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琼枝白化特征及其附生菌群多样性分析
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作者 马艺丹 唐磊 +4 位作者 王一帆 张帅 王振东 茅云翔 莫照兰 《中国海洋大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期52-62,共11页
2021-2022年,海南昌江养殖的琼枝(Betaphycus gelatinae)白化现象频发,造成了一定的经济损失,影响了海洋生态环境。为探究白化琼枝的特征和附生菌群落结构的差异,本研究分析了不同状态琼枝的形态差异;测定了色素含量、光合生理、生理生... 2021-2022年,海南昌江养殖的琼枝(Betaphycus gelatinae)白化现象频发,造成了一定的经济损失,影响了海洋生态环境。为探究白化琼枝的特征和附生菌群落结构的差异,本研究分析了不同状态琼枝的形态差异;测定了色素含量、光合生理、生理生化等指标;分离、鉴定了不同状态琼枝表面的可培养附生细菌,同时采用16S rRNA高通量测序技术分析了健康琼枝(BgR)和白化琼枝(BgW)表面附生细菌的α多样性、β多样性以及菌群群落结构组成。研究显示,白化琼枝藻体的皮层组织结构遭到破坏,色素含量、最大光合效率(QY_max)显著降低,活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、脯氨酸(Pro)含量显著降低(p<0.05);BgW的可培养附生细菌数量(2.76×10^(7) cfu/g)显著高于BgR(3.3×10^(4) cfu/g),BgR中可培养附生细菌优势菌为鲁杰氏菌属(Ruegeria),BgW中为Yoonia属;高通量测序结果显示,两组样品附生菌群的α多样性指数无显著差异,但BgW的Ace、Chao、Simpson指数均有所升高,相似性分析(ANOSIM)表明,BgR和BgW表面附生菌群之间存在显著差异,比对注释结果共识别出253个OTUs,无色杆菌属(Achromobacter)、琼脂小杆菌属(Agaribacterium)、Hirschia属、Mesoflavibacter属和Aquimarina属是BgR和BgW之间相对丰度差异最显著的细菌类群(p<0.001);BgR的优势菌群为无色杆菌属,BgW的优势菌群为琼脂小杆菌属。本研究首次报道了白化琼枝的特征及表面附生菌群的变化,为进一步探究琼枝白化的原因奠定了基础。 展开更多
关键词 琼枝 白化 附生细菌 多样性 生理生化 病理特征
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多纹钱蝶鱼源海豚链球菌的分离鉴定及灭活疫苗的免疫效果
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作者 尚忠 唐磊 +3 位作者 王连慧 黄海 茅云翔 莫照兰 《中国海洋大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期38-50,共13页
为探究养殖的多纹钱蝶鱼(Selenotoca multifasciata)病害频发的原因,建立有效的病害防控方法,对暴发于海南养殖场的多纹钱蝶鱼病害开展调查并进行灭活疫苗的研制及免疫保护效果评估。分离到2株病原菌LSSM和DFSM,经形态学和16S rDNA序列... 为探究养殖的多纹钱蝶鱼(Selenotoca multifasciata)病害频发的原因,建立有效的病害防控方法,对暴发于海南养殖场的多纹钱蝶鱼病害开展调查并进行灭活疫苗的研制及免疫保护效果评估。分离到2株病原菌LSSM和DFSM,经形态学和16S rDNA序列分析,将病原鉴定为海豚链球菌(Streptococcus iniae)。将这2株菌与实验室收集保藏的2株鱼源海豚链球菌(菌株GXTO和GXAS)进行了血清型鉴定和耐药性、致病性分析,制备了灭活疫苗并评价了疫苗的免疫保护效果。研究表明:4株海豚链球菌鉴定为血清Ⅰ型。所有菌株均对青霉素类、头孢类、四环素等23种抗生素高度敏感、对丁胺卡那耐药,其中海南株LSSM、DFSM对庆大霉素和卡那霉素抗生素耐药,广西株GXTO和GXAS对庆大霉素和卡那霉素敏感。DFSM、GXTO和LSSM对多纹钱蝶鱼的半数致死量(LD_(50))分别为7.20×10^(2)、2.72×10^(3)和3.40×10^(6) CFU/尾,GXAS未显示毒力。分别制备3株毒株(DFSM、GXTO和LSSM)的灭活疫苗,通过腹腔注射途径免疫多纹钱蝶鱼,各组免疫鱼在同源菌株攻毒后,获得的免疫保护率分别为84.6%~85.7%、69.2%~71.4%和33.3%~40.0%;此外,DFSM免疫鱼在异源毒株LSSM和GXTO攻毒后,获得的交叉免疫保护率分别为86.7%和100%。本研究确定了海豚链球菌是海南养殖的多纹钱蝶鱼病害频发的病原,使用DFSM株制备的海豚链球菌灭活疫苗对多纹钱蝶鱼有良好的免疫保护效果。 展开更多
