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纳米孔测序技术在动物疫病中应用的研究进展
1
作者 李鑫 沈海潇 +6 位作者 葛菲菲 杨德全 鞠厚斌 王建 白艺兰 桂亚萍 赵洪进 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2024年第9期119-124,共6页
第三代纳米孔测序是一种便携、方便、相对快速且经济有效的技术,具有长读长、高通量、实时提供测序数据等特点,在现场检测、临床诊断、流行病学调查和微生物鉴别等方面都有巨大的发展潜力。本文主要比较了下一代测序技术和第三代测序技... 第三代纳米孔测序是一种便携、方便、相对快速且经济有效的技术,具有长读长、高通量、实时提供测序数据等特点,在现场检测、临床诊断、流行病学调查和微生物鉴别等方面都有巨大的发展潜力。本文主要比较了下一代测序技术和第三代测序技术的优缺点,讨论了纳米孔测序数据的相关分析,以及该技术在动物疫病临床应用的例子,展望了纳米孔测序技术的发展以及在动物疫病诊断与防控领域的潜在前景。 展开更多
关键词 纳米孔测序 数据分析 动物疫病 检测
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PRRSV非结构蛋白Nsp1α合成肽多克隆抗体的制备及应用
2
作者 解艺璇 张彦兵 +10 位作者 李慧 朱琳 葛菲菲 刘珂 魏建超 李宗杰 邵东华 李蓓蓓 马志永 孙延鸣 邱亚峰 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第3期19-26,共8页
本研究尝试利用PRRSV Nsp1α合成肽进行多克隆抗体的制备,并对抗体的特性进行了分析。首先,利用生物信息学技术预测获得PRRSV非结构蛋白Nsp1α的抗原肽序列;随后,按照此序列合成获得抗原肽,并将其与KLH载体蛋白进行偶联;接下来,将偶联... 本研究尝试利用PRRSV Nsp1α合成肽进行多克隆抗体的制备,并对抗体的特性进行了分析。首先,利用生物信息学技术预测获得PRRSV非结构蛋白Nsp1α的抗原肽序列;随后,按照此序列合成获得抗原肽,并将其与KLH载体蛋白进行偶联;接下来,将偶联好的抗原肽与弗氏佐剂混合,通过免疫大白兔制备针对Nsp1α合成肽的多克隆抗体;最后,利用ELISA、Western blot及间接免疫荧光法对多克隆抗体的特性进行了分析。结果显示:该多克隆抗体ELISA的效价超过105;利用Western blot可以检测到特异的Nsp1α表达条带,包括瞬时转染的样品和不同毒株病毒感染的样品;利用间接免疫荧光法分析,该多克隆抗体可有效地区分病毒感染和未感染的样品。结果表明,PRRSV Nsp1α合成肽多克隆抗体可以有效地应用于PRRSV Nsp1α表达检测,为进一步研究PRRSV Nsp1α的功能提供了一个有效的工具。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 合成肽 多克隆抗体 非结构蛋白
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上海市某腹泻猪群猪流行性腹泻病毒检测及全基因序列分析
3
作者 康龙山 于慧茹 +6 位作者 杨德全 李鑫 沈海潇 杨显超 王建 徐丽娜 葛菲菲 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第1期175-181,共7页
猪流行性腹泻(PED)是由猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染引起的仔猪严重腹泻性疾病,传播快,发病急,死亡率高,给我国养猪业造成巨大损失。2021年10月上海某猪场产房仔猪发生腹泻,发病率为30%~50%,死亡率为20%~30%,猪群之前进行过疫苗免疫。粪... 猪流行性腹泻(PED)是由猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染引起的仔猪严重腹泻性疾病,传播快,发病急,死亡率高,给我国养猪业造成巨大损失。2021年10月上海某猪场产房仔猪发生腹泻,发病率为30%~50%,死亡率为20%~30%,猪群之前进行过疫苗免疫。