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戊型肝炎病毒感染的实验室诊断研究进展
1
作者 唐自闽 葛胜祥 《厦门大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期345-356,共12页
[背景]戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV),是全球范围内病毒性肝炎重要病原体之一.HEV感染可以导致急性、慢性戊型肝炎以及许多肝外症状.研究者们开发了HEV RNA、HEV抗原、HEV IgM和HEV IgG等多种实验室检测方法用于诊断HEV感染.[进... [背景]戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV),是全球范围内病毒性肝炎重要病原体之一.HEV感染可以导致急性、慢性戊型肝炎以及许多肝外症状.研究者们开发了HEV RNA、HEV抗原、HEV IgM和HEV IgG等多种实验室检测方法用于诊断HEV感染.[进展]不同HEV指标都有其独特的诊断价值,尤其是HEV抗原.HEV抗原检测的主要靶标为分泌型HEV抗原,而非传统的病毒衣壳蛋白.HEV抗原检测可用于急性与慢性HEV感染的检测,也可用于HEV感染后临床结局的预测以及区分急性与慢性HEV感染,尿液HEV抗原检测为HEV感染提供了一种无创的检测方式.HEV RNA检测在急性与慢性HEV感染以及出现肝外症状的人群中都具有重要的价值,被认为是HEV感染诊断的金标准.HEV IgM和HEV IgG分别是HEV近期感染和既往感染指标,持续时间较长,对HEV现症感染的指示较弱.[展望]随着检测技术的进步和检测新靶标的发现,HEV RNA和抗原作为现症感染的指标越来越受到重视,而HEV IgM和IgG血清学检测作为间接检测指标由于较成熟,商品化试剂较丰富,目前依然在临床检测中广泛使用.了解HEV感染的实验室诊断研究现状和发展动态,可为临床中HEV感染的诊断提供思路和参考. 展开更多
关键词 戊型肝炎病毒(HEV) 诊断 HEV抗原 HEV抗体 HEV RNA
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蛋白质组氨酸甲基化
2
作者 李蒙婷 唐自闽 葛胜祥 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期1343-1351,共9页
蛋白质甲基化是生物体内常见的翻译后修饰。长期以来蛋白质甲基化的研究主要集中在精氨酸和赖氨酸上,关于组氨酸甲基化的报道较少,而最近的研究强调了组氨酸甲基化也是一种普遍存在且高度保守的修饰,该修饰发生在组氨酸咪唑环上的Nπ和... 蛋白质甲基化是生物体内常见的翻译后修饰。长期以来蛋白质甲基化的研究主要集中在精氨酸和赖氨酸上,关于组氨酸甲基化的报道较少,而最近的研究强调了组氨酸甲基化也是一种普遍存在且高度保守的修饰,该修饰发生在组氨酸咪唑环上的Nπ和Nτ位点,由特定的组氨酸甲基转移酶(PHMTs)催化。本文综述了组氨酸甲基化的研究历史和近年来取得的重要进展,重点强调了几个已知的组氨酸甲基转移酶,这些酶通过特定分子机制负责组氨酸上精确位点的甲基化修饰,其介导的甲基化在细胞运动、肿瘤细胞增殖和蛋白质翻译等过程中发挥重要作用。此外,本文还讨论了组氨酸甲基化的研究方法,特别是质谱技术的应用,在推动组氨酸甲基化研究中发挥重要作用。尽管组氨酸甲基化的面纱正在逐渐被揭开,对该修饰及其功能机制的完全理解仍存在挑战,因此,本文还对目前组氨酸甲基化的研究困境和未来的研究重点提出了一些新的见解,期待在未来揭开组氨酸甲基化更多的秘密,以扩展蛋白质甲基化修饰网络,为阐明疾病机制、开发新的治疗策略提供新的视角和策略。 展开更多
关键词 组氨酸甲基化 组氨酸甲基转移酶 Nπ甲基化 Nτ甲基化
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基于磁珠的外泌体富集检测技术 被引量：1
3
作者 张沥丹 张师音 葛胜祥 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期1664-1672,共9页
