白桦酯醇对食管癌细胞EC109的抑制作用 被引量：11

1

作者 蔡唯佳 马云青 +4 位作者 祁逸梅 牛永东 许丽艳 李建新 李恩民 《癌变．畸变．突变》 CAS CSCD 2006年第1期16-18,共3页

背景与目的白桦酯醇是一种重要的三萜类生物活性分子,本文从白桦树皮中提取获得白桦酯醇纯品,然后研究该生物活性分子抑制食管癌细胞的活性。材料与方法取一定量的白桦树皮干粉,通过乙醇回流,减压浓缩和甲醇-氯仿重结晶等步骤获得白桦... 背景与目的白桦酯醇是一种重要的三萜类生物活性分子,本文从白桦树皮中提取获得白桦酯醇纯品,然后研究该生物活性分子抑制食管癌细胞的活性。材料与方法取一定量的白桦树皮干粉,通过乙醇回流,减压浓缩和甲醇-氯仿重结晶等步骤获得白桦酯醇纯品。用不同剂量的白桦酯醇作用于EC109食管癌细胞48h,噻唑蓝(Methylthiazoletetrazolium,MTT)法检测细胞抑制率。结果白桦酯醇作用于食管癌细胞EC109后,EC109细胞形态发生明显改变,细胞抑制率随白桦酯醇浓度的增高而增高,呈现剂量依赖关系。结论白桦酯醇对食管癌细胞EC109有明显抑制活性。 展开更多

关键词 白桦酯醇 食管癌细胞 抗肿瘤活性

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SHEE细胞形态与细胞内F-actin含量的关系

2

作者 蔡唯佳 陈耀文 +2 位作者 许丽艳 林珏龙 李恩民 《激光生物学报》 CAS CSCD 2005年第5期336-338,共3页

为了研究食管永生化细胞在不同的培养基中,培养后细胞形态的改变。实验利用显微镜观察,鬼笔环肽(phalloidin)-FITC标记和流式细胞仪技术分析转换培养基与未转换培养基的SHEE细胞。结果显示:转换培养基后,SHEE细胞膜边缘异常,细胞连接松... 为了研究食管永生化细胞在不同的培养基中,培养后细胞形态的改变。实验利用显微镜观察,鬼笔环肽(phalloidin)-FITC标记和流式细胞仪技术分析转换培养基与未转换培养基的SHEE细胞。结果显示:转换培养基后,SHEE细胞膜边缘异常,细胞连接松散;细胞内F-actin含量降低。说明细胞培养过程中,更换细胞生长环境可影响到细胞骨架,进而改变细胞形态及细胞的粘附能力。 展开更多

关键词 食管永生化细胞 培养基 流式细胞仪 纤维型肌动蛋白

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NGAL基因在永生化食管上皮细胞恶性转化中过表达的研究 被引量：39

3

作者 许丽艳 李恩民 +2 位作者 熊华淇 蔡唯佳 沈忠英 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第6期839-843,共5页

为研究NGAL (neutrophilgelatinase associatedlipocalin)基因在永生化食管上皮细胞恶性转化中的表达情况 ,以永生化食管上皮细胞系SHEE和食管癌细胞系SHEEC互为对照 ,用cDNA微列阵进行筛选 ,用RNA印迹和RT PCR进行鉴定 ,cDNA克隆测序后... 为研究NGAL (neutrophilgelatinase associatedlipocalin)基因在永生化食管上皮细胞恶性转化中的表达情况 ,以永生化食管上皮细胞系SHEE和食管癌细胞系SHEEC互为对照 ,用cDNA微列阵进行筛选 ,用RNA印迹和RT PCR进行鉴定 ,cDNA克隆测序后与GenBank进行BLAST分析比较 .结果表明NGAL基因在SHEEC中出现显著差异过表达 ,其cDNA序列与小鼠 2 4p3、大鼠NRL (neu relatedlipocalin)、人中性粒细胞NGAL和卵巢癌NGAL具有较高的相似性 .这提示NGAL基因在永生化食管上皮细胞恶性转化中可能发挥着重要作用 。 展开更多

关键词 NGAL cDNA微列阵 差异表达基因 食管癌 永生化食管上皮细胞 恶性转化 过表达

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Fascin 1基因在永生化食管上皮细胞癌变中的表达 被引量：19

4

作者 荣举 许丽艳 +5 位作者 蔡唯佳 熊兴东 李劲涛 方王楷 沈忠英 李恩民 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第3期243-248,共6页

