兰科植物FNR基因的密码子偏好性分析 被引量：22

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作者 李蓉 谢析颖 +6 位作者 王雪晶 苏立遥 林玉玲 郭容芳 陈裕坤 赖钟雄 徐涵 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2018年第6期1137-1145,共9页

为揭示兰科植物FNR基因的特性和密码子偏好性,采用DNAMAN、Codon W和SPSS软件及EMBOSS、SWISS-MODEL在线网站对17种兰科植物的FNR基因序列、氨基酸序列、同源区域及蛋白质三维结构进行分析。结果表明:兰科植物FNR基因普遍具有在A/T(U)与... 为揭示兰科植物FNR基因的特性和密码子偏好性,采用DNAMAN、Codon W和SPSS软件及EMBOSS、SWISS-MODEL在线网站对17种兰科植物的FNR基因序列、氨基酸序列、同源区域及蛋白质三维结构进行分析。结果表明:兰科植物FNR基因普遍具有在A/T(U)与G/C之间较弱的密码子偏好性;密码子的末位在A和T(U)之间存在显著的T(U)偏好性,在C和G之间存在显著的C偏好性;NADP结合域比非结合域有较小的密码子偏好性;基于CDS和氨基酸聚类结果比基于RSCU聚类更接近于植物的进化分类;自然选择的作用是导致兰科植物FNR基因的密码子使用偏好性的主要成因。 展开更多

关键词 兰科 FNR基因 密码子偏好性

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miR171家族成员分子特性及miR171b调控靶标在龙眼体胚发生早期的表达分析 被引量：5

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作者 苏立遥 张帅 +3 位作者 陈旭 徐小萍 赖钟雄 林玉玲 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期1324-1334,共11页

【目的】研究龙眼miR171家族的分子特性及miR171b调控靶标对GA3、2,4-D的响应和在龙眼体胚发生早期的表达模式。【方法】通过龙眼基因组和转录组数据库筛选得到龙眼miR171成熟体与前体序列,基于邻近法(neighborjoining,NJ)利用MEGA 7.0... 【目的】研究龙眼miR171家族的分子特性及miR171b调控靶标对GA3、2,4-D的响应和在龙眼体胚发生早期的表达模式。【方法】通过龙眼基因组和转录组数据库筛选得到龙眼miR171成熟体与前体序列,基于邻近法(neighborjoining,NJ)利用MEGA 7.0以及iTOL进行系统发育树的构建以及序列多重比较分析;psRNAtarget预测龙眼miR171家族靶基因,利用改良的RLM-RACE验证靶基因裂解位点;利用qPCR分析不同浓度2,4-D、GA3处理的龙眼胚性愈伤组织(EC)及龙眼体胚发生早期miR171b与其靶基因SCL6(Scarecrow-like)的表达模式。【结果】分子特性分析提示,龙眼miR171各成员之间的进化关系较远,进化来源复杂,进化速率具有差异性;靶基因预测显示miR171家族靶基因主要包括SCL6、SCL15、SCL27、转录剪切体X2和RNA依赖的RNA聚合酶1等;裂解位点验证表明miR171b可以靶向切割SCL6,同时SCL27具有结合位点之外的切割位点。在不同浓度2,4-D和GA3处理下,miR171b与SCL6的表达趋势基本呈现为负调控模式;随着2,4-D浓度的升高,miR171b的转录水平总体呈下调趋势,SCL6的表达量总体呈上调趋势;GA3的存在显著下调miR171b的转录水平,而SCL6的表达量分别在2.5和12.5 mg·L^(-1)GA3时达到最高值和最低值。龙眼早期体胚发生前期(0～6 d),miR171b与SCL6表达模式相似,龙眼早期体胚发生后期(6～12 d),miR171b显著下调,SCL6显著上调,提示大量积累的SCL6对龙眼球形胚(GE)形态建成具有重要作用,而miR171b通过减少转录产物的积累促进SCL6表达。【结论】miR171具有物种间的保守性以及成员间的差异性,同时miR171b及其靶标SCL6通过响应激素调节龙眼早期体胚发生的形态建成。 展开更多

关键词 龙眼 miR171 分子特性 SCL6 激素响应 体胚发生

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miR403分子进化特性及其在龙眼体胚发生早期的表达模式分析 被引量：3

