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蚀斑法测定呼吸道合胞病毒滴度的建立和验证
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作者 刘悦越 赵荣荣 +5 位作者 赵慧 李淑艳 英志芳 邵铭 王剑锋 李长贵 《山西医科大学学报》 CAS 2023年第11期1515-1519,共5页
目的建立蚀斑法用于呼吸道合胞病毒的病毒滴度测定,并进行验证。方法通过测定样品的病毒滴度,比较滴度结果,筛选最佳覆盖物、覆盖物浓度和病毒孵育时间,从而建立蚀斑法用于测定呼吸道合胞病毒滴度。根据国际人用药品注册技术协调会指导... 目的建立蚀斑法用于呼吸道合胞病毒的病毒滴度测定,并进行验证。方法通过测定样品的病毒滴度,比较滴度结果,筛选最佳覆盖物、覆盖物浓度和病毒孵育时间,从而建立蚀斑法用于测定呼吸道合胞病毒滴度。根据国际人用药品注册技术协调会指导原则和《中华人民共和国药典》要求,验证该方法的准确性、精密性、线性和耐用性。结果采用0.8%微晶纤维素作为覆盖物,病毒孵育2~3 h为建立蚀斑法的最优条件。该蚀斑法测定不同浓度样品病毒滴度的结果相对偏倚均小于10%;试验内和试验间精密性几何变异系数分别为11%和18%;本方法的线性斜率为1.004,相关系数为0.9991;本方法中固定细胞的时间0.5~24 h均适用,差异无统计学意义(F=1.767,P=0.2225)。结论建立的蚀斑法具有较好的准确性、精密性、线性和耐用性,适用于呼吸道合胞病毒的滴度测定。 展开更多
关键词 呼吸道合胞病毒 病毒滴度 蚀斑法 微晶纤维素 方法验证
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中国婴儿中脊灰母传抗体水平对两种疫苗免疫效果的影响 被引量:13
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作者 英志芳 王剑锋 +2 位作者 李艳萍 李荣成 李长贵 《微生物学免疫学进展》 2011年第1期7-9,共3页
为了了解2月龄婴儿中针对脊髓灰质炎病毒的中和抗体水平,并探讨母传抗体对脊髓灰质炎减毒活疫苗(OPV)和灭活疫苗(IPV)免疫效果的影响。对416名2月龄婴儿分别接种OPV和IPV,采集免疫前后血清,用微量中和法检测血清中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型脊髓灰质... 为了了解2月龄婴儿中针对脊髓灰质炎病毒的中和抗体水平,并探讨母传抗体对脊髓灰质炎减毒活疫苗(OPV)和灭活疫苗(IPV)免疫效果的影响。对416名2月龄婴儿分别接种OPV和IPV,采集免疫前后血清,用微量中和法检测血清中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型脊髓灰质炎病毒中和抗体滴度,评价抗体GMT水平及4倍增长情况。检测结果显示,2月龄婴儿母传抗体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型阳性率分别为45%、38.2%和17.5%,抗体GMT水平为9.0、8.1和5.2。经接种两组疫苗后,母传抗体阳性者与阴性者免后抗体GMT水平相比,OPV组无明显差异,IPV组阳性者略低于阴性者。在免前抗体滴度<1∶32人群中,OPV组免后抗体滴度4倍增长率及几何滴度增长倍数分别为:Ⅰ型93.6%、71.2;Ⅱ型98.2%、43.7;Ⅲ型91.7%、47.9;IPV组免后抗体滴度4倍增长率及几何滴度增长倍数分别为:Ⅰ型82%、9.4;Ⅱ型62.8%、5.1;Ⅲ型95.6%、11.7;在免前抗体滴度1∶32~1∶128人群中,OPV组Ⅰ型92.3%、23;Ⅱ型86.4%、13.9;Ⅲ型55.6%、4.1;IPV组Ⅰ型48%、2.5;Ⅱ型15%、0.9;Ⅲ型55.6%、2.7。目前中国2月龄婴儿免前脊灰抗体阳性率较高,尤其是Ⅰ、Ⅱ型。脊灰母传抗体对两种疫苗免疫效果有一定干扰,对IPV疫苗的影响较为明显。 展开更多
关键词 母传抗体 脊髓灰质炎减毒活疫苗 脊髓灰质炎灭活疫苗 免疫效果
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我国自行研制的冻干水痘减毒活疫苗的临床效果评价 被引量:20
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作者 周铁群 陈震 +19 位作者 王剑锋 英志芳 邱平 范行良 李娟 李长贵 方捍华 陈海平 李秀玲 谢芸 许丽锋 郭绍红 董春明 刘立新 罗耀兴 蔡汉港 张吉凯 徐宁 张铭驱 李建基 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2005年第4期342-345,共4页