关键词 多纹钱蝶鱼 海豚链球菌 灭活疫苗 分离鉴定 半数致死量 相对存活率 交叉免疫
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建立螺旋藻转基因体系初报 被引量:9
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作者 茅云翔 王高歌 +3 位作者 张宝红 杨官品 隋正红 张学成 《中国海洋大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 2000年第z1期-,共6页
从钝顶螺旋藻单细胞克隆的制备、重组平台的 克隆、同源重组表达质粒的构建、质粒的电激转化和报告基因的表达等方面对螺旋藻转基因 表达系统进行了研究,初步建立起螺旋藻转基因体系。用次氯酸钠溶液处理获得无菌培养系 ;用钠、钙离... 从钝顶螺旋藻单细胞克隆的制备、重组平台的 克隆、同源重组表达质粒的构建、质粒的电激转化和报告基因的表达等方面对螺旋藻转基因 表达系统进行了研究,初步建立起螺旋藻转基因体系。用次氯酸钠溶液处理获得无菌培养系 ;用钠、钙离子混合液处理,获得了可再生的螺旋藻单细胞。用含EDTA的培养基预培养和用 培养基洗涤可分别去除胞外核酸酶活性和抑制胞内核酸酶活性。以氯霉素乙酰转移酶基因替 换大肠杆菌表达质粒pBV220的抗性选择标记,同时插入系列同源重组片段和萤火虫荧光素酶 基因,构建了同源重组表达载体pBVCS01-04L。电激转化螺旋藻S6-4品系单 细胞,获得了具有稳定氯霉素抗性的培养系,并用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳证实了报告基 因的表达。 展开更多
关键词 螺旋藻 重组质粒 同源重组 表达
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16SrRNA基因与16S-23SrRNA转录单元内间隔区序列分析及其在节旋藻和螺旋藻分类鉴定中的应用 被引量:7
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作者 茅云翔 杨官品 +1 位作者 张宝红 张学成 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2001年第6期12-18,共7页
测定了节旋藻属 3个品系和螺旋藻属 1个品系的全长 1 6SrRNA基因和 1 6S 2 3SrRNA转录单元内间隔区序列 (ITS) ,分析了已知的节旋藻、螺旋藻和相关品系的相应序列的同源性 ,构建了系统发生树 ,并评价了这两段DNA序列在节旋藻、螺旋藻种... 测定了节旋藻属 3个品系和螺旋藻属 1个品系的全长 1 6SrRNA基因和 1 6S 2 3SrRNA转录单元内间隔区序列 (ITS) ,分析了已知的节旋藻、螺旋藻和相关品系的相应序列的同源性 ,构建了系统发生树 ,并评价了这两段DNA序列在节旋藻、螺旋藻种属分类和种质鉴定中的意义。结果表明 :( 1 ) 1 6SrRNA基因序列和ITS序列均可用于节旋藻属和螺旋藻属的属间分类 ,以两序列为基础的系统学分析结果一致 ;( 2 )ITS序列变异程度高于 1 6SrDNA序列 ,适用于节旋藻和螺旋藻属内品系或种质鉴定 ;( 3)节旋藻属可明确界定 ,1 6SrRNA基因序列相似性大于 98% ,ITS序列相似性大于 88% ;( 4 )螺旋藻属某些品系间 1 6SrDNA序列和ITS序列相似性较低 ,与不同属间的序列相似性程度为同一水平。 展开更多
关键词 16SRRNA基因 16S-23SrRNA转录单元内间隔区 聚类分析 节旋藻属 螺旋藻属 鉴定 养殖 形态学分类
