目的探索人表皮干细胞(ep iderm a l stem ce lls,ESC s)的分离方法和培养体系。方法用Ⅳ型胶原纯化、富集ESC s,将黏附细胞(实验组)和未黏附细胞(对照组)分别接种在Ⅳ型胶原基质(实验组为A1,对照组为A2)和3T 3细胞滋养层(实验照组为B1...目的探索人表皮干细胞(ep iderm a l stem ce lls,ESC s)的分离方法和培养体系。方法用Ⅳ型胶原纯化、富集ESC s,将黏附细胞(实验组)和未黏附细胞(对照组)分别接种在Ⅳ型胶原基质(实验组为A1,对照组为A2)和3T 3细胞滋养层(实验照组为B1,对照组为B2),培养体系为:低糖无钙DM EM培养基(添加10%胎牛血清、表皮生长因子10μg/L、氯化钙0.05 mm o l/L、氢化可的松0.8 m g/L),观察细胞能否呈克隆状生长,用流式细胞仪和免疫细胞化学染色,对ECSs周期和表型进行分析。结果实验组细胞呈克隆状生长,G0/G1期细胞和α6briCD71d im细胞百分率明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),实验组角蛋白19免疫细胞化学染色呈阳性,对照组呈阴性。结论人ESC s可通过Ⅳ型胶原快速黏附分选,并可在适当的培养体系里扩增。展开更多
文摘目的探索人表皮干细胞(ep iderm a l stem ce lls,ESC s)的分离方法和培养体系。方法用Ⅳ型胶原纯化、富集ESC s,将黏附细胞(实验组)和未黏附细胞(对照组)分别接种在Ⅳ型胶原基质(实验组为A1,对照组为A2)和3T 3细胞滋养层(实验照组为B1,对照组为B2),培养体系为:低糖无钙DM EM培养基(添加10%胎牛血清、表皮生长因子10μg/L、氯化钙0.05 mm o l/L、氢化可的松0.8 m g/L),观察细胞能否呈克隆状生长,用流式细胞仪和免疫细胞化学染色,对ECSs周期和表型进行分析。结果实验组细胞呈克隆状生长,G0/G1期细胞和α6briCD71d im细胞百分率明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),实验组角蛋白19免疫细胞化学染色呈阳性,对照组呈阴性。结论人ESC s可通过Ⅳ型胶原快速黏附分选,并可在适当的培养体系里扩增。
