转录调节蛋白TP 53(Tumor protein 53)调控多种重要生物学过程,包括细胞周期、DNA损伤、修复和细胞凋亡等.在各种应激条件下tp53会被激活并发挥与应激相关的调控作用,但tp53在鱼类低温应激下的作用尚不明了.本文首先检测在低温应激条件...转录调节蛋白TP 53(Tumor protein 53)调控多种重要生物学过程,包括细胞周期、DNA损伤、修复和细胞凋亡等.在各种应激条件下tp53会被激活并发挥与应激相关的调控作用,但tp53在鱼类低温应激下的作用尚不明了.本文首先检测在低温应激条件下斑马鱼(Danio rerio)中tp53的表达变化,然后利用tp53^(-/-)斑马鱼敲除模型研究了敲除tp53对斑马鱼低温耐受能力和运动的影响.RT-qPCR结果显示:在8℃低温条件下野生型斑马鱼全鱼和鳃组织中tp53的mRNA水平显著升高.低温耐受实验显示:8℃低温下tp53^(-/-)斑马鱼的耐受能力增强,半数致死时间(lethal time to 50%mortality, LT50)显著高于WT(Wild type)对照组(P<0.000 1).运动行为学实验发现:与28℃相比,18℃低温下WT和tp53^(-/-)斑马鱼的移动距离、平均速度和活跃度均显著降低(P<0.000 1);同时发现在28℃和18℃条件下,tp53^(-/-)斑马鱼的移动距离、平均速度和活跃度均显著高于WT组.研究结果说明tp53参与斑马鱼的低温响应过程,敲除tp53后斑马鱼的耐寒能力与运动能力增强.本文为鱼类的低温耐受机制和运动行为学研究提供了新思路.展开更多
为了探究Sdf1-Cxcr4信号在斑马鱼(Danio rerio)后侧线系统(Posterior lateral line system,PLLs)发育中的作用,本研究首先通过原位杂交发现斑马鱼cxcr4b在迁移的侧线原基-Ⅰ和原基-Ⅱ中表达,sdf1a在原基迁移路径上表达。进一步构建了由...为了探究Sdf1-Cxcr4信号在斑马鱼(Danio rerio)后侧线系统(Posterior lateral line system,PLLs)发育中的作用,本研究首先通过原位杂交发现斑马鱼cxcr4b在迁移的侧线原基-Ⅰ和原基-Ⅱ中表达,sdf1a在原基迁移路径上表达。进一步构建了由热激启动子控制的cxcr7b过表达转基因斑马鱼,在不同时间点过表达cxcr7b抑制Sdf1-Cxcr4信号。结果表明:相较于野生型斑马鱼,过表达cxcr7b的斑马鱼的原基-Ⅰ和原基-Ⅱ的迁移明显减慢。但体侧中线神经丘的腹部迁移、间生和针脚神经丘的形成不受过表达cxcr7b的影响。本研究为理解鱼类侧线系统发育调控和多样性产生奠定基础。展开更多
Six基因家族进化高度保守,在脊椎动物个体发育中起着重要作用。但目前对其调控机制尚不完全清楚。在UCSC (The University of California Santa Cruz) Genome Browser的斑马鱼基因组数据库中发现, Six2a-Six3a基因簇周围存在一条长链非...Six基因家族进化高度保守,在脊椎动物个体发育中起着重要作用。但目前对其调控机制尚不完全清楚。在UCSC (The University of California Santa Cruz) Genome Browser的斑马鱼基因组数据库中发现, Six2a-Six3a基因簇周围存在一条长链非编码RNA——Six2a-OT。首先,利用反转录PCR (RT-PCR)结合测序证实了该RNA确实存在。然后,利用荧光半定量PCR (qPCR)和整胚原位杂交(whole-mount in situ hybridization, WISH)确定了其特异性的表达模式:Six2a-OT在卵巢中的表达远高于精巢;在受精卵和早期原肠胚中高表达,随后显著下降;受精后48 h (48 hpf)集中表达于耳囊(otic vesicle)、躯干中线(trunk midline)和鳃弓(branchial archs)。随后,进一步利用反义吗啡啉(morpholino)特异性阻断Six2a-OT剪接,观察到63%的48 hpf胚胎表现出躯干变短、侧弯,或心包积水,同时Six2a和Six3a的表达显著下降。以上结果表明:Six2a-OT作为母源性因子通过调节Six2a和Six3a的表达参与斑马鱼胚胎早期发育。这为揭示Six基因簇的表达调控机制提供了重要依据。展开更多