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节旋藻(螺旋藻)高分子量DNA的两种制备方法 被引量:7
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作者 茅云翔 张宝红 +1 位作者 杨官品 张学成 《海洋科学》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期32-36,共5页
DNA的简便高效制备方法是研究基因结构、功能及开展其它各项研究的基础。首次报道了针对节旋藻的结构和组成特性而建立的制备节旋藻高分子量DNA的两种方法。其中第一个方法是常规方法 ,可大量提取纯度较高、分子量达50kb的节旋藻DNA ,... DNA的简便高效制备方法是研究基因结构、功能及开展其它各项研究的基础。首次报道了针对节旋藻的结构和组成特性而建立的制备节旋藻高分子量DNA的两种方法。其中第一个方法是常规方法 ,可大量提取纯度较高、分子量达50kb的节旋藻DNA ,可用于构建节旋藻质粒文库、Southern杂交和PCR操作等 ;第2种方法是用脉冲电场凝胶电泳分离DNA片段 ,制备的DNA片段达数百kb ,可用于构建节旋藻噬菌体文库、粘粒文库、BAC文库等 ,从而为构建节旋藻物理图谱 ,定位克隆基因奠定基础。 展开更多
关键词 节旋藻 螺旋藻 高分子量DNA 制备方法 脉冲场凝胶电泳
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极大节旋藻(Arthrospiramaxima)高分子量基因组文库构建及其应用 被引量:4
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作者 茅云翔 凌娜 +2 位作者 王广策 隋正红 张学成 《高技术通讯》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期191-196,共6页
构建了极大节旋藻fosmid文库。该文库含有4300个克隆,重组率是100%,插入片段集中在30~36kh之间,平均为33kb,覆盖率为节旋藻基因组的25.8倍。随机挑选100个克隆进行双末端测序,得到110个序列,经生物信息学分析筛查到67条功能基... 构建了极大节旋藻fosmid文库。该文库含有4300个克隆,重组率是100%,插入片段集中在30~36kh之间,平均为33kb,覆盖率为节旋藻基因组的25.8倍。随机挑选100个克隆进行双末端测序,得到110个序列,经生物信息学分析筛查到67条功能基因序列。选取了14对特异的末端序列作为序列标签位点并设计引物,采用STS-PCR反应池法通过多轮筛选,得到127个阳性克隆,按照相互位置关系,绘制了4个连续的克隆重叠群。该研究为深入了解极大节旋藻分子遗传特性和绘制物理图谱奠定了基础。 展开更多
关键词 极大节旋藻 FOSMID文库 序列标签位点(SIS) 功能基因 重叠群 物理图谱
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条斑紫菜基因组Fosmid文库构建 被引量:3
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作者 茅云翔 崔菁菁 孔凡娜 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期396-402,共7页
高分子量基因组文库是开展条斑紫菜基因组学研究的必备工具。构建了由23 040个Fosmid克隆组成的条斑紫菜孢子体无偏倚基因组文库。检测分析表明:文库克隆重组率为100%;插入DNA片段长度为28-40 kb,平均长度为35 kb,文库覆盖率约为条... 高分子量基因组文库是开展条斑紫菜基因组学研究的必备工具。构建了由23 040个Fosmid克隆组成的条斑紫菜孢子体无偏倚基因组文库。检测分析表明:文库克隆重组率为100%;插入DNA片段长度为28-40 kb,平均长度为35 kb,文库覆盖率约为条斑紫菜基因组的2.78倍;从超级池中筛查条斑紫菜18S rRNA、atpA、h2A、rbcL基因,至少能得到一个阳性克隆,印证了计算所推测的文库覆盖率;随机选取6个Fosmid克隆经100代传代后插入DNA片段未发生丢失或长度变化,表明克隆传代的稳定性。该文库的构建为开展条斑紫菜基因组特性分析和基因克隆奠定了基础。 展开更多
关键词 条斑紫菜 FOSMID文库 基因克隆 基因组学
