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原发性干燥综合征患者唾液腺中染色质调节因子相关基因的表达分析及其与免疫浸润的关系
1
作者 张乃丹 刘利洪 +1 位作者 孙家祥 袁成良 《国际检验医学杂志》 CAS 2023年第3期301-305,310,共6页
目的分析染色质调节因子(CRs)相关基因在原发性干燥综合征(pSS)患者唾液腺中的表达情况,并探讨其与pSS患者唾液腺免疫浸润的相关性。方法通过下载并整合基因表达综合数据库(GEO)的3个包含pSS患者和健康对照者唾液腺基因表达阵列的数据集... 目的分析染色质调节因子(CRs)相关基因在原发性干燥综合征(pSS)患者唾液腺中的表达情况,并探讨其与pSS患者唾液腺免疫浸润的相关性。方法通过下载并整合基因表达综合数据库(GEO)的3个包含pSS患者和健康对照者唾液腺基因表达阵列的数据集,纳入38例pSS患者作为pSS组,32例健康对照者作为对照组,并对22189个基因的表达情况进行分析,包括筛选与CRs有关的差异表达基因(DEGs)、基因本体论(GO)富集分析。所有数据集都在R语言(4.0.3)中使用相关程序包进行分析,采用ssGSEA算法获得不同免疫细胞和免疫功能的免疫浸润评分,并对不同免疫细胞间和不同免疫功能间的免疫浸润评分进行相关性分析。对pSS组和对照组的免疫浸润评分进行差异分析。结果从22189个基因中共筛选出850个与CRs有关的基因表达,差异分析共筛选出11个DEGs,其中包括10个上调基因和1个下调基因。GO富集分析提示,频率最高的4种生物学过程为正向调控DNA修复、调节DNA损伤刺激反应、非同源端连接修复双链DNA和DNA修复,所涉及的细胞组分包括性染色体、PML核体、染色体端粒和核心蛋白复合体。对免疫细胞的相关性分析提示,肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)和B细胞的相关性最高(r=0.90,P<0.001),其次为滤泡辅助性T细胞(Tfh)和TIL(r=0.72,P<0.001);在免疫功能方面,免疫检查点和T细胞共刺激的相关性最高(r=0.92,P<0.001),其次为免疫检查点和CC趋化因子受体(r=0.89,P<0.001)。pSS组9种免疫细胞和8种免疫功能的免疫浸润评分较对照组显著上调(P<0.05)。结论pSS患者唾液腺中DEGs数量较少,但是与受损唾液腺免疫浸润异常有关,值得临床医生的关注。 展开更多
关键词 染色质调节因子 差异表达基因 原发性干燥综合征 免疫浸润
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NK细胞相关免疫检查点及其抑制剂的研究进展
2
作者 米锦涛 袁成良 《现代肿瘤医学》 CAS 北大核心 2023年第24期4645-4650,共6页
自然杀伤(nature killer,NK)细胞为抵御病毒感染和细胞突变的第一道防线。NK细胞表面有多种激活受体和抑制受体,两者之间的动态平衡控制着NK细胞的杀伤或静止状态。其中,抑制受体作为免疫检查点发挥重要作用。肿瘤通过某些免疫检查点途... 自然杀伤(nature killer,NK)细胞为抵御病毒感染和细胞突变的第一道防线。NK细胞表面有多种激活受体和抑制受体,两者之间的动态平衡控制着NK细胞的杀伤或静止状态。其中,抑制受体作为免疫检查点发挥重要作用。肿瘤通过某些免疫检查点途径作为免疫抵抗的主要机制。在新兴的癌症免疫治疗领域探索了通过使用免疫检查点抑制剂来提高NK细胞抗肿瘤免疫的新方法,旨在使平衡向激活倾斜。近年来,针对免疫检查点的抑制剂疗法取得了巨大的成功。本文就NK细胞免疫检查点及其抑制剂的研究和应用现状进行综述。 展开更多
关键词 自然杀伤细胞 免疫检查点 免疫检查点抑制剂 免疫治疗
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雌二醇对骨髓基质细胞向成骨细胞分化的影响 被引量：3
3
作者 袁成良 金小岚 +2 位作者 侯建红 栗群英 黄迎春 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第13期1155-1158,共4页
目的　研究骨髓基质细胞在向成骨细胞分化的介质中 ,17β 雌二醇 (E2 )对其骨形态发生蛋白受体 (BMPR)ⅠA及核结合因子α1(Cbfα1)mRNA表达的影响 ,探讨雌二醇对成骨细胞生成的作用。方法　用 1,2 5 (OH) 2 D3和地塞米松(DEX)诱导大鼠... 目的　研究骨髓基质细胞在向成骨细胞分化的介质中 ,17β 雌二醇 (E2 )对其骨形态发生蛋白受体 (BMPR)ⅠA及核结合因子α1(Cbfα1)mRNA表达的影响 ,探讨雌二醇对成骨细胞生成的作用。方法　用 1,2 5 (OH) 2 D3和地塞米松(DEX)诱导大鼠骨髓基质细胞向成骨细胞分化 ,应用RT PCR和Northernblot技术 ,观察不同浓度E2对骨髓基质细胞分化过程中BMPR ⅠA及Cbfα1mRNA表达的影响 ,以α 磷酸奈酚为底物测定细胞碱性磷酸酶的活性 ,VanGieson染色法显示Ⅰ型胶原的含量。结果　E2能明显抑制骨髓基质细胞向成骨细胞分化过程中BMPR ⅠA及Cbfα1mRNA的表达 ,且呈剂量依赖性 ,并被Northernblot结果所证实。ALP活性随E2浓度增加而降低 ,细胞Ⅰ型胶原的合成量随E2浓度增加而减少。结论　E2能明显抑制体外培养的骨髓基质细胞分化过程中BMPR ⅠA及Cbfα1mRNA的表达 ,降低成骨细胞生成。 展开更多