粪便样本经猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪轮状病毒(RV)荧光RT-PCR检测,结果显示:PEDV检测为阳性,TGEV和RV检测均为阴性。经全基因测序后进行系统进化分析,结果显示:全基因序列属于GⅡ-c亚群,S基因序列属于GⅡ-b亚群,与目前的经典疫苗株CV777和变异株AJ1102相比,CV777的全基因和S基因都属于GⅠ-b群,AJ1102的全基因和S基因都属于GⅡ-b亚群,研究结果表明新基因型的PEDV已在上海地区流行,而传统疫苗株无法提供好的免疫效果,提示新的防控策略的制定和有针对性的疫苗的生产和使用,对于预防PEDV感染和流行有重要意义。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 系统进化 S基因
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狂犬病病毒LN34基因假病毒核酸国家标准物质的研制 被引量：2
4
作者 鞠厚斌 李鑫 +4 位作者 葛菲菲 杨德全 沈海潇 王建 赵洪进 《中国动物检疫》 CAS 2023年第4期123-129,共7页
LN34基因作为狂犬病病毒核酸诊断的首选基因已被广泛应用,但检测活动中涉及生物安全要求以及缺少相应的核酸标准物质,导致很难对现有核酸诊断方法进行有效评价。本研究以慢病毒为表达载体,制备了含有狂犬病病毒LN34基因的假病毒核酸标... LN34基因作为狂犬病病毒核酸诊断的首选基因已被广泛应用,但检测活动中涉及生物安全要求以及缺少相应的核酸标准物质,导致很难对现有核酸诊断方法进行有效评价。本研究以慢病毒为表达载体,制备了含有狂犬病病毒LN34基因的假病毒核酸标准物质,并对该标准物质开展了均匀性、稳定性评估以及数字PCR法定值、不确定度分析和临床试用。结果显示:制备的标准物质定值为(1.33±0.23)×10^(4)拷贝/μL,样品均匀;-20℃条件下可稳定保存6个月,4℃可稳定保存9 d,25℃可稳定保存1 d。本标准物质的研制为相关实验室开展量值溯源、能力验证、质量控制、方法评价、试剂选择等工作提供了技术支撑。 展开更多
关键词 狂犬病 核酸扩增 LN34基因 标准物质
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狂犬病病毒微滴式数字PCR检测方法的建立 被引量：2
5
作者 李鑫 鞠厚斌 +4 位作者 葛菲菲 杨德全 沈海潇 王建 赵洪进 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2023年第3期41-45,共5页
为了建立可绝对定量狂犬病病毒(RABV)的微滴式数字PCR(ddPCR)检测方法,本试验根据RABV基因组起始区域设计引物和探针,继而优化引物和探针浓度以及退火温度,并对建立的ddPCR方法的灵敏度、特异性和重复性进行分析。结果显示:ddPCR方法的... 为了建立可绝对定量狂犬病病毒(RABV)的微滴式数字PCR(ddPCR)检测方法,本试验根据RABV基因组起始区域设计引物和探针,继而优化引物和探针浓度以及退火温度,并对建立的ddPCR方法的灵敏度、特异性和重复性进行分析。结果显示:ddPCR方法的最佳引物和探针浓度分别为900 nmol/L和250 nmol/L,最佳退火温度为55℃;ddPCR方法的标准曲线相关系数(R~2)为0.999,呈现良好的线性关系;灵敏度高,最低可检测到3.37 copies/μL;特异性良好,与常见犬病原无交叉反应;重复性好,检测结果稳定。临床样品的检测结果显示,本试验建立的狂犬病病毒ddPCR方法与实时荧光定量反转录PCR(RT-PCR)方法的符合率为100%。结果表明,本试验建立的狂犬病病毒微滴式数字PCR方法灵敏度高、特异性强,可用于狂犬病病毒的绝对定量检测。 展开更多
关键词 狂犬病 微滴式数字PCR 检测方法
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真菌性阴道炎患者的心理护理及健康护理对策
6
作者 葛菲菲 《中文科技期刊数据库（文摘版）医药卫生》 2024年第7期0145-0148,共4页