目的考核和评价我国自行分离毒株研制的冻干水痘减毒活疫苗的安全性和免疫原性。方法采用随机、双盲、对照的原则进行设计,在2~6岁健康人群中进行开放式临床观察。结果试验疫苗共接种易感儿童738人,接种后的总体中强发热反应率为5.96%(... 目的考核和评价我国自行分离毒株研制的冻干水痘减毒活疫苗的安全性和免疫原性。方法采用随机、双盲、对照的原则进行设计,在2~6岁健康人群中进行开放式临床观察。结果试验疫苗共接种易感儿童738人,接种后的总体中强发热反应率为5.96%(44738),皮疹水痘样皮疹发生率为0.68%(5738);易感者接种39810PFU、2000PFU以及500PFU病毒量的疫苗后,抗体GMT分别为36.4、34.3和18.6;抗体阳转率分别为100%、98.77%和85.42%。结论我国自行研制的水痘疫苗具有较好的安全性和免疫原性。 展开更多
关键词 冻干水痘减毒活疫苗 安全性 免疫原性 中国 自主知识产权
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以重组人巨细胞病毒pp65制备的多克隆抗体建立检测感染性病毒颗粒方法 被引量:3
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作者 李长贵 王剑锋 +2 位作者 英志芳 周铁群 李娟 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第10期47-49,共3页
人巨细胞病毒(HCMV)活动性感染是造成器官移植失败的重要原因。建立灵敏、特异的检测方法可为及早发现感染、及时给予抗病毒治疗提供依据。以离子交换和分子筛方法纯化重组表达的HCMVpp65(rp65hp)抗原,经两步纯化后,rp65hp纯度达到95%... 人巨细胞病毒(HCMV)活动性感染是造成器官移植失败的重要原因。建立灵敏、特异的检测方法可为及早发现感染、及时给予抗病毒治疗提供依据。以离子交换和分子筛方法纯化重组表达的HCMVpp65(rp65hp)抗原,经两步纯化后,rp65hp纯度达到95%。免疫家兔制备的抗血清,ELISA抗体滴度高达1∶2560000;免疫印迹证明能与HCMVpp65抗原特异反应。将HCMV病毒感染细胞,以纯化的多克隆抗体建立了间接免疫荧光法,成功地检测到细胞中的病毒。因此,该方法为临床检测HCMV病毒活动性感染奠定了良好的基础。 展开更多
关键词 重组人巨细胞病毒pp65 制备方法 多克隆抗体 感染性病毒颗粒 检测方法 间接免疫荧光法
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两种方法检测人血清中抗水痘抗体的比较 被引量:2
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作者 周铁群 陈震 +4 位作者 英志芳 王剑锋 李娟 李秀玲 谢芸 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2005年第1期64-64,共1页
关键词 ELISA试剂盒 水痘 人血清 荧光抗体 糖蛋白E VZV 金标准 抗原免疫 筛选 抗体检测
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S/D法灭活血液制剂中脂包膜病毒效果验证的研究 被引量:10
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作者 王剑锋 英志芳 +1 位作者 李长贵 方捍华 《微生物学免疫学进展》 2008年第3期38-41,共4页
选用不同核酸的脂包膜病毒,其中RNA病毒为水疱性口炎病毒(VSV),DNA病毒为伪狂犬病毒(PRV),将两种指示病毒分别用于验证S/D法处理对纤维蛋白原、凝血酶原复合物、凝血因子Ⅷ、静注丙种球蛋白、免疫血浆等血液制剂的病毒灭活效果... 选用不同核酸的脂包膜病毒,其中RNA病毒为水疱性口炎病毒(VSV),DNA病毒为伪狂犬病毒(PRV),将两种指示病毒分别用于验证S/D法处理对纤维蛋白原、凝血酶原复合物、凝血因子Ⅷ、静注丙种球蛋白、免疫血浆等血液制剂的病毒灭活效果。结果该法对所有被处理的血液制剂中的PRV及VSV灭活能力分别为≥3.38-5.88和≥3.50-4.75logTCID50/0.1ml,表明S/D法对两种病毒核酸类型的脂包膜病毒有良好的灭活效果。 展开更多
关键词 脂包膜病毒S/D(有机溶剂/去污剂)法 血液制剂 病毒灭活
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低pH孵放法灭活静注人免疫球蛋白中脂包膜病毒效果验证的研究 被引量:7
