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五重PCR检测大肠杆菌O157∶H7菌体抗原和毒素基因 被引量：7
1
作者 薄清如 周志江 +8 位作者 吴小伦 徐海聂 黄云君 冯家望 王小玉 黄建珍 陈静静 潘文波 廖秀云 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期169-172,共4页
针对 O1 5 7∶H7大肠杆菌 O抗原抗血清同多种细菌有交叉反应 ,而单一毒素基因并不是 O1 5 7∶ H7所独有这一特点 ,建立了五重和四重 PCR方法 ,同时检测大肠杆菌 O1 5 7∶ H7的 O抗原、H抗原和 4种毒素基因 ,可在较短的时间内检测、鉴定... 针对 O1 5 7∶H7大肠杆菌 O抗原抗血清同多种细菌有交叉反应 ,而单一毒素基因并不是 O1 5 7∶ H7所独有这一特点 ,建立了五重和四重 PCR方法 ,同时检测大肠杆菌 O1 5 7∶ H7的 O抗原、H抗原和 4种毒素基因 ,可在较短的时间内检测、鉴定大肠杆菌 O1 5 7∶ H7,并有较高的特异性 ,解决了传统细菌检测方法耗时长、灵敏度低 。 展开更多
关键词 大肠杆菌 菌体抗原 毒素基因 多重PCR技术
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猪流行性腹泻的病理学研究——免疫酶组化法(间接法)抗原定位的研究 被引量：2
2
作者 薄清如 郑兆荣 +1 位作者 邱震东 刘宝岩 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1989年第S1期101-105,共5页
本试验给8头3日龄同窝仔猪经口感染猪流行性腹泻病毒“吉”毒株的猪胎肠上皮原代单层细胞培养物,于感染后在第18、30、45、96小时扑杀。以免疫组化法(间接法)进行抗原定位的研究。研究表明:猪流行性腹泻病毒主要侵袭、感染仔猪小肠绒毛... 本试验给8头3日龄同窝仔猪经口感染猪流行性腹泻病毒“吉”毒株的猪胎肠上皮原代单层细胞培养物,于感染后在第18、30、45、96小时扑杀。以免疫组化法(间接法)进行抗原定位的研究。研究表明:猪流行性腹泻病毒主要侵袭、感染仔猪小肠绒毛上皮细胞,此外还感染大肠粘膜上皮细胞、肠腺上皮细胞、肠系膜淋巴结的巨噬细胞,而与TCE的全身感染不同;以感染30小时,腹泻10小时左右,空肠中、后部阳性细胞最多;腹泻10小时后,小肠绒毛上皮有的变成矮立方形、扁平上皮,有的空泡化,还有的仍为柱状,但这些细胞中都见有阳性反＊，闪而证明这些细胞都畜病毒抗原存在。腹泻1则、时左右的病猪，取其空肠中、后部等病料，用hU切氏液固定、、蜡包埋切片，免疫酶组化法（间接法）染色，可作为流行性腹泻病猪死后诊断的一种特异性方法；石蜡切片以O．15％胰酶在37”C温箱湿盒中消化45分钟最为适宜；为防止脱片，使用乳白胶（工呵OQ）粘片效果最佳；组织切片制备中使用甲苯作为透明剂其免疫酶组化法染色效果优于二甲苯；使用IIRpspA’i呐标免抗猪几G，二行效果无明显差异。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻 病理学研究 流行性腹泻病 小肠绒毛 细胞培养物 间接法 组化 乳白胶 大肠粘膜 腺上皮细胞
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养殖对虾病毒病PCR诊断方法的建立及在流行病学调查中的应用 被引量：1
3
作者 薄清如 吴小伦 +6 位作者 黄建珍 徐海聂 朱建洪 王小玉 黄云君 周思波 陈静静 《中国畜牧兽医》 CAS 2004年第10期38-41,共4页
利用分子生物学技术 ,建立了一种快速、准确、实用的养殖对虾白斑病和斑节对虾杆状病毒的 PCR检测方法 ,通过特异性试验和敏感性试验 ,并经测序 ,其 PCR产物与目的基因符合率为 99% ,证实该方法具有良好的特异性。本项目还将该方法应用... 利用分子生物学技术 ,建立了一种快速、准确、实用的养殖对虾白斑病和斑节对虾杆状病毒的 PCR检测方法 ,通过特异性试验和敏感性试验 ,并经测序 ,其 PCR产物与目的基因符合率为 99% ,证实该方法具有良好的特异性。本项目还将该方法应用于对虾育苗过程的各个环节 ,并对珠海地区养殖场养殖对虾、市场销售的对虾和进出口对虾等进行了对虾白斑病毒和斑节对虾杆状病毒的流行病学调查。在调查中首次发现虾蛄对虾白斑病毒呈阳性反应 ,说明该病毒可以感染除对虾外的节肢动物。 展开更多
