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广州市及珠江三角洲淡水鱼华支睾吸虫感染的初步调查 被引量：11
1
作者 詹希美 吕芳丽 +5 位作者 俞慕华 何蔼 张瑞林 梁瑜 付承彬 李道宁 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2000年第5期109-109,103,共2页
关键词 华支睾吸虫感染 淡水鱼 流行病学
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并殖吸虫数量分类研究 被引量：7
2
作者 詹希美 徐小川 +2 位作者 李桂云 徐秉锟 陈心陶 《中山医科大学学报》 CSCD 1997年第2期81-84,共4页
并殖吸虫是并殖病病原，它们的发现较早，但因种类较多，分类较为混乱。本教研室从４０年代起着手并殖吸虫研究，８０年代以来将数量分类学应用于并殖吸虫研究。根据研究结果对某些种的独立地位、种的归属及分类系统提出新的见解。
关键词 并殖吸虫属 分类 聚类分析
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并殖吸虫成虫形态结构特征排序 被引量：6
3
作者 詹希美 徐秉锟 《动物学报》 SCIE CAS CSCD 1990年第1期7-11,共5页
对9种并殖吸虫成虫形态特征进行主成分分析及聚类分析,结果表明:在并殖吸虫成虫的6项主要特征中,体形因素及卵巢类型是重要的分类依据。在被分析的9个种中,怡乐村并殖吸虫、斯氏狸殖吸虫、巨睾狸殖吸虫、三平正并殖吸虫、异盘并殖吸虫... 对9种并殖吸虫成虫形态特征进行主成分分析及聚类分析,结果表明:在并殖吸虫成虫的6项主要特征中,体形因素及卵巢类型是重要的分类依据。在被分析的9个种中,怡乐村并殖吸虫、斯氏狸殖吸虫、巨睾狸殖吸虫、三平正并殖吸虫、异盘并殖吸虫、陈氏并殖吸虫与卫氏并殖吸虫7个种具有种的独立地位,而泡囊狸殖吸虫和扁囊并殖吸虫未能分别从斯氏狸殖吸虫和卫氏并殖吸虫中分开。 展开更多
关键词 并殖吸虫 成虫 形态学 聚类分析
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多元分析在肺吸虫病诊断的应用 被引量：1
4
作者 詹希美 邵向云 +3 位作者 徐小川 李桂云 路群 李荣隹 《中山医科大学学报》 CSCD 1994年第4期269-273,共5页
对浙江省温州市的７２例肺吸虫病患者及１８例正常人按１１项检验结果作聚类分析及逐步判别分析；根据谱系分枝图及判别函数的提示，这些患者可分成３种类型，并与临床上的肺型、肝型、亚临床型对应；结合临床情况提出：诊断肺吸虫病只... 对浙江省温州市的７２例肺吸虫病患者及１８例正常人按１１项检验结果作聚类分析及逐步判别分析；根据谱系分枝图及判别函数的提示，这些患者可分成３种类型，并与临床上的肺型、肝型、亚临床型对应；结合临床情况提出：诊断肺吸虫病只需６项指标（肺吸虫抗原皮试、血白细胞计数、血中嗜酸性细胞比例、血沉、γ球蛋白比例及ＥＬＩＳＡ），而肝肿大、谷丙转氨酶、间接血凝试验等项可以省去而不影响判别效果。所得２组函数可能有助于诊断及分型。 展开更多
关键词 肺吸虫病 聚类分析 诊断
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Studies on Numerical Taxonomy of Lung Flukes and Their Application
5
作者 詹希美 李卓雅 +1 位作者 徐小川 李桂云 《中山大学学报论丛》 1997年第1期8-12,共5页