关键词 雌二醇 骨髓基质细胞 骨形态发生蛋白受体ⅠA 分化 核结合因子α1
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雌二醇对骨髓基质细胞分化的作用 被引量：3
4
作者 袁成良 薛萍 +2 位作者 黄海 邹自英 金小岚 《西南国防医药》 CAS 2005年第4期357-361,共5页
目的:研究骨髓基质细胞在向成骨细胞分化的介质中,17β-雌二醇(E2)对其骨形态发生蛋白受体ⅠB-(BMPR-ⅠB)及过氧化物酶增殖活化受体-γ2(PPAR-γ2)mRNA表达的影响,探讨雌二醇对骨髓基质细胞分化的作用。方法:1,25(OH)2D3和地塞米松(DEX... 目的:研究骨髓基质细胞在向成骨细胞分化的介质中,17β-雌二醇(E2)对其骨形态发生蛋白受体ⅠB-(BMPR-ⅠB)及过氧化物酶增殖活化受体-γ2(PPAR-γ2)mRNA表达的影响,探讨雌二醇对骨髓基质细胞分化的作用。方法:1,25(OH)2D3和地塞米松(DEX)诱导大鼠骨髓基质细胞向成骨细胞分化,应用半定量DR-PCR及Northernblot技术,观察不同浓度E2对骨髓基质细胞分化过程中BMPR-ⅠB及PPAR-γ2-mRNA表达的影响;以α-磷酸奈酚为底物,测定细胞碱性磷酸酶的活性,VanGieson染色法显示Ⅰ型胶原的含量。结果:E2能明显增强骨髓基质细胞在分化介质中BMPR-IBmRNA的表达,E2为(0-10-6)mol/L时,BMPR-IBmRNA的表达随E2浓度增加而增加,从(2.0±0.4)%增至(4.8±1.0)%(P<0.05)和(17.3±2.2)%(P<0.01);E2能明显促进骨髓基质细胞在分化介质中PPAR-γ2mRNA的表达,在上述E2浓度时,PPAR-γ2mRNA的表达从(1.80±0.3)%增至(9.5±2.1)%,(P<0.01)和(19.2±3.0)%,(P<0.01);Northernblot结果显示随着E2浓度的增加,BMPR-ⅠBmRNA的表达从1.72±0.11增至3.73±0.31(P<0.01);PPAR-γ2mRNA的表达量从1.47±0.12增至2.81±0.22(P<0.01)和4.02±0.36(P<0.01)。细胞ALP活性明显受E2的抑制;在上述E2浓度时ALP的活性蛋白从(42.6±2.5)降至(3.6±0.7)μg(P<0.01)。Ⅰ型胶原含量均随E2浓度增加而降低。结论:E2抑制体外培养的骨髓基质细胞向成骨细胞分化而促进其向脂肪细胞分化。 展开更多
关键词 雌二醇 骨髓基质细胞 过氧化物酶增殖活化受体γ2 分化 骨形成发生蛋白受体ⅠB
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乳腺癌免疫检查点及其抑制剂的研究进展
5
作者 张红生 米锦涛 +1 位作者 曹维维 袁成良 《癌症进展》 2023年第5期481-485,516,共6页
乳腺癌已超过肺癌成为最常见的恶性肿瘤,且病死率居全部恶性肿瘤前五位。肿瘤可以激活与免疫稳态相关的负调节途径以及主动逃避免疫细胞的监测,因此免疫系统在肿瘤中的作用在过去未被重视。近年来肿瘤免疫疗法才成为研究热点。肿瘤免疫... 乳腺癌已超过肺癌成为最常见的恶性肿瘤,且病死率居全部恶性肿瘤前五位。肿瘤可以激活与免疫稳态相关的负调节途径以及主动逃避免疫细胞的监测,因此免疫系统在肿瘤中的作用在过去未被重视。近年来肿瘤免疫疗法才成为研究热点。肿瘤免疫疗法通过重新启动并维持肿瘤-免疫循环,恢复机体正常的抗肿瘤免疫反应,而不仅限于针对单个致癌基因紊乱或肿瘤细胞的其他自主特征,因此,肿瘤免疫疗法可以产生抗肿瘤活性。在不同类型的肿瘤免疫疗法中,免疫检查点抑制剂的影响最为广泛。本文就乳腺癌相关经典免疫检查点和新型免疫检查点及其抑制剂的研究进展进行综述。 展开更多
关键词 乳腺癌 免疫检查点 肿瘤免疫疗法 免疫检查点抑制剂
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17β-雌二醇对骨髓基质细胞骨形态发生蛋白受体ⅠA、ⅠB mRNA表达的影响 被引量：3
6
作者 袁成良 金小岚 +2 位作者 侯建红 栗群英 黄迎春 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期256-259,共4页