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红藻DNA条形码分析技术研究进展 被引量:3
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作者 茅云翔 吴菲菲 杜国英 《中国海洋大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期48-53,共6页
DNA条形码是指利用一段相对较短的标准DNA片段,对物种进行识别和鉴定。目前该技术在动物、植物物种鉴定领域已经得到了广泛的研究和应用。在藻类的研究中,尚未确定一条统一的标准条形码基因,现阶段都是使用2条或2条以上基因序列来完成... DNA条形码是指利用一段相对较短的标准DNA片段,对物种进行识别和鉴定。目前该技术在动物、植物物种鉴定领域已经得到了广泛的研究和应用。在藻类的研究中,尚未确定一条统一的标准条形码基因,现阶段都是使用2条或2条以上基因序列来完成物种鉴定。对于形态多样、种类繁多的海洋红藻,常用的DNA条形码基因有COI基因(Partial cytochrome c oxidase I gene)、UPA基因(Partial 23SrRNA gene,universal plastid amplicon)、LSU基因(Partial 28SrRNA gene)和rbcL基因(The large subunit of ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase)等,这些基因中2个或3个基因的互补运用准确有效地提高了红藻的鉴定准确率,尤其是COI基因的种间差异大足够区分相近物种。本文在概述条形码的原理及其标准的基础上,阐述了红藻DNA条形码鉴定研究的新进展以及常用几种基因片段的优缺点,并对条形码在红藻鉴定中存在的问题进行了分析,对其应用前景进行了展望。 展开更多
关键词 DNA条形码 红藻 COI基因 藻类
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养殖牙鲆鱼苗腹水症病原菌的鉴定及系统发育学分析 被引量:52
9
作者 莫照兰 茅云翔 +3 位作者 陈师勇 张振冬 徐永立 张培军 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期131-141,共11页
从患腹水症养殖牙鲆鱼苗分离到一株细菌B1 7,人工感染实验证实其具有致病性。用Biolog GN细菌鉴定系统对B1 7进行测试 ,发现其与参考菌株的相似性较低 ,不能进行鉴定。常规生理生化测试表明 ,B1 7具有弧菌属的特征 ,其表型特征与Vibrios... 从患腹水症养殖牙鲆鱼苗分离到一株细菌B1 7,人工感染实验证实其具有致病性。用Biolog GN细菌鉴定系统对B1 7进行测试 ,发现其与参考菌株的相似性较低 ,不能进行鉴定。常规生理生化测试表明 ,B1 7具有弧菌属的特征 ,其表型特征与Vibriosplendidus非常相似。为了进一步明确菌株B1 7的分类学地位 ,测定了其 1 6SrRNA基因序列 ,分析了相关细菌相应序列的同源性 ,构建了系统发生树 ,结果表明菌株B1 7与V .splendidus的亲缘关系最近。综合上述结果 ,菌株B1 7可鉴定为V .splendidus。 展开更多
关键词 牙鲆 腹水症 16SRRNA基因 系统发育学分析 Vibriosplendidus
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一株牙鲆皮肤溃烂症病原菌的鉴定 被引量:48
10
作者 莫照兰 茅云翔 +1 位作者 陈师勇 张培军 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期263-269,共7页
从山东荣成养鱼场发病牙鲆分离到一株病原菌M3 ,革兰氏阴性 ,杆状 ,能运动 ,菌落半透明 ,用BIOLOG细菌鉴定系统不能鉴定。通过 1 6SrDNA序列分析和同源性检索发现M3菌株与弧菌属的同源性较高 ,为 94%~ 98%。系统发育学分析表明菌株M3... 从山东荣成养鱼场发病牙鲆分离到一株病原菌M3 ,革兰氏阴性 ,杆状 ,能运动 ,菌落半透明 ,用BIOLOG细菌鉴定系统不能鉴定。通过 1 6SrDNA序列分析和同源性检索发现M3菌株与弧菌属的同源性较高 ,为 94%~ 98%。系统发育学分析表明菌株M3与鳗弧菌关系最近 ,相似性为 99 6 % ,其生化性状也和鳗弧菌的特征相似 ,故可把M3定为鳗弧菌 (Vibrioan guillarum)。 展开更多