外泌体是一类30~150 nm天然纳米颗粒,通过细胞主动分选胞内物质并以囊泡的形式转运到胞外,参与诸多生理过程。外泌体因其携带亲代细胞信息,常被用作疾病诊断和预后循环生物标志物。然而,临床标本的外泌体富集方法、富集产物的产量及纯... 外泌体是一类30~150 nm天然纳米颗粒,通过细胞主动分选胞内物质并以囊泡的形式转运到胞外,参与诸多生理过程。外泌体因其携带亲代细胞信息,常被用作疾病诊断和预后循环生物标志物。然而,临床标本的外泌体富集方法、富集产物的产量及纯度限制着外泌体临床转化,因此,高效富集临床标本来源的外泌体是进行诊断和治疗应用的前提条件。常见的外泌体提取技术,例如超速离心、多聚物沉淀等能富集高产量的外泌体,但产物中存在的高水平蛋白质污染物极大地影响了下游外泌体分析。而经磁珠法富集的外泌体产物纯度高,特异性好,逐渐被研究人员用于临床标本外泌体的富集检测。磁珠富集中,研究者对不同磁珠类型、富集方式的选择影响着外泌体富集效率及下游检测分析结果,在磁珠法的基础上也开发了新的外泌体分离方式用于改善磁珠存在的富集洗脱等局限性。本文综述了基于磁珠法的外泌体富集方式和检测技术,简述了磁珠法在临床应用中的优势、局限性及未来的展望。 展开更多
关键词 外泌体 磁珠 富集 检测
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基因Ⅰ、Ⅳ型戊型肝炎病毒高灵敏度通用引物的设计和初步应用 被引量：54
4
作者 葛胜祥 郭清顺 +2 位作者 李少伟 张军 夏宁邵 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期181-187,共7页
设计针对国内流行的戊型肝炎病毒(HEV)基因Ⅰ、Ⅳ型,在这两型序列的保守区域设计了一套RT-PCR引物--E引物,并将E引物与目前较常用的3对通用引物(Meng、ConORF1和ConORF2引物)比较了检测基因Ⅰ、Ⅳ型HEV的灵敏度.对基因Ⅰ型HEV,E引物能... 设计针对国内流行的戊型肝炎病毒(HEV)基因Ⅰ、Ⅳ型,在这两型序列的保守区域设计了一套RT-PCR引物--E引物,并将E引物与目前较常用的3对通用引物(Meng、ConORF1和ConORF2引物)比较了检测基因Ⅰ、Ⅳ型HEV的灵敏度.对基因Ⅰ型HEV,E引物能检出的稀释度为105,参考引物能检出的稀释度为102～104;对基因Ⅳ型HEV,E引物能检出的稀释度为102,参考引物能检出的稀释度为101～102.在17份HEV-IgM阳性血清中,E引物检出5份,检出率为29.4%;参考引物只能检出1份或2份,检出率最高为11.8%.E引物在33份HEV-IgM阳性的隐性感染血清中检出6份,阳性率18.2%;在79份HEV-IgM阳性的临床肝炎血清中检出36份,阳性率45.6%.以上结果初步表明,对于在国内流行的基因Ⅰ、Ⅳ型HEV,E引物的检测灵敏度要高于目前常用的通用引物. 展开更多
关键词 戊型肝炎病毒 基因Ⅰ型 基因Ⅳ型 聚合酶链反应 通用引物 设计 PCR
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基于多聚化重组抗原的检测戊型肝炎病毒IgM与IgG抗体的ELISA的建立及初步评估 被引量：33
5
作者 葛胜祥 张军 +6 位作者 彭耿 黄果勇 何志强 顾颖 朱子恒 吴文翰 夏宁邵 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期74-82,共9页
建立并评估分别检测戊型肝炎 (戊肝 )病毒IgM与IgG抗体的捕获法及间接法ELISA。以原核表达的多聚化重组HEV蛋白为抗原 ,建立戊肝捕获法IgMELISA(E2 -IgM )和间接法IgGELISA(E2 -IgG)。利用 2 9只实验感染猴系列血清及多份临床急性肝炎... 建立并评估分别检测戊型肝炎 (戊肝 )病毒IgM与IgG抗体的捕获法及间接法ELISA。以原核表达的多聚化重组HEV蛋白为抗原 ,建立戊肝捕获法IgMELISA(E2 -IgM )和间接法IgGELISA(E2 -IgG)。利用 2 9只实验感染猴系列血清及多份临床急性肝炎血清、正常人血清以及单克隆抗体评估所建立的方法的敏感性与特异性 ,并与商品化试剂 (Genelabs公司抗 -HEVIgG和IgM试剂 ,GL -IgG/GL -IgM )进行比较。 2 9只恒河猴E2 -IgM和E2-IgG的阳转率均为 10 0 % ,其中 75 %在感染后 4周内阳转 ,均早于ALT异常时间。