背景与目的:Fascin1蛋白为一种与F-肌动蛋白结合的55kDa细胞骨架蛋白,从人畸胎瘤中克隆fascin1基因。食管上皮细胞癌变机制至今不甚明了,为此,对永生化食管上皮细胞株SHEE(Shantouhumanembryonicesophagealepithelialcellline)和由SHEE... 背景与目的:Fascin1蛋白为一种与F-肌动蛋白结合的55kDa细胞骨架蛋白,从人畸胎瘤中克隆fascin1基因。食管上皮细胞癌变机制至今不甚明了,为此,对永生化食管上皮细胞株SHEE(Shantouhumanembryonicesophagealepithelialcellline)和由SHEE恶性转化而来的食管癌细胞株SHEEmt之间的差异表达基因在蛋白质和mRNA两个水平上进行检测分析,以期为揭示食管鳞状上皮细胞癌变机制提供新思路。方法:采用双向凝胶电泳技术分析SHEE与SHEEmt之间的蛋白质差异表达情况,以基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱(matrix-assistedlaserdesorption/ionizationtimeofflyingmassspectrometry,MALDI-TOF-MS)对部分差异表达蛋白质点进行鉴定,以逆转录聚合酶链反应(reversetranscriptionploymerasechainreaction,RT-PCR)对目标基因进行mRNA转录水平上的检测,并对RT-PCR产物进行序列测定分析。结果:在SHEE向SHEEmt的恶性转化中有9个基因出现差异表达,其中fascin1基因在蛋白质水平升高3.64倍,mRNA水平升高16.17倍。结论:fascin1基因可能与SHEE向SHEEmt的恶性转化有关。 展开更多

关键词 Fascin1基因 食管上皮细胞癌 基因表达 食管肿瘤

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番茄红素体外对人食管癌细胞SHEEC36的初探 被引量：11

5

作者 张庆英 沈忠英 +3 位作者 蔡唯佳 林珏龙 沈健 苏宜香 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期246-248,共3页

目的　探讨番茄红素对体外培养的人食管癌细胞的影响。方法　应用MTT法和流式细胞术手段 ,观察不同剂量的番茄红素对体外培养的人胚食管上皮癌细胞汕头株36代 (SHEEC36 )的增殖抑制及诱导凋亡作用。结果　MTT实验显示 ,番茄红素体外对SH... 目的　探讨番茄红素对体外培养的人食管癌细胞的影响。方法　应用MTT法和流式细胞术手段 ,观察不同剂量的番茄红素对体外培养的人胚食管上皮癌细胞汕头株36代 (SHEEC36 )的增殖抑制及诱导凋亡作用。结果　MTT实验显示 ,番茄红素体外对SHEEC36细胞增殖有明显的抑制作用。结论　番茄红素体外能抑制SHEEC36增殖。 展开更多

关键词 食管肿瘤 细胞周期 细胞凋亡 番茄红素 肿瘤细胞

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食管癌细胞SHEEC中NGAL基因5'-UTR和3'-UTR的克隆与鉴定 被引量：9

6

作者 李恩民 许丽艳 +6 位作者 熊华淇 蔡唯佳 吴炳礼 张灿 张永发 林艳 沈忠英 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第2期143-147,共5页

背景与目的:NGAL(neutrophilgelatinase-associatedlipocalin)基因是lipocalin家族的一个新成员。以往我们曾研究发现NGAL基因在TPA诱导永生化食管上皮细胞SHEE向食管癌细胞SHEEC恶性转化的过程中显著过表达,但表达调控机制不清楚。本... 背景与目的:NGAL(neutrophilgelatinase-associatedlipocalin)基因是lipocalin家族的一个新成员。以往我们曾研究发现NGAL基因在TPA诱导永生化食管上皮细胞SHEE向食管癌细胞SHEEC恶性转化的过程中显著过表达,但表达调控机制不清楚。本研究拟从SHEEC细胞中克隆NGAL基因的5'-UTR和3'-UTR(untranslatedregion)并进一步明确其结构特征。方法:采用RACE方法从SHEEC细胞中克隆NGAL基因的5'-UTR和3'-UTR;在测序基础上进行BLAST分析鉴定。结果:结合以往的实验结果,从SHEEC细胞中克隆了NGAL基因的69bp5'-UTR和147bp3'-UTR,而且序列分析未发现突变。结论:SHEEC细胞中的NGAL基因具备完整的5'-UTR和3'-UTR结构。 展开更多