关键词 养殖对虾病毒病 PCR诊断方法 应用
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突破技术壁垒限制 提高动物性食品出口竞争力
4
作者 薄清如 《中国畜牧兽医》 CAS 2004年第8期3-5,共3页
加入WTO后,美日欧等发达国家以技术贸易壁垒限制中国动物性产品出口。如何跨越技术壁垒,提高我国产品出口竞争力已成为当前一项十分紧迫的任务。作者介绍了发达国家技术壁垒概况,分析了我国动物性食品安全现状及技术性贸易壁垒对我国出... 加入WTO后,美日欧等发达国家以技术贸易壁垒限制中国动物性产品出口。如何跨越技术壁垒,提高我国产品出口竞争力已成为当前一项十分紧迫的任务。作者介绍了发达国家技术壁垒概况,分析了我国动物性食品安全现状及技术性贸易壁垒对我国出口动物性食品的冲击,提出了加强我国动物性食品安全工作突破技术壁垒限制的措施。 展开更多
关键词 技术壁垒 动物性食品 出口竞争力
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禽流感病毒H1、H3、H5、N2亚型多重RT-PCR检测方法的初步研究 被引量：8
5
作者 韩雪清 林祥梅 +5 位作者 侯义宏 薄清如 廉慧锋 吴绍强 刘建 杨泽晓 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期993-996,共4页
目的根据禽流感病毒H1、H3、H5亚型的HA基因和N2型NA基因的保守序列,设计出四对RT-PCR引物,建立一步法多重RT-PCR对禽流感H1、H3、H5、N2四亚型进行快速检测。方法利用所设计的四对引物,通过对该方法扩增条件的优化,成功建立快速检测禽... 目的根据禽流感病毒H1、H3、H5亚型的HA基因和N2型NA基因的保守序列,设计出四对RT-PCR引物,建立一步法多重RT-PCR对禽流感H1、H3、H5、N2四亚型进行快速检测。方法利用所设计的四对引物,通过对该方法扩增条件的优化,成功建立快速检测禽流感病毒H1、H3、H5、N2四亚型的一步法多重RT-PCR。利用禽流感H1、H3、H5、N2四亚型毒株和其它相关标准毒株进行敏感性和特异性试验。结果与结论所建立的一步法多重RT-PCR具有较高的特异性和敏感性,与禽流感其它亚型和NDV、IBV、ARV?IBDV的核酸均无交叉反应。用该方法检测现场样品395份(4省20多个地区),结果与经典检测方法一致。 展开更多
关键词 禽流感病毒 多重RT-PCR H1亚型 H3亚型 H5亚型 N2亚型
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口蹄疫研究概况 被引量：14
6
作者 汪洋 亢文华 +1 位作者 白永平 薄清如 《中国畜牧兽医》 CAS 2004年第9期47-48,i001,共3页
口蹄疫是偶蹄兽以口、舌、唇、蹄、乳房等部位发生水疱和溃烂为特征的一种急性热性高度接触性传染病 ,作者综述了近年来口蹄疫的病原、流行特点、临床症状、病理变化、防制等研究进展。
关键词 口蹄疫 流行特点 防疫 病原 流行特点 临床症状 病理变化
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口蹄疫病毒群特异性荧光PCR检测方法研究 被引量：10
7
作者 杨素 吴小伦 +5 位作者 花群义 徐自忠 周晓黎 贾建军 薄清如 潘文波 《中国畜牧兽医》 CAS 2004年第11期44-46,共3页