E2 -IgM持续 2～ 14周 ,平均6周 ;E2 -IgG在 70周时仍无一阴转。GL -IgG阳转率为 79 3% ( 2 3/ 2 9) ,多数晚于ALT异常时间 ,平均持续约18周 ,但最长为 1只在感染后 70周时仍为阳性。用E2 -IgM试剂盒检测 92 8份正常人血清 ,仅 2份OD值略高于0 2。检测 5 10份临床急性肝炎血清 ,可明显将其区分为 2个部分 ,一个部分OD值小于 0 2 ,其OD值分布与正常人相似 ;另一个部分OD值大于 0 4,共 131份 ,其中 10 9份大于 1 0。可能分别对应于急性肝炎中的非戊肝患者和戊肝患者。 119份非甲～丙急性肝炎中 ,E2 -IgM阳性 5 7份 ,GL -IgM阳性 2 9份 (E2 -IgM均阳性 )。 5 0 6 0份普通人群血清的E2 -IgGOD值在 0 2以下 。 展开更多
关键词 戊型肝炎 诊断 试剂 IGM IGG
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大肠杆菌表达的戊型肝炎病毒ORF2多肽对恒河猴的免疫保护研究 被引量：22
6
作者 葛胜祥 张军 +3 位作者 黄果勇 逄淑强 周开姣 夏宁邵 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期35-42,共8页
在大肠杆菌中表达的一段戊型肝炎病毒 (HEV)结构蛋白NE2 ,纯化后以弗氏佐剂 ,按0d ,1 0d ,30d的方案 1 0 μg 针的剂量免疫 3只恒河猴 ,在第 2周抗体阳转 ,第 6周时 1只滴度达 1∶1 0 0 0 0 0 ,另 2只滴度 1∶2 0 0 0 0 ,此时以 1 0 6PC... 在大肠杆菌中表达的一段戊型肝炎病毒 (HEV)结构蛋白NE2 ,纯化后以弗氏佐剂 ,按0d ,1 0d ,30d的方案 1 0 μg 针的剂量免疫 3只恒河猴 ,在第 2周抗体阳转 ,第 6周时 1只滴度达 1∶1 0 0 0 0 0 ,另 2只滴度 1∶2 0 0 0 0 ,此时以 1 0 6PCR滴度的HEV病毒粪悬液攻击。对照组 3只均出现血清转氨酶 (ALT)升高 ,抗体阳转 ,粪便持续排毒 1月以上 ;疫苗组无一发病 ,未检出非疫苗来源的抗体 ,其中 1只始终未检出粪便排毒 ,另 2只仅出现短暂排毒。以一份NE2免疫后猴血清 (滴度 1∶2 0 0 0 0 )与 1 0 3PCR滴度的病毒混匀后感染 2只恒河猴 ,结果对照组 2只均持续排毒 3周以上 ,抗体阳转 ,1只ALT明显升高 ;而抗体中和组 2只猴始终未检出粪便排毒 ,抗NE2抗体缓慢下降 ,ALT正常。这些结果表明NE2具有良好的免疫原性和免疫保护性 ,有可能成为有效的戊肝疫苗。 展开更多
关键词 大肠杆菌 基因表达 戊型肝炎病毒 ORF2多肽 恒河猴 免疫保护
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中国不同地区商品猪中戊型肝炎病毒感染情况调查 被引量：65
7
作者 葛胜祥 田克恭 +5 位作者 多海刚 李纯玲 陈凡 王传彬 彭耿 夏宁邵 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2003年第2期108-109,共2页
关键词 中国 商品猪 戊型肝炎病毒感染 调查 流行病学
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一种新型H5N1禽流感病毒血凝素抗原快速检测试剂的建立 被引量：6
8
作者 葛胜祥 徐飞海 +10 位作者 罗海峰 陈毅歆 郭永利 陈自敏 王嘉 罗文新 吴婷 张军 陈鸿霖 管轶 夏宁邵 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期445-449,共5页