关键词 牙鲆 皮肤溃烂症 病原菌 鉴定 鳗弧菌 16S RDNA 系统发育
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一株牙鲆出血症病原菌的分子生物学鉴定 被引量:28
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作者 莫照兰 茅云翔 +2 位作者 陈师勇 张振冬 张培军 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2001年第12期12-17,共6页
从患出血症养殖牙鲆分离到一株病原菌M 4 ,革兰氏阴性 ,杆状 ,有极生和侧生鞭毛 ,能运动 ,菌落半透明。进行了常规生理生化和BIOLOG GN细菌鉴定系统测试 ,结果表明菌株M 4与V .carchariae的表型特征非常相似。为了进一步确定M 4的分类... 从患出血症养殖牙鲆分离到一株病原菌M 4 ,革兰氏阴性 ,杆状 ,有极生和侧生鞭毛 ,能运动 ,菌落半透明。进行了常规生理生化和BIOLOG GN细菌鉴定系统测试 ,结果表明菌株M 4与V .carchariae的表型特征非常相似。为了进一步确定M 4的分类学地位 ,测定了其 16SrRNA基因序列 ,分析了相关细菌相应序列的同源性 ,构建了系统发生树 ,结果表明菌株M 4与V .carchariae的亲缘关系最近。综合上述结果 ,菌株M 4可鉴定为Vibirocarchariae。 展开更多
关键词 牙PING 16SrRNA基因序列 系统发育学分析 鉴定 分子生物学 出血症 病原菌M4 Vibiro carchariae
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温度、盐度及光照强度对海链藻(Thalassiosira sp.)生长的影响 被引量:37
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作者 朱明 张学成 +3 位作者 茅云翔 阎斌伦 滕亚娟 陆正和 《海洋科学》 CAS CSCD 北大核心 2003年第12期58-61,共4页
报道了温度、盐度、光照对海洋硅藻海链藻生长的影响。结果表明 ,海链藻的适应温度范围比较广 ,从9~27℃都可维持正常生长 ,15~21℃为其适温范围 ;在盐度15~35范围内 ,盐度对海链藻的影响不大 ,在盐度为20时 ,海链藻获得最大的生长率... 报道了温度、盐度、光照对海洋硅藻海链藻生长的影响。结果表明 ,海链藻的适应温度范围比较广 ,从9~27℃都可维持正常生长 ,15~21℃为其适温范围 ;在盐度15~35范围内 ,盐度对海链藻的影响不大 ,在盐度为20时 ,海链藻获得最大的生长率;此外 ,海链藻具有广泛的光适应性 ,在7.5~90μmol/(m2·s)的光照范围内均可正常生长。 展开更多
关键词 海链藻 生长率 温度 盐度 光照强度
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几种江蓠属海藻的ISSR标记分析 被引量:22
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作者 孙雪 张学成 +4 位作者 茅云翔 刘金姐 隋正红 秦松 费修绠 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2003年第9期89-93,共5页
用ISSR标记对几种江蓠属海藻进行了遗传多样性的研究。所用的7种实验材料包括4株龙须菜(其中3株分别来自中国青岛、委内瑞拉和南非,及1株青岛产龙须菜的高温选育种)和细基江蓠繁枝变型、真江蓠、芋根江蓠。用9条ISSR引物进行筛选,有6条... 用ISSR标记对几种江蓠属海藻进行了遗传多样性的研究。所用的7种实验材料包括4株龙须菜(其中3株分别来自中国青岛、委内瑞拉和南非,及1株青岛产龙须菜的高温选育种)和细基江蓠繁枝变型、真江蓠、芋根江蓠。用9条ISSR引物进行筛选,有6条可扩增出清晰可辨条带。这6条引物在7种材料中共扩增出151条带,其中117条(77.48%)表现出多态性。根据Nei等的遗传相似性系数(S)对7种材料进行分析,结果显示青岛产龙须菜与其选育种的相似性最高(S为0.939)。在3株不同产地龙须菜中,青岛龙须菜与南非龙须菜的遗传距离最近(S为0.643),委内瑞拉龙须菜与前两者的S分别为0.167和0.192,因此初步推断委内瑞拉龙须菜不属于龙须菜种。包括龙须菜(产自青岛或南非)在内的4种江蓠间的相似性系数在0~0.143之间。 展开更多
