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艰难梭菌毒素AC端结构域在大肠杆菌中的可溶性表达与卵黄抗体的制备 被引量：7
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作者 郭桂萍 董创创 +5 位作者 戴洁 李敏 于锦丽 马慧文 林东海 冯东晓 《军事医学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期676-680,共5页
目的重组表达艰难梭菌毒素A的C端结构域,制备针对艰难梭菌毒素A C端结构域的卵黄抗体。方法将优化合成的艰难梭菌毒素A的C端结构域DNA片段克隆到表达载体pET32b(+)上,重组质粒转入大肠杆菌中诱导表达,经高亲和镍离子树脂纯化得到融合蛋... 目的重组表达艰难梭菌毒素A的C端结构域,制备针对艰难梭菌毒素A C端结构域的卵黄抗体。方法将优化合成的艰难梭菌毒素A的C端结构域DNA片段克隆到表达载体pET32b(+)上,重组质粒转入大肠杆菌中诱导表达,经高亲和镍离子树脂纯化得到融合蛋白,凝血酶酶切后用高亲和镍离子树脂吸附多余多肽获得目的蛋白。检测目的蛋白的生物学活性,用目的蛋白免疫产蛋鸡制备针对艰难梭菌毒素A受体结合区的鸡卵黄抗体,分离纯化鸡卵黄抗体并用ELISA测定卵黄抗体的效价。结果获得了优化的艰难梭菌毒素A受体结合区的基因片段,继而制备了具有生物学活性的毒素A C端结构域重组蛋白。免疫产蛋鸡后获得了效价1∶50 000的抗艰难梭菌毒素A的卵黄抗体。结论获得了具有生物学活性的艰难梭菌毒素A C端结构域重组蛋白,为建立艰难梭菌基因工程疫苗打下了基础,并制备了针对艰难梭菌毒素蛋白A的卵黄抗体,可用于艰难梭菌相关性腹泻的诊断和治疗。 展开更多
关键词 艰难梭菌毒素A 重组蛋白 卵黄抗体(IgY)
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人斯钙素1在大肠杆菌中的重组表达与活性鉴定
2
作者 刘培培 董创创 +2 位作者 刘广芝 孙君波 张菊新 《军事医学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期39-43,共5页
目的通过原核表达的方法得到有活性的斯钙素1(STC1)重组蛋白。方法将优化合成的STC1 DNA片段克隆到表达载体pET-32b(+)上,重组质粒转入大肠杆菌诱导表达,在变性条件下纯化包涵体,经透析复性得到可溶的斯钙素1融合蛋白,凝血酶酶切后用高... 目的通过原核表达的方法得到有活性的斯钙素1(STC1)重组蛋白。方法将优化合成的STC1 DNA片段克隆到表达载体pET-32b(+)上,重组质粒转入大肠杆菌诱导表达,在变性条件下纯化包涵体,经透析复性得到可溶的斯钙素1融合蛋白,凝血酶酶切后用高亲和镍离子树脂吸附多余多肽获得目的蛋白。Western印迹分析验证目的蛋白免疫活性。动物实验检测目的蛋白的生物学活性。结果构建了pET-32b(+)-STC1表达载体,表达并纯化了STC1融合蛋白包涵体,经复性、凝血酶切和纯化后获得可溶的目的蛋白。Western印迹分析验证正确。生物学活性检测表明重组STC1能增加大鼠排泄系统对磷酸盐的重吸收。结论获得了具有生物学活性的斯钙素1重组蛋白,为制备STC1单克隆抗体和进一步研究STC1与肿瘤治疗的关系奠定了基础。 展开更多
关键词 斯钙素1 原核表达 包涵体复性 磷酸盐重吸收
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