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猪流行性腹泻病毒微滴式数字PCR定量检测方法的建立及初步应用
1
作者
周建浩
王东方
+10 位作者
刘影
王淑娟
马震原
谢彩华
赵雪丽
杨海波
冯桂丹
康台生
胡煜锋
李博文
闫若潜
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第1期413-418,共6页
旨在建立一种敏感性高、特异性强、重复性好的猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)定量检测方法。本研究根据GenBank登录的PEDV(MK862249.1)M基因序列保守区设计合成特异...
旨在建立一种敏感性高、特异性强、重复性好的猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)定量检测方法。本研究根据GenBank登录的PEDV(MK862249.1)M基因序列保守区设计合成特异性引物对和探针;通过对反应体系和反应条件的优化,成功建立了可用于检测PEDV的荧光定量PCR(fluorescent quantitative real-time PCR,FQ-PCR)方法,将自行建立的FQ-PCR方法的引物对/探针用来确定ddPCR方法;对ddPCR方法进行敏感性、特异性、重复性和初步应用试验。结果显示:自行建立的FQ-PCR方法在敏感性、重复性等方面均优于行标FQ-PCR方法;根据自行设计的FQ-PCR方法建立的ddPCR方法最低检测极限为0.15 copies·μL^(-1),敏感性高于行业标准(SN/T 1699—2017)FQ-PCR方法(1.0×10^(1)copies·μL^(-1));模板浓度为1.0×10^(0)~1.0×10^(4)copies·μL^(-1)时,具有良好的线性关系(R 2>0.99);批内、批间变异系数(CV%)为1.52%~7.40%;对猪丁型冠状病毒、猪伪狂犬病毒等11种对照病毒核酸检测结果均为阴性;分别用建立的ddPCR方法、行业标准FQ-PCR方法对150份临床样品进行PEDV核酸检测,ddPCR方法对行业标准FQ-PCR方法检测阳性样品的检测符合率为10^(0)%。本研究成功建立的PEDV ddPCR检测方法可用于临床上PEDV感染的早期检测和定量检测,为PEDV核酸标准物质的研制提供了定量手段。
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关键词
猪流行性腹泻病毒
微滴式
数字PCR
方法
建立
下载PDF
职称材料
题名
猪流行性腹泻病毒微滴式数字PCR定量检测方法的建立及初步应用
1
作者
周建浩
王东方
刘影
王淑娟
马震原
谢彩华
赵雪丽
杨海波
冯桂丹
康台生
胡煜锋
李博文
闫若潜
机构
河南农业大学动物医学院
河南省动物疫病预防控制中心/河南省重大动物疫病监测预警及防控重点实验室
河南科技大学动物科技学院
上海市动物疫病预防控制中心
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第1期413-418,共6页
基金
河南省重大科技专项课题(221100110600)
河南省重点研发专项(231111111300)
+1 种基金
河南省现代农业产业技术体系(HARS-22-12-T)
河南省重点研发与推广专项(232102111053)
文摘
旨在建立一种敏感性高、特异性强、重复性好的猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)定量检测方法。本研究根据GenBank登录的PEDV(MK862249.1)M基因序列保守区设计合成特异性引物对和探针;通过对反应体系和反应条件的优化,成功建立了可用于检测PEDV的荧光定量PCR(fluorescent quantitative real-time PCR,FQ-PCR)方法,将自行建立的FQ-PCR方法的引物对/探针用来确定ddPCR方法;对ddPCR方法进行敏感性、特异性、重复性和初步应用试验。结果显示:自行建立的FQ-PCR方法在敏感性、重复性等方面均优于行标FQ-PCR方法;根据自行设计的FQ-PCR方法建立的ddPCR方法最低检测极限为0.15 copies·μL^(-1),敏感性高于行业标准(SN/T 1699—2017)FQ-PCR方法(1.0×10^(1)copies·μL^(-1));模板浓度为1.0×10^(0)~1.0×10^(4)copies·μL^(-1)时,具有良好的线性关系(R 2>0.99);批内、批间变异系数(CV%)为1.52%~7.40%;对猪丁型冠状病毒、猪伪狂犬病毒等11种对照病毒核酸检测结果均为阴性;分别用建立的ddPCR方法、行业标准FQ-PCR方法对150份临床样品进行PEDV核酸检测,ddPCR方法对行业标准FQ-PCR方法检测阳性样品的检测符合率为10^(0)%。本研究成功建立的PEDV ddPCR检测方法可用于临床上PEDV感染的早期检测和定量检测,为PEDV核酸标准物质的研制提供了定量手段。
关键词
猪流行性腹泻病毒
微滴式
数字PCR
方法
建立
Keywords
porcine epidemic diarrhea virus
droplet
digital PCR
method
establishment
分类号
S852.659.6 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
猪流行性腹泻病毒微滴式数字PCR定量检测方法的建立及初步应用
周建浩
王东方
刘影
王淑娟
马震原
谢彩华
赵雪丽
杨海波
冯桂丹
康台生
胡煜锋
李博文
闫若潜
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024
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