为了建立伪狂犬病病毒(PRV)微滴数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)的检测方法,以伪狂犬病病毒gB基因为靶基因,建立了可对其准确定量的微滴数字PCR方法。对ddPCR反应中的引物浓度、探针浓度、退火温度进行了优化。对建立的ddPCR方法的...为了建立伪狂犬病病毒(PRV)微滴数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)的检测方法,以伪狂犬病病毒gB基因为靶基因,建立了可对其准确定量的微滴数字PCR方法。对ddPCR反应中的引物浓度、探针浓度、退火温度进行了优化。对建立的ddPCR方法的特异性和敏感性也进行测定,并且应用于临床样品的检测。结果表明,ddPCR的最佳引物浓度为0.9μmol·L^(-1),探针浓度为0.25μmol·L^(-1),退火温度为60℃。ddPCR方法线性相关系数(R2)为0.998,显示呈良好的线性关系。检测限为6.1copies·μL^(-1),比荧光定量PCR(Real Time PCR,qPCR)的检测限低,变异系数为2.81%,与其他病毒无交叉反应。通过对临床样品的检测,与病毒分离比较,ddPCR方法的敏感性为87.5%,特异性为96.2%,符合率为97%。结果表明新建立的ddPCR方法,敏感性高、特异性强,可用于伪狂犬病病毒的定量检测。展开更多
为了解我国猪群中猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)的感染情况,分析感染与猪年龄的关系,本试验于2009年在我国28个省市的71个中小规模场、22个屠宰场和62家散养户采集了2 905份猪血清样品,用PCR法对PCV2进行检测。结果显...为了解我国猪群中猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)的感染情况,分析感染与猪年龄的关系,本试验于2009年在我国28个省市的71个中小规模场、22个屠宰场和62家散养户采集了2 905份猪血清样品,用PCR法对PCV2进行检测。结果显示,检出阳性血清429份,阳性率为14.8%。在被调查的场/户中,86.4%屠宰场、52.1%中小规模场和58.1%散养户为PCV2感染阳性,其中48.6%的PCV2阳性中小规模场的群阳性率低于10%。分析中小规模场PCV2感染情况和猪年龄之间的关系发现,在5个年龄组中,2～4周龄组未检出PCV2感染,5周龄以上各组均检出PCV2感染,其中11～14周龄组和15～26周龄组阳性率较高,高于5～7周龄组和8～10周龄组。展开更多
文摘为了建立伪狂犬病病毒(PRV)微滴数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)的检测方法,以伪狂犬病病毒gB基因为靶基因,建立了可对其准确定量的微滴数字PCR方法。对ddPCR反应中的引物浓度、探针浓度、退火温度进行了优化。对建立的ddPCR方法的特异性和敏感性也进行测定,并且应用于临床样品的检测。结果表明,ddPCR的最佳引物浓度为0.9μmol·L^(-1),探针浓度为0.25μmol·L^(-1),退火温度为60℃。ddPCR方法线性相关系数(R2)为0.998,显示呈良好的线性关系。检测限为6.1copies·μL^(-1),比荧光定量PCR(Real Time PCR,qPCR)的检测限低,变异系数为2.81%,与其他病毒无交叉反应。通过对临床样品的检测,与病毒分离比较,ddPCR方法的敏感性为87.5%,特异性为96.2%,符合率为97%。结果表明新建立的ddPCR方法,敏感性高、特异性强,可用于伪狂犬病病毒的定量检测。
文摘为了解我国猪群中猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)的感染情况,分析感染与猪年龄的关系,本试验于2009年在我国28个省市的71个中小规模场、22个屠宰场和62家散养户采集了2 905份猪血清样品,用PCR法对PCV2进行检测。结果显示,检出阳性血清429份,阳性率为14.8%。在被调查的场/户中,86.4%屠宰场、52.1%中小规模场和58.1%散养户为PCV2感染阳性,其中48.6%的PCV2阳性中小规模场的群阳性率低于10%。分析中小规模场PCV2感染情况和猪年龄之间的关系发现,在5个年龄组中,2～4周龄组未检出PCV2感染,5周龄以上各组均检出PCV2感染,其中11～14周龄组和15～26周龄组阳性率较高,高于5～7周龄组和8～10周龄组。