利用5株广谱特异性抗H5亚型血凝素单克隆抗体和酶联免疫渗滤技术成功地建立了一种适于现场检测H5亚型禽流感病毒血凝素蛋白的抗原快速检测试剂H5-HA(Ag)Dot-ELISA。该试剂对41株代表当前亚洲地区流行的各种遗传变异亚系H5N1禽流感病毒... 利用5株广谱特异性抗H5亚型血凝素单克隆抗体和酶联免疫渗滤技术成功地建立了一种适于现场检测H5亚型禽流感病毒血凝素蛋白的抗原快速检测试剂H5-HA(Ag)Dot-ELISA。该试剂对41株代表当前亚洲地区流行的各种遗传变异亚系H5N1禽流感病毒检测均为阳性,对多数毒株的分析灵敏度优于0.1个血凝滴度(HA titer),其中部分优于0.01个血凝滴度;比较该试剂与早期开发的同类ELISA试剂,发现前者对后者未能检出的H5N1新变异株检测均为阳性;利用该试剂和商品化Directigen Flu A(BD)试剂检测两株H5N1病毒株,提示前者灵敏度高于后者;该试剂对一株H5N1病毒的检测灵敏度与标准RT-PCR相当;该试剂对24株非H5亚型病毒检测均为阴性,显示出良好特异性。以上结果提示,此研究建立的H5N1病毒抗原快速检测试剂在H5禽流感现场检测上具有较好的应用前景。 展开更多
关键词 禽流感病毒 H5N1 抗原快速检测 血凝素 单克隆抗体
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大肠杆菌表达的戊型肝炎病毒ORF2片段的聚合现象研究 被引量：37
9
作者 李少伟 张军 +5 位作者 何志强 葛胜祥 顾颖 林鉴 刘如石 夏宁邵 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期463-467,共5页
在大肠杆菌中表达了戊型肝炎病毒 (HEV)ORF2的a .a .394～a .a .6 0 4片段 ,得到的重组蛋白NE2在SDS PAGE中主要以可被尿素解聚的二聚体形式存在 ,二聚体对病人血清的反应性明显强于单体 ;质谱分析表明NE2可形成从二聚体到至少六聚体的... 在大肠杆菌中表达了戊型肝炎病毒 (HEV)ORF2的a .a .394～a .a .6 0 4片段 ,得到的重组蛋白NE2在SDS PAGE中主要以可被尿素解聚的二聚体形式存在 ,二聚体对病人血清的反应性明显强于单体 ;质谱分析表明NE2可形成从二聚体到至少六聚体的多种聚体 ;动态光散射测定表明平均分子半径约 4nm ,相当于四聚体 ,但分散度较大 ,提示为多种大小不一的聚合体的混合物。这些证据表明NE2蛋白可形成以同源二聚体为基本单位的多种聚合体形式 ,其中以二聚体间的结合最为紧密 ,并且以二聚体为基础可进一步装配出多种更高级结构 ,从而具有作为HEV疫苗及诊断试剂抗原的良好前景。 展开更多
关键词 大肠杆菌 表达 戊型肝炎病毒ORF2片段 聚合现象 组装 二聚体 原核表达
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戊型病毒性肝炎研究进展 被引量：34
10
作者 夏宁邵 张军 +5 位作者 李少伟 葛胜祥 吴婷 郑子峥 吴文翰 史维国 《厦门大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期431-436,共6页
戊型病毒性肝炎是全球最主要的病毒性肝炎之一,近半个世纪多次发生大规模暴发,孕妇感染戊型肝炎后病死率高达20%.近年随着基于构象型表位多肽E2的戊型肝炎诊断试剂的出现,戊型肝炎的病原学诊断及流行病学调查均获得了较大的发展,越来越... 戊型病毒性肝炎是全球最主要的病毒性肝炎之一,近半个世纪多次发生大规模暴发,孕妇感染戊型肝炎后病死率高达20%.近年随着基于构象型表位多肽E2的戊型肝炎诊断试剂的出现,戊型肝炎的病原学诊断及流行病学调查均获得了较大的发展,越来越引起人们的重视.由我国自主创新研制的重组戊型肝炎疫苗现已在中国完成世界上首个Ⅲ期临床试验,其预防戊型肝炎的保护率达到100%（95%CI,72.1%~100.0%）. 展开更多
关键词 戊型病毒性肝炎 戊型肝炎病毒 E2 诊断试剂 重组戊型肝炎疫苗
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戊肝病毒(HEV)在猪和牛群中的流行病学研究 被引量：35
11
作者 王佑春 张华远 +7 位作者 崔鹏 蓝海云 李少伟 田克恭 王京 葛胜祥 辜文洁 林京香 《中国预防医学杂志》 CAS 2002年第3期199-201,共3页
