本研究从曼地亚红豆杉(Taxus x media)树皮内表皮分离得到一株产紫杉醇的内生真菌Z58,通过高效液相色谱法、质谱法和核磁共振波谱法对其紫杉醇提取物进行了分析.结果表明,内生真菌Z58的紫杉醇提取物具有和紫杉醇标准品相近的色谱特征峰...本研究从曼地亚红豆杉(Taxus x media)树皮内表皮分离得到一株产紫杉醇的内生真菌Z58,通过高效液相色谱法、质谱法和核磁共振波谱法对其紫杉醇提取物进行了分析.结果表明,内生真菌Z58的紫杉醇提取物具有和紫杉醇标准品相近的色谱特征峰,其保留时间为10.2 min;也与紫杉醇标准品具有相同的质谱特征峰((M+Na)+=876)和1H-NMR谱带.并通过形态学特征分析和18S rDNA序列分析,将内生真菌Z58初步鉴定为肉座菌属(Hypocrea sp.)真菌.肉座菌Z58的紫杉醇产量约为2.5~3.0μg/g(紫杉醇/菌丝干重),是一株具有潜在应用价值的产紫杉醇内生真菌.展开更多
过表达紫杉醇合成关键酶基因是提高红豆杉细胞紫杉醇产量的有效方法.本文通过构建C-l3苯丙素侧链CoA-乙酰转移酶(C-13 phenylpropanoid side chain-CoA acetyltransferase,BAPT)基因Bapt的表达载体p1303-SbaptN,采用根癌农杆菌介导法转...过表达紫杉醇合成关键酶基因是提高红豆杉细胞紫杉醇产量的有效方法.本文通过构建C-l3苯丙素侧链CoA-乙酰转移酶(C-13 phenylpropanoid side chain-CoA acetyltransferase,BAPT)基因Bapt的表达载体p1303-SbaptN,采用根癌农杆菌介导法转化中国红豆杉细胞,经潮霉素抗性筛选获得转基因细胞系.转基因细胞的PCR和Southern印迹分析结果表明,T-DNA及其包含的基因与宿主细胞染色体成功整合;Western印迹结果表明,转基因细胞中报告基因GusA-mgfp5正常表达;QRT-PCR结果显示,转基因细胞的Bapt mRNA表达量是未转化细胞的1.26倍;HPLC检测结果显示,转基因细胞的紫杉醇产量为37.4μg/g,是未转化细胞的1.87倍.本研究结果表明,过表达Bapt基因提高了中国红豆杉细胞的紫杉醇产量.展开更多