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沙棘多糖提取物对LPS/D-GalN诱导的小鼠肝损伤的保护作用及其对TLR4,SOCS3表达的调控 被引量：9
1
作者 王雪 张威 +6 位作者 刘欢 谢基明 董仕超 陈俊娜 王岩 刘芳 王玉珍 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期1457-1460,共4页
目的:研究沙棘多糖提取物对LPS联合D-Gal N诱导的肝损伤的保护作用以及对肝脏TLR4,SOCS3蛋白表达的调控。方法:将C57BL/6系雄性小鼠随机分为6组,即空白对照组、模型组、地塞米松阳性对照组、沙棘多糖低、中、高剂量组;沙棘多糖低、中、... 目的:研究沙棘多糖提取物对LPS联合D-Gal N诱导的肝损伤的保护作用以及对肝脏TLR4,SOCS3蛋白表达的调控。方法:将C57BL/6系雄性小鼠随机分为6组,即空白对照组、模型组、地塞米松阳性对照组、沙棘多糖低、中、高剂量组;沙棘多糖低、中、高剂量组分别以50、100和200 mg/kg沙棘多糖溶液连续灌胃14 d。通过腹腔注射LPS(10μg/kg)和DGal N(700 mg/kg)建立急性肝损伤模型,阳性药物组在建模前腹腔注射地塞米松(10 mg/kg)。建模4 h后采集血清和肝脏组织,检测血清ALT和AST水平,HE染色观察沙棘多糖提取物对肝损伤的影响。Western blot检测TLR4,SOCS3的表达情况。结果:沙棘多糖提取物显著降低了LPS/D-Gal N诱导的小鼠血清中ALT和AST水平(P<0.01,P<0.05);HE染色观察显示,沙棘多糖明显减轻了肝细胞损伤和炎性细胞浸润。Western blot检测表明,沙棘多糖提取物抑制了LPS/D-Gal N诱导的TLR4的表达,但是对SOCS3的表达影响不明显。结论:沙棘多糖提取物有效抑制了LPS/D-Gal N诱导的肝损伤,这种保护作用可能是通过抑制TLR4的表达来发挥作用的,而非通过调控SOCS3来实现的。 展开更多
关键词 沙棘多糖 LPS D-GALN 肝损伤 TLR4 SOCS3
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Rab5a促进CpG诱导的巨噬细胞中炎性细胞因子和Ⅰ型干扰素的表达 被引量：3
2
作者 陈俊娜 孙晓琳 +7 位作者 董仕超 邹凯 刘欢 王岩 王雪 刘芳 谢基明 王玉珍 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期165-168,173,共5页
目的:采用稳定表达Rab5a及其显性负性突变体Rab5a N133I的巨噬细胞系RAW264.7,研究Rab5a及其突变体过表达后对Cp G诱导的炎性细胞因子和Ⅰ型干扰素的表达的影响。方法:通过脂质体法将Rab5a及其突变体Rab5a N133I的真核表达载体转染到RAW... 目的:采用稳定表达Rab5a及其显性负性突变体Rab5a N133I的巨噬细胞系RAW264.7,研究Rab5a及其突变体过表达后对Cp G诱导的炎性细胞因子和Ⅰ型干扰素的表达的影响。方法:通过脂质体法将Rab5a及其突变体Rab5a N133I的真核表达载体转染到RAW264.7细胞中,用G418选择性培养基进行筛选,建立稳定表达Rab5a、Rab5a N133I的细胞系。通过RT-PCR、Real time-PCR和Western blot方法鉴定稳定表达的细胞系。用Cp G刺激稳定表达Rab5a、Rab5a N133I的细胞系8 h后检测细胞因子TNF-α、IL-1β和IFN-β的表达量变化。结果:RAW264.7转染Rab5a真核表达载体后Rab5a的表达量显著高于对照质粒转染细胞(P<0.05)。Rab5a过表达后,在Cp G刺激作用下RAW264.7分泌的TNF-α、IL-1β显著升高(P<0.01),IFN-β的分泌也显著升高(P<0.05),而Rab5a N133I过表达后上述细胞因子的分泌均有所恢复。结论:Rab5a促进了Cp G诱导的巨噬细胞中炎性细胞因子和Ⅰ型干扰素的表达,Rab5a可能是TLR9信号通路的正向调控蛋白。 展开更多
关键词 RAB5A CPG TLR9 TNF-Α IL-1Β IFN-Β
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乳腺癌细胞中Rab7基因的克隆及序列分析 被引量：5
3
作者 云小乐 董仕超 +3 位作者 张威 谢基明 康鸿斌 王玉珍 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期248-252,共5页