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作者 王剑锋 英志芳 +1 位作者 李长贵 方捍华 《微生物学免疫学进展》 2009年第2期19-21,共3页
选用不同核酸类型的脂包膜病毒,其中RNA病毒为水疱性口炎病毒(VSV),DNA病毒为伪狂犬病毒(PRV),将两种指示病毒分别用于验证低pH孵放法对不同厂家生产的人血静脉注射用丙种球蛋白(IVIG)的病毒灭活效果。结果表明,液体IVIG的pH值为3.8~4... 选用不同核酸类型的脂包膜病毒,其中RNA病毒为水疱性口炎病毒(VSV),DNA病毒为伪狂犬病毒(PRV),将两种指示病毒分别用于验证低pH孵放法对不同厂家生产的人血静脉注射用丙种球蛋白(IVIG)的病毒灭活效果。结果表明,液体IVIG的pH值为3.8~4.4,在23~25℃环境中,孵放21天可灭活VSV和PRV,两种指示病毒的灭活效果分别为≥5.50~6.62和≥5.38~6.62logTCID50/0.1ml。因此,低pH孵放法是一种安全、有效且简便实用的灭活脂包膜病毒的方法。 展开更多
关键词 静注人免疫球蛋白(IVIG) 脂包膜病毒 低PH 病毒灭活
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辛酸盐灭活静注人免疫球蛋白中脂包膜病毒效果验证的研究 被引量:9
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作者 王剑锋 英志芳 李长贵 《微生物学免疫学进展》 2011年第2期38-40,共3页
选用不同核酸类型的脂包膜病毒,其中RNA病毒为水疱性口炎病毒(VSV),DNA病毒为伪狂犬病毒(PRV),将两种指示病毒分别用于验证一定浓度的辛酸盐对某一厂家生产的人血静脉注射用丙种球蛋白(IVIG)的病毒灭活效果。结果表明,液体IVIG在辛酸钠(... 选用不同核酸类型的脂包膜病毒,其中RNA病毒为水疱性口炎病毒(VSV),DNA病毒为伪狂犬病毒(PRV),将两种指示病毒分别用于验证一定浓度的辛酸盐对某一厂家生产的人血静脉注射用丙种球蛋白(IVIG)的病毒灭活效果。结果表明,液体IVIG在辛酸钠(0.7±0.2mmol/g蛋白)、pH(5.1±0.1)、29.5~30.5℃,孵放90min可灭活VSV和PRV,两种指示病毒的灭活效果分别为≥4.00~4.12和≥5.25~5.75log TCID50/0.1ml。因此,辛酸盐是一种安全、有效、快速的灭活脂包膜病毒的灭活剂。 展开更多
关键词 静注人免疫球蛋白(IVIG) 脂包膜病毒 辛酸盐 病毒灭活
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板层人工角膜辐照法病毒灭活验证方法的建立及灭活效果验证 被引量:4
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作者 王剑锋 英志芳 +1 位作者 徐康维 李长贵 《微生物学免疫学进展》 2018年第4期40-43,共4页
目的建立板层人工角膜钴-60照射病毒灭活验证方法,用该方法对脂包膜病毒灭活效果进行验证。方法以伪狂犬病毒(pseudorabies virus,PRV)为指示病毒,将干燥的板层人工角膜浸泡在高滴度病毒液中,在2~8℃浸泡5 h,经剪碎、研磨等步骤后4℃放... 目的建立板层人工角膜钴-60照射病毒灭活验证方法,用该方法对脂包膜病毒灭活效果进行验证。方法以伪狂犬病毒(pseudorabies virus,PRV)为指示病毒,将干燥的板层人工角膜浸泡在高滴度病毒液中,在2~8℃浸泡5 h,经剪碎、研磨等步骤后4℃放置12 h,确立角膜吸附和释放病毒的条件。之后,将吸附病毒并呈干燥状态的角膜以0、5、10、15、20、25 k Gy辐照剂量进行钴-60辐照,以确立的条件释放病毒并进行滴定,考察灭活效果。结果板层角膜在2~8℃浸泡5 h可吸附足量病毒;病毒滴度可达到4 lg值以上,满足病毒灭活验证的要求。样品经25 k Gy剂量钴-60照射后灭活PRV为2.75~3.25 lg TCID50/100μL,灭活后的样品在敏感细胞上盲传3代均未出现细胞病变。结论成功建立了板层人工角膜病毒灭活验证的方法,并验证采用钴-60辐照法对PRV有较好的灭活效果。 展开更多
关键词 板层人工角膜 伪狂犬病毒 辐照法 病毒灭活 验证试验
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冻干加热处理凝血因子类制剂的病毒灭活验证 被引量:3
10
作者 王剑锋 英志芳 +2 位作者 周铁群 邱平 陈震 《微生物学免疫学进展》 2005年第2期29-31,共3页