目的 探讨戊型肝炎病毒(HEV)在猪和牛群中的感染情况。方法 用抗-HEV抗体试剂盒检测猪和牛血清中的抗体;对部分血清用逆转录聚合酶链的方法(RT-PCR)检测HEV RNA,并对PCR阳性产物进行克隆测序,然后将序列进行分析。结果 281份猪血清中有... 目的 探讨戊型肝炎病毒(HEV)在猪和牛群中的感染情况。方法 用抗-HEV抗体试剂盒检测猪和牛血清中的抗体;对部分血清用逆转录聚合酶链的方法(RT-PCR)检测HEV RNA,并对PCR阳性产物进行克隆测序,然后将序列进行分析。结果 281份猪血清中有235份为抗-HEV抗体阳性,阳性率为83.6％;其中56份血清中有3份为HEV RNA阳性,序列分析显示从猪中克隆的3株序列(SB 2、SH1和SJ 14)之间在ORF 2(6007-6354bp)区域的核苷酸序列的同源性为83％～86％,该3株序列在ORF 2区与1,2,3,4型的同源性分别为74％～79％、73％～77％,73％～76％和83％～93％;190份牛血清中有12份为抗-HEV抗体阳性,阳性率为6.3％。结论 HEV在猪和牛群中均有流行,但在猪群中的流行率明显高于牛群。猪感染的HEV的基因序列与人群中散发性戊型肝炎病毒的4型同源性最高。 展开更多
关键词 流行病学 戊型肝炎病毒 基因型 聚合酶链反应 人兽共患性疾病
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高致病性H5亚型禽流行性感冒病毒血凝素单克隆抗体的制备与初步应用 被引量：13
12
作者 陈毅歆 罗海峰 +7 位作者 葛胜祥 郭永利 彭耿 王嘉 陈鸿霖 张军 管轶 夏宁邵 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期422-427,共6页
以禽流感病毒株Ck/HK/Yu22/02(H5N1)作为免疫原,利用常规杂交瘤技术和血凝抑制试验法成功地筛选出6株稳定分泌抗高致病性H5亚型禽流感病毒血凝素的单克隆抗体(单抗),分别命名为2F2、3C8、3FC1、7C6、10HD4和13G4。经血凝抑制试验法分析... 以禽流感病毒株Ck/HK/Yu22/02(H5N1)作为免疫原,利用常规杂交瘤技术和血凝抑制试验法成功地筛选出6株稳定分泌抗高致病性H5亚型禽流感病毒血凝素的单克隆抗体(单抗),分别命名为2F2、3C8、3FC1、7C6、10HD4和13G4。经血凝抑制试验法分析,结果发现这6株单抗具有特异性高、反应性强、识别谱宽且互补等特点。基于单抗2F2,初步建立了三种H5N1病毒诊断方法,经评估证实均具有很好的特异性。由此说明,研究制备的抗H5亚型禽流感病毒血凝素单抗可适用于H5N1病毒的诊断。 展开更多
关键词 禽流行性感冒病毒H5N1 血凝素 单克隆抗体 酶联免疫吸附试验 胶体金免疫试验
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戊型肝炎病毒中和性单克隆抗体的鉴定 被引量：16
13
作者 顾颖 葛胜祥 +7 位作者 黄果勇 李少伟 朱子恒 何志强 陈毅歆 王颖彬 张军 夏宁邵 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期217-223,共7页
阻断实验发现,用戊型肝炎病毒(HEV)衣壳蛋白重组抗原制备的8株抗HEV单克隆抗体(mAb),分别识别3个构象表位和2个线性表位。用抗体捕获反转录PCR方法证实,其中识别2个构象表位的3个mAb可以直接捕获HEV颗粒,表明这2个表位位于HEV颗粒的外... 阻断实验发现,用戊型肝炎病毒(HEV)衣壳蛋白重组抗原制备的8株抗HEV单克隆抗体(mAb),分别识别3个构象表位和2个线性表位。用抗体捕获反转录PCR方法证实,其中识别2个构象表位的3个mAb可以直接捕获HEV颗粒,表明这2个表位位于HEV颗粒的外表面。识别这两个表位的mAb8C11和8H3均可中和HEV对恒河猴的致病性和感染性。mAb8C11缩短排毒时间的效应较明显,而mAb8H3延迟机体抗HEV抗体阳转时间的效应较明显。二者的中和效应具有较明显的协同作用。中和单抗8C11、8H3对戊肝不同感染时期的血清均有显著阻断作用,Fab片段的阻断作用与完整抗体类似,表明这两个mAb对应的中和表位是HEV体液免疫应答的优势表位。 展开更多
关键词 戊型肝炎病毒 中和性 单克隆抗体 中和表位
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TB-IGRA与TST检测菌培阳性肺结核患者比较 被引量：16
14
作者 张向东 郑蓉蓉 +4 位作者 何水珍 熊君辉 葛胜祥 张军 牛建军 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期464-466,共3页
