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抗Her-2抗体与人β防御素Ⅱ融合蛋白的表达、纯化及活性鉴定
1
作者 袁丰瑞 张敏静 +3 位作者 仝雷 苏志坚 项琪 黄亚东 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期266-271,共6页
利用小分子泛素样修饰蛋白(small ubiquitin-like modifier,SUMO)融合表达系统,在大肠杆菌Origami B(DE3)中表达人β防御素Ⅱ(humanβdefensin 2,HBD2)与抗人表皮生长因子受体2(Her-2)单链抗体(4D5 scFv)的融合蛋白。经20℃,l mmol/L I... 利用小分子泛素样修饰蛋白(small ubiquitin-like modifier,SUMO)融合表达系统,在大肠杆菌Origami B(DE3)中表达人β防御素Ⅱ(humanβdefensin 2,HBD2)与抗人表皮生长因子受体2(Her-2)单链抗体(4D5 scFv)的融合蛋白。经20℃,l mmol/L IPTG诱导24 h后,获得相对分子质量约为41 kD的SUMO-HBD2-4D5融合蛋白,为可溶性表达,表达量占菌体上清总蛋白的42.2%。利用组氨酸亲和凝胶色谱(Ni-NTAsepharose)、特异性SUMO蛋白酶(SUMO protease)酶切和分子筛(Sephadex G-25)联用的方法可获得纯度大于95%的目的蛋白HBD2-4D5,其最终得率达到15 mg/L。HBD2-4D5 200μg对金黄色葡萄球菌(ATCC25923)和大肠杆菌K12D31具有较明显的杀伤作用。免疫荧光分析结果显示,HBD2-4D5蛋白能结合于Her-2高表达的人乳腺癌细胞SK-BR-3表面。本实验表达的HBD2-4D5双功能蛋白具有较好的抗菌活性和特异性结合SK-BR-3表面Her-2的能力,为日后用于靶向治疗Her-2高表达的肿瘤疾病提供研究基础。 展开更多
关键词 人β防御素Ⅱ 人表皮生长因子受体2 融合蛋白 靶向作用
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自研硝苯地平缓释片(Ⅰ)与原研制剂体外释放度一致性评价 被引量：4
2
作者 袁春平 黄后楷 +2 位作者 张文芳 袁丰瑞 区淑蕴 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期1416-1423,共8页
目的:评价自研硝苯地平缓释片(Ⅰ)与原研制剂(Adalat-L10)体外释放行为的一致性。方法:参照日本原研制剂(Adalat-L10)的释放度试验条件,分别考察自研制剂与原研制剂0 d样品、加速6个月样品在pH 1.2人工胃液、pH 4.0醋酸盐缓冲液、pH... 目的:评价自研硝苯地平缓释片(Ⅰ)与原研制剂(Adalat-L10)体外释放行为的一致性。方法:参照日本原研制剂(Adalat-L10)的释放度试验条件,分别考察自研制剂与原研制剂0 d样品、加速6个月样品在pH 1.2人工胃液、pH 4.0醋酸盐缓冲液、pH 6.8磷酸盐缓冲液及水中的体外释放行为;考察自研制剂与原研制剂在不同转速下释放曲线的相似性;考察3批自研制剂释放曲线的均一性和重现性。结果:自研制剂与原研制剂0 d样品、加速6个月的样品在4种不同的释放介质中释放曲线均相似(f2因子>50),且0 d样品与加速6个月的样品释放曲线基本重叠;自研制剂与原研制剂在不同转速下释放曲线相似;自研制剂的均一性和重现性均符合技术要求。结论:自研制剂与原研制剂体外释放度一致,且可产业化。 展开更多
关键词 硝苯地平 缓释片 释放度 F2因子 一致性评价
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基于UPLC-ESI-Q-TOF-MS/MS技术快速鉴定柴石退热颗粒的化学成分 被引量：21
3
作者 杨丽 袁丰瑞 +4 位作者 曹岚 段烨琳 邹萌 张勇 何军伟 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第17期152-159,共8页
目的:采用超高效液相色谱-电喷雾/四极杆飞行时间串联质谱法(UPLC-ESI-Q-TOF-MS/MS)技术快速鉴定柴石退热颗粒的化学成分。方法:采用Phenomenex Luna omega C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.6μm),以0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B)为流动相... 目的:采用超高效液相色谱-电喷雾/四极杆飞行时间串联质谱法(UPLC-ESI-Q-TOF-MS/MS)技术快速鉴定柴石退热颗粒的化学成分。方法:采用Phenomenex Luna omega C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.6μm),以0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B)为流动相进行梯度洗脱(0~20 min,5%~40%B;20~40 min,40%~95%B;40~43 min,95%B),流速0.3 mL·min^(-1),采用电喷雾离子源(ESI),在正、负离子模式下采集数据,扫描范围m/z 150~1 500,通过与对照品的保留时间及质谱数据信息对比,并结合精确相对分子质量、质谱裂解规律、质谱数据库(PubChem,MassBank,ChemicalBook等)及相关文献,对柴石退热颗粒的化学成分进行快速鉴定,并明确各成分的药材归属。结果:共鉴定了85个化学成分,包括28个黄酮类,24个苯丙素类,11个萜类,10个生物碱类,4个醌类及8个其他类;其中19个化合物来源于金银花,14个化合物来源于黄芩,10个化合物来源于板蓝根,9个化合物来源于蒲公英,9个化合物来源于连翘,4个化合物来源于柴胡,4个化合物来源于知母,4个化合物来源于大黄。结论:柴石退热颗粒含有丰富的化学成分且来源于多味药材,为其质量控制、物质基础及体内代谢分析奠定了研究基础。 展开更多
关键词 柴石退热颗粒 超高效液相色谱-电喷雾/四极杆飞行时间串联质谱法(UPLC-ESI-Q-TOF-MS/MS) 黄酮类 苯丙素类 萜类 生物碱类 裂解规律
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