3

作者 苏立遥 蒋梦琦 +5 位作者 黄倏祺 徐小萍 厉雪 陈旭 赖钟雄 林玉玲 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期846-856,共11页

【目的】探究miR403的分子进化特性及其在龙眼体胚发生早期中的表达模式。【方法】根据龙眼转录组数据库结合miRBase数据库下载得到植物miR403成熟体(miRNA,MicroRNA)和前体(pre-miRNA,Precursor MicroRNA)序列,对其构建系统发育树、序... 【目的】探究miR403的分子进化特性及其在龙眼体胚发生早期中的表达模式。【方法】根据龙眼转录组数据库结合miRBase数据库下载得到植物miR403成熟体(miRNA,MicroRNA)和前体(pre-miRNA,Precursor MicroRNA)序列,对其构建系统发育树、序列多重比对、前体二级结构分析;并克隆龙眼miR4035’末端cDNA序列,比较miR403启动子顺式作用元件。利用qPCR(Quantitative real time-PCR)探究龙眼体胚发生早期miR403和pre-miR403的表达模式。【结果】龙眼及其他17个物种中miR403的36个前体和42成熟体序列的系统发育树以及序列多重比对显示,植物miR403高度保守且主要来源于pre-miR403的3臂,而pre-miR403分歧较大,序列仅在miRNA生成区域保守;不同物种之间miR403成员数量差异不大;pre-miR403最小折叠自由能为-35.70^-55.50kal·mol^-1。克隆获得龙眼primiR403(miR403初级体)5’末端cDNA序列,确认其第一个碱基A为转录起始位点(TSS,transcription start site)。龙眼等5种植物MIR403启动子中具有大量光、激素和逆境胁迫等元件。龙眼早期体胚发生过程中miR403和pre-miR403整体为显著下调趋势。【结论】龙眼miR403与其他植物miR403具有高度的保守性以及物种之间的特异性,miR403和pre-miR403下调表达可能有利于促进龙眼早期体胚发生。 展开更多

关键词 龙眼 microRNA403 进化特性 启动子 体胚发生 表达分析

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龙眼胚性愈伤组织RNA结合蛋白LSm14的基因克隆、亚细胞定位及表达分析 被引量：1

4

作者 厉雪 苏立遥 +6 位作者 陈燕 张舒婷 徐小萍 陈晓慧 陈荣珠 赖钟雄 林玉玲 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期808-818,共11页

【目的】探究LSm14对龙眼体胚发生的影响,克隆RNA结合蛋白DlLSm14e基因并观察其亚细胞定位,分析其表达特性。【方法】以龙眼胚性愈伤组织为材料,依据转录组数据和基因组数据,采用RT-PCR克隆了一个DlLSm14基因,将其命名为DlLSm14e。对该... 【目的】探究LSm14对龙眼体胚发生的影响,克隆RNA结合蛋白DlLSm14e基因并观察其亚细胞定位,分析其表达特性。【方法】以龙眼胚性愈伤组织为材料,依据转录组数据和基因组数据,采用RT-PCR克隆了一个DlLSm14基因,将其命名为DlLSm14e。对该基因进行生物信息学分析、亚细胞定位观察、龙眼非胚性愈伤组织和不同胚性培养物以及不同激素处理下的FPKM值分析和不同浓度细胞分裂素(KT)处理下的qRT-PCR检测。【结果】该基因CDS全长1707 bp,编码568个氨基酸,该蛋白不含信号肽和跨膜结构,不属于分泌蛋白和跨膜蛋白;此外,该蛋白含有N端保守结构域以及延长的C端,并且含有74个磷酸化修饰位点;系统发育分析表明,DlLSm14e蛋白与漾濞槭(Acer yangbiense)相似度较高,与单子叶植物亲缘关系最远;顺式作用元件分析表明,该基因含有大量光响应元件和多种激素响应元件;亚细胞定位结果表明,该基因为核定位基因;表达谱与实时荧光定量分析显示,DlLSm14e的FPKM值在非胚性愈伤组织(NEC)阶段最低,在球形胚阶段达到最高,推测DlLSm14e大量累积可能有利于龙眼体胚早期形态建成;不同激素处理下,2,4-D抑制该基因表达,KT促进其表达,而KT的浓度能影响该基因的表达。【结论】龙眼LSm14e基因定位于细胞核,该基因FPKM值随龙眼体胚胚性增加而升高,并且响应多种与龙眼体胚发生相关的激素,推测该基因可能参与龙眼体胚早期的形态建成。 展开更多