在病毒灭活验证过程中,比较了冻干后不同加热方法对凝血因子类制剂中伪狂犬病毒(PRV)的灭活效果,包括80℃干烤72h、100℃水浴加热30min以及100℃蒸汽加热30min方法。结果表明80℃干烤72h对制品中PRV灭活较彻底,另外两种方法对制品中PRV... 在病毒灭活验证过程中,比较了冻干后不同加热方法对凝血因子类制剂中伪狂犬病毒(PRV)的灭活效果,包括80℃干烤72h、100℃水浴加热30min以及100℃蒸汽加热30min方法。结果表明80℃干烤72h对制品中PRV灭活较彻底,另外两种方法对制品中PRV的灭活效果均不理想。 展开更多
关键词 凝血因子 病毒灭活 冻干 加热处理
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人巨细胞病毒IgM抗体国家参考品的研制 被引量:3
11
作者 范行良 英志芳 +2 位作者 李长贵 白东亭 王军志 《微生物学免疫学进展》 2012年第3期30-33,共4页
目的为了对人巨细胞病毒(Human cytomegalovirus,HCMV)IgM抗体检测试剂进行统一评价,研制HCMVIgM抗体国家参考品,用于控制试剂盒的质量。方法收集正常人与感染者的标本,采用多实验室联合标定的方法确认参考品的试验结果,并经一系列的破... 目的为了对人巨细胞病毒(Human cytomegalovirus,HCMV)IgM抗体检测试剂进行统一评价,研制HCMVIgM抗体国家参考品,用于控制试剂盒的质量。方法收集正常人与感染者的标本,采用多实验室联合标定的方法确认参考品的试验结果,并经一系列的破坏条件进行稳定性和均匀性考核。结果考核的敏感性和准确性符合国家参考品的要求。结论该参考品能用于临床检测试剂的质量控制。 展开更多
关键词 巨细胞病毒 国家参考品 质量控制 IGM
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应用复合增强剂扩增人巨细胞病毒pp65全基因 被引量:1
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作者 李长贵 王剑锋 +2 位作者 英志芳 范行良 周铁群 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 2004年第1期42-44,共3页
在PCR过程中 ,模板GC含量过高是一个不利因素。如果设计扩增片段较长 ,则进一步增加了PCR扩增的难度。解决这一问题对于以PCR成功获取富含GC的长基因有非常重要的意义。以人巨细胞病毒pp65全基因 (约 1 95 0bp ,GC %为 67%)为例 ,在PCR... 在PCR过程中 ,模板GC含量过高是一个不利因素。如果设计扩增片段较长 ,则进一步增加了PCR扩增的难度。解决这一问题对于以PCR成功获取富含GC的长基因有非常重要的意义。以人巨细胞病毒pp65全基因 (约 1 95 0bp ,GC %为 67%)为例 ,在PCR系统中测试不同添加剂(甘油、乙醇、DMSO、甜菜碱等 )及各种组合 ,摸索扩增目的基因的最佳条件。结果发现 :无或单一的添加剂都不能获得目的基因片段 ,只有当同时使用DMSO和甜菜碱 ,并在适当浓度时才能够获得特异产物。在PCR系统中包含复合增强剂能有助于高GC %、长基因片段的扩增 。 展开更多
关键词 高GC含量 复合增强剂 人巨细胞病毒PP65 T载体 引物设计
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荧光MAPREC分析Ⅰ型Sabin株脊髓灰质炎病毒突变率方法的建立和应用 被引量:1
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作者 徐康维 张平 +5 位作者 英志芳 魏文明 何蕊 王剑锋 赵慧 李长贵 《微生物学免疫学进展》 2017年第6期56-60,共5页
目的使用CY5荧光标记引物建立定量检测I型Sabin株脊髓灰质炎病毒480-A和525-C突变率的MAPREC。方法提取I型Sabin株脊髓灰质炎病毒样品RNA,反转录合成c DNA后,进行非对称PCR扩增以生成单链DNA,之后采用CY5荧光标记引物进行一步扩增反应... 目的使用CY5荧光标记引物建立定量检测I型Sabin株脊髓灰质炎病毒480-A和525-C突变率的MAPREC。方法提取I型Sabin株脊髓灰质炎病毒样品RNA,反转录合成c DNA后,进行非对称PCR扩增以生成单链DNA,之后采用CY5荧光标记引物进行一步扩增反应以合成双链产物,以DNA内切酶Dde I和Nci I酶切后电泳分离,获取荧光信号,计算样品的突变率。检测4个国际标准品(100%DNA突变标准品、IS DNA标准品、LMVR标准品和HMVR标准品)的突变率,重复5次,验证方法的准确性和精密度,并进行初步应用。结果使用CY5荧光标记引物,建立了定量检测I型Sabin株脊髓灰质炎病毒480-A和525-C突变率的MAPREC。100%DNA突变标准品、IS DNA标准品、LMVR标准品以及HMVR标准品的标示值分别为100.00%、2.00%、1.84%、2.56%,检测结果分别为95.09%、2.06%、1.45%、1.92%,各标准品的实验间CV值均<15%。I型Sabin株口服脊髓灰质炎减毒活疫苗工作种子、单次收获液和原液的突变率为1.05%~1.22%,批间一致性良好。结论初步建立了基于荧光素标记的MAPREC,可以代替同位素法进行I型Sabin株脊髓灰质炎病毒突变率的定量检测。 展开更多