目的比较结核分枝杆菌γ-干扰素体外释放试验(TB-IGRA)与结核菌素皮肤试验(TST)在临床上用于检测MTB感染者的应用价值。方法 TB-IGRA与TST平行检测对147例菌培阳性肺结核患者,并分析年龄、性别和是否接种卡介苗对各自检测性能的影响。TS... 目的比较结核分枝杆菌γ-干扰素体外释放试验(TB-IGRA)与结核菌素皮肤试验(TST)在临床上用于检测MTB感染者的应用价值。方法 TB-IGRA与TST平行检测对147例菌培阳性肺结核患者,并分析年龄、性别和是否接种卡介苗对各自检测性能的影响。TST分别比较红肿硬块直径≥5mm(TST5)和≥15mm(TST15)者。结果 TB-IGRA和TST5的检出率分别为80.3%(118/147)和78.2%(115/147),均显著高于TST15的44.2%(65/147)。TB-IGRA在60岁以下年龄组的检出率显著高于60岁以上年龄组,TST15检出率随年龄变化趋势与TB-IGRA类似。是否接种卡介苗对TB-IGRA和TST15没有明显影响,而TST5在接种过卡介苗的患者中的阳性率显著高于未接种组。结论 TB-IGRA比TST有更高的检测灵敏度,可以作为判断结核分枝杆菌感染的手段之一。 展开更多
关键词 结核 皮肤试验 Γ-干扰素 体外释放试验
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一种联合检测乙型肝炎病毒前S1抗原与核心抗原方法的建立及其与病毒核酸检测结果的一致性 被引量：13
15
作者 袁权 葛胜祥 +4 位作者 闫强 赵昱 熊君辉 张军 夏宁邵 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期252-257,共6页
本研究以与血清中HBV DNA含量高度相关的两种HBV抗原（前S1抗原与核心抗原）为靶标,建立了联合检测这两种HBV核酸相关抗原（NRAg）的双抗体夹心法ELISA试剂。对系列稀释血清的检测表明,该试剂的平均分析灵敏度为103.2基因组拷贝/mL（95... 本研究以与血清中HBV DNA含量高度相关的两种HBV抗原（前S1抗原与核心抗原）为靶标,建立了联合检测这两种HBV核酸相关抗原（NRAg）的双抗体夹心法ELISA试剂。对系列稀释血清的检测表明,该试剂的平均分析灵敏度为103.2基因组拷贝/mL（95%可信限102.2-4.2基因组拷贝/mL）,显著高于前S1抗原或核心抗原的单独检测。对994份HBsAg阴性血清的检测结果表明NRAg ELISA的特异性为99.7%（95%可信限：99.1%-99.9%）。对271份临床慢性肝炎血清进行检测,结果NRAg ELISA与HBV DNA结果的总符合率达96.3%（95%可信限：93.3%-98.2%）,NRAg ELISA的读值/临界值比（S/CO）与HBV基因组拷贝数呈正相关。利用NRAg试剂,发现了1例HBsAg“a”抗原表位突变的变异株。这些结果显示HBV NRAg ELISA与HBV DNA具有高度相关性,并能够检测出HBsAg抗原变异株,有望成为HBsAg变异株筛选的有力工具,并为广大基层医疗单位提供一种便捷的替代HBV DNA定性检测的手段。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 核酸相关抗原 表面抗原突变
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戊型肝炎流行区病毒感染的特点 被引量：17
16
作者 王延臣 葛胜祥 +6 位作者 孙鲁民 严庆峰 聂希会 靳祥堂 康伟民 张军 夏宁邵 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第2期147-150,共4页