本实验主要是从人乳腺癌细胞中克隆Rab7基因并进行基因序列比对和分析。通过培养乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB231,提取细胞总RNA,逆转录为cDNA,以此cDNA为模板,根据GenBank公布的人Rab7全长序列设计引物,扩增Rab7基因的开放阅读框。将其与... 本实验主要是从人乳腺癌细胞中克隆Rab7基因并进行基因序列比对和分析。通过培养乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB231,提取细胞总RNA,逆转录为cDNA,以此cDNA为模板,根据GenBank公布的人Rab7全长序列设计引物,扩增Rab7基因的开放阅读框。将其与真核表达载体pc-DNA3.1连接,构建pcDNARab7重组质粒。测序后发现MCF-7细胞中克隆的Rab7序列与GenBank序列的同源性为91%,发生了多处突变,其中94.4%为同义突变,5.5%为错义突变。但是MDA-MB231细胞中克隆的Rab7基因序列与GenBank中的Rab7序列的同源性为100%。由于发现Rab7在MCF-7乳腺癌细胞中发生突变,而在MDA-MB-231乳腺癌细胞中基因未发生突变,我们推测Rab7基因的突变是否与乳腺癌的产生有关系,这个发现为以后研究Rab7与乳腺癌的关系奠定了基础。 展开更多
关键词 Rab7 基因克隆 基因突变 MCF-7 MDA-MB231
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沙棘多糖的提取纯化及其对巨噬细胞的作用研究 被引量：8
4
作者 宋亮 张威 +2 位作者 董仕超 谢基明 王玉珍 《内蒙古农业大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2013年第5期87-92,共6页
本文以内蒙古大果沙棘为材料,用超声裂解法结合热水提取法提取沙棘多糖。并用Sevage法结合木瓜蛋白酶法除蛋白,SephadexG-150进行柱层析,提取并纯化出沙棘多糖冻干纯品HPRⅠa,并对其进行纯度鉴定。用MTT法和中性红法初步探讨沙棘多糖对R... 本文以内蒙古大果沙棘为材料,用超声裂解法结合热水提取法提取沙棘多糖。并用Sevage法结合木瓜蛋白酶法除蛋白,SephadexG-150进行柱层析,提取并纯化出沙棘多糖冻干纯品HPRⅠa,并对其进行纯度鉴定。用MTT法和中性红法初步探讨沙棘多糖对RAW264.7巨噬细胞的作用。发现随着多糖作用浓度的增加,RAW264.7细胞的增殖活性和吞噬能力也随之增强,作用浓度达到300μg/mL时细胞的增殖活性基本达到一个平台期。由此可已初步判断HPRⅠa对巨噬细胞具有明显的促增殖作用。 展开更多
关键词 沙棘多糖 提取 纯化 巨噬细胞 增殖
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益生菌Lactobacillus Casei Zhang对巨噬细胞中NO/iNOS表达的影响及其机制
5
作者 张威 谢基明 +3 位作者 云小乐 董仕超 王玉珍 张和平 《内蒙古农业大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2014年第2期87-91,共5页
目的：研究益生菌L.Casei Zhang对巨噬细胞RAW264.7中NO/iNOS表达的影响及探讨相关机制。方法：1×10-6CFU益生菌L.Casei Zhang与巨噬细胞RAW264.7细胞共培养2h,6h,12h,24h。收集细胞培养上清,检测NO的表达变化。通过Real-rime PCR... 目的：研究益生菌L.Casei Zhang对巨噬细胞RAW264.7中NO/iNOS表达的影响及探讨相关机制。方法：1×10-6CFU益生菌L.Casei Zhang与巨噬细胞RAW264.7细胞共培养2h,6h,12h,24h。收集细胞培养上清,检测NO的表达变化。通过Real-rime PCR检测iNOS、TLR2和TLR4表达的变化。L.Casei Zhang与RAW264.7共培养3h后,以LPS、CpG和PolyI：C刺激细胞,检测NO和iNOS表达的变化。结果：益生菌L.Casei Zhang促进了巨噬细胞中NO分泌和iNOS的表达。与TLR2的本底表达相比,L.Casei Zhang上调了RAW264.7细胞中TLR2的表达。TLR4 mRNA的表达在L.Casei Zhang与RAW264.7细胞共培养后2h显著增高。LPS和PolyI：C活化的巨噬细胞在L.Casei Zhang预处理后,NO/iNOS的表达水平显著降低。结论：益生菌L.Casei Zhang促进巨噬细胞中NO/iNOS的表达与促进TLR2和TLR4的表达有关。L.Casei Zhang抑制了LPS和PolyI：C诱导的巨噬细胞中NO/iNOS的表达。该研究为进一步阐明益生菌的免疫调节作用奠定了基础。 展开更多
关键词 益生菌 巨噬细胞 TLR iNOS NO
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