应用荧光 PCR技术 ,利用 O型口蹄疫病毒 (FMDV)的 5′端 UTR区的 IRES片段设计和合成了可检测 7个血清型FMDV群特异性引物和 Taqman探针 ,建立了 1种敏感性高、特异性强、快速的检测方法 ,耗时仅为 4 h,克服了传统的病毒分离鉴定方法耗... 应用荧光 PCR技术 ,利用 O型口蹄疫病毒 (FMDV)的 5′端 UTR区的 IRES片段设计和合成了可检测 7个血清型FMDV群特异性引物和 Taqman探针 ,建立了 1种敏感性高、特异性强、快速的检测方法 ,耗时仅为 4 h,克服了传统的病毒分离鉴定方法耗时长 ,敏感性和准确性较差 ,而且容易造成病毒扩散及环境污染的缺点 ,可广泛应用于动物的大批量、快速检疫。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 群特异性 检测 荧光PCR 检疫
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多重荧光PCR检测Ⅱ型猪链球菌方法的建立及应用 被引量：8
8
作者 陈博文 罗宝正 +6 位作者 陈竞帆 薄清如 徐海聂 杨素 陈静静 黄新民 侯亚琴 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期355-358,共4页
建立了一种快速检测Ⅱ型猪链球菌(Streptococcus suis)的多重荧光PCR(multiplex real-time polymerase chain reaction)方法。首先,从GenBank中获得Ⅱ型猪链球菌荚膜抗原编码基因簇中的cps2I和溶菌素释放蛋白基因mrp,用Primer Express2.... 建立了一种快速检测Ⅱ型猪链球菌(Streptococcus suis)的多重荧光PCR(multiplex real-time polymerase chain reaction)方法。首先,从GenBank中获得Ⅱ型猪链球菌荚膜抗原编码基因簇中的cps2I和溶菌素释放蛋白基因mrp,用Primer Express2.0设计引物和Taqman荧光探针,在ABI7500荧光PCR仪上进行荧光PCR检测。荧光曲线表明该多重荧光PCR可以特异性地检测型猪链球菌,而参考猪链球菌、大肠杆菌等细菌和空白对照均为阴性;检测方法灵敏度达10个细菌的最小检测量,整个过程仅需60min;稳定性试验表明,2次检测所得的Ct值之间无统计学差异(P>0.05)。本试验建立的多重荧光PCR检测Ⅱ型猪链球菌的方法快速、特异性强,灵敏度高,稳定性好,适合于大批量样品的检验,可广泛用于出入境检疫和动物防疫监督部门的疫情监测。 展开更多
关键词 多重荧光PCR Ⅱ型猪链球菌 检测
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基于AHP-FCE模型的珠海进出口公共技术服务平台运行能力评价实证研究 被引量：6
9
作者 李烃 姜梦楚 +5 位作者 陈敬 沈维 张恒 汪文辉 茹赤峰 薄清如 《科技管理研究》 CSSCI 北大核心 2017年第3期119-124,共6页
加强公共技术服务平台建设对于提高中小企业质量技术水平、增强自主创新能力、实现战略转型具有重要意义,而建立科学、完善的绩效评价体系是推动平台健康发展的有力保障。以珠海进出口公共技术服务平台为例,从建设者和使用者的视角,应... 加强公共技术服务平台建设对于提高中小企业质量技术水平、增强自主创新能力、实现战略转型具有重要意义,而建立科学、完善的绩效评价体系是推动平台健康发展的有力保障。以珠海进出口公共技术服务平台为例,从建设者和使用者的视角,应用层次分析法与模糊综合评判法构建平台运行能力综合评价模型,对其2015年运行状况进行实证分析,并根据分析结果提出改进措施和建议,为平台建设运行与可持续发展提供参考依据。 展开更多
关键词 公共技术服务平台 绩效评价 层次分析法 模糊综合评判法 实证分析
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基因芯片方法检测6种动物源性人兽共患病病原 被引量：5
10
作者 王振全 罗宝正 +4 位作者 薄清如 徐海聂 沙才华 廖秀云 陈伟生 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期804-807,共4页