关键词 江蓠属海藻 龙须菜 ISSR标记 遗传多样性 遗传相似性 简单串联重复序列 DNA
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8种抗生素对塔玛亚历山大藻生长的影响 被引量:17
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作者 张冬宝 隋正红 +4 位作者 茅云翔 郭浩 臧晓南 张学成 吕英刚 《海洋学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期123-130,共8页
对一株有毒的塔玛亚历山大藻(Alexandrium tamarense (Lebour) Balech)进行了8种抗生素—氯霉素、红霉素、林可霉素、庆大霉素、金霉素、氨苄青霉素、新霉素和链霉素的敏感性实验.结果表明,该藻对抗生素较为敏感.其中的5种:氯霉素、红... 对一株有毒的塔玛亚历山大藻(Alexandrium tamarense (Lebour) Balech)进行了8种抗生素—氯霉素、红霉素、林可霉素、庆大霉素、金霉素、氨苄青霉素、新霉素和链霉素的敏感性实验.结果表明,该藻对抗生素较为敏感.其中的5种:氯霉素、红霉素、林可霉素、庆大霉素和金霉素,对藻8 d比生长速率的EC50分别为2.45μg/cm3,25.2μg/cm3,7.95μg/cm3,285 u/cm3,58.7μg/cm3,可用作该藻基因工程的选择压力,其对应的抗性基因可以作为基因工程阳性选择标记基因,应用于塔玛亚历山大藻的遗传操作研究.新霉素和链霉素对A.tamarense的生长无明显抑制作用,可以用于藻株无菌化培养而应用于甲藻产毒机制和赤潮爆发机理的研究,还应用筛选出的抗生素对藻培养物进行了除菌实验. 展开更多
关键词 抗生素 基因工程 塔玛亚历山大藻 无菌化 选择标记
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无菌钝顶螺旋藻单细胞的制备和再生 被引量:15
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作者 王高歌 张宝红 +2 位作者 茅云翔 臧晓南 张学成 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2001年第4期6-10,共5页
用含有 0 .75mol/LNaCl的Zarrouk培养基洗去藻丝体表面的角质鞘 ,可获得大量有活性并能再生的单细胞 ,再生率为 2 8.6%。用 0 .4%的次氯酸钠溶液消毒藻丝体 5分钟 ,恢复培养后再置于含有终浓度均为 1 50 μg/μl的卡那霉素、庆大霉素和... 用含有 0 .75mol/LNaCl的Zarrouk培养基洗去藻丝体表面的角质鞘 ,可获得大量有活性并能再生的单细胞 ,再生率为 2 8.6%。用 0 .4%的次氯酸钠溶液消毒藻丝体 5分钟 ,恢复培养后再置于含有终浓度均为 1 50 μg/μl的卡那霉素、庆大霉素和新霉素Zarrouk培养基中 35℃ 48h杀菌 ,最后用含 1 .5mol/LNaCl的Zarrouk培养基对藻丝体洗壁处理 1min 。 展开更多
关键词 钝顶螺旋藻 单细胞 再生 制备 非酶法 原生质体
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溶藻弧菌的PCR快速检测方法 被引量:18
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作者 韩一凡 莫照兰 +4 位作者 李杰 茅云翔 肖鹏 汪笑宇 杨官品 《中国海洋大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期1237-1240,共4页