关键词 食管肿瘤 NGAL基因 基因过表达 转录非翻译区 RACE法 克隆

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反义封闭NGAL基因表达对SHEEC食管癌细胞微丝骨架的影响 被引量：9

7

作者 林珏龙 许丽艳 +6 位作者 李恩民 蔡唯佳 牛永东 方昆阳 熊华淇 沈忠英 曾毅 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第5期409-415,共7页

为了研究反义封闭NGAL基因表达对SHEEC食管癌细胞微丝骨架以及肿瘤细胞生物学行为的影响 ,以不同长度NGAL基因片段反义表达载体和硫代修饰反义寡核苷酸单链片段转染SHEEC食管癌细胞 ,通过G4 18筛选 ,建立一系列旨在封闭SHEEC食管癌细胞N... 为了研究反义封闭NGAL基因表达对SHEEC食管癌细胞微丝骨架以及肿瘤细胞生物学行为的影响 ,以不同长度NGAL基因片段反义表达载体和硫代修饰反义寡核苷酸单链片段转染SHEEC食管癌细胞 ,通过G4 18筛选 ,建立一系列旨在封闭SHEEC食管癌细胞NGAL基因表达的亚细胞克隆 .在细胞内F 肌动蛋白 (F actin)及DNA荧光双标记基础上 ,通过流式细胞术、激光共聚焦显微镜扫描术等技术手段检测封闭反义NGAL基因表达后 ,SHEEC食管癌细胞中F actin和DNA含量、F actin形态结构以及肿瘤细胞生物学行为的变化特征 .结果显示 ,反义封闭NGAL基因表达后 ,SHEEC食管癌细胞F actin的含量明显降低 ,与永生化食管上皮细胞SHEE相近 ,但细胞分裂增殖指数未见明显变化 .表明反义封闭NGAL基因表达对SHEEC食管癌细胞的微丝骨架有明显影响 ,而对SHEEC食管癌细胞的分裂增殖影响不明显 .激光共聚焦显微镜扫描观测显示 ,反义封闭NGAL基因表达可使SHEEC食管癌细胞F actin分布均匀 ,F actin小体减少 ,细胞间连接重新建立 ,结构较紧密 ,主要形态结构特征与SHEE细胞趋于一致 .提示反义封闭NGAL基因表达可对SHEEC食管癌细胞的微丝骨架F actin产生明显影响 ,推测癌细胞的微丝骨架F 展开更多

关键词 微丝骨架 F-肌动蛋白 NGAL基因 SHEEC细胞 细胞周期

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新候选癌基因STRBP8在人永生化食管上皮细胞癌变过程中差异表达的分析 被引量：6

8

作者 熊兴东 李恩民 +4 位作者 许丽艳 刘新光 蔡唯佳 韩雅莉 沈忠英 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第4期385-390,共6页

背景与目的:近年来,核基质蛋白(nuclearmatrixproteins,NMPs)成分、结构与功能改变在肿瘤发生发展过程中的作用已成为人们研究的热点问题。分离并鉴定肿瘤相关的NMPs,是寻找肿瘤特异性标志物并进一步研究肿瘤发病机制的一个新途径。本... 背景与目的:近年来,核基质蛋白(nuclearmatrixproteins,NMPs)成分、结构与功能改变在肿瘤发生发展过程中的作用已成为人们研究的热点问题。分离并鉴定肿瘤相关的NMPs,是寻找肿瘤特异性标志物并进一步研究肿瘤发病机制的一个新途径。本研究通过检测类视网膜母细胞瘤结合蛋白8(similartoretinoblastomabindingprotein8,STRBP8)在人永生化食管上皮细胞癌变过程中的差异表达,为寻找食管癌特异性标志物和研究食管癌的发病机制提供新线索。方法:硫酸铵沉淀法提取人胚永生化食管上皮细胞系SHEE和由SHEE转化而来的食管癌细胞系SHEEC的NMPs,利用双向电泳、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI鄄TOF鄄MS)和RT鄄PCR等技术检测STRBP8在SHEE和SHEEC中的差异表达。将STRBP8cDNA序列连接到pGEM鄄Teasy载体后,转化TOP10F蒺大肠杆菌感受态细胞,经筛选获得含STRBP8的阳性克隆,DNA序列测定后进行BLAST比对。结果:通过双向电泳和MALDI鄄TOF鄄MS技术分离并鉴定出核基质蛋白STRBP8只在SHEEC中表达,RT鄄PCR分析发现STRBP8mRNA也只出现在SHEEC细胞中。将其cDNA序列插入pGEM鄄Teasy载体后,经转化和筛选获得含STRBP8的阳性克隆。测序结果显示克隆得到的STRBP8cDNA片段与Genbank数据库上的序列完全一致。结论:STRBP8作为一种新? 展开更多