文摘转录调节蛋白TP 53(Tumor protein 53)调控多种重要生物学过程,包括细胞周期、DNA损伤、修复和细胞凋亡等.在各种应激条件下tp53会被激活并发挥与应激相关的调控作用,但tp53在鱼类低温应激下的作用尚不明了.本文首先检测在低温应激条件下斑马鱼(Danio rerio)中tp53的表达变化,然后利用tp53^(-/-)斑马鱼敲除模型研究了敲除tp53对斑马鱼低温耐受能力和运动的影响.RT-qPCR结果显示:在8℃低温条件下野生型斑马鱼全鱼和鳃组织中tp53的mRNA水平显著升高.低温耐受实验显示:8℃低温下tp53^(-/-)斑马鱼的耐受能力增强,半数致死时间(lethal time to 50%mortality, LT50)显著高于WT(Wild type)对照组(P<0.000 1).运动行为学实验发现:与28℃相比,18℃低温下WT和tp53^(-/-)斑马鱼的移动距离、平均速度和活跃度均显著降低(P<0.000 1);同时发现在28℃和18℃条件下,tp53^(-/-)斑马鱼的移动距离、平均速度和活跃度均显著高于WT组.研究结果说明tp53参与斑马鱼的低温响应过程,敲除tp53后斑马鱼的耐寒能力与运动能力增强.本文为鱼类的低温耐受机制和运动行为学研究提供了新思路.
文摘为了探究Sdf1-Cxcr4信号在斑马鱼(Danio rerio)后侧线系统(Posterior lateral line system,PLLs)发育中的作用,本研究首先通过原位杂交发现斑马鱼cxcr4b在迁移的侧线原基-Ⅰ和原基-Ⅱ中表达,sdf1a在原基迁移路径上表达。进一步构建了由热激启动子控制的cxcr7b过表达转基因斑马鱼,在不同时间点过表达cxcr7b抑制Sdf1-Cxcr4信号。结果表明:相较于野生型斑马鱼,过表达cxcr7b的斑马鱼的原基-Ⅰ和原基-Ⅱ的迁移明显减慢。但体侧中线神经丘的腹部迁移、间生和针脚神经丘的形成不受过表达cxcr7b的影响。本研究为理解鱼类侧线系统发育调控和多样性产生奠定基础。
文摘Six基因家族进化高度保守,在脊椎动物个体发育中起着重要作用。但目前对其调控机制尚不完全清楚。在UCSC (The University of California Santa Cruz) Genome Browser的斑马鱼基因组数据库中发现, Six2a-Six3a基因簇周围存在一条长链非编码RNA——Six2a-OT。首先,利用反转录PCR (RT-PCR)结合测序证实了该RNA确实存在。然后,利用荧光半定量PCR (qPCR)和整胚原位杂交(whole-mount in situ hybridization, WISH)确定了其特异性的表达模式:Six2a-OT在卵巢中的表达远高于精巢;在受精卵和早期原肠胚中高表达,随后显著下降;受精后48 h (48 hpf)集中表达于耳囊(otic vesicle)、躯干中线(trunk midline)和鳃弓(branchial archs)。随后,进一步利用反义吗啡啉(morpholino)特异性阻断Six2a-OT剪接,观察到63%的48 hpf胚胎表现出躯干变短、侧弯,或心包积水,同时Six2a和Six3a的表达显著下降。以上结果表明:Six2a-OT作为母源性因子通过调节Six2a和Six3a的表达参与斑马鱼胚胎早期发育。这为揭示Six基因簇的表达调控机制提供了重要依据。