为了建立可同时检测H5亚型禽流感病毒、狂犬病病毒、猪链球菌2型、炭疽芽孢杆菌、沙门氏菌、大肠杆菌O157的基因芯片检测方法,本实验根据GenBank中上述6种病原的基因序列,设计并合成了特异性的引物和探针。采用点样法制备杂交芯片,将上... 为了建立可同时检测H5亚型禽流感病毒、狂犬病病毒、猪链球菌2型、炭疽芽孢杆菌、沙门氏菌、大肠杆菌O157的基因芯片检测方法,本实验根据GenBank中上述6种病原的基因序列,设计并合成了特异性的引物和探针。采用点样法制备杂交芯片,将上述病原扩增产物混合后与芯片杂交。杂交结果显示,针对本试验中6种人兽共患传染病所设计的寡核苷酸探针可特异性识别靶基因,与其他常见病原体之间没有交叉反应。检测的灵敏度在1.38×10-5 pg/μL～151 pg/μL之间。将建立的基因芯片检测方法对临床样品进行检测,结果与荧光PCR方法一致。 展开更多
关键词 基因芯片 人兽共患病 检测
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猪繁殖与呼吸综合征RT-LAMP检测方法研究 被引量：5
11
作者 杨素 沙才华 +6 位作者 顾海洋 董尚智 廖秀云 徐海聂 薄清如 罗宝正 陈伟生 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第6期136-141,共6页
应用反转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP),利用猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)核衣壳蛋白(N蛋白)ORF7基因保守序列的6个区域设计2对特异引物,经反应体系、反应条件优化及敏感性和特异性试验,建立了PRRSV RT-LAMP检测方法。研究结果表明,... 应用反转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP),利用猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)核衣壳蛋白(N蛋白)ORF7基因保守序列的6个区域设计2对特异引物,经反应体系、反应条件优化及敏感性和特异性试验,建立了PRRSV RT-LAMP检测方法。研究结果表明,该检测方法不需要复杂仪器,仅用一台普通恒温水浴锅,在等温条件(63℃)保温1 h,即可完成核酸扩增反应,加入核酸染料SYBR GreenⅠ后,用肉眼即可对试验结果进行准确判定,为田间和基层部门检测猪繁殖与呼吸综合征病毒提供了一种廉价、简便、快速、敏感、特异的新方法。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 RT-LAMP 检测方法 研究
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TaqMan探针荧光PCR检测副猪嗜血杆菌方法的建立和应用 被引量：5
12
作者 罗宝正 王振全 +4 位作者 薄清如 徐海聂 沙才华 廖秀云 陈伟生 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2011年第6期1367-1370,共4页
为了建立基于TaqMan探针荧光PCR技术检测副猪嗜血杆菌的方法,本试验参考GenBank已发表的副猪嗜血杆菌(Hemophilus parasuis,HPS)转录起始因子infB基因序列,利用生物学软件Primer Express 2.0设计特异性引物和探针;并对副猪嗜血杆菌标准... 为了建立基于TaqMan探针荧光PCR技术检测副猪嗜血杆菌的方法,本试验参考GenBank已发表的副猪嗜血杆菌(Hemophilus parasuis,HPS)转录起始因子infB基因序列,利用生物学软件Primer Express 2.0设计特异性引物和探针;并对副猪嗜血杆菌标准菌株提取DNA后进行PCR扩增,将产物测序鉴定后克隆到pMD18-T载体,再转化到大肠杆菌感受态细胞,细菌培养后对菌液进行PCR扩增,把产物测序鉴定后获得的重组质粒作为标准阳性对照;最后将建立的TaqMan探针荧光PCR方法进行灵敏度、特异性、稳定性试验。结果显示,该检测方法可以达到1μl 1.0×101拷贝数量级的灵敏度;另外,该方法可以将HPS和大肠杆菌O157、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、猪链球菌分开,特异性良好;稳定性试验显示,2次批内变异系数分别为0.65%和0.92%,批间变异系数为1.31%,稳定性良好。对口岸送检的56份猪肉和12份血浆蛋白粉样品进行检测,结果表明TaqMan探针荧光PCR方法和细菌分离方法的检测效果一致。 展开更多