探讨心理护理及健康护理对真菌性阴道炎患者的影响效果。方法 随机挑选医院收治的100例真菌性阴道炎患者为对象,并通过电脑编号方式分组,分成对照组和观察组,对照组开展常规护理,观察组开展心理护理与健康护理,观察效果。结果 观察组临... 探讨心理护理及健康护理对真菌性阴道炎患者的影响效果。方法 随机挑选医院收治的100例真菌性阴道炎患者为对象,并通过电脑编号方式分组,分成对照组和观察组,对照组开展常规护理,观察组开展心理护理与健康护理,观察效果。结果 观察组临床护理有效率高于对照组,且疾病知识知晓评分较高,焦虑抑郁负面情绪评分低于对照组,P<0.05。结论 真菌性阴道炎患者通过心理护理和健康护理可以改善患者身心健康,提高疾病认知。 展开更多
关键词 真菌性阴道炎 心理护理 健康护理 身心健康状态 护理效果
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牛源大肠杆菌耐药性研究进展 被引量：2
7
作者 张玉杰 王晓旭 +5 位作者 徐锋 沈莉萍 葛菲菲 刘健 唐聪圣 王建 《中国奶牛》 2023年第10期29-36,共8页
牛源致病性大肠杆菌是导致牛细菌性疾病的重要病原体之一,抗菌药是治疗及预防牛大肠杆菌病的重要手段,然而在养殖过程中,长期且不合理的使用抗菌药物,导致大肠杆菌耐药问题频发,且耐药性具有通过人与动物的直接接触或借助食物链将耐药... 牛源致病性大肠杆菌是导致牛细菌性疾病的重要病原体之一,抗菌药是治疗及预防牛大肠杆菌病的重要手段,然而在养殖过程中,长期且不合理的使用抗菌药物,导致大肠杆菌耐药问题频发,且耐药性具有通过人与动物的直接接触或借助食物链将耐药基因从动物传播给人类的可能,严重威胁人类健康及公共卫生安全。本文根据近几年国内外关于牛源大肠杆菌耐药性基因的研究报道,对大肠杆菌耐药机制、耐药基因检出率及耐药表型进行综述,以期为大肠杆菌耐药性的研究提供参考。 展开更多
关键词 牛 大肠杆菌 耐药机制 耐药表型 耐药基因
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重组酶扩增技术概述及应用研究进展
8
作者 陈兴浩 李鑫 +10 位作者 沈海潇 张校培 徐丽娜 张鹤平 葛菲菲 杨显超 刘健 白艺兰 王建 杨德全 赵洪进 《中国动物检疫》 CAS 2023年第11期76-81,共6页
重组酶扩增技术是近几年快速发展起来的一类等温扩增技术,相对于传统的核酸检测方法,具有设备要求低、操作简单等优势,在现场快速检测方面有着广阔的应用前景。本文简要介绍了重组酶扩增技术的技术原理、优点和难点,重点阐述了其在病毒... 重组酶扩增技术是近几年快速发展起来的一类等温扩增技术,相对于传统的核酸检测方法,具有设备要求低、操作简单等优势,在现场快速检测方面有着广阔的应用前景。本文简要介绍了重组酶扩增技术的技术原理、优点和难点,重点阐述了其在病毒、细菌、寄生虫及其他微生物检测领域的应用研究进展,旨在为重组酶扩增技术的进一步发展与应用提供参考。 展开更多
关键词 重组酶聚合酶扩增技术 酶促重组等温扩增技术 重组酶介导等温扩增技术 多酶恒温核酸快速扩增技术
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主动免疫GnRH疫苗对公犬生殖功能的影响
9
作者 曾悦 葛菲菲 +6 位作者 惠晓晨 王同兆 任婧 史开拓 王莹 周登元 李秋燕 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2023年第21期111-116,135,共7页
为了探究促性腺激素释放激素(GnRH)疫苗对公犬生殖功能的影响,试验将GnRH基因克隆至原核表达载体中,转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,用终浓度为1 mmol/L IPTG诱导蛋白表达,通过SDS-PAGE和Western-blot对表达产物进行蛋白鉴定,将... 为了探究促性腺激素释放激素(GnRH)疫苗对公犬生殖功能的影响,试验将GnRH基因克隆至原核表达载体中,转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,用终浓度为1 mmol/L IPTG诱导蛋白表达,通过SDS-PAGE和Western-blot对表达产物进行蛋白鉴定,将鉴定正确的GnRH蛋白纯化后制备成抗原。