关键词 聚合酶链式反应和限制性内切酶酶切技术作突变分析 脊髓灰质炎病毒 疫苗 荧光标记 突变率
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口服脊髓灰质炎疫苗效力标准品国际协作研究
14
作者 周铁群 王剑锋 英志芳 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2005年第5期394-397,共4页
目的评价第2代脊髓灰质炎疫苗效力国际标准品的适用性,并确定其标示滴度。方法由WHO参考实验室英国国家检定所(NIBSC)组织协作研究,并提供测定样本及单克隆抗体,共有13个实验室参加,各实验室分别采用单抗及内部参考品进行测定,结果递交N... 目的评价第2代脊髓灰质炎疫苗效力国际标准品的适用性,并确定其标示滴度。方法由WHO参考实验室英国国家检定所(NIBSC)组织协作研究,并提供测定样本及单克隆抗体,共有13个实验室参加,各实验室分别采用单抗及内部参考品进行测定,结果递交NIBSC进行总结。结果本实验室对各样本测定的结果与各实验室测定结果均值总体上是一致的,变异系数基本在5%以下。结论本实验室目前采用的病毒滴度测定方法及试剂的敏感性、标准化程度均与国际一致。 展开更多
关键词 口服脊髓灰质炎疫苗 效力测定 标准品 国际协作 疫苗效力 灰质 脊髓 测定结果 口服 病毒滴度
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SARS抗体酶联诊断试剂盒比较
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作者 范行良 英志芳 +4 位作者 王剑峰 易敏 李长贵 方捍华 周铁群 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期156-158,共3页
目的:对国内 SARS 抗体(IgG 和/或总抗体)检测试剂盒的质量进行比较和评价。方法:本文选用4种国内 SARS 抗体ELISA 检测试剂盒分别检测已知同样样品,并对结果进行比较。结果:4种试剂盒的阳性参考品符合率均为100%(18/18),阴性参考品符... 目的:对国内 SARS 抗体(IgG 和/或总抗体)检测试剂盒的质量进行比较和评价。方法:本文选用4种国内 SARS 抗体ELISA 检测试剂盒分别检测已知同样样品,并对结果进行比较。结果:4种试剂盒的阳性参考品符合率均为100%(18/18),阴性参考品符合率均为100%(20/20);3批 D 试剂盒的精密性(10/10)试验的 CV 值均在3%以下,A 试剂盒及3批 B 试剂盒的的 CV 值均在5%~10%之间,3批 C 试剂盒的 CV 值均在10%~15%之间;B、C、D3种试剂盒的灵敏度均达到5/7或以上,其中第1批 C 试剂盒及前2批 D 试剂盒灵敏度较高,均达到了7/7。结论:4种试剂盒均有较好的灵敏度、特异性及检出率。 展开更多
关键词 SARS 诊断试剂盒
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自动化液体处理工作站在脊髓灰质炎疫苗D抗原含量检测中的应用
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作者 刘悦越 赵荣荣 +3 位作者 英志芳 王剑锋 邵铭 李长贵 《山西医科大学学报》 CAS 2022年第11期1464-1468,共5页