为建立溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)的PCR快速检测方法,本研究根据弧菌toxR基因的高变区序列设计1对扩增片段为161 bp的引物,进行了特异性和敏感性试验。结果表明该方法能特异地检测溶藻弧菌,每个PCR反应检测的敏感度为0.01 pg的DNA... 为建立溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)的PCR快速检测方法,本研究根据弧菌toxR基因的高变区序列设计1对扩增片段为161 bp的引物,进行了特异性和敏感性试验。结果表明该方法能特异地检测溶藻弧菌,每个PCR反应检测的敏感度为0.01 pg的DNA和3.7CFU的细菌。用溶藻弧菌人工感染大菱鲆,以建立的PCR方法检测感染鱼的肝、脾、肾阳性检出率为100%。该方法可用于对感染溶藻弧菌的水生动物疾病进行诊断。 展开更多
关键词 溶藻弧菌 toxR基因 PCR检测
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节旋藻FACHB341 Rubisco基因部分序列的克隆和分析 被引量:8
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作者 刘金姐 茅云翔 +2 位作者 臧晓南 隋正红 张学成 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2003年第6期87-93,共7页
以节旋藻FACHB341为材料,对所克隆Rubisco基因进行了核苷酸序列测定和分析,由此推导出相应的氨基酸序列,并与部分其他蓝藻的同源基因进行了同源性分析。结果表明:所克隆DNA片段包含Rubisoo大小亚基基因部分序列及rbcX基因序列,长度为207... 以节旋藻FACHB341为材料,对所克隆Rubisco基因进行了核苷酸序列测定和分析,由此推导出相应的氨基酸序列,并与部分其他蓝藻的同源基因进行了同源性分析。结果表明:所克隆DNA片段包含Rubisoo大小亚基基因部分序列及rbcX基因序列,长度为2073 bp,其中rbcL和rbcX基因之间存在两个转录茎环结构;大小亚基酸性氨基酸和碱性氨基酸的比例分别为13.14%和14.51%,疏水氨基酸的比例为42.16%;rbcL核苷酸序列与集胞藻PCC6803、Prochlorothrix hollandica、聚球藻PCC6301、Agmenellum quadruplicatum和鱼腥藻PCC7120同源序列的相似性分别为91.7%、79.9%、74.8%、77.2%和76.1%;rbcS核苷酸序列与鱼腥藻PCC7120同源序列的相似性为67.6%,而与PCC6301和集胞藻PCC7002同源序列的相似性分别为30.1%和63.8%。 展开更多
关键词 节旋藻 基因序列 克隆 “l 5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶” 核苷酸 同源性分析 氨基酸 RUBISCO基因 密码子
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牙鲆生长激素基因的克隆及其在大肠杆菌中的融合表达 被引量:6
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作者 臧晓南 刘滨 +2 位作者 张学成 茅云翔 隋正红 《高技术通讯》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期99-104,共6页
采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法, 从牙鲆(Paralichthys olivaceus)脑垂体总RNA中扩增出编码牙鲆生长素(GH)成熟肽基因序列.重组至融合表达载体pGEX-4T-3中,构建成牙鲆GH基因融合表达载体pGEX-gh, 转化大肠杆菌BL21(DE3),筛选阳... 采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法, 从牙鲆(Paralichthys olivaceus)脑垂体总RNA中扩增出编码牙鲆生长素(GH)成熟肽基因序列.重组至融合表达载体pGEX-4T-3中,构建成牙鲆GH基因融合表达载体pGEX-gh, 转化大肠杆菌BL21(DE3),筛选阳性克隆,IPTG诱导表达.经SDS-PAGE电泳显示在45kD处有特异的蛋白条带出现,该蛋白的表达量随诱导时间的延长而增加,3h达最高值,达到细胞总蛋白的18.3%.该融合蛋白在胞内主要以包涵体状态存在,经优化表达条件,成功地获得了可溶性的融合蛋白,经Glutathione Sepharase 4B凝胶纯化后用Western-blotting检测表明其为牙鲆生长激素,并通过酶联免疫吸附受体法证实其具有生物学活性. 展开更多