关键词 龙眼 DlLSm14基因 克隆 亚细胞定位 表达

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miR395分子进化特性及其在龙眼早期体胚发生中的表达分析 被引量：2

5

作者 黄倏祺 苏立遥 +2 位作者 蒋梦琦 赖钟雄 林玉玲 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期18-28,共11页

【目的】研究miR395的分子进化特性及其在龙眼早期体胚发生中的表达分析。【方法】通过龙眼miRNA文库、转录组数据库和miRBase数据库,得到所有植物miR395家族成员成熟体和前体序列,对其进行序列比对及进化分析、保守性分析、前体二级结... 【目的】研究miR395的分子进化特性及其在龙眼早期体胚发生中的表达分析。【方法】通过龙眼miRNA文库、转录组数据库和miRBase数据库,得到所有植物miR395家族成员成熟体和前体序列,对其进行序列比对及进化分析、保守性分析、前体二级结构预测、潜在靶基因预测,对龙眼miR395a在龙眼早期体胚发生(SE)阶段的表达模式进行分析。【结果】龙眼miR395家族包含5条前体序列和2条成熟体序列。Mfold预测分析发现,龙眼pre-miR395序列均能形成稳定的发卡结构,其最小折叠自由能ΔG在-44.70~64.80 kal·mol-1,提示与序列长度没有显著相关性。其次,保守性分析显示,植物pre-miR395两端序列较保守,而中间序列不保守;系统进化分析提示,龙眼pre-miR395家族与脐橙、葡萄和苹果的亲缘关系更近。psRNAtarget预测显示,龙眼miR395调控的潜在靶基因主要包含富含亮氨酸重复受体蛋白激酶LRR-RLKs、ATP硫酸化酶APS1、蛋白磷酸酶PP2C、前体RNA蛋白质TSR1同系物TSR1、酮酯酰CoA硫解酶KAT2和EH结构域蛋白EHD1等6个,且都是以裂解靶标的方式进行调控。qRT-PCR分析表明,在龙眼早期体胚发生阶段,miR395a呈上调趋势,且miR395a与APS1呈显著负相关。【结论】龙眼miR395与其他植物miR395功能具有高度保守性和物种特异性,同时龙眼miR395a上调表达可能促进龙眼球形胚的形态建成。 展开更多

关键词 龙眼 miRNA395 进化特性 早期体胚发生 实时荧光定量PCR

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药用石斛内源褪黑素含量及动态水平变化的研究

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作者 肖学宸 王培育 +5 位作者 叶炜 陈燕 苏立遥 许旭明 赖钟雄 林玉玲 《园艺与种苗》 CAS 2021年第8期12-15,44,共5页

[目的]对药用石斛进行首次褪黑素含量测定,证实褪黑素在石斛中的存在并进一步分析种和昼夜变化对褪黑素含量的影响。[方法]以ELISA法测定药用石斛中褪黑素(MT)含量。[结果]8种药用石斛中,金钗石斛的褪黑素含量最高(89.81±1.60 pg/g... [目的]对药用石斛进行首次褪黑素含量测定,证实褪黑素在石斛中的存在并进一步分析种和昼夜变化对褪黑素含量的影响。[方法]以ELISA法测定药用石斛中褪黑素(MT)含量。[结果]8种药用石斛中,金钗石斛的褪黑素含量最高(89.81±1.60 pg/g,f.w.),铁皮石斛的褪黑素含量最低(27.19±5.81 pg/g,f.w.)。此外,药用石斛的褪黑素含量随昼夜变化出现了规律性波动——昼低夜高。[结论]该研究结果将为石斛有效药用成分的开发和进一步研究褪黑素的作用机理提供参考依据。 展开更多

关键词 褪黑素 药用石斛 含量 动态变化

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龙眼pri-miR319a编码短肽活性的研究 被引量：6

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作者 苏立遥 王培育 +9 位作者 蒋梦琦 黄倏祺 薛晓东 刘梦雨 肖学宸 赖春旺 张梓浩 陈裕坤 赖钟雄 林玉玲 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期908-920,共13页