选取6只2~4月龄健康公犬随机分成2组,每组3只,其中免疫组每只犬免疫GnRH蛋白1 mg,共免疫3次,每次间隔4周,分别于免疫前和一免、二免、三免后14天采血,通过ELISA检测血清GnRH抗体及睾酮水平,并于最后一次采血结束后制备睾丸组织切片,观察睾丸组织形态。结果表明:3次免疫后免疫组GnRH抗体水平均显著高于对照组(P<0.05),睾酮水平均显著低于对照组(P<0.05),免疫组睾丸相对较小,曲精小管中生精细胞数量较少,管径较细。说明主动免疫GnRH疫苗抑制了公犬的性腺发育和生殖器官的成熟。 展开更多
关键词 主动免疫 促性腺激素释放激素(GnRH) 公犬 生殖功能 去势
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副溶血性弧菌PCR检测方法的建立 被引量：13
10
作者 葛菲菲 徐锋 +1 位作者 沈莉萍 王建 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期229-232,共4页
为了建立适于基层单位应用的针对副溶血性弧菌检测的特异PCR方法,检测副溶血性弧菌的基因序列。针对该菌的属特异性基因t1基因进行引物设计,扩增片段大小为449 bp。运用该PCR法可特异性的从副溶血性弧菌ATCC17802标准株中扩增出目的基... 为了建立适于基层单位应用的针对副溶血性弧菌检测的特异PCR方法,检测副溶血性弧菌的基因序列。针对该菌的属特异性基因t1基因进行引物设计,扩增片段大小为449 bp。运用该PCR法可特异性的从副溶血性弧菌ATCC17802标准株中扩增出目的基因片段,与GenBank上发表的序列同源性为100%。而经常污染海产品的溶藻弧菌,嗜水气单胞菌标准株J-1,铜绿假单胞菌标准株ATCC27853结果均为阴性。该PCR法最低检出菌体DNA量为10-2 ng以及最低检出菌数为5.7×103 CFU/mL。对临床上送检的35份样品进行菌体DNA PCR方法检测并同时与国标GB/T4789.7-2003中使用的检测方法进行比对,两种检测方法的结果完全符合,与国标中使用的检测方法相比可大大缩短鉴定时间。因此该PCR法能快速鉴定当前副溶血性弧菌流行群,有利于流行病学溯源等研究。 展开更多
关键词 副溶血性弧菌 PCR t1基因 GB/T4789.7-2003
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乙脑病毒E蛋白中和表位与结核杆菌hsp70在大肠杆菌中的融合表达 被引量：5
11
作者 葛菲菲 刘佩红 +3 位作者 王建 沈莉萍 徐锋 孙泉云 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期208-212,共5页
根据大肠杆菌偏嗜性密码子原则,人工合成了乙脑病毒E蛋白C末端的中和表位,位于E蛋白上373-399 aa,通过EcoRⅠ和HindⅢ连接构建原核表达载体pET-32a-epitope。将hsp70通过HindⅢ和XhoⅠ连接到载体pET-32a-epitope上中和表位的3′端,构建... 根据大肠杆菌偏嗜性密码子原则,人工合成了乙脑病毒E蛋白C末端的中和表位,位于E蛋白上373-399 aa,通过EcoRⅠ和HindⅢ连接构建原核表达载体pET-32a-epitope。将hsp70通过HindⅢ和XhoⅠ连接到载体pET-32a-epitope上中和表位的3′端,构建融合表达载体pet-32a-epitope-hsp70。诱导表达后,将上清和沉淀分别进行SDS-PAGE,结果表明该融合蛋白以包含体形式存在。将包含体在8 mol/L的尿素中过夜溶解,然后将上清过柱,获得良好的纯化结果。融合蛋白的分子量为94 kD。Western blot显示该蛋白兼具对JEV和结核杆菌热休克蛋白70（M.Thsp70）的特异抗原性。 展开更多
关键词 乙脑病毒E蛋白中和表位 大肠杆菌 结核杆菌hsp70 融合 包含体
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2007-2008年上海市H9N2亚型禽流感病毒的遗传演化 被引量：5