关键词 副猪嗜血杆菌 荧光PCR 检测
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抗H5N1型禽流感病毒单克隆抗体的制备与鉴定 被引量：6
13
作者 连晓雯 杜惠芬 +4 位作者 李克生 崔燕 徐海聂 薄清如 黄新民 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 2007年第2期26-29,共4页
制备抗H5N1型禽流感病毒单克隆抗体并对其进行鉴定.采用纯化抗原免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合,筛选分泌抗AIV-H5N1的单克隆抗体细胞株,将阳性细胞株接种小鼠腹腔制备单克隆抗体腹水并对腹水抗体进行纯化,测定抗体亚... 制备抗H5N1型禽流感病毒单克隆抗体并对其进行鉴定.采用纯化抗原免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合,筛选分泌抗AIV-H5N1的单克隆抗体细胞株,将阳性细胞株接种小鼠腹腔制备单克隆抗体腹水并对腹水抗体进行纯化,测定抗体亚类,并对其抗原结合位点进行分析.共获得了5株单克隆抗体杂交瘤细胞株,均为抗AIV-H5N1的特异性单克隆抗体,而且与H9N1型禽流感病毒,H13型禽流感病毒,鸡新城疫病毒,产蛋下降综合征病毒,鸡传染性支气管炎病毒均无交叉反应. 展开更多
关键词 禽流感病毒 单克隆抗体 ELISA
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TaqMan探针荧光RT-PCR检测狂犬病病毒 被引量：5
14
作者 王振全 罗宝正 +5 位作者 薄清如 周昌芳 白鸽 许远靖 王冲 吴殿君 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第6期79-82,共4页
根据GenBank已公布的狂犬病病毒(rabies virus,RV)核蛋白(N)基因序列设计并合成一对特异性的引物和探针,建立基于TaqMan探针的荧光RT-PCR检测狂犬病病毒方法。对狂犬病疫苗提取核酸后进行RT-PCR扩增,将目的条带切胶回收,克隆测序,重组... 根据GenBank已公布的狂犬病病毒(rabies virus,RV)核蛋白(N)基因序列设计并合成一对特异性的引物和探针,建立基于TaqMan探针的荧光RT-PCR检测狂犬病病毒方法。对狂犬病疫苗提取核酸后进行RT-PCR扩增,将目的条带切胶回收,克隆测序,重组质粒作为标准阳性对照。对建立的TaqMan探针荧光RT-PCR方法做灵敏度、特异性、重复性及稳定性试验。结果显示,该方法可以达到10拷贝/μL的灵敏度,可以将狂犬病病毒与犬瘟热病毒、犬细小病毒、犬腺病毒、犬冠状病毒和犬副流感病毒分开,方法重复性好,稳定可靠。 展开更多
关键词 狂犬病病毒 TAQMAN探针 荧光RT-PCR
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新型基因芯片检测禽流感病毒、鸡新城疫病毒和鸡减蛋综合征病毒 被引量：3
15
作者 廖秀云 陶虹 +5 位作者 邵建宏 罗宝正 薄清如 刘国昌 徐海聂 沙才华 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2013年第10期15-20,共6页