为研究龙眼miRNA编码短肽(miRNA encode regulatory peptide,miPEP)的潜在活性,以miR319为对象,从7个龙眼品种中克隆得到pri-miR319a序列并预测其潜在编码miPEP,并通过遗传转化和人工合成miPEP的方法验证miPEP319a的活性。结果显示,7个... 为研究龙眼miRNA编码短肽(miRNA encode regulatory peptide,miPEP)的潜在活性,以miR319为对象,从7个龙眼品种中克隆得到pri-miR319a序列并预测其潜在编码miPEP,并通过遗传转化和人工合成miPEP的方法验证miPEP319a的活性。结果显示,7个龙眼品种中pri-miR319a序列存在10个核苷酸的差异,并具有3个潜在ORF可以编码miPEP,其中1个核苷酸突变位点导致miPEP319a氨基酸序列的改变。进一步通过原位转化法获得转化miPEP的过表达载体及相应突变表达载体的龙眼幼芽,并结合人工合成miPEP319处理龙眼胚性愈伤组织,进一步验证龙眼miPEP的生物学活性。结果显示,pri-miR319a编码的3个潜在miPEP仅miPEP319a-2具有生物学活性并促进下游mi R319a的表达。最后采用烟草叶片的瞬时转化法验证龙眼miPEP319a在烟草当中的活性及对miR319a的影响。结果表明龙眼miPEP319a具有物种特异性,在烟草叶片中miR319a的表达模式无差异。该研究结果提示龙眼pri-miR319序列在不同品种中具有多态性,且其编码的3个潜在miPEP仅mi PEP319a-2具有生物学活性,并具有物种特异性,同时也暗示龙眼miPEP319a-2可以参与到龙眼的生长发育过程中。 展开更多

关键词 龙眼 miR319a miRNA编码短肽 基因克隆 遗传转化

原文传递

龙眼miR403及其候选靶标对外源激素的响应模式以及在龙眼体胚中的表达模式 被引量：4

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作者 苏立遥 黄倏祺 +5 位作者 蒋梦琦 厉雪 徐小萍 陈旭 赖钟雄 林玉玲 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期977-984,共8页

MicroRNA403(miR403)为双子叶植物特有的miRNA家族,其在双子叶植物抗病、逆境胁迫和生长发育中具有重要作用.为了解miR403及其候选靶标对外源激素的响应模式以及在龙眼体胚发生过程中的表达模式,利用psRNAtarget对miR403潜在靶标进行预... MicroRNA403(miR403)为双子叶植物特有的miRNA家族,其在双子叶植物抗病、逆境胁迫和生长发育中具有重要作用.为了解miR403及其候选靶标对外源激素的响应模式以及在龙眼体胚发生过程中的表达模式,利用psRNAtarget对miR403潜在靶标进行预测,采用改良RLM-RACE技术验证其裂解位点,通过qPCR技术检测miR403及其候选靶标对外源激素的应答及在龙眼体胚中的表达模式.结果显示,共获得41个龙眼miR403的潜在靶标,包含4个PPR(Pentatricopeptide repeat protein)和3个PCNT115(Auxin-induced protein PCNT115),却未发现AGO2(Argonaute2).4个PPR中Dlo014588.1和Dlo014589.1序列一致,而3个PCNT115基因序列在所预测的miR403结合位点上下游序列基本一致.裂解位点显示,miR403不具备裂解AGO2 mRNA的能力,但介导PPR(Dlo014588.1)和PCNT115 mRNA的裂解,裂解位点位于miR403 5′端的第2和第3个碱基之间. qPCR显示,miR403响应脱落酸(ABA)信号并显著上调,PPR和PCNT115对不同浓度的ABA呈现不同的表达模式,PPR和PCNT115在5μg/L ABA时显著上调,随后,PPR先显著下调(50μg/L ABA),而后显著上调(5 000μg/L ABA),而PCNT115呈显著下调趋势;miR403不响应赤霉素(GA3)信号,而PPR和PCNT115随着GA3浓度升高而上调;miR403可以响应不同浓度的水杨酸(SA)和2,4-D信号显著下调,而其靶基因显著上调.不同胚性培养物中qPCR显示,miR403仅在龙眼胚性愈伤组织(EC)高度表达且在龙眼体胚发生过程中显著下调,PPR在EC和子叶胚(CE)高度表达,PCNT115在CE和成熟胚(ME)高水平表达,三者之间并未呈现明显的负调控趋势.本研究表明在龙眼体胚中miR403并不靶向调控AGO2,而是调控PPR和PCNT115;另外,miR403可能响应ABA、SA和2,4-D调控PPR和PCNT15参与到龙眼体胚发生过程中. 展开更多

