 ,棉酚对PLA2 展开更多
关键词 棉酚 磷脂酶A 磷脂酶A2拮抗剂 微孔比色法 荧光分析法 抗生育作用 机制
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蛋白质药物的聚乙二醇修饰 被引量：18
19
作者 吴洁 刘景晶 胡卓逸 《药学进展》 CAS 2002年第3期146-151,共6页
蛋白质药物经聚乙二醇修饰后其性质会发生多种变化。本文综述了该项技术的国内外研究现状 ,包括聚乙二醇修饰的原理与方法 ,修饰对蛋白质性质的影响 ,修饰方法的生物优化 ,有关的鉴定与检测方法及修饰产品的开发与临床应用状况。
关键词 蛋白质药物 聚乙二醇 修饰 偶联 生物优化
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用基因工程菌酶法和化学法制备-D-对羟基苯甘氨酸(英文) 被引量：2
20
作者 李志强 胡卓逸 刘景晶 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期151-155,共5页
D 对羟基苯甘氨酸 (D p HPG)是制备羟氨苄青霉素、羟氨苄头孢菌素和羟氨唑头孢菌素等β 内酰胺类抗生素的重要中间体 ,同时它也用于多种多肽类激素及农药的合成 .在D 对羟基苯甘氨酸的多种制备方法中 ,生物酶转化法具有原料易得、工艺... D 对羟基苯甘氨酸 (D p HPG)是制备羟氨苄青霉素、羟氨苄头孢菌素和羟氨唑头孢菌素等β 内酰胺类抗生素的重要中间体 ,同时它也用于多种多肽类激素及农药的合成 .在D 对羟基苯甘氨酸的多种制备方法中 ,生物酶转化法具有原料易得、工艺简单、耗能少、产率高、成本低、光学纯度好、三废污染少等优势 .为利用生物酶转化法制备D 对羟基苯甘氨酸 ,首先用尿素、乙醛酸和苯酚合成底物D ,L 对羟基苯海因 ,然后利用D 海因酶基因工程菌E .coliBL2 1 pMD T7 dht细胞作酶源 ,进行底物D ,L 对羟基苯海因到中间体N 氨基甲酰 D 对羟基苯甘氨酸的酶法转化 ,最后用化学法将N 氨基甲酰 D 对羟基苯甘氨酸进一步转化为D 对羟基苯甘氨酸 .结果表明 ,底物D ,L 对羟基苯海因的收率为 60 % .8L体积的发酵小试实验表明 ,发酵 12h ,工程菌E .coliBL2 1 pMD T7 dht的海因酶活力为 30 0 0U L ,SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳薄层扫描结果显示海因酶表达量约占菌体总可溶性蛋白质的 60 % ,菌体收率为 6% .8L体积的海因酶转化实验表明 ,在 4 %底物D ,L 对羟基苯海因和 1%菌体 (湿重 )pH 9 0情况下 ,反应 5h ,D ,L 对羟基苯海因的转化率可达 96% .在酸性条件下 ,用NaNO2 将N 氨基甲酰 D 对羟基苯甘氨酸转化为D 对羟基苯甘氨酸 ,反应 2h ,转? 展开更多
关键词 D-对羟基苯甘氨酸 制备 抗生素 中间体 生物酶转化法 化学法 基因工程菌
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