目的 :研究骨髓基质细胞在向成骨细胞分化的介质中 ,17β -雌二醇 (E2 )对其骨形态发生蛋白受体(BMPR)ⅠA ,ⅠBmRNA表达的影响 ,探讨雌二醇对成骨细胞生成的作用。方法 :用 1,2 5 (OH) 2 D3 和地塞米松 (DEX)诱导大鼠骨髓基质细胞向成... 目的 :研究骨髓基质细胞在向成骨细胞分化的介质中 ,17β -雌二醇 (E2 )对其骨形态发生蛋白受体(BMPR)ⅠA ,ⅠBmRNA表达的影响 ,探讨雌二醇对成骨细胞生成的作用。方法 :用 1,2 5 (OH) 2 D3 和地塞米松 (DEX)诱导大鼠骨髓基质细胞向成骨细胞分化 ,应用半定量RT -PCR技术 ,观察不同浓度E2 对骨髓基质细胞分化过程中BMPR -ⅠA ,ⅠBmRNA表达的影响 ,以α-磷酸奈酚为底物测定细胞碱性磷酸酶的活性 ,VanGieson染色法显示Ⅰ型胶原的含量。结果 :E2 能明显抑制骨髓基质细胞分化过程中BMPR -ⅠAmRNA的表达 ,且呈剂量依赖性 ,随E2浓度增加 ,BMPR -ⅠAmRNA从 (2 3 7± 1 7) %降至 (16 3± 1 5 ) % (P <0 0 5 )和 (8 3± 1 2 ) % (P <0 0 1) ;BMPR -ⅠBmRNA随E2 浓度增加而增加 ,从 (1 3± 0 6 ) %增至 (5 7± 2 0 ) % (P <0 0 5 )和 (15 3± 3 0 ) % (P <0 0 1)。ALP活性随E2 浓度增加而降低 ,从 (42 6± 2 5 )U·L-1·g-1protein降至 (10 8± 1 5 )U·L-1·g-1protein和 (3 6± 1 7)U·L-1·g-1pro tein(P <0 0 1) ;细胞Ⅰ型胶原的含量随E2 浓度增加而减少。结论 :E2 能明显抑制体外培养的骨髓基质细胞分化过程中BMPR -ⅠAmRNA的表达 ,降低成骨细胞生成。 展开更多
关键词 雌二醇 骨髓基质细胞 骨形态发生蛋白质类
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破骨细胞分化成熟调节的分子机理研究进展 被引量：4
7
作者 袁成良 金小岚 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期427-432,共6页
Osteoprotegerin(OPG) ,receptoractivatorofNF -κBligand (RANKL)andreceptoracti vatorofNF -κΒ(RANK)areimportantmoleculesthatregulateosteoclastogenesis .OPGisdecoyreceptorof RANKL .ThebindingofOPGandRANKLblocksconnecti... Osteoprotegerin(OPG) ,receptoractivatorofNF -κBligand (RANKL)andreceptoracti vatorofNF -κΒ(RANK)areimportantmoleculesthatregulateosteoclastogenesis .OPGisdecoyreceptorof RANKL .ThebindingofOPGandRANKLblocksconnectingofRANKLandRANK ,inhibitsdevelopmentof osteoclast.ThebindingofRANKLandRANKinducesaserieskinasecascadereaction ,activatestranscription factors,introducestheproliferationanddifferentiationofosteoclastprecursors .Severalhormonesandos teotropicfactorsregulatetheformationandfunctionofosteoclastthroughtheabovemolecules . 展开更多
关键词 破骨细胞 分子机理 细胞分化 调节因子
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活动性肺结核与潜在感染者CD8＋、CD4＋记忆T细胞表达水平的比较 被引量：3
8
作者 袁成良 刘朝红 +1 位作者 张姚 叶敏 《医学临床研究》 CAS 2016年第12期2383-2385,共3页
【目的】探讨CD8^＋、CD4^＋记忆T细胞表达水平在活动性肺结核与潜伏感染者中的表达差异及其意义。【方法】本院确诊的25例活动性肺结核患者（A组）、25例肺结核潜伏感染者（B组）、30例健康人群作为健康对照组（C组），检测各组外周血C... 【目的】探讨CD8^＋、CD4^＋记忆T细胞表达水平在活动性肺结核与潜伏感染者中的表达差异及其意义。【方法】本院确诊的25例活动性肺结核患者（A组）、25例肺结核潜伏感染者（B组）、30例健康人群作为健康对照组（C组），检测各组外周血CD4^＋记忆T细胞、CD8^＋记忆T细胞的表达水平，并探讨其与高分辨率CT评分（HRCT）的相关性。【结果】B组的CD4^＋Tcm、CD8^＋Tcm水平显著高于A组、C组（P〈0．05），A组的CD4^＋Tcm、CD8^＋Tcm水平显著的高于C组（P〈0．05）。B组、A组的CD4^＋Tem、CD8^＋Tem水平显著的低于C组（P〈0．05），B组、A组的CD4^＋Tem、CD8^＋Tem水平相比差异无显著性（P〉0．05）。A组患者CD4^＋Tcm、CD8^＋Tcm水平与HRCT评分呈显著的负相关关系（P〈0．05）；A组患者CD4^＋Tem、CD8^＋Tem水平与HRCT评分无显著的相关系（P〉0．05）。[结论]CD4^＋、CD8^＋中心记忆性T细胞在活动性肺结核与潜伏感染者中水平差异显著，并且与肺结核患者病例损伤程度有关。 展开更多