建立了可同时筛选禽流感病毒(AIV)通用型、H4、H5、H6、H7、H9、N1、N2、N9亚型及鸡新城疫病毒(NDV)、鸡减蛋综合征病毒(EDSV)的基因芯片检测方法。从GenBank中下载相关序列,利用分子生物学软件设计特异性引物和杂交探针。使用Dr.chip... 建立了可同时筛选禽流感病毒(AIV)通用型、H4、H5、H6、H7、H9、N1、N2、N9亚型及鸡新城疫病毒(NDV)、鸡减蛋综合征病毒(EDSV)的基因芯片检测方法。从GenBank中下载相关序列,利用分子生物学软件设计特异性引物和杂交探针。使用Dr.chip系统进行芯片点样、杂交、显色、读数,优化反应条件后做灵敏度、特异性试验,然后应用于临床检验。结果显示,各病原间无交叉反应,探针可特异性识别靶基因;病原的最低浓度为4.83pg/μL,灵敏度较高;每个梯度的两个反应结果一致,重复性良好。对临床样品检验,结果同病毒分离鉴定方法一致。本研究建立的基因芯片检测方法可用于禽流感通用型、H4、H5、H6、H7、H9、N1、N2、N9亚型及NDV、EDSV的鉴别检测。 展开更多
关键词 基因芯片 禽流感病毒 新城疫病毒 鸡减蛋综合征病毒
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H_9型禽流感毒株免疫对H_5型禽流感抗体检测的干扰试验 被引量：3
16
作者 薛景山 徐海聂 +4 位作者 潘文波 廖秀云 杨素 薄清如 冯家望 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2001年第6期5-8,共4页
利用禽流感病毒 (AIV)美国H9型毒株、江门H9型毒株和广东某厂家生产的含AIV毒株的几种禽用商品疫苗分别免疫 40日龄的肉用鸡。通过首免和超免疫后采集首免血和超免疫血分离血清 ,分别用自制H5型抗原 (美国毒株 )、广州H5型抗原 (香港毒... 利用禽流感病毒 (AIV)美国H9型毒株、江门H9型毒株和广东某厂家生产的含AIV毒株的几种禽用商品疫苗分别免疫 40日龄的肉用鸡。通过首免和超免疫后采集首免血和超免疫血分离血清 ,分别用自制H5型抗原 (美国毒株 )、广州H5型抗原 (香港毒株 )和中国农业科学院哈尔滨兽医研究所H5型抗原对上述免疫鸡血清进行血凝抑制试验 (HI) ,测定这些H9型毒株免疫的抗血清对H5型抗体检测的影响。试验结果表明 ,单纯的H9型毒株免疫的抗血清不构成对H5型抗体检测的影响。而含AIV抗原的商品疫苗免疫的鸡血清部分显示H5型抗体阳性 ,说明某些商品疫苗中含H5型抗原。用美国H5型毒株免疫的鸡血清进行反向验证试验 ,也未发现对H9型抗体检测的影响 ,表明H5和H9型AIV不存在同源抗原 。 展开更多
关键词 禽流感 H5型 H9型 血凝抑制试验 干扰试验 抗体检测 疫苗
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食品中单核增生性李斯特菌的PCR快速检测研究 被引量：10
17
作者 冯家望 吴小伦 +3 位作者 黄云君 王小玉 薄清如 陈静静 《中国食品卫生杂志》 2005年第3期234-237,共4页
为提高食品中单增李斯特菌的检测水平,针对单增李斯特菌中多个稳定的特异性基因hlyA、plcB、prfA、iap,设计并筛选出7对引物组成多重-巢式PCR联合检测体系,并结合高灵敏性的聚丙烯酰胺凝胶电泳,对单增李斯特菌进行快速检测,多重PCR的灵... 为提高食品中单增李斯特菌的检测水平,针对单增李斯特菌中多个稳定的特异性基因hlyA、plcB、prfA、iap,设计并筛选出7对引物组成多重-巢式PCR联合检测体系,并结合高灵敏性的聚丙烯酰胺凝胶电泳,对单增李斯特菌进行快速检测,多重PCR的灵敏度达到1×102CFU ml,巢式PCR的灵敏度达到1×10CFU ml。结果表明该检测体系具有快速可靠、灵敏准确及特异性好的特点,而且有效缩短了检验周期,从传统的7～14d缩短到1～2d。 展开更多
关键词 利斯特氏菌 单核细胞增生 食品 聚合酶链反应
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实时荧光RT-PCR鉴别检测美洲型PRRSV及其变异株 被引量：3
18
作者 罗宝正 王连想 +3 位作者 薄清如 王爱民 徐海聂 黄好兴 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2011年第5期18-21,共4页
