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猪肠道非致病性且无耐药性大肠杆菌的分离鉴定、生长特性和基因组进化分析 被引量：1
1
作者 区炳明 陈晓洁 +6 位作者 李清青 陈锦洪 萧碧扬 钟炜楠 林雪 刘蕾蕾 张敏瑜 《广东农业科学》 CAS 2024年第5期115-124,共10页
【目的】从猪肠道中分离出无毒力基因且无抗生素耐药性的大肠杆菌,并分析其生长性能和遗传进化规律,以期为开发猪用微生态制剂或口服疫苗奠定基础。【方法】采集广东省2个地区养猪场的11头和15头健康成年猪的粪便样本。首先,采用培养方... 【目的】从猪肠道中分离出无毒力基因且无抗生素耐药性的大肠杆菌,并分析其生长性能和遗传进化规律,以期为开发猪用微生态制剂或口服疫苗奠定基础。【方法】采集广东省2个地区养猪场的11头和15头健康成年猪的粪便样本。首先,采用培养方法从麦康凯培养基中分离出疑似大肠杆菌的菌株,通过16S rRNA序列分析鉴定其是否为大肠杆菌菌株;然后,采用PCR方法验证所选大肠杆菌是否含有13种常见的猪致病性大肠杆菌毒力基因,并以7类(14种)抗生素进行药敏试验;最后,对筛选出的优质大肠杆菌菌株进行生长动力学分析,并提取其全基因组DNA,构建全基因组系统进化树。【结果】在260株疑似为大肠杆菌菌株中,经16S rRNA序列分析确认后有206株属于大肠杆菌。其中,107株大肠杆菌不含13种常见毒力基因,25株大肠杆菌对7类(14种)抗生素敏感。在这25株菌株中,有23株非致病性且无抗生素耐药性大肠杆菌(编号为2-9、3-2、3-4、5-1、6-1、6-2、6-9、6-10、8-2、8-9、10-5、B-4、B-6、B-7、B-10、D-10、E-2、E-10、J-1、J-4、K-6、L-6和O-9)的生长性能与大肠杆菌Nissle1917、MG1655相似,其他2株大肠杆菌(编号为6-4和5-2)的生长速度高于Nissle 1917和MG1655。此外,有10株菌株(编号为E-10、E-2、6-4、6-9、8-2、O-9、3-2、6-2、J-1、K-6)耐酸性能较好,可能适合长期定殖于猪胃肠道内。基于SNP核心基因组系统进化树分析,发现这25株菌株中有9株菌株(编号为3-2、6-10、10-5、6-1、8-9、5-2、L-6、O-9、K-6)在系统进化树开端处属于同一大类群,表明它们极可能为猪原生大肠杆菌的祖先群。【结论】综合上述大肠杆菌的抗生素敏感性、生长性能和全基因组进化树和胃液环境耐受性能分析,菌株O-9在这4个方面均具备优势,该菌株与大肠杆菌Nissle 1917、MG1655的生长动力学相似甚至更优,意味着O-9菌株可能是优质的猪肠道原生大肠杆菌,具有极大研究潜力。 展开更多
关键词 猪 原生大肠杆菌 毒力基因 抗生素耐药性 生长特性 遗传进化
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25株猪肠道无毒力且不耐药大肠杆菌的分离鉴定、生长特性及遗传进化分析
2
作者 区炳明 李清青 +4 位作者 陈晓洁 萧碧扬 林雪 钟炜楠 张敏瑜 《现代畜牧科技》 2024年第8期1-7,共7页
该研究旨在从猪肠道中分离出无毒力基因且无耐药性的大肠杆菌菌株,分析其生长性能和遗传进化关系,进行致病性大肠杆菌常见的13个毒力基因的PCR检测和7类(14种)抗生素敏感性试验。测定无毒力且不耐药菌株的生长曲线,构建16S rRNA基因系... 该研究旨在从猪肠道中分离出无毒力基因且无耐药性的大肠杆菌菌株,分析其生长性能和遗传进化关系,进行致病性大肠杆菌常见的13个毒力基因的PCR检测和7类(14种)抗生素敏感性试验。测定无毒力且不耐药菌株的生长曲线,构建16S rRNA基因系统进化树。结果显示,该研究共分离鉴定出206株大肠杆菌,107株大肠杆菌不含13种常规毒力基因,其中25株对7类(14种)抗生素敏感,这25株无毒力且不耐药大肠杆菌的生长曲线与3株典型大肠杆菌相似。16S rRNA进化树分析显示,有4株大肠杆菌与典型益生菌菌株的进化关系接近。综合生长曲线和16S rRNA进化树的结果,4株大肠杆菌可能是优质的猪肠道原生大肠杆菌菌株,具有研究潜力。 展开更多
关键词 大肠杆菌 毒力基因 抗生素 耐药性 生长 进化
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番鸭细小病毒VP3蛋白的原核表达及抗原性分析
3
作者 刘郁夫 萧碧扬 +3 位作者 董楠 夏兆伦 申翰钦 陈瑞爱 《养禽与禽病防治》 2024年第8期2-6,共5页
为原核表达番鸭细小病毒(Muscovy duck parvovirus,MDPV)VP3蛋白,评价MDPV VP3蛋白在番鸭中的抗原性。将MDPV VP3基因按照大肠杆菌密码子偏嗜性优化后,克隆至原核表达载体pET-28a,经IPTG诱导表达和His镍柱纯化后,获得VP3纯化蛋白,并进行... 为原核表达番鸭细小病毒(Muscovy duck parvovirus,MDPV)VP3蛋白,评价MDPV VP3蛋白在番鸭中的抗原性。将MDPV VP3基因按照大肠杆菌密码子偏嗜性优化后,克隆至原核表达载体pET-28a,经IPTG诱导表达和His镍柱纯化后,获得VP3纯化蛋白,并进行SDS-PAGE蛋白电泳和western blots鉴定。通过透射电镜观察MDPV VP3蛋白在大肠杆菌中形成病毒样颗粒的情况,以纯化后的VP3蛋白免疫种番鸭,评价MDPV VP3蛋白的抗原性。结果显示,MDPVVP3蛋白可在大肠杆菌BL21(DE3)中以沉淀包涵体的形式高效表达,SDS-PAGE和Western blots试验结果显示VP3目的条带大小为60kDa左右,与预期相符,纯化后VP3蛋白浓度为5.64mg/mL。通过透射电镜,可在VP3蛋白表达上清样品中观察到直径约为20nm的颗粒样物质,表明单独表达MDPV VP3蛋白可在大肠杆菌中自组装形成病毒样颗粒。将制备的VP3蛋白免疫种番鸭,利用间接ELISA试验检测番鸭血清中特异性抗体水平,免疫后14d,OD450值为0.75~0.90,表明制备的VP3蛋白抗原性良好。本试验在大肠杆菌中成功表达纯化MDPVVP3蛋白,具有良好的抗原性,具备研制MDPV亚单位疫苗的开发前景,本研究可为进一步评MDPVVP3蛋白的免疫保护效果提供前期基础。 展开更多
关键词 番鸭细小病毒 VP3 原核表达 抗原性
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