关键词 结核 肺/免疫学 CD8阳性T淋巴细胞 CD4阳性T淋巴细胞
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RNA干扰原理及应用研究进展 被引量：6
9
作者 袁成良 金晓岚 《西部医学》 2009年第4期664-666,共3页
RNA干扰(RNAi)是一种进化上保守的抵御转基因或外来病毒侵犯的防御机制,指内源性或外源性与靶基因的转录产物mRNA有同源互补序列的双链RNA(dsRNA)在细胞内特异降解该mRNA,从而致使特异性的基因有效封闭的过程,是一种序列特异性的转录后... RNA干扰(RNAi)是一种进化上保守的抵御转基因或外来病毒侵犯的防御机制,指内源性或外源性与靶基因的转录产物mRNA有同源互补序列的双链RNA(dsRNA)在细胞内特异降解该mRNA,从而致使特异性的基因有效封闭的过程,是一种序列特异性的转录后基因沉默(PTGS)。RNAi作为一种简单快速、特异、高效、经济、效果可预测的技术,具有明显的优势,它比反义核酸技术优越,比基因敲除简单,具有良好的应用前景。RNAi主要用于基因功能的分析、信号传导通路的研究、新药物的研究和开发、病毒感染和肿瘤的治疗等。 展开更多
关键词 RNA干扰 SIRNA 转录后基因沉默
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雌二醇对骨髓基质细胞核结合因子α1基因表达的影响 被引量：1
10
作者 袁成良 金小岚 +2 位作者 龚群 侯建红 黄迎春 《第四军医大学学报》 北大核心 2003年第13期1227-1230,共4页
目的 :研究骨髓基质细胞 (MSCs)在向成骨细胞(OB)分化的条件培养体系中 ,17β 雌二醇 (E2 )对其核结合因子α1(corebindingfactorα1,Cbfα1)基因表达的影响 ,探讨E2对OB生成的作用及绝经后高转换骨代谢的可能机制 .方法 :取自 3mo龄雌... 目的 :研究骨髓基质细胞 (MSCs)在向成骨细胞(OB)分化的条件培养体系中 ,17β 雌二醇 (E2 )对其核结合因子α1(corebindingfactorα1,Cbfα1)基因表达的影响 ,探讨E2对OB生成的作用及绝经后高转换骨代谢的可能机制 .方法 :取自 3mo龄雌性SD大鼠MSCs在生长培养基中传代后 ,用1,2 5 (OH) 2 D3 和地塞米松 (DEX)诱导MSCs向OB分化 .应用半定量RT PCR技术 ,观察不同浓度E2 对MSCs分化过程中Cbfα1mRNA表达的影响 ;以α 磷酸奈酚为底物 ,测定细胞碱性磷酸酶 (ALP)的活性 ;VanGieson染色法显示Ⅰ型胶原的含量 .结果 :E2 能明显抑制MSCs分化过程中Cbfα1mR NA的表达 ,从 (2 3.4± 1.8) %降至 (15 .8± 1.5 ) %和 (5 .8± 0 .8) % (P <0 .0 5 ) ;细胞ALP活性随E2 浓度增加而降低 ,从(70 6± 37)nkat·g-1(protein)降至 (6 3± 5 )nkat·g-1(P <0 .0 5 ) .E2 降低细胞Ⅰ型胶原的合成 ,用VanGieson染色细胞 ,随着E2 浓度的增加 ,胞质染色由鲜红、淡红到黄色 .结论 :E2能明显抑制MSCs分化过程中Cbfα1mRNA的表达 ,减少OB的生成 . 展开更多
关键词 雌二醇 骨髓 基质细胞 核结合因子α1 细胞分化 基因表达
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RNA干扰抑制树突状细胞CD80和CD86基因表达研究 被引量：1
11
作者 袁成良 刘定海 +2 位作者 刘利洪 邹自英 魏世刚 《西部医学》 2011年第8期1415-1418,共4页