本研究建立了美洲型猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syn-drome virus,PRRSV）通用实时荧光RT-PCR和PRRSV变异株特异性实时荧光RT-PCR检测方法,对方法的灵敏度和特异性进行了验证,并对24个临床可疑... 本研究建立了美洲型猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syn-drome virus,PRRSV）通用实时荧光RT-PCR和PRRSV变异株特异性实时荧光RT-PCR检测方法,对方法的灵敏度和特异性进行了验证,并对24个临床可疑样品进行检测。结果显示,实时荧光RT-PCR可以检测到0.47 TCID50的病毒培养液,灵敏度略高于病毒分离方法;两个实时荧光RT-PCR都具有良好的特异性,无交叉反应。在对24个临床可疑样品的检测中,阳性率与病毒分离方法一致（21/24）,检测时间也缩短为70 min。本研究建立的方法有潜力应用于传统美洲型PRRSV及其变异株（NSP2 1594~1680缺失）感染引起的PRRS和高致病性PRRS的监测和鉴别诊断。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 变异株 实时荧光RT-PCR 鉴别诊断
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大肠杆菌O157志贺毒素1胶乳凝集试剂的研制 被引量：1
19
作者 刘建青 周志江 +2 位作者 韩烨 郑峰 薄清如 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第1期29-33,共5页
根据大肠杆菌933W志贺毒素1(STX1)基因的序列,设计合成寡核苷酸引物,以国内分离的大肠杆菌O157菌株94H的DNA为摸板,经PCR扩增志贺毒素1A亚基基因,扩增的基因克隆到原核表达载体pET-28a,在E.coliBL21中进行表达。用表达的STX1A产物免疫兔... 根据大肠杆菌933W志贺毒素1(STX1)基因的序列,设计合成寡核苷酸引物,以国内分离的大肠杆菌O157菌株94H的DNA为摸板,经PCR扩增志贺毒素1A亚基基因,扩增的基因克隆到原核表达载体pET-28a,在E.coliBL21中进行表达。用表达的STX1A产物免疫兔子,制备STX1A抗血清,从中提取IgG。合成胶乳,用提取的IgG与胶乳交连反应,研制出了敏感和简便的检测大肠杆菌O157STX1产生的胶乳检测试剂。 展开更多
关键词 大肠杆菌O157 志贺毒素1 A亚基 原核表达 胶乳试剂
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昆虫杆状病毒系统表达口蹄疫病毒3ABC基因 被引量：1
20
作者 罗宝正 薄清如 +3 位作者 陈金顶 王伟毅 程钢 何蕴韶 《中国病毒学》 CAS CSCD 2005年第3期303-306,共4页
以O型口蹄疫病毒为研究对象,经过RTPCP扩增得到非结构蛋白3ABC基因,克隆到转移载体pFastbacHT,将其转入含穿梭载体Bacmid的DH10Bac,与Bacmid发生位点特异性转座作用,得到3ABC的重组穿梭载体Bacmid3ABC,再将其转染昆虫细胞HiFive。PCR鉴... 以O型口蹄疫病毒为研究对象,经过RTPCP扩增得到非结构蛋白3ABC基因,克隆到转移载体pFastbacHT,将其转入含穿梭载体Bacmid的DH10Bac,与Bacmid发生位点特异性转座作用,得到3ABC的重组穿梭载体Bacmid3ABC,再将其转染昆虫细胞HiFive。PCR鉴定证实3ABC基因正确地插入到病毒基因组的多角体蛋白基因启动子下游,经过SDSPAGE和Westernblot检测,3ABC基因在昆虫细胞中表达了大小约为50kDa的蛋白条带,3ABC基因在BactoBac系统中的成功表达为建立以基因工程产品为抗原、鉴别诊断自然感染和免疫动物的方法提供了技术条件。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 非结构蛋白3ABC 杆状病毒 鉴别诊断
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