关键词 龙眼 miR403 靶基因 PPR PCNT115 AGO2 激素响应 体胚发生

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eTM、microRNA319及其调控靶标在龙眼体胚发生早期的表达模式 被引量：4

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作者 苏立遥 陈旭 +5 位作者 黄倏祺 蒋梦琦 厉雪 张梓浩 赖钟雄 林玉玲 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期566-573,共8页

MicroRNA319作为最保守的miRNA家族之一,在植物器官形态建成、激素信号转导、抵抗外界胁迫等途径中均有重要作用.为了解miR319在植物体胚中的调控途径,利用龙眼转录组数据库筛选miR319成熟体(miR319)和前体序列(pre-miR319),并通过DNAMA... MicroRNA319作为最保守的miRNA家族之一,在植物器官形态建成、激素信号转导、抵抗外界胁迫等途径中均有重要作用.为了解miR319在植物体胚中的调控途径,利用龙眼转录组数据库筛选miR319成熟体(miR319)和前体序列(pre-miR319),并通过DNAMAN 6.0和Mfold分析miR319的定位和pre-miR319的二级结构;进而采用TAPIR和psRNAtarget预测选定的miR319成员的内源诱捕靶标(endogenous target mimics,eTM)及候选靶标,并通过RLM-RACE验证靶标裂解位点,最后分析eTM、miR319及其靶标在龙眼体胚发生早期的表达模式.结果显示,龙眼4个miR319成员有1个定位于miR319a scafflod517,有3个定位于miR319a scaffold225.因此,以miR319a scaffold225为研究对象,将其命名为pre-miR319a,其上的成熟体分别命名为miR319a-3p.1、miR319a-5p.1和miR319a-5p.2.裂解位点显示龙眼miR319a 3个成员中,miR319a-3p.1的靶基因为TCP2和TCP4(Dlo_022819.1,Dlo_026743.1),miR319a-5p.1的靶基因为吲哚-3-甘油磷酸合成酶(IGS)和ABI3-5抑制因子,miR319a-5p.2未验证到靶基因.qPCR显示,在龙眼早期体胚发生过程中,miR319a 3个成员的表达模式基本一致,呈显著上调趋势.另外,除eTM8637外,其余eTM的表达模式与其相应的miR319a成员基本呈现为负相关趋势,均为下调趋势.miR319a-3p.1与其靶基因基本呈现为负调控趋势,miR319a-5p.1与ABI3-5抑制因子在龙眼早期体胚发生后期呈现负调控,与IGS没有明显负相关.本研究初步验证了"eTM-miR319a-靶基因"信号途径可能参与到龙眼早期体胚发生的形态建成. 展开更多

关键词 龙眼 miR319 内源诱捕靶标 靶基因 体胚发生

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龙眼GRF家族全基因组鉴定及表达模式 被引量：14

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作者 刘蒲东 张舒婷 +7 位作者 陈晓慧 苏立遥 姚德恒 李汉生 张梓浩 陈裕坤 林玉玲 赖钟雄 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期236-245,共10页