目的探讨体外合成的小干扰RNA(siRNA)对人树突状细胞(DC)共刺激分子CD80和CD86基因表达的影响。方法设计并合成了3条siRNA(siRNA1、siRNA2和siRNAc),在脂质体的介导下转染树突状细胞,于转染后24、48、72h收集细胞,用半定量RT-PCR检测CD8... 目的探讨体外合成的小干扰RNA(siRNA)对人树突状细胞(DC)共刺激分子CD80和CD86基因表达的影响。方法设计并合成了3条siRNA(siRNA1、siRNA2和siRNAc),在脂质体的介导下转染树突状细胞,于转染后24、48、72h收集细胞,用半定量RT-PCR检测CD80和CD86 mRNA的变化,用蛋白印迹检测CD80、CD86蛋白的表达。结果转染24、48、72h后,DC CD80 mRNA均有明显减少(P<0.01),抑制率分别为(50.0±3.63)%、(66.8±4.12)%和(76.6±4.87)%;CD86 mRNA均有显著降低(P<0.01),抑制率分别为(53.0±3.70)%(、60.5±3.92)%和(73.4±4.46)%,而单纯脂质转染和siRNAc转染对CD80、CD86 mRNA表达均无影响(P>0.05)。Western Blot结果显示转染48、72h后,siRNA1对CD80蛋白表达的抑制率为(67.3±4.80)%和(80.9±5.23)%;siRNA2后对CD86蛋白表达的抑制率为(60.7±4.15)%和(74.7±4.63)%。结论 siRNA可特异抑制树突细胞B7基因的转录和表达,为进一步研究siRNA诱导移植免疫耐受提供了理论和实验基础,为诱导器官移植免疫耐受提供了新思路和途径。 展开更多
关键词 小干扰RNA 树突状细胞 B7 基因表达
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B7特异性siRNA对树突状细胞功能的影响 被引量：1
12
作者 袁成良 魏世刚 +2 位作者 刘定海 刘利洪 邹自英 《西部医学》 2009年第4期559-561,565,共4页
目的探讨体外合成的B7特异性小干扰RNA(siRNA)对树突状细胞(DC)功能的影响。方法设计并合成B7特异性siRNA,在脂质体的介导下转染树突状细胞,转染后72h收集细胞,用蛋白印迹法检测B7-1、B7-2蛋白的表达,用ELISPOT检测DC与淋巴细胞共培养后... 目的探讨体外合成的B7特异性小干扰RNA(siRNA)对树突状细胞(DC)功能的影响。方法设计并合成B7特异性siRNA,在脂质体的介导下转染树突状细胞,转染后72h收集细胞,用蛋白印迹法检测B7-1、B7-2蛋白的表达,用ELISPOT检测DC与淋巴细胞共培养后T细胞分泌IFN-γ,用MTT法检测混合淋巴细胞增殖反应和CTL特异性杀伤率。结果Western Blot结果显示转染72h后,siRNA1对B7-1蛋白表达的抑制率为(80.9±5.23)%;siR-NA2对B7-2蛋白表达的抑制率为(74.7±4.63)%。经转染B7-1、B7-2分子特异性siRNA的DC激活后,T淋巴细胞分泌IFN-γ分别为(84.6±23.1)103U/L和(76.7±19.7)10.3U/L明显低于对照组(204.5±46.2)103U/L;各组DC刺激淋巴细胞增殖指数(PI)分别为1.73±0.32和1.53±0.25,也低于对照组4.23±0.74。CTL杀伤实验结果表明:对照组的特异性杀伤率为(76.4±7.6)%,siRNA1和siRNA2组的特异性杀伤率分别为(14.4±3.6)%和(18.6±4.7)%,低于对照组。结论B7特异性siRNA可明显抑制树突细胞B7基因的表达,并可降低DC激活T淋巴细胞增殖和CTL的细胞毒性,为进一步研究siRNA诱导免疫耐受和治疗自身免疫性疾病提供了新思路和方法。 展开更多
关键词 小干扰RNA 树突状细胞 B7 功能
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17β-雌二醇对成骨细胞生成的作用 被引量：1
13
作者 袁成良 金小岚 +2 位作者 侯建红 钱江龙 黄迎春 《四川医学》 CAS 2003年第11期1105-1108,共4页
目的　研究骨髓基质细胞在向成骨细胞分化的介质中 ,17β 雌二醇 (E2 )对其核结合因子α1(Cbfα1)及过氧化物酶增殖活化受体γ2 (PPAR γ2 )mRNA表达的影响 ,探讨雌二醇对成骨细胞生成的作用。方法　 1,2 5 (OH ) 2 D3 和地塞米松 (DEX... 目的　研究骨髓基质细胞在向成骨细胞分化的介质中 ,17β 雌二醇 (E2 )对其核结合因子α1(Cbfα1)及过氧化物酶增殖活化受体γ2 (PPAR γ2 )mRNA表达的影响 ,探讨雌二醇对成骨细胞生成的作用。方法　 1,2 5 (OH ) 2 D3 和地塞米松 (DEX)诱导大鼠骨髓基质细胞向成骨细胞分化 ,应用半定量RT PCR及Northernblot技术 ,观察不同浓度E2对骨髓基质细胞分化过程中Cbfα1及PPAR γ2mRNA表达的影响 ,以α 磷酸奈酚为底物 ,测定细胞碱性磷酸酶 (ALP)的活性 ,VanGieson染色法显示Ⅰ型胶原的含量。结果　E2能明显抑制骨髓基质细胞分化过程中Cbfα1mRNA的表达 ,E2浓度为 (0 10 -6)mol/L时 ,Cbfα1mRNA的表达量从 (2 5 0± 3 3 ) %降至 (14 5± 1 3 ) % (P <0 0 1)和 (6 5± 1 9) % (P <0 0 1) ;E2能明显促进骨髓基质细胞在分化介质中PPAR γ2mRNA的表达 ,在上述E2浓度时 ,PPAR γ2mRNA的表达从 (1 75± 0 5 ) %增至 (9 5± 2 1) % (P <0 0 1)和 (19 3± 3 0 ) % (P <0 0 1) ;Northernblot结果显示随着E2浓度的增加 ,CbfαlmRNA的表达量从 4 42± 0 3 9降至 1 88± 0 16(P <0 0 1)和 1 2 0± 0 11(P <0 0 1) ;PPAR γ2mRNA的表达量从 1 47± 0 12增至 2 81±0 2 2 (P <0 0 1)和 4 0 2± 0 3 6(P 展开更多