12
作者 葛菲菲 刘健 +2 位作者 鞠厚斌 张维谊 周锦萍 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期696-699,共4页
目的对分离自上海活禽批发市场的11株H9N2亚型AIV(2007年5株、2008年6株)进行了PB2,PB1,HA,NP和NA的测序,以阐明2007年至2008年上海地区H9N2亚型禽流感病毒分离株的遗传变异及分子特征。方法采集鸡气管和泄殖腔样品,将H9亚型荧光RT-PCR... 目的对分离自上海活禽批发市场的11株H9N2亚型AIV(2007年5株、2008年6株)进行了PB2,PB1,HA,NP和NA的测序,以阐明2007年至2008年上海地区H9N2亚型禽流感病毒分离株的遗传变异及分子特征。方法采集鸡气管和泄殖腔样品,将H9亚型荧光RT-PCR试剂盒检测的阳性样品处理后,经鸡胚尿囊腔接种分离病毒,HI进一步确定HA亚型,通过RT-PCR方法分别扩增了这11个毒株的PB2,PB1,HA,NP和NA并进行了序列测定。结果对HA基因进行遗传发生关系分析,这11株分离株均属于Ck/Bei/1/94系。这11个毒株的5个片段的组成有两种方式。结论上海活禽批发市场的11株H9N2亚型AIV毒株中已包含了H5的片段,所以在今后的工作中加强H9N2亚型禽流感流行病学监测是非常必要的。 展开更多
关键词 H9N2亚型禽流感 测序 遗传发生关系
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上海市三株H9N2鸭禽流感病毒全基因遗传进化分析 被引量：11
13
作者 葛菲菲 刘健 +3 位作者 杨德全 鞠厚斌 葛杰 周锦萍 《中国动物传染病学报》 CAS 2014年第5期15-20,共6页
为了解上海市鸭群中H9N2亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)的遗传变异特征,以及与疫苗株A/Chicken/Shan dong/6/1996和A/Chicken/Shanghai/F/1998之间的遗传距离,对2007年和2009年分离自上海市鸭气管和泄殖腔样品采用荧光RT-PC... 为了解上海市鸭群中H9N2亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)的遗传变异特征,以及与疫苗株A/Chicken/Shan dong/6/1996和A/Chicken/Shanghai/F/1998之间的遗传距离,对2007年和2009年分离自上海市鸭气管和泄殖腔样品采用荧光RT-PCR检测,将H9亚型禽流感病毒核酸阳性样品处理后,经鸡胚尿囊腔接种分离病毒,HI进一步确定血凝素(haemagglutin,HA)亚型,随后进行了全基因测序,并结合GenBank中的相关序列进行遗传进化分析。结果表明:3株分离毒株为H9N2亚型鸭禽流感病毒,HA蛋白裂解位点的氨基酸组成为PARSSRGLF,符合低致病性禽流感病毒特征,均属于经典的H9N2 Ck/Bei群系;NA基因均属于Y280系;NP、PA基因和A/Goose/Guangdong/1/1996(H5亚型)归为一群;PB2和M基因属于Qa/HK/G1/97系;NS基因仍为Ck/Bei系;2007年的分离株和2009年的分离株在PB1基因上分属不同亚群。3株病毒的HA1基因与疫苗株A/Chicken/Shandong/6/1996和A/Chicken/Shanghai/F/1998之间的遗传距离均大于7%。由此可见,3株鸭H9N2亚型毒株可能是由不同禽流感病毒基因亚群间发生自然重排的产物,现有疫苗对分离株的保护性需要进一步评估。 展开更多
关键词 H9N2亚型禽流感病毒 遗传进化分析 遗传距离
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猪圆环病毒3型的检测及其全基因进化分析 被引量：6
14
作者 葛菲菲 李鑫 +4 位作者 刘健 鞠厚斌 杨德全 王建 周锦萍 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2018年第4期6-10,共5页