目的用自动化液体处理工作站代替人工进行脊髓灰质炎疫苗的D抗原检测。方法用自动化液体处理工作站检测10批脊髓灰质炎疫苗的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型D抗原,通过与人工操作的检测结果比较分析其准确性;通过对6批疫苗的6次试验内和3次试验间平行检... 目的用自动化液体处理工作站代替人工进行脊髓灰质炎疫苗的D抗原检测。方法用自动化液体处理工作站检测10批脊髓灰质炎疫苗的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型D抗原,通过与人工操作的检测结果比较分析其准确性;通过对6批疫苗的6次试验内和3次试验间平行检测验证其精密性。结果工作站与人工操作的检测结果差异均无统计学意义(P>0.05),且工作站与人工操作的结果具有相关性(P<0.05),两种方法Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型D抗原检测结果的Pearson相关系数分别为0.7,0.7,0.9。对于工作站的试验内精密性,几何变异系数不高于8%;对于试验间精密性,几何变异系数不高于9%。结论自动化液体处理工作站操作的准确性和精密性良好,能够代替人工完成脊髓灰质炎疫苗D抗原含量检测。 展开更多
关键词 脊髓灰质炎病毒 D抗原 工作站 液体处理 自动化
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流感减毒活疫苗效力试验检测新方法的建立
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作者 赵慧 王剑锋 +3 位作者 英志芳 徐康维 李娟 李长贵 《微生物学免疫学进展》 2018年第6期16-19,共4页
目的建立基于NP蛋白检测的流感减毒活疫苗病毒滴度检测方法,并进行初步应用。方法对病毒接种方式、流感病毒感染MDCK细胞培养时间、一抗和酶标二抗的稀释度、封闭液等ELISA反应条件进行筛选优化。采用建立的方法检测3批流感减毒活疫苗... 目的建立基于NP蛋白检测的流感减毒活疫苗病毒滴度检测方法,并进行初步应用。方法对病毒接种方式、流感病毒感染MDCK细胞培养时间、一抗和酶标二抗的稀释度、封闭液等ELISA反应条件进行筛选优化。采用建立的方法检测3批流感减毒活疫苗原液和1批疫苗成品,并与鸡胚培养法检测结果进行比较。结果选择直接接种法作为接种方式,病毒感染细胞后培养48 h进行NP蛋白表达的检测; ELISA检测条件一抗稀释度为1∶4 000,酶标二抗稀释度为1∶4 000,2%牛血清白蛋白封闭2 h,检测结果 P/N值最大。用建立的方法检测流感减毒活疫苗原液及疫苗成品效力,与鸡胚培养法检测结果差异无统计学意义(P>0.05),具有较好的一致性。结论建立了基于NP蛋白检测的流感减毒活疫苗效力试验方法,可用于生产过程中流感减毒活疫苗原液和成品的检定。 展开更多
关键词 流感减毒活疫苗 效力试验 酶联免疫吸附试验 质量控制
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sIPV疫苗D抗原含量双抗体夹心ELISA检测方法的建立及验证
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作者 徐康维 朱文慧 +4 位作者 宋彦丽 英志芳 王剑锋 权娅茹 李长贵 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期1230-1234,1241,共6页
目的 建立牛多抗对兔多抗夹心ELISA方法 检测Sabin株脊灰病毒灭活疫苗(Sabin strain inactivated poliovirus Vaccine,sIPV)D抗原含量,并对建立的方法 进行验证。方法 分别采用Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型sIPV疫苗原液作为抗原制备兔多抗,并通过间接EL... 目的 建立牛多抗对兔多抗夹心ELISA方法 检测Sabin株脊灰病毒灭活疫苗(Sabin strain inactivated poliovirus Vaccine,sIPV)D抗原含量,并对建立的方法 进行验证。方法 分别采用Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型sIPV疫苗原液作为抗原制备兔多抗,并通过间接ELISA法检测其效价及特异性。以牛多抗为包被抗体、兔多抗为显示抗体建立检测D抗原含量的双抗体夹心ELISA方法,并对方法 的准确度、精密度及D抗原专属性进行验证。用建立的方法 检测国内5家企业sIPV疫苗样品。结果 制备获得型别特异性好、效价高的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型兔多抗,并成功建立了双抗体夹心ELISA方法。采用四参数拟合,3型别标准曲线均具有良好的线性关系,R^(2)均>0.99。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型各试验加标回收率均为80%~120%,各浓度平均回收率分别为98.11%、97.41%、98.66%;重复性与中间精密度CV均<10%;能够对D/C抗原进行区分。建立的方法 对5家企业生产的sIPV疫苗均能够进行D抗原定量检测。结论 成功建立了检测sIPV疫苗D抗原含量的双抗体夹心ELISA方法,该方法 准确度、精密度良好,具有一定的D抗原特异性,能够对不同厂家生产的疫苗进行检测。 展开更多