目的　在新的抗体检测试剂基础上了解普通人群戊型肝炎病毒感染特点。方法　利用戊型肝炎病毒多聚化重组抗原组装的抗HEVIgGELISA试剂 (E2 IgG)对山东某地社区普通人群的戊肝感染情况进行检测。结果　本地人群各个年龄组共 2 ,998人中... 目的　在新的抗体检测试剂基础上了解普通人群戊型肝炎病毒感染特点。方法　利用戊型肝炎病毒多聚化重组抗原组装的抗HEVIgGELISA试剂 (E2 IgG)对山东某地社区普通人群的戊肝感染情况进行检测。结果　本地人群各个年龄组共 2 ,998人中抗HEVIgG抗体总阳性率 (年龄性别标化 )为 14 1% ,男性标化阳性率为 16 2 % ,女性为 11 9%。 2 0岁以下人群戊肝感染率不足 1% ,自 2 0岁起男性和女性分别以每年接近 0 9%和 0 8%的速度平稳上升。戊肝感染者中男性与女性的平均抗体水平基本相同 ,基本上随着年龄的上升 ,人群中感染者的平均抗体水平也缓慢上升。随机选取的 10份E2 IgG阳性血清与抗原的反应均被抗 HEV单克隆抗体明显阻断。结论　该地区为戊肝流行区 ,感染主要发生在成年之后 ,以每年接近 1%的新感染率稳定上升。中小学生中戊肝抗体阳性率极低 ,学校内戊肝暴发的预防应引起高度重视。 展开更多
关键词 戊型肝炎 流行区病毒感染 抗-HEV ELISA试剂
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大肠杆菌重组颗粒性戊型肝炎疫苗对恒河猴的免疫保护 被引量：7
17
作者 张军 李益民 +7 位作者 李少伟 欧山海 黄果勇 何志强 葛胜祥 鲜阳凌 逄淑强 夏宁邵 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期1-6,共6页
大肠杆菌表达的戊型肝炎病毒 (HEV)衣壳蛋白ORF2片段HEV 2 39重组蛋白颗粒 ,经铝佐剂吸附后 ,分别以5 μg、1 0 μg和 2 0 μg剂量免疫恒河猴 ,2 8天时以相同剂量加强免疫 1次 ,3周后分别以不同病毒滴度的基因Ⅰ型或基因Ⅳ型HEV静脉攻... 大肠杆菌表达的戊型肝炎病毒 (HEV)衣壳蛋白ORF2片段HEV 2 39重组蛋白颗粒 ,经铝佐剂吸附后 ,分别以5 μg、1 0 μg和 2 0 μg剂量免疫恒河猴 ,2 8天时以相同剂量加强免疫 1次 ,3周后分别以不同病毒滴度的基因Ⅰ型或基因Ⅳ型HEV静脉攻击。结果 ,加强后 3周 ,3个免疫剂量组猴的抗体几何平均滴度分别为 1∶2 71 75、1∶344 0 9、1∶4 16 0 7,以世界卫生组织参比血清定量 ,则分别为 1 0 98IU/ml,1 35 7IU/ml、1 72 4IU/ml。每个剂量免疫组及对照组各有 3只猴接受 1 0 7病毒滴度基因Ⅰ型HEV感染 ,对照组 3只猴均被成功感染 ,2只出现肝炎 ;2 0 μg免疫组 3只猴均未被感染 ;1 0 μg和 5 μg免疫组各有 2只猴未被感染 ,另 1只猴出现短暂感染 ,免疫猴均未出现肝炎。 3个剂量免疫组及对照组另外 3只猴 ,接受 1 0 4病毒滴度基因Ⅰ型HEV感染 ,对照组 3只猴均被感染 ,1只出现肝炎 ;而免疫猴均未被感染 ,也未出现肝炎。 3只 1 0 μg免疫猴和 3只对照猴分别接受 1 0 7病毒滴度基因Ⅳ型HEV感染 ,对照组均被感染并出现肝炎 ,而免疫组均未出现肝炎 ,有 2只未被感染 ,另 1只被短暂感染。另有 3只 1 0 μg免疫猴和 3只对照猴分别接受 1 0 4病毒滴度基因Ⅳ型HEV感染 ,对照组均被感染 ,而免疫组均未被感染。这些结果表明 展开更多
关键词 戊型肝炎 疫苗 原核表达 恒河猴 保护率
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一种A型流感病毒NP抗原快速检测试剂的建立 被引量：8
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作者 徐飞海 王锐 +5 位作者 白佳伟 齐先佳 陈毅歆 葛胜祥 张军 夏宁邵 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期22-25,共4页
目的建立一种适合现场检测需要的A型流感快速诊断试剂。方法以自制的抗A型流感（Flu A）病毒核蛋白（NP）单抗为原料，建立快速检测A型流感病毒的双抗体夹心酶免疫渗滤试验，并对其灵敏度和特异性进行了初步评价。结果该试剂对不同地区... 目的建立一种适合现场检测需要的A型流感快速诊断试剂。方法以自制的抗A型流感（Flu A）病毒核蛋白（NP）单抗为原料，建立快速检测A型流感病毒的双抗体夹心酶免疫渗滤试验，并对其灵敏度和特异性进行了初步评价。结果该试剂对不同地区流行的各种亚型的A型流感病毒株均有较高的反应性，而对非Flu A病毒株无交叉反应。比较该试剂与BD公司的两种流感快速诊断试剂，发现该试剂对随机选取的3株Flu A病毒的检测分析灵敏度高出Directigen EZ FluA试剂5～125倍，对2株Flu A病毒的分析灵敏度高出Directigen Flu A试剂约20倍。另外，用该试剂对57份含漱液标本和170份动物拭子标本进行检测，结果显示：本试剂的灵敏度（〉85％）和特异性（〉95％）均优于当前主流的商品化A型流感快速诊断试剂。结论利用抗Flu A NP单抗为原料建立了A型流感快速诊断试剂，该试剂的应用无需任何专用仪器，操作简便快速，可满足现场检测需要。 展开更多