关键词 食管肿瘤 核基质蛋白 STRBP8 双向电泳 MALDI-TOF-MS

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NGAL基因5′侧翼区转录调控元件的分段定位鉴定 被引量：9

9

作者 许丽艳 李恩民 +4 位作者 蔡唯佳 王子良 牛永东 沈忠英 曾毅 《肿瘤防治杂志》 CAS 2004年第5期449-453,共5页

目的 :对中性粒细胞明胶酶相关脂萼蛋白 (neutrophilgelatinase associatedlipocalin ,NGAL)基因 5′侧翼区的转录调控元件进行分段定位鉴定。方法 :以双荧光素酶报告基因检测系统检测NGAL基因 5′侧翼区 ( -14 3 1～ +84)转录调控元件... 目的 :对中性粒细胞明胶酶相关脂萼蛋白 (neutrophilgelatinase associatedlipocalin ,NGAL)基因 5′侧翼区的转录调控元件进行分段定位鉴定。方法 :以双荧光素酶报告基因检测系统检测NGAL基因 5′侧翼区 ( -14 3 1～ +84)转录调控元件与转录调控蛋白之间的相互作用。结果 :在NGAL基因 5′端 -945～ -65 8和 -65 7～ -4 172个区段发现了转录增强子元件与转录激活蛋白之间的相互作用 ,而在 -4 16～ -15 2区段则发现了转录沉默子元件与转录抑制蛋白之间的相互作用。结论 :在NGAL基因5′侧翼转录调控区可能至少存在着 2个转录增强子元件和 展开更多

关键词 食管癌细胞 基因 NGAL 基因表达调控 荧光素酶

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食管癌细胞SHEEC中NGAL基因5′端转录调控区的克隆及其顺式作用元件定位分析 被引量：4

10

作者 李恩民 许丽艳 +5 位作者 吴炳礼 张灿 张永发 林艳 蔡唯佳 沈忠英 《肿瘤防治杂志》 CAS 2003年第3期235-239,共5页

目的 :从食管癌细胞SHEEC中克隆NGAL基因 5′端转录调控区并进行顺式作用元件定位分析。方法 :采用PCR法克隆NGAL基因 5′端转录调控区 ,并通过NCBI公共数据库BLAST序列分析鉴定突变。应用KEGG序列数据库对该调控区进行顺式作用元件定... 目的 :从食管癌细胞SHEEC中克隆NGAL基因 5′端转录调控区并进行顺式作用元件定位分析。方法 :采用PCR法克隆NGAL基因 5′端转录调控区 ,并通过NCBI公共数据库BLAST序列分析鉴定突变。应用KEGG序列数据库对该调控区进行顺式作用元件定位分析。结果 :从SHEEC中获得了NGAL基因 5′端转录调控区 - 112 4～ +6 5区段的克隆 ,该区段序列有 3处点突变 ,在NGAL基因- 112 4～ +6 5区段共鉴定出 78个有效顺式作用元件位点。结论 展开更多

关键词 食管癌细胞 基因 NGAL 基因转录调控 顺式作用元件 TPA

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HeLa细胞中ezrin基因主要转录调控区的定位分析 被引量：3

11

作者 高书颖 许丽艳 +4 位作者 崔磊 周飞 郭张燕 蔡唯佳 李恩民 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期101-103,共3页