本研究对2016年3月~2017年3月采集于上海市猪场的20份病料进行了病原体检测,并对检测到的圆环病毒3型(Porcine circovirus type 3,PCV3)进行了全基因分析。检测结果显示:猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory s... 本研究对2016年3月~2017年3月采集于上海市猪场的20份病料进行了病原体检测,并对检测到的圆环病毒3型(Porcine circovirus type 3,PCV3)进行了全基因分析。检测结果显示:猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRSV)阳性病料1份,而猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)、猪伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)、猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)、猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)、猪乙脑病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)均为阴性;PCV3阳性病料2份,其中1份为PCV3和PRRSV混合感染。对这2株PCV3进行全基因测序和Blast分析,并绘制PCV3全基因、囊膜蛋白基因的遗传进化树,结果显示:与这2株病毒基因同源性最高的毒株为CN/Hubei-618/2016,同源性为99%;在全基因进化树中,这2株毒株和中国来源的PCV3毒株以及美国毒株PCV3/USA/MO2015(Gen Bank登录号:KX778720.1)在同一群中;在囊膜蛋白基因的进化树中,这2株PCV3属于PCV3a。 展开更多
关键词 猪圆环病毒3型 混合感染 基因进化分析
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H9N2亚型禽流感病毒抗原性变异的研究 被引量：5
15
作者 葛菲菲 刘健 +3 位作者 杨德全 李鑫 鞠厚斌 周锦萍 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2015年第5期10-14,共5页
为了解不同年分离的H9N2亚型禽流感病毒（Avian infl uenza virus,AIV）之间的抗原相关性,挑选2002年、2006～2014年在上海市分离的14株H9N2亚型禽流感病毒,通过血凝抑制（hemagglutination inhibition,HI）交叉试验进行抗原性比较和分... 为了解不同年分离的H9N2亚型禽流感病毒（Avian infl uenza virus,AIV）之间的抗原相关性,挑选2002年、2006～2014年在上海市分离的14株H9N2亚型禽流感病毒,通过血凝抑制（hemagglutination inhibition,HI）交叉试验进行抗原性比较和分析。HI试验结果显示,2002年,2006～2014年这14株H9N2亚型AIV不同毒株间已经发生了抗原漂移,划分成4个不同的抗原群,A/Chicken/Shanghai/Y1/2002和A/Chicken/Shanghai/Y1/2006归为一个抗原群,A/Chicken/Shanghai/C/2011独自成为一个抗原群,A/Pigeon/Shanghai/JC1/2013、A/Chicken/Shanghai/1107/2013归为同一个抗原群,其余毒株均为一个抗原群。综上所述,随着时间的推移,H9N2 AIV抗原发生了不同程度的漂变,但是也存在在某个时间段多种抗原群共存的情况。该研究结果从理论上为上海市制定禽流感防控策略,有效防制H9N2 AIV流行提供了科学的指导,为生产H9N2亚型流感免疫与疫苗候选毒株的选择提供参考依据。 展开更多
关键词 H9N2亚型禽流感病毒 交叉HI试验 抗原漂移
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雉鸡禽偏肺病毒、鸡毒支原体及细菌混合感染的诊断 被引量：2