生长调节因子(growth regulating factor,GRF)是植物体内特有的一种转录因子,在植物生长发育、渗透胁迫中发挥重要的作用.基于龙眼基因组和转录组数据,采用生物信息学分析的方法对龙眼GRF(DlGRF)家族成员进行鉴定命名;分析其基本理化性... 生长调节因子(growth regulating factor,GRF)是植物体内特有的一种转录因子,在植物生长发育、渗透胁迫中发挥重要的作用.基于龙眼基因组和转录组数据,采用生物信息学分析的方法对龙眼GRF(DlGRF)家族成员进行鉴定命名;分析其基本理化性质、基因结构、蛋白结构域、启动子序列顺式作用元件;构建系统进化树、预测可能直接调控DlGRF的miRNAs;分析DlGRF家族在龙眼非胚性及胚性培养物、组织器官、光质与激素处理下的表达水平;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测DlGRF的表达模式.结果显示,龙眼DlGRF家族包含9个成员,均含有QLQ和WRC保守结构域;包含2-5个外显子,以3个为主;分布于四大分支上,与甜橙、拟南芥GRF亲缘关系较近;DlGRF蛋白包含7个motif;启动子序列中包含众多光响应、激素应答、厌氧感应、胁迫响应及其他与生长发育相关的作用元件.转录组结果显示,DlGRF家族8个成员在球形胚阶段表达量高于其他阶段;各成员均在种子中有较高表达量,对蓝、白光及激素响应明显. qRT-PCR结果显示,DlGRF1-2、DlGRF2-1、DlGRF2-2、DlGRF4、DlGRF5-1及DlGRF7在球形胚阶段表达量最高;DlGRF1-1、DlGRF1-2、DlGRF2-2及DlGRF5-2在脱落酸(ABA)、茉莉酸甲酯(MeJA)和赤霉素(GA3)等激素处理中表达上调.此外,DlGRF可能受miR396a调控,调控方式为裂解靶标.本研究表明DlGRF在进化过程中保守性较高,且可能受到蓝光和激素的诱导,参与龙眼非胚性及胚性培养物尤其是球形胚及种子发育形成的过程.(图6表3参42) 展开更多

关键词 龙眼 生长调节因子(GRF) 成员鉴定 光质 激素 实时荧光定量PCR

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龙眼体胚发生早期miR166初级体的克隆与表达分析 被引量：5

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作者 张清林 苏立遥 +9 位作者 厉雪 张舒婷 徐小萍 陈晓慧 王培育 李蓉 张梓浩 陈裕坤 赖钟雄 林玉玲 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期1501-1512,共12页

为了解龙眼miR166初级体基因Pri-miR166 S53结构特点及其前体和成熟体在龙眼体胚发生早期的表达模式,采用SMART^(TM) RACE试剂盒和PCR扩增技术克隆龙眼体胚早期miR166基因的初级体(Pri-miR166 S53),确认其转录起始位点,并预测其含有的潜... 为了解龙眼miR166初级体基因Pri-miR166 S53结构特点及其前体和成熟体在龙眼体胚发生早期的表达模式,采用SMART^(TM) RACE试剂盒和PCR扩增技术克隆龙眼体胚早期miR166基因的初级体(Pri-miR166 S53),确认其转录起始位点,并预测其含有的潜在ORF;利用龙眼基因组数据库提取其启动子序列,预测其含有的顺式作用元件;用实时荧光定量PCR对龙眼体胚发生早期及不同激素处理下的胚性愈伤组织中miR166基因的前体(Pre-miR166 S53)和成熟体(miR166a.2)表达模式进行分析。结果表明:获得长317 bp的Pri-miR166 S53基因初级体序列,对其进行翻译,得到一条长13个氨基酸序列的miPEP(MLCFVDALFLIST)。利用生物信息学软件分析Pri-miR166 S53基因的启动子序列发现,除了具有TATA/CAAT-box外,还含有生长素、脱落酸、乙烯、水杨酸、茉莉酸甲酯及spl、HSE等特异作用元件。实时荧光定量PCR分析表明,在2,4-D调控的龙眼体胚发生早期过程中,从胚性松散型愈伤组织发育到球形胚的过程中,Pri-miR166 S53基因的前体pre-miR166 S53和成熟体miR166a.2都表现为下调趋势;而在无2,4-D调控的龙眼体胚发生早期中,pre-miR166 S53和miR166a.2表达模式不同。此外,pre-miR166S53随ABA和乙烯处理浓度升高呈下调表达,而对不同浓度2,4-D处理无应答;miR166a.2随2,4-D、ABA处理浓度升高呈下调表达,而在乙烯处理下呈上调表达。上述研究结果提示miR166前体和成熟体在对外源激素应答的模式上并不呈简单线性相关,可能存在多层次、多方位的调控。 展开更多

关键词 龙眼 miR166初级体 启动子 实时荧光定量PCR 表达特性

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龙眼Hsf基因家族密码子使用模式分析 被引量：6

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作者 王云 彭丽云 +4 位作者 苏立遥 李蓉 陈裕坤 林玉玲 赖钟雄 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2019年第17期5595-5603,共9页