目的:鉴定ezrin基因在HeLa细胞中的主要转录调控区,初步研究ezrin基因的转录调控机制。方法:采用嵌套缺失技术构建一系列以ezrin基因翻译起始位点上游不同长度DNA序列作为报告基因启动子的重组pGLB质粒,利用双荧光素酶报告基因分析系统... 目的:鉴定ezrin基因在HeLa细胞中的主要转录调控区,初步研究ezrin基因的转录调控机制。方法:采用嵌套缺失技术构建一系列以ezrin基因翻译起始位点上游不同长度DNA序列作为报告基因启动子的重组pGLB质粒,利用双荧光素酶报告基因分析系统检测启动子的转录活力,并利用在线分析程序预测ezrin基因主要转录调控区的潜在转录因子结合位点。结果:获得一系列含不同长度ezrin基因5′侧翼区序列的重组pGLB质粒;当ezrin基因5′侧翼区序列从-1324截短到-890时,转录活力降低约80%,从-146截短到-32时,转录活力几乎完全丧失;在-1324/-890和-146/-32区,存在大量的Sp1转录因子结合位点。结论:在HeLa细胞中,ezrin基因的-1324/-890和-146/-32区是主要的转录调控区。Sp1可能是调控基因转录的重要转录因子。 展开更多

关键词 肿瘤 实验性 调节元件 转录 转录因子 荧光素酶类 萤火虫 基因 ezrin 细胞 HeLa

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NGAL基因5’侧翼区转录调控元件萤火虫荧光素酶报告基因表达载体的构建与鉴定 被引量：5

12

作者 许丽艳 李恩民 +2 位作者 蔡唯佳 沈忠英 曾毅 《癌变．畸变．突变》 CAS CSCD 2004年第1期5-8,共4页

背景与目的:构建NGAL基因5’侧翼区转录调控元件萤火虫荧光素酶报告基因表达载体。材料与方法:以PCR法从SHEEC食管癌细胞基因组DNA中扩增NGAL基因5’侧翼转录调控区不同长度片段G0-G6(-1431-+84)。PCR产物经pGEM-Teasy转载,再定向亚克... 背景与目的:构建NGAL基因5’侧翼区转录调控元件萤火虫荧光素酶报告基因表达载体。材料与方法:以PCR法从SHEEC食管癌细胞基因组DNA中扩增NGAL基因5’侧翼转录调控区不同长度片段G0-G6(-1431-+84)。PCR产物经pGEM-Teasy转载,再定向亚克隆插入pGL3-Basic。重组子通过特异限制性内切酶切割,琼脂糖电泳予以鉴定。结果:成功构建NGAL基因5’侧翼区转录调控元件萤火虫荧光素酶报告基因表达载体7个,pGLB-G0-G6。结论:为借助于双荧光素酶报告基因检测系统研究确定NGAL基因5’侧翼转录调控区转录调控元件的分布特点以及转录调控元件与转录调控蛋白之间相互作用的性质提供了基本实验条件。 展开更多

关键词 NGAL基因 基因表达调控 荧光素酶 报告基因 载体构建

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食管癌细胞NGAL基因-152～-60区段存在TPA反应元件 被引量：3

13

作者 许丽艳 李恩民 +5 位作者 牛永东 蔡唯佳 袁华敏 常静霞 沈忠英 曾毅 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第2期140-148,共9页

以往研究发现,在TPA诱导永生化食管上皮细胞癌变中中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白(neutrophilgelatinase-associatedlipocalin,NGAL)基因过表达,但过表达机制不明.最近研究提示,食管癌细胞NGAL启动子及其邻近区域可能存在着TPA反应元件.... 以往研究发现,在TPA诱导永生化食管上皮细胞癌变中中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白(neutrophilgelatinase-associatedlipocalin,NGAL)基因过表达,但过表达机制不明.最近研究提示,食管癌细胞NGAL启动子及其邻近区域可能存在着TPA反应元件.为了对NGAL的这一TPA反应元件进行更准确定位,采用PCR法结合嵌套缺失实验从食管癌细胞中克隆了NGAL5′侧翼区-152～+84、-140～+84、-78～+84、-59～+84、-50～+84、-41～+84、-37～+84、-29～+84和-10～+84等片段,并定向插入pGLB、pGLP或pGLE等萤火虫荧光素酶报告基因表达载体中,构建了pGLB-152、pGLP-152、pGLE-152、pGLB-140、pGLB-78、pGLB-59、pGLB-50、pGLB-41、pGLB-37、pGLB-29和pGLB-10等系列报告基因表达载体.将上述报告基因表达载体分别同pRL-TK共转染食管癌细胞EC109,并用TPA刺激,检测TPA刺激转染EC109的相对荧光素酶活力,综合判定NGAL-152～+84区不同长度片段的TPA反应性,对NGAL启动子区的TPA反应元件给予进一步分段定位.结果表明,NGAL启动子区的TPA反应元件位于-152～-60区段,而且应答TPA刺激的反应能力很强.生物信息学分析结果显示,NGAL启动子区所存在的TPA反应元件很可能是一种新结构类型.研究说明,NGAL在DNA序列上有应答TPA刺激的结构基础,将有助于深入到分子水平揭示TPA诱导永生化食管上皮细胞癌变中NGAL过表达机制,也有助于进一步认识TPA信号细胞内传递途径网络在肿瘤发生发展中的作用. 展开更多