关键词 雌二醇 骨髓基质细胞 过氧化物酶增殖活化受体γ2 分化 核结合因子α1
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β-羟丁酸的酶法测定及其临床意义 被引量：1
14
作者 袁成良 陈蓉 钱江龙 《西南国防医药》 CAS 2001年第2期113-114,共2页
β-羟丁酸(β-Hydroxybutyric Acid)是酮体的主要成份，占酮体的78%，在肝脏内合成，经肝外组织利用。由于β-羟丁酸在酮体中所占比例最大，可以代表酮体的含量。正常情况下，肝内产生的酮体可被肝外组织充分利用，血清中的酮体含量不... β-羟丁酸(β-Hydroxybutyric Acid)是酮体的主要成份，占酮体的78%，在肝脏内合成，经肝外组织利用。由于β-羟丁酸在酮体中所占比例最大，可以代表酮体的含量。正常情况下，肝内产生的酮体可被肝外组织充分利用，血清中的酮体含量不高，但在糖尿病时，由于糖不能被补充利用，脂肪动员加强，产生的酮体超过肝外组织的利用量，致使血清中酮体增加，产生酮血症，导致患者酸碱失衡及电解质紊乱，不易纠正且死亡率高。 展开更多
关键词 Β-羟丁酸 酶 糖尿病 测定
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微小RNA-340对肝细胞癌细胞转移和侵袭力的影响
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作者 袁成良 邹宁 +1 位作者 刘朝红 邹颜矫 《国际检验医学杂志》 CAS 2019年第19期2313-2317,共5页
目的探讨高表达微小RNA-340(miR-340)对肝细胞癌(HCC)细胞转移和侵袭力的影响。方法采用LipofectamineTM2000试剂盒进行miR-340转染,Transwell侵袭实验评价侵袭能力,实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)测定HCC细胞株miR-340、E-钙黏蛋白、N... 目的探讨高表达微小RNA-340(miR-340)对肝细胞癌(HCC)细胞转移和侵袭力的影响。方法采用LipofectamineTM2000试剂盒进行miR-340转染,Transwell侵袭实验评价侵袭能力,实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)测定HCC细胞株miR-340、E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白、波形蛋白、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的mRNA水平,酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定MMP-2和MMP-9蛋白水平,用蛋白质免疫印迹(Western blot)检测核转录因子κB1(NF-κB1)蛋白水平。结果与HepG2相比miR-340在HCC细胞系中表达水平降低,高表达miR-340的HepG2细胞、MHCC-97L细胞侵袭能力下降。高表达miR-340的HepG2细胞和MHCC-97L细胞E-钙黏蛋白mRNA表达上调,N-钙黏蛋白mRNA水平下调,波形蛋白mRNA水平下调。miR-340使HepG2细胞和MHCC-97L细胞中MMP-2和MMP-9的表达下降;与HCC细胞系比较,高表达miR-340的HepG2细胞NF-κB1表达量下降40%、MHCC-97L细胞下降66%,差异有统计学意义(P<0.05)。生物信息学分析预示NF-κB1是miR-340的潜在靶基因且萤光素酶报告分析又进一步证实了miR-340可以直接作用于NF-κB1的3′端非编码区。结论 miR-340在抑制细胞迁移、侵袭和上皮细胞间质转化中起着重要的作用,提示miR-340表达水平降低是HCC发生的重要环节,基于miR-340的治疗方法可用于HCC诊治。 展开更多
关键词 微小RNA-340 肝细胞癌 侵袭 转移 核转录因子-κB1
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雌二醇对大鼠骨髓基质细胞过氧化物酶增殖活化受体γ2基因表达的影响(英文)