为了解龙眼热激转录因子(heat shock transcription factor, Hsf)基因家族密码子使用偏性特征,本研究利用CodonW程序和EMBOSS在线软件对龙眼Hsf (DlHsf)基因家族密码子偏好性进行数据的提取及分析,运用SPSS、Origin和GraphPad软件对密... 为了解龙眼热激转录因子(heat shock transcription factor, Hsf)基因家族密码子使用偏性特征,本研究利用CodonW程序和EMBOSS在线软件对龙眼Hsf (DlHsf)基因家族密码子偏好性进行数据的提取及分析,运用SPSS、Origin和GraphPad软件对密码子偏好性参数进行统计、分析与图表制作。结果显示:(1) DlHsf基因家族密码子A/T (U)选择偏性较G/C更强,且更偏好以A/T (U)结尾。(2)最优密码子有CUU等12个。(3)密码子组成成分分析、中性绘图分析、ENC-plot分析及PR2-plot分析表明,DlHsf基因家族密码子偏好性主要受到突变压力影响。(4)与模式生物基因组密码子使用偏性使用频率比较显示,酵母菌真核表达系统更适合作为该家族基因异源表达系统,拟南芥、烟草、番茄均可作为该家族遗传转化的受体,但为提高表达效率,可能仍需在实验过程中对家族基因密码子进行改造优化。本研究为DlHsf基因家族密码子优化及转基因功能尤其是在异源表达上的研究提供一定的理论基础。 展开更多

关键词 龙眼(Dimocarpus longan) Hsf基因家族 密码子偏好性 转基因功能

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龙眼miR156家族及其调控靶标SPL的生物信息学和表达模式 被引量：3

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作者 蒋梦琦 苏立遥 +5 位作者 黄倏祺 陈旭 徐小萍 张梓浩 赖钟雄 林玉玲 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期558-565,共8页

为了解miR156基因家族的进化特性及其在龙眼早期体胚发生过程中的调控作用,对植物miR156家族成员的成熟体和前体序列进行多重比对和进化特性分析,并对龙眼miR156基因家族成员进行了前体(pre-miRNA)二级结构预测、靶基因预测及裂解位点验... 为了解miR156基因家族的进化特性及其在龙眼早期体胚发生过程中的调控作用,对植物miR156家族成员的成熟体和前体序列进行多重比对和进化特性分析,并对龙眼miR156基因家族成员进行了前体(pre-miRNA)二级结构预测、靶基因预测及裂解位点验证,利用qPCR技术探究龙眼体胚发生早期miR156a与靶基因SPL6/9/16调控模式.结果表明,龙眼miR156家族含有13条成熟体序列和6条前体序列.Mfold预测显示,pre-miR156家族6个成员的序列均能形成典型稳定的茎环二级结构,它们的最小折叠自由能(ΔG)在-43.30--62.60 kal/mol;成熟序列的碱基保守性高.系统发育进化树分析显示,龙眼miR156家族与水稻、拟南芥的miR156亲缘关系更为接近.靶基因预测显示,龙眼miR156a的靶基因是SPL2、SPL6、SPL9、SPL16、SPL18;利用改良的RLM-RACE在龙眼愈伤组织中检测到SPL6/9/16的断裂片段,miR156a在与靶基因mRNA互补的第10个核苷酸处切割靶标mRNA.实时荧光定量PCR显示,在龙眼体胚发生早期miR156a在0-9 d表达平稳,仅在球形胚(globular embryos,GE)阶段显著下调,SPL6/9/16表达量持续上调,在GE阶段表达量最高,提示SPL6/9/16的大量积累对龙眼球形胚形态建成具有重要作用.本研究表明植物miR156基因家族成熟体序列高度保守,且miR156a的下调表达与靶基因SPL6/9/16的大量积累可能对龙眼球形胚的建成具有重要意义. 展开更多

关键词 龙眼 miR156 进化特性 体胚发生 SPL

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龙眼miR167家族分子特性及其潜在靶标在体胚发生早期的表达模式 被引量：1

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作者 王静宇 申序 +5 位作者 陈晓慧 徐小萍 张舒婷 苏立遥 林玉玲 赖钟雄 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期146-157,共12页