关键词 中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白基因 食管癌细胞 基因表达调控 TPA反应元件

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人食管癌cDNA酵母杂交文库的构建与鉴定及其应用 被引量：2

14

作者 许丽艳 李恩民 +6 位作者 牛永东 蔡唯佳 韩溟 吴炳礼 张灿 沈忠英 曾毅 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第2期295-300,共6页

以往在研究由促癌物 12 o 十四烷酰佛波醇 13 乙酯 (12 o tetradecanoylphorbol 13 acetate,TPA)诱导的人永生化食管上皮细胞恶性变中基因的差异表达情况时 ,曾获得中性粒细胞明胶酶相关lipocalin (neutrophilgelatinase associatedli... 以往在研究由促癌物 12 o 十四烷酰佛波醇 13 乙酯 (12 o tetradecanoylphorbol 13 acetate,TPA)诱导的人永生化食管上皮细胞恶性变中基因的差异表达情况时 ,曾获得中性粒细胞明胶酶相关lipocalin (neutrophilgelatinase associatedlipocalin ,NGAL)等新的食管癌癌变相关基因 .为深入研究这些癌变相关基因在食管癌中以蛋白质 蛋白质或蛋白质 DNA相互作用为基础的功能网络调控关系 ,建立了一个食管癌cDNA酵母杂交文库 .采用Trizol试剂从一种新的人食管癌细胞 (SHEEC ,由人永生化食管上皮细胞转化而来 )中提取细胞总RNA ,采用OligotexmRNAKit从细胞总RNA中制备PolyA+ mRNA ,采用SuperScriptTM ChoiceSystemForcDNASynthesisKit合成cDNA ,以PolyA+ mRNA为探针 ,化学发光法监测cDNA合成的质量 ,以 pGADT7为载体构建了SHEEC细胞的cDNA酵母杂交文库 .文库的滴度为 1 19× 10 9cfu/ml,重组片段大小主要集中在 0 5～6 0kb ,重组率为 5 0 % .在此基础上 ,应用酵母单杂交技术手段对该文库中的NF κB元件结合因子进行了筛选 ,在SD/ his/ leu/[+15mmol/L 3 AT ]缺陷培养基平板上共获得了约 36 0个单克隆 .按照平板上酵母单克隆直径的大小 ,选择直径大于 2mm者 91个 ,提取质粒进行酶切鉴定和一对一酵母单杂交验? 展开更多

关键词 人食管癌 CDNA文库 构建 鉴定 应用 酵母杂交

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PCR和原位杂交检测食管癌组织中人乳头状瘤病毒 被引量：2

15

作者 吕丽春 沈忠英 +2 位作者 游绍进 沈健 蔡唯佳 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1999年第2期162-164,共3页

目的：探索汕头高发区食管癌的发病是否与HPV感染有关。方法：用L1区共用引物PCR和HPV18DNA探针原位杂交技术对55例新鲜食管瘤标本进行检测。结果：PCR和原位杂交的HPV阳性检出率分别为92．72％和81．80%，癌旁粘膜HPV检出率高于癌组织... 目的：探索汕头高发区食管癌的发病是否与HPV感染有关。方法：用L1区共用引物PCR和HPV18DNA探针原位杂交技术对55例新鲜食管瘤标本进行检测。结果：PCR和原位杂交的HPV阳性检出率分别为92．72％和81．80%，癌旁粘膜HPV检出率高于癌组织（P＜0．05）。而且原位杂交提示不同病变杂交信号分布特征不同：癌旁“正常”和单纯增生上皮呈层状分布，原位癌层状分布特征消失，阳性细胞弥散全层，浸润癌呈区域性阳性。结论：HPV感染可能是食管癌的病因之一。 展开更多

关键词 食管肿瘤 HPV 聚合酶链反应 原位杂交

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细胞内F-actin的聚合与解聚对肝癌Bel-7402细胞的影响 被引量：3