16
作者 葛菲菲 齐新永 +5 位作者 李鑫 刘健 杨德全 鞠厚斌 陆雪林 周锦萍 《中国家禽》 北大核心 2017年第10期65-66,共2页
为确定上海市某雉鸡场雉鸡发生眼睑肿胀的原因,通过PCR检测、病理组织学以及细菌学检查查找致病病原。PCR检测为鸡传染性鼻炎阴性、鸡毒支原体阳性和禽偏肺病毒(Avi-an metapneumovirus,a MPV)阳性。通过对F基因核苷酸序列分析,禽偏肺... 为确定上海市某雉鸡场雉鸡发生眼睑肿胀的原因,通过PCR检测、病理组织学以及细菌学检查查找致病病原。PCR检测为鸡传染性鼻炎阴性、鸡毒支原体阳性和禽偏肺病毒(Avi-an metapneumovirus,a MPV)阳性。通过对F基因核苷酸序列分析,禽偏肺病毒属于B亚型。同时细菌分离到大肠杆菌、肠球菌、葡萄球菌和链球菌。结果表明,B亚型禽偏肺病毒并混合感染鸡毒支原体和细菌是该场雉鸡群发病的原因。 展开更多
关键词 雉鸡 禽偏肺病毒 鸡毒支原体 细菌 混合感染
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乙脑病毒E-Hsp70与E-肽连接区对小鼠特异性免疫的比较 被引量：5
17
作者 葛菲菲 邱亚峰 +1 位作者 杨耀武 陈溥言 《中国病毒学》 CSCD 2005年第4期357-361,共5页
在本实验室已构建的原核表达载体(含乙脑疫苗株SA14-14-2株E蛋白基因主要抗原片段)的基础上用巴斯德毕赤酵母系统表达,该片段长1113bp,编码371个氨基酸残基,研究酵母表达的该乙脑病毒(Japaneseencephali-tisvirus)E蛋白主要抗原片段与... 在本实验室已构建的原核表达载体(含乙脑疫苗株SA14-14-2株E蛋白基因主要抗原片段)的基础上用巴斯德毕赤酵母系统表达,该片段长1113bp,编码371个氨基酸残基,研究酵母表达的该乙脑病毒(Japaneseencephali-tisvirus)E蛋白主要抗原片段与结核杆菌热休克蛋白70(Hsp70)的融合蛋白以及该抗原肽与Hsp70上的一个功能域-肽连接区(Peptidebindingdomain,以下简称BD)融合形成的蛋白,用这三种蛋白分别免疫BALB/c小鼠,以酵母单独表达的E蛋白主要抗原片段免疫作为对照,比较它们对小鼠抗E蛋白主要抗原片段特异性的细胞免疫和体液免疫的影响。采用腹腔内注射蛋白的方法免疫小鼠,主要从IL-2的mRNA水平,淋巴细胞的增殖和抗体滴度这三个方面进行比较,最后我们得出E-BD融合蛋白在免疫效果方面比E-Hsp70略好一些,所以在本试验中肽连接区是完全可以代替Hsp70独立行使其佐剂功能。 展开更多
关键词 乙脑病毒E蛋白 主要抗原片段 结核杆菌热休克蛋白70(Hsp70) 肽连接区 淋巴细胞的增殖
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糖尿病肾病早期诊疗进展 被引量：11
18
作者 葛菲菲 宋立群 《辽宁中医杂志》 CAS 北大核心 2010年第S1期317-320,共4页
糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)是糖尿病(diabetes mellitus,DM)常见和主要的慢性微血管并发症之一也是糖尿病患者死亡的重要原因。早期糖尿病肾病在临床中容易被忽略,仅表现为持续性微量白蛋白尿(UAER持续在20～200μg/min)为此... 糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)是糖尿病(diabetes mellitus,DM)常见和主要的慢性微血管并发症之一也是糖尿病患者死亡的重要原因。早期糖尿病肾病在临床中容易被忽略,仅表现为持续性微量白蛋白尿(UAER持续在20～200μg/min)为此期标志。近年来对DN早期的病机、诊断、治疗方法、中西医都有了更深的认识,而且运用中西医结合的治疗手法,在临床中也取得了很好的疗效,现就近年中西医在DN早期的诊疗方法进展综述如下。 展开更多
关键词 糖尿病肾病早期 中西医诊疗 综述
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上海地区H9亚型禽流感病毒HA基因序列分析 被引量：1