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作者 袁成良 金小岚 +1 位作者 魏世刚 邹自英 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期596-600,共5页
背景:雌二醇能否改变骨髓基质细胞分化过程中过氧化物酶增殖活化受体γ2-mRNA的表达进而影响其向成骨细胞分化有待研究。目的:观察骨髓基质细胞在向成骨细胞分化的介质中,17β-雌二醇对其过氧化物酶增殖活化受体γ2mRNA及蛋白表达的影... 背景:雌二醇能否改变骨髓基质细胞分化过程中过氧化物酶增殖活化受体γ2-mRNA的表达进而影响其向成骨细胞分化有待研究。目的:观察骨髓基质细胞在向成骨细胞分化的介质中,17β-雌二醇对其过氧化物酶增殖活化受体γ2mRNA及蛋白表达的影响。设计:对比观察实验。单位:成都军区总医院中心实验室,德阳市人民医院检验科,成都百奥生物技术有限公司。材料:选用1只雌性SD大鼠,3月龄,清洁级,体质量(200±20)g,由成都中医药大学实验动物研究中心提供(动物许可证号码11)。DMEM培养液购自Hyclone,1,25一双羟维生素D3、地塞米松和雌二醇购自Sigma公司,引物用Jellyfish软件设计,由大连宝生物技术有限公司合成。RT-PCR试剂盒和RNA提取试剂盒均由大连宝生物提供。兔抗山羊多抗(北京中山生物技术有限公司),山羊抗鼠PPARγ2抗体和Western Blotting增强化学发光试剂均购自Santa Cruz公司。方法:实验于2001-04/2002-07在成都军区总医院中心实验室和成都百奥生物技术有限公司完成。①无菌条件下分离大鼠骨髓基质细胞,1,25一双羟维生素D3和地塞米松诱导大鼠骨髓基质细胞向成骨细胞分化,观察细胞生长情况。②用0,0.1,10和1000nmol/L不同浓度雌二醇对细胞分化过程进行干预3d。培养细胞用Tris-Triton X-100缓冲液加超声粉碎裂解细胞,在Beckman CX-7生化分析仪上测定碱性磷酸酶的活性,观察不同浓度雌二醇条件下细胞产生碱性磷酸酶的情况。③100g/L中性甲醛固定培养于24孔板的骨髓基质细胞,Weigert苏木素染液染色10min,自来水冲洗,5g/L盐酸乙醇分化,Van Gieson染色,体积分数为0.95乙醇分化脱水,二甲苯透明,显微镜下观察并照相,观察细胞胶原合成情况。④应用半定量RT-PCR及Northern blot、Western blot技术,观察不同浓度雌二醇对骨髓基质细胞分化过程中PPAR-γ2mRNA及蛋白表达的影响。主要观察指标:①骨髓基质细胞生长情况、细胞胶原合成情况。②不同浓度雌二醇条件下细胞产生碱性磷酸酶的情况。③不同浓度雌二醇对骨髓基质细胞分化过程中PPAR-γ2mRNA及蛋白表达的影响。结果:①骨髓基质细胞接种后4h开始贴壁,24～72h可见贴壁细胞明显增大且分裂增殖,细胞呈三角形,多角形或梭形。3d后首次换液,贴壁细胞体积增大,呈集落生长,10d左右融合成遍。多次传代的骨髓基质细胞呈有序的成纤维细胞样分布。②随着雌二醇浓度的增加,胞浆染色越淡,由鲜红、淡红到黄色。胞浆呈红色说明有胶原合成,红色越深,表明胶原越多。③不同浓度雌二醇条件下细胞均能产生碱性磷酸酶,其活性随雌二醇浓度增加而降低,雌二醇浓度从0nmol/L增加到1000nmol/L时,碱性磷酸酶从(710.1±41.7)nkat/g降至(60.0±11.7)nkat/g(t=29.0,P<0.01)。④雌二醇浓度为0.1,10和1000nmol/L时,PPAR-γ2mRNA的表达量均明显高于雌二醇0mol/L组(t=6.1,7.2,11.5,P<0.01),Northern blot结果显示雌二醇浓度为0.1,10和1000nmol/L时PPAR-γ2mRNA表达量分别为(4.0±0.4)%,(1.7±0.2)%,(2.8±0.2)%,明显高于雌二醇0mol/L组[(1.5±0.1)%,t=5.4,105.0,14.2,P<0.01]。⑤Western Blot检测结果显示雌二醇能明显增加骨髓基质细胞PPAR-γ2蛋白的表达。雌二醇浓度为0.1,10和1000nmol/L时,PPAR-γ2蛋白的表达量分别为(2.2±0.2)%,(2.6±0.2)%,(4.1±0.2)%,明显高于雌二醇0mol/L组[(1.2±0.10)%,t=6.6,8.5,13.2,P<0.01]。结论:雌二醇能明显抑制体外培养的骨髓基质细胞碱性磷酸酶的表达,同时促进骨髓基质细胞内过氧化物酶增殖活化受体γ2mRNA和蛋白的表达。 展开更多
关键词 雌二醇 骨髓细胞 基因表达 蛋白
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B7特异性RNA干扰对皮肤移植的影响
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作者 袁成良 邹自英 +3 位作者 魏世刚 李永忠 刘定海 刘利洪 《四川医学》 CAS 2009年第6期807-810,共4页