16

作者 林珏龙 陈耀文 +4 位作者 蔡唯佳 朴仲贤 刘晓珑 杨海伟 许丽艳 《激光生物学报》 CAS CSCD 2005年第1期52-55,共4页

目的 :为探讨癌细胞内F actin的解聚与聚合对癌细胞的形态、迁移、侵入的影响。方法 :利用激光共聚焦显微镜对贴附培养的人肝癌Bel 74 0 2细胞形态及其细胞内F actin进行观察 ;使用流式细胞仪对贴附的Bel 74 0 2细胞及其脱落细胞与Cyt ... 目的 :为探讨癌细胞内F actin的解聚与聚合对癌细胞的形态、迁移、侵入的影响。方法 :利用激光共聚焦显微镜对贴附培养的人肝癌Bel 74 0 2细胞形态及其细胞内F actin进行观察 ;使用流式细胞仪对贴附的Bel 74 0 2细胞及其脱落细胞与Cyt B处理后Bel 74 0 2细胞内F actin的含量进行分析。结果 :Bel 74 0 2细胞在培养的过程中 ,癌细胞形态伸展 ,出现侵入性生长 ,细胞内F actin聚合形成粗大的贯通细胞内的F actin束 ,F actin含量增高 ;癌细胞在生长过程中 ,常出现重叠生长 ,细胞变圆 ,F actin解聚变短 ,F actin小体增高 ,细胞有脱落的趋势 ,其脱落细胞内的F actin含量低于贴附细胞。结论 :人肝癌Bel 74 0 2细胞内F actin的聚合可增加癌细胞的贴附和侵入性 ;细胞内F actin的解聚 ,及G actin重新聚合形成F 展开更多

关键词 激光共聚焦显微镜 肝癌BEL-7402细胞 纤维型肌动蛋白 细胞松弛素-B

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NGAL基因cDNA的克隆及其表达载体的构建 被引量：2

17

作者 熊华淇 许丽艳 +3 位作者 李恩民 蔡唯佳 沈忠英 徐小虎 《肿瘤防治杂志》 CAS 2001年第5期456-460,共5页

目的 :克隆NGAL基因的cDNA ,并构建其表达载体。方法 :应用RT PCR技术 ,从食管癌细胞系SHEEC中扩增出NGAL(neutrophilgelatinase associatedlipocalin)基因的cDNA ,并重组到中间载体pT Adv中 ,经测序和与NCBI数据库比较证实是NGAL基因... 目的 :克隆NGAL基因的cDNA ,并构建其表达载体。方法 :应用RT PCR技术 ,从食管癌细胞系SHEEC中扩增出NGAL(neutrophilgelatinase associatedlipocalin)基因的cDNA ,并重组到中间载体pT Adv中 ,经测序和与NCBI数据库比较证实是NGAL基因的全编序列。然后把它分别插入到真核表达载体pcDNA 3和原核表达载体pGEX 4T 3中。结果 :获得了NGAL基因的cDNA全序列 ,构建了NGAL的正、反向真核表达载体pcDNA NGAL(+ - )和原核表达载体pGEX NGAL ,并在大肠埃希菌TOP10F′中成功地表达出NGAL融合蛋白。结论 :为研究NGAL基因的新功能和制备其抗体 ,进而阐明NGAL在食管癌等肿瘤中的生物学作用提供了有利工具。 展开更多

关键词 嗜中性粒细胞明胶酶相关 CDNA克隆 食管癌细胞系 表达载体构建

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非同位素标记法检测人染色体端粒长度 被引量：2

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作者 许丽艳 李恩民 +2 位作者 沈忠英 蔡唯佳 沈健 《癌变．畸变．突变》 CAS CSCD 2001年第1期1-4,共4页

目的 :建立一种非同位素标记测定端粒长度的方法。方法 :以地高辛标记寡核苷酸 (CCCTAA) 3 为探针 ,对基因组DNA进行Southern杂交 ,NBT/BCIP显色后与DNA标准分子量比较 ,图象分析系统测定端粒长度。结果 :通过严格控制探针的工作浓度 (1... 目的 :建立一种非同位素标记测定端粒长度的方法。方法 :以地高辛标记寡核苷酸 (CCCTAA) 3 为探针 ,对基因组DNA进行Southern杂交 ,NBT/BCIP显色后与DNA标准分子量比较 ,图象分析系统测定端粒长度。结果 :通过严格控制探针的工作浓度 (1:12 80稀释 )、DNA上样量 (>2 0 μg)、杂交温度 (4 7± 2℃ )等主要影响因素 ,获得了比较好的杂交条带。结论 :建立了一种稳定、可靠、低背景的地高辛标记检测端粒长度的方法。 展开更多