关键词 融合表达载体 融合蛋白 大肠杆菌 IVIG Western-blotting 成熟肽基因 逆转录聚合酶链式反应 牙鲆 生长激素基因 GH基因
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浒苔孢子放散与附着萌发特性及其干出适应性的初步研究 被引量:6
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作者 朱明 刘兆普 +2 位作者 徐军田 茅云翔 姚东瑞 《海洋科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期1-6,共6页
研究了浒苔(Enteromorpha prolifera)孢子的放散与附着时限及其对附着基质的选择性,并探讨不同温度的干出处理对浒苔活力、孢子释放水平及其萌发的影响。实验结果表明:浒苔在20℃(黑暗)干出12h后连续放散孢子时限约为1~10h,放... 研究了浒苔(Enteromorpha prolifera)孢子的放散与附着时限及其对附着基质的选择性,并探讨不同温度的干出处理对浒苔活力、孢子释放水平及其萌发的影响。实验结果表明:浒苔在20℃(黑暗)干出12h后连续放散孢子时限约为1~10h,放散高峰出现在4h左右;浒苔孢子附着时限约为1~12h,附着高峰出现在6h左右,孢子附着最佳时机为孢子释放后2h左右;略粗糙的PVC、PVF和PA基质更有利于浒苔孢子的附着。相对于20℃的干出处理组,低温(4℃-4℃)或冰冻干出条件(-20℃)下浒苔藻体的活力得到更好的保持,但其孢子释放能力则在20℃(3周内)和-20℃(3~5周)保持较高水平。在20,4,-4和-20℃(黑暗)干出条件下,浒苔附着孢子能够分别在4,16,8和16d内萌发。本实验结果所揭示的浒苔孢子释放及萌发时效性、浒苔藻体及其孢子对多种干出条件的耐受性,可望为进一步探索浒苔“绿潮”的发生机制提供帮助。 展开更多
关键词 浒苔(Enteromorpha prolifera) 干出 孢子 释放 萌发
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4株琼胶降解菌的分离、鉴定及产酶条件分析 被引量:7
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作者 牟宗娟 李贵阳 +2 位作者 茅云翔 孔凡娜 莫照兰 《海洋科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期13-20,共8页
从海藻及海参中分离筛选得到4株琼胶降解菌HD、JL、QJ和HS,均为革兰氏阴性菌,确定了它们发酵产酶的最佳条件均为:2216E海水培养基、初始Ph 7.5、琼胶底物浓度0.30%、培养温度28℃、培养时间36 h。大部分酶分泌到细菌细胞外。生理生化检... 从海藻及海参中分离筛选得到4株琼胶降解菌HD、JL、QJ和HS,均为革兰氏阴性菌,确定了它们发酵产酶的最佳条件均为:2216E海水培养基、初始Ph 7.5、琼胶底物浓度0.30%、培养温度28℃、培养时间36 h。大部分酶分泌到细菌细胞外。生理生化检测、16SrDNA序列同源性及聚类分析结果表明,HD、JL、HS为白色噬琼胶菌(Agarivorans albus);QJ的16SrDNA序列与Simiduia sp.,糖噬胞菌属(Sac charophagus sp.)和船蛆杆菌(Teredinibacter sp.)的相似性为93%~94%,在进化树上单独形成一个分支,但生理生化特征与它们有所不同,分类地位需要进一步确定。从HD、JL和HS中能克隆到β-琼胶酶基因,它们与其他物种的β-琼胶酶基因序列的相似性为97%~98%。 展开更多
关键词 琼胶降解菌(agarase-producing bacteria) 琼胶酶活力 鉴定 白色噬琼胶菌(Agarivor ansalbus) β-琼胶酶基因
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