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作者 葛菲菲 刘健 +6 位作者 鞠厚斌 张维谊 王建 沈莉萍 徐锋 周锦萍 刘佩红 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期940-943,共4页
目的对分离自上海活禽批发市场的7株H9AIV(2002年1株、2006-2008年每年各2株)进行了HA序列的测定,以阐明这7株毒株HA基因的遗传变异及分子特征。方法采集鸡气管和泄殖腔样品,将H9亚型荧光RT-PCR试剂盒检测的阳性样品处理后,经鸡胚尿囊... 目的对分离自上海活禽批发市场的7株H9AIV(2002年1株、2006-2008年每年各2株)进行了HA序列的测定,以阐明这7株毒株HA基因的遗传变异及分子特征。方法采集鸡气管和泄殖腔样品,将H9亚型荧光RT-PCR试剂盒检测的阳性样品处理后,经鸡胚尿囊腔接种分离病毒,HI进一步确定HA亚型,通过RT-PCR方法分别扩增了这7个毒株的HA基因,并将其克隆到pMD18-T载体后进行序列测定与同源性分析。结果HI试验表明这7株毒株均属于H9亚型禽流感病毒。核苷酸和其推导的氨基酸序列同源性比较结果表明,这7株毒株HA基因的核苷酸序列同源性为88.6%～99.6%,氨基酸序列同源性为89.1%～99.1%;7株分离株HA基因的裂解位点氨基酸顺序则均为RSSR↓GLF,为低致病性毒株;所有毒株的潜在糖基化位点均有7个;2002年的分离株与2006年早期的分离株在aa226和aa228位分别为Q和G,其余5株分离株在这两个位点分别为L和G。遗传发生关系分析,这7株分离株均属于Ck/Bei/1/94系。结论上海地区7株H9亚型分离株具有相同的起源,且分子特性相似,受疫苗免疫选择压力的影响不大。 展开更多
关键词 H9亚型禽流感 序列测定 同源性 遗传发生关系
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2012年上海地区发病鸡群H9N2亚型禽流感病毒的变异分析 被引量：2
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作者 葛菲菲 刘健 +2 位作者 杨德全 鞠厚斌 周锦萍 《中国动物传染病学报》 CAS 2013年第2期25-31,共7页
为了了解2012年分离自上海发病鸡群的H9N2亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIS)的遗传变异特征,采集发病鸡群中病死鸡气管、肺、脑和肾脏等内脏,经实验室诊断为H9亚型禽流感病毒核酸阳性。将阳性样品处理后,经鸡胚尿囊腔接种分离... 为了了解2012年分离自上海发病鸡群的H9N2亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIS)的遗传变异特征,采集发病鸡群中病死鸡气管、肺、脑和肾脏等内脏,经实验室诊断为H9亚型禽流感病毒核酸阳性。将阳性样品处理后,经鸡胚尿囊腔接种分离病毒,HI进一步确定HA亚型,通过RT-PCR方法分别扩增了3个分离株的8个基因片段并进行了序列分析。3株分离株均为H9N2亚型禽流感病毒,与以往从上海地区健康鸡群中分离的4株H9N2毒株相比,本研究中的3株分离株由于HA基因220位的氨基酸发生了变异,缺失了HA上218～220位的一个潜在的糖基化位点,并且HA基因受体结合位点的左缘235位发生了变异。从HA基因抗原位点的分析表明,与疫苗株Ck/SD/6/96相比,这3株H9N2亚型禽流感病毒7个抗原位点中已有4个发生了改变。遗传发生关系表明这3株分离株均属于Ck/Bei/1/94系,与08年的分离株Ck/SH/Y1/08 8个基因片段所属基因型相同。2012年上海地区发病鸡群中分离的上述3株H9N2禽流感病毒基因序列已发生变异,是否导致其生物学特性发生改变以及目前使用的疫苗能否给禽群提供足够的保护力还需要作进一步的研究。 展开更多
关键词 发病鸡群 H9N2亚型禽流感 变异
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