关键词 端粒 端粒长度 非同位素标记 癌变细胞

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NGAL基因新型TPA反应元件结合蛋白的研究 被引量：1

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作者 孟令英 缪成贵 +3 位作者 杜则澎 蔡唯佳 许丽艳 李恩民 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2008年第6期661-670,共10页

以往研究发现, 食管癌细胞的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin, NGAL)基因的过表达具有明显的 12-O- 十四烷酰佛波醇 -13- 醋酸酯(12-O-tetradecanoyl phorbol-13-acetate, TPA)诱导性, ... 以往研究发现, 食管癌细胞的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin, NGAL)基因的过表达具有明显的 12-O- 十四烷酰佛波醇 -13- 醋酸酯(12-O-tetradecanoyl phorbol-13-acetate, TPA)诱导性, 在启动子- 152～- 60 区段存在着一种新型的 TPA 反应元件(TPA response element, TRE), 但是该元件的结合蛋白尚未被鉴定出来. 采用寡核苷酸 DNA 亲和层析法(oligonucleotide trapping)从食管癌细胞中分离纯化了 NGAL 基因 TRE 结合蛋白; 经 SDS-PAGE进一步分离, 银染显示目标蛋白带. 人工切取各目标蛋白带进行 MALDI-TOF-MS 分析, 通过 Mascot 软件搜索 NCBI 数据库, 根据蛋白质的功能、细胞定位和分子质量大小等指标确定 8 个核蛋白因子: C19、KIAA1949、TDRD1、RXR β、FAM54A、KLF15、KLF10 和 YY-1. 最后, 利用 RT-PCR 验证了这些核蛋白因子表达的 TPA 反应性, 结果表明 C19、KIAA1949、TDRD1、RXR β和 KLF15 等编码基因的转录表现出了明显的 TPA 反应性, 提示可能是食管癌细胞中应答 TPA刺激, 参与 NGAL 基因过表达的转录激活因子. 展开更多

关键词 NGAL基因 寡核苷酸DNA亲和层析 MALDI-TOF-MS TPA反应元件 TPA反应元件结合蛋白 TPA反应性

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人乳头状瘤病毒协同^(60)钴照射促进食管上皮细胞恶性转化 被引量：1

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作者 沈忠英 岑山 +6 位作者 滕智平 蔡唯佳 沈健 陈炯玉 陈志坚 李德锐 曾毅 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期225-229,共5页

为探明人乳头状瘤病毒(HPV)和促癌剂对食管上皮致癌作用,人胚食管上皮细胞转染HPV协同60钴(60Co)放射观察其恶性转化。用HPV18E6E7AAV转染的人胚食管上皮(SHEE),培养至13代,分为4组,实验组分别用60Co2、4、8Gy照射,每周1次共4周;SHEE未... 为探明人乳头状瘤病毒(HPV)和促癌剂对食管上皮致癌作用,人胚食管上皮细胞转染HPV协同60钴(60Co)放射观察其恶性转化。用HPV18E6E7AAV转染的人胚食管上皮(SHEE),培养至13代,分为4组,实验组分别用60Co2、4、8Gy照射,每周1次共4周;SHEE未经照射为对照组。细胞形态用相差显微镜观察;细胞DNA合成和定量用3H TdR掺入和用流式细胞仪分析;染色体众数用常规方法分析;致瘤性用软琼脂培养和裸小鼠接种;HPVDNA用PCR检测。经60Co照射后细胞呈凋亡和坏死(危象期)。8周后SHEE4Gy组细胞增殖,增殖指数(34%)和3H TdR摄入增高,软琼脂培养和裸鼠接种出现致瘤性。对照组SHEE组细胞增殖指数24%,伴有少数3H TdR掺入,裸鼠未成瘤。染色体众数:对照组,58～62;4Gy组,63～65;两组HPV18E6E7PCR呈阳性条带。此结果表明,用HPV18E6E7协同60Coγ射线可以使人胚食管上皮恶性转化,60Coγ射线有加速食管上皮细胞恶性转化作用。 展开更多

关键词 食管上皮 人乳头状瘤病毒 ^60钴照射 恶性转化 致癌作用

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