目的探讨RNA干扰技术阻断B7/CD28共刺激信号对小鼠异体皮肤移植排斥反应的影响。方法设计并合成B7特异性siRNA,在脂质体的介导下转染树突状细胞,转染后72h收集细胞,用蛋白印迹法检测B7-1、B7-2蛋白的表达。在小鼠异体皮肤移植前7d,经静... 目的探讨RNA干扰技术阻断B7/CD28共刺激信号对小鼠异体皮肤移植排斥反应的影响。方法设计并合成B7特异性siRNA,在脂质体的介导下转染树突状细胞,转染后72h收集细胞,用蛋白印迹法检测B7-1、B7-2蛋白的表达。在小鼠异体皮肤移植前7d,经静脉将转染B7特异性siRNA的DC输入小鼠体内(DC转染组),同时设立同种异体移植对照组、同系移植对照组、环孢素A(CsA)治疗组(术后每日皮下注射CsA5 mg/kg)和未转染DC组(移植前输注未转染DC),观察各组移植皮瓣的存活时间和排斥反应情况,并用MTT法检测混合淋巴细胞增殖反应,术后1个月观察迟发性超敏反应情况。结果Western Blot结果显示转染72h后,siRNA1对B7-1蛋白表达的抑制率为(77.2±6.26)%;siRNA2对B7-2蛋白表达的抑制率为(73.3±5.42)%。与同种异体移植对照组和未转染DC组比较,DC转染组移植皮瓣成活时间明显延长(P<0.01),组织排斥反应程度较轻,混合淋巴细胞反应和DTH反应显著降低(P<0.01)。结论B7特异性siRNA可明显抑制树突细胞B7基因的表达,以阻断B7/CD28共刺激通路,抑制小鼠皮肤移植排斥反应,为进一步研究siRNA诱导免疫耐受提供了新方法。 展开更多
关键词 RNA干扰 树突状细胞 B7 皮肤移植 免疫抑制
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糖尿病患者红细胞糖酵解及其与红细胞参数的关系
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作者 袁成良 曾平 +1 位作者 陈威巍 肖庆忠 《西南国防医药》 CAS 1996年第6期329-331,共3页
本文测定了30例非胰岛素依赖型糖尿病(NIDOM)患者红细胞糖酵解值及红细胞几个相关参数。结果显示NIDOM患者红细胞糖酵解值较正常对照组明显降低;而且对葡萄糖变化的应激能力也减弱,红细胞数(RBC)、红细胞压积(HCT)、平均红细胞体积(MCV... 本文测定了30例非胰岛素依赖型糖尿病(NIDOM)患者红细胞糖酵解值及红细胞几个相关参数。结果显示NIDOM患者红细胞糖酵解值较正常对照组明显降低;而且对葡萄糖变化的应激能力也减弱,红细胞数(RBC)、红细胞压积(HCT)、平均红细胞体积(MCV)也较正常对照组明显增高。提示红细胞糖酵解降低可能是导致红细胞相关参数变化的重要因素。 展开更多
关键词 糖尿病 非胰岛素依赖型 红细胞 葡萄糖 酵解
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消除溶血对肌酐测定的影响
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作者 袁成良 胡宗海 罗震宇 《西南国防医药》 CAS 1997年第2期86-87,共2页
Jaffe’s动力学法测定肌酐的影响因素很多,而溶血就是最常见的干扰影响因素之一,它可使结果相差甚大,本文就溶血对肌酐的测定影响进行了实验观察,并根据非离子去垢剂碱性溶液(AHD试剂)能转变血红蛋白使其在575nm处有吸收峰来消除溶血对... Jaffe’s动力学法测定肌酐的影响因素很多,而溶血就是最常见的干扰影响因素之一,它可使结果相差甚大,本文就溶血对肌酐的测定影响进行了实验观察,并根据非离子去垢剂碱性溶液(AHD试剂)能转变血红蛋白使其在575nm处有吸收峰来消除溶血对肌酐测定的影响,结果令人满意,现报告如下。 展开更多
关键词 溶血 干扰 血肌酐测定
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氧化酶—氧电极法检测血糖
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作者 袁成良 胡宗海 龚群 《西南国防医药》 CAS 1997年第6期353-354,共2页
血清(血浆)葡萄糖(glucose)的检测,目前常用的有己糖激酶法(HK)、葡萄糖氧化酶(GOD)酶偶联法和邻甲苯胺(O—TB)法。我们引进美国BECKMAN公司CA—7型生化分析仪的同时,也引用了氧化酶—氧电极法检测血糖,经过一年的使用证实,氧化酶—氧... 血清(血浆)葡萄糖(glucose)的检测,目前常用的有己糖激酶法(HK)、葡萄糖氧化酶(GOD)酶偶联法和邻甲苯胺(O—TB)法。我们引进美国BECKMAN公司CA—7型生化分析仪的同时,也引用了氧化酶—氧电极法检测血糖,经过一年的使用证实,氧化酶—氧电极法检测血糖简单快速,准确可靠,取得了满意的效果。 展开更多
关键词 氧化酶—氧电极 血糖 检测
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