关键词 Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗 D抗原 酶联免疫吸附试验 抗体
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兔抗新型冠状病毒血清制备中佐剂对抗体效价的影响
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作者 胡云光 英志芳 +6 位作者 张玉平 殷安国 李亚东 常亚军 段男 易力 宋杰 《国际生物制品学杂志》 CAS 2023年第3期146-150,共5页
目的制备高效价兔抗新型冠状病毒血清并研究佐剂对抗体效价的影响.方法将9只新西兰兔随机分为a、b、c组,分别皮下注射新型冠状病毒混合弗氏佐剂、氢氧化铝佐剂或单磷酰脂A佐剂进行免疫,0、28、42 d各免疫1次.每次免疫前及初次免疫后14 ... 目的制备高效价兔抗新型冠状病毒血清并研究佐剂对抗体效价的影响.方法将9只新西兰兔随机分为a、b、c组,分别皮下注射新型冠状病毒混合弗氏佐剂、氢氧化铝佐剂或单磷酰脂A佐剂进行免疫,0、28、42 d各免疫1次.每次免疫前及初次免疫后14 d于耳中央动脉采血,初次免疫后49 d经颈动脉采血,分离血清,进行中和抗体效价检测以及中和试验.结果经过整个免疫程序后,a、b、c组均能产生高效价抗血清,且a组(6144.00)最终产生的血清中和抗体效价高于b组(4437.33)和c组(3754.67);3组血清均可在中和试验中有效中和KMS2株新型冠状病毒,中和后培养细胞均未发生病变.结论3种不同佐剂疫苗在新西兰兔体内均可产生高水平的免疫应答. 展开更多
关键词 新型冠状病毒 抗血清 佐剂 抗体效价
原文传递
Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗D抗原国家标准品的建立 被引量:8
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作者 英志芳 江征 +4 位作者 蔡玮 周健 王剑锋 徐康维 李长贵 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2018年第1期52-54,58,共4页
目的制备Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗D抗原国家标准品,并进行协作标定及稳定性检测。方法委托中国医学科学院医学生物学研究所按照国家批准工艺制备分装三价候选国家标准品,并考察其均匀性;组织5家实验室采用统一的D抗原ELISA检测方法对... 目的制备Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗D抗原国家标准品,并进行协作标定及稳定性检测。方法委托中国医学科学院医学生物学研究所按照国家批准工艺制备分装三价候选国家标准品,并考察其均匀性;组织5家实验室采用统一的D抗原ELISA检测方法对候选标准品协作标定,确定D抗原标示值,并对其稳定性进行初步检测。结果候选标准品分装精度变异系数(CV)为0.21%;Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型CV值分别为7.39%、6.21%、7.75%;Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型在不同实验室间D抗原含量的CV值分别为4.03%~5.90%、3.48%~4.00%、3.03%~4.53%,抗原含量均一性良好;确定Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型最终标准品效价分别为180、191、243 DU/m L。将标准品于4及-20℃放置4个月,3个血清型的D抗原含量均未发生较大变化;25℃放置约7周时,各血清型D抗原含量才出现下降趋势;37℃放置1周时开始下降,尤以Ⅰ型最为明显。结论制备的候选标准品满足国家生物标准物质的要求,可应用于Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗体外效力检测。 展开更多
关键词 Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗 D抗原 标准品
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