为了解miR167家族成员的分子特性及其可能互作的靶标在龙眼体胚发生早期的调控机制,采用生物信息学分析方法进行龙眼miR167基因家族序列分析、二级结构预测、分子进化树分析、靶基因预测及其靶标特异表达的FPKM值分析,并采用实时荧光定... 为了解miR167家族成员的分子特性及其可能互作的靶标在龙眼体胚发生早期的调控机制,采用生物信息学分析方法进行龙眼miR167基因家族序列分析、二级结构预测、分子进化树分析、靶基因预测及其靶标特异表达的FPKM值分析,并采用实时荧光定量PCR技术(quantitave real-time PCR,qPCR)检测miR167家族在体胚发生早期的转录水平.结果显示,龙眼miR167前体序列存在一个长为20 nt的重叠区域,miR167b的中间序列区域和3’端与此区域存在多个碱基差异;龙眼miR167前体成员均能形成茎环结构,且最小折叠自由能介于-79.95--46.90 Kal/mol之间;分子进化树显示龙眼miR167前体成员分别与番木瓜(Carica papaya)、番茄(Solanum lycopersicum)、高粱(Sorghum bicolor)和大豆(Glycine max)亲缘关系最近,miR167a、c、d、f在成熟体进化树中聚于同一支,靶标预测结果显示它们可能调控6个相同的靶基因,即E3泛素连接酶BIG BROTHER(BB)、AIRP2,MYB转录因子和生长素应答因子(ARF6、ARF8、ARF6-3),miR167b则单独分布于另一支中,并可能调控2个特异靶标,即赖氨酸特异性组蛋白去甲基化酶1(LSD1)和细胞周期素(cyclin-C1-2-like);qPCR结果显示dlo-miR167a、c、d的表达均呈上调趋势,dlo-miR167d、f在3个阶段的表达水平较低;FPKM值显示ARF6/8、BB在体胚发生早期的表达模式与dlo-miR167a、c、d趋于一致,与AIRP2呈负相关.本研究表明在体胚发生早期ARF6/8和BB可能不受龙眼miR167的靶向调控,miR167可能通过靶向AIRP2参与早期体胚发生的形态建成,提示龙眼miR167基因功能的协同性和独立性并存.(图9表3参54) 展开更多

关键词 龙眼 miR167家族 体胚发生早期 qPCR 靶基因 ARF6/8

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龙眼TCP家族全基因组鉴定与表达分析

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作者 蒋梦琦 薛晓东 +7 位作者 苏立遥 陈燕 张舒婷 李晓斐 王培育 张梓浩 赖钟雄 林玉玲 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第12期2481-2496,共16页

利用生物信息学方法对龙眼TCP(DlTCP)基因家族进行全基因组鉴定,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术分析龙眼TCP基因家族成员体胚发生早期表达模式及其对ABA和MeJA的响应模式。从龙眼基因组数据库中共鉴定获得20个龙眼TCP成员。这些DlTC... 利用生物信息学方法对龙眼TCP(DlTCP)基因家族进行全基因组鉴定,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术分析龙眼TCP基因家族成员体胚发生早期表达模式及其对ABA和MeJA的响应模式。从龙眼基因组数据库中共鉴定获得20个龙眼TCP成员。这些DlTCP蛋白包含169~540个不等的氨基酸残基,分子量介于39.6~57.2 kD之间,理论等电点介于5.90~9.45。亚细胞定位预测显示,18个成员在细胞核中。染色体定位显示,DlTCP分布在龙眼15条染色体中的11条染色体上;共线性分析发现有12个DlTCP基因参与片段复制事件。启动子顺式作用元件分析显示,DlTCP成员启动子序列上含有响应激素应答、调控生长发育的元件。系统进化分析可将DlTCP分为2类,均具有典型TCP结构域。体胚发生早期表达模式分析表明,DlTCP2/4a/4b/13/17/18/19/23均在胚性愈伤组织阶段高表达,DlTCP5b/DlTCP8在不完全胚性紧实结构阶段表达量较高,DlTCP20a在球形胚阶段高表达,表明DlTCP在体胚发生早期阶段的优先表达可能有助于该阶段的形态建成。经外源ABA诱导后4个DlTCP成员表达量显著下调,4个上调;MeJA诱导后,3个成员表达量显著下调,4个上调,说明DlTCP成员可以响应ABA和MeJA。 展开更多

关键词 龙眼 TCP转录因子 成员鉴定 ABA MEJA 实时荧光定量PCR

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