关键词 A型流感病毒 核蛋白 快速检测 免疫渗滤
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SARS冠状病毒核衣壳(N)蛋白不同区域的原核表达 被引量：4
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作者 林鉴 葛胜祥 +6 位作者 王颖彬 罗文新 吴婷 李少伟 程通 张军 夏宁邵 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期81-87,共7页
利用大肠杆菌表达系统对SARS冠状病毒的核衣壳(N)蛋白全长及N末端或/和C末端缺失突变体进行了表达,共表达了39个重组蛋白,表达量在15%～30%之间。分别利用电洗脱或金属鳌合介质纯化重组蛋白,用蛋白印迹实验检测纯化蛋白对SARS病人恢复... 利用大肠杆菌表达系统对SARS冠状病毒的核衣壳(N)蛋白全长及N末端或/和C末端缺失突变体进行了表达,共表达了39个重组蛋白,表达量在15%～30%之间。分别利用电洗脱或金属鳌合介质纯化重组蛋白,用蛋白印迹实验检测纯化蛋白对SARS病人恢复期血清的反应性,结果发现全长N蛋白活性最好,其余的末端缺失蛋白均无法达到同一活性水平。由此说明N蛋白的完整性对于其优势表位的充分暴露是必要的。 展开更多
关键词 重组蛋白 SARS冠状病毒 SARS病人 N蛋白 表位 实验检测 恢复期 核衣壳 利用 缺失突变体
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生物传感器对抗戊型肝炎病毒单克隆抗体部分特性的研究 被引量：6
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作者 顾颖 张军 +6 位作者 李少伟 葛胜祥 何志强 朱子恒 鲜阳凌 李益民 夏宁邵 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期617-620,共4页
目的　应用生物传感器对新制备的抗戊型肝炎病毒单克隆抗体 (mAb)的亲和力、Ig亚类 (型 )及抗原结合的动力学进行研究。方法　用HEVORF2区基因工程重组蛋白NE2 ,免疫BALB/c小鼠 ,经杂交瘤技术制备mAb ,采用ELISA、Westernblot和生物传... 目的　应用生物传感器对新制备的抗戊型肝炎病毒单克隆抗体 (mAb)的亲和力、Ig亚类 (型 )及抗原结合的动力学进行研究。方法　用HEVORF2区基因工程重组蛋白NE2 ,免疫BALB/c小鼠 ,经杂交瘤技术制备mAb ,采用ELISA、Westernblot和生物传感器鉴定其有关特性。结果获得 12株可稳定分泌抗NE2mAb的杂交瘤细胞系。用ELISA及生物传感器等鉴定各株mAb ,分别为IgM和IgG1、IgG2a,轻链均为κ型。其中在用ELISA法对mAb3F5亚类鉴定过程中 ,发现其与HRP GAMIgG2a和HRP GAMIgM均有反应 ,生物传感器鉴定其为IgM。Westernblot验证各株mAb的特异性 ,同时各株mAb对于不同聚合形式的NE2蛋白的反应性有一定的差别。应用生物传感器测定了 4株mAb的KD 值 ,mAb 8C11为 4 .36× 10 7,mAb8H3为 1.5 3× 10 5,mAb 13D8为 1.2 1× 10 6,mAb 16D7为8.0 3× 10 7。从生物传感器测得的各株mAb与NE2的结合、解离过程中发现 ,mAb 8H3与NE2可快速结合、快速解离 ,其它 3株mAb结合稳定。结论　经多种方法鉴定 ,所获得的 12株杂交瘤细胞分泌的抗体 。 展开更多
关键词 生物传感器 戊型肝炎病毒 ORF2 单克隆抗体
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