对存于中山医科大学寄生虫教研室的在定种时使用的８种正副模标本及从虎肺中取出的并殖吸虫标本进行主成分析及聚类分析，结果表明并殖吸虫成虫的６项主要特征中，体形因素及卵巢类型是重要的分类依据。在被分析的９个种中，怡乐村并殖... 对存于中山医科大学寄生虫教研室的在定种时使用的８种正副模标本及从虎肺中取出的并殖吸虫标本进行主成分析及聚类分析，结果表明并殖吸虫成虫的６项主要特征中，体形因素及卵巢类型是重要的分类依据。在被分析的９个种中，怡乐村并殖吸虫、斯氏狸殖吸虫、巨睾狸殖吸虫、三平正并殖吸虫、异盘并殖吸虫、陈氏并殖吸虫与卫氏并殖吸虫７个种具有独立地位，而泡囊狸殖吸虫和扁囊并殖吸虫未能分别从斯氏狸殖和卫氏并殖吸虫分开。建立具有独立地位的７种并殖虫吸虫鉴别模型。对中国１０个省地区的虫种进行鉴定，结果表明：广东（梅县）、湖南、河南、四川、陕西的吸虫同为斯氏狸殖吸虫；广东（广宁）、江西、浙江、安徽、吉林的并殖吸虫同为卫氏并殖，但各种内不同居群存在形态差别。对１６个种的并殖吸虫进行聚类分析，认为１６种并殖吸虫可分为两个大群，它们的基本特征符合陈心陶提出的狸殖属与并殖属，但属中所含虫种不尽相同。 展开更多
关键词 肺吸虫 数值分类
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3例广州管圆线虫病患儿死亡的原因 被引量：12
6
作者 李道宁 何蔼 +4 位作者 王轶 梁瑜 李卓雅 孟锦绣 詹希美 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期310-311,共2页
目的　报告 3例广州管圆线虫病婴幼儿死亡的病因。为诊治该病提出建议。方法　根据临床症状、病理组织学的检查和有关资料复习及分析。结果与结论　 3例广州管圆线虫病患儿均为临床上误诊、误治和延误救治时机而死亡。及早检查脑脊液、... 目的　报告 3例广州管圆线虫病婴幼儿死亡的病因。为诊治该病提出建议。方法　根据临床症状、病理组织学的检查和有关资料复习及分析。结果与结论　 3例广州管圆线虫病患儿均为临床上误诊、误治和延误救治时机而死亡。及早检查脑脊液、气管冲洗液和粪便等查幼虫和及时治疗有可能挽救患儿。 展开更多
关键词 广州管圆线虫病 广州管圆线虫 脑脊液 死亡原因 广州市
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广州市褐云玛瑙螺感染广州管圆线虫的调查分析 被引量：18
7
作者 孟锦绣 詹希美 +9 位作者 程梅 梁瑜 李素丽 甘明 徐贵峰 李卓雅 余细勇 蒋文玲 李运雄 何蔼 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期191-194,共4页
目的对广州市褐云玛瑙螺(Achatina fulica)感染广州管圆线虫(Angiostrongylus cantonensis)第Ⅲ期幼虫的情况进行调查和比较,填补广州市广州管圆线虫病的流行病学资料。方法分别于2000年7月和2004年7月对广州市天河区、海珠区和越秀区... 目的对广州市褐云玛瑙螺(Achatina fulica)感染广州管圆线虫(Angiostrongylus cantonensis)第Ⅲ期幼虫的情况进行调查和比较,填补广州市广州管圆线虫病的流行病学资料。方法分别于2000年7月和2004年7月对广州市天河区、海珠区和越秀区褐云玛瑙螺进行采样收集,消化法分离第Ⅲ期幼虫,计算感染率和感染度并与过去及国内其它地区进行比较,用灌胃法构建大鼠和小鼠动物模型,检测脑部和心肺晚期虫体。结果广州市褐云玛瑙螺广州管圆线虫感染率,2000年为44.2%(57/129),感染度401条/螺,而2004年为27.3%(33/121),感染度为72条/螺,2次感染率差异有显著性(χ2=7.5,P<0.01),各区褐云玛瑙螺的感染率差异较大,最高达65.9%。褐云玛瑙螺的感染率与其螺重呈正比。用分离的第Ⅲ期幼虫构建了小鼠和大鼠动物模型,分别从脑部和心肺检出较晚期虫体。结论广州市褐云玛瑙螺的广州管圆线虫感染率和感染度2004年较2000年有明显下降,2004年感染率低于曾发生过广州管圆线虫病暴发流行的地区;小鼠适于构建广州管圆线虫第Ⅳ、Ⅴ期模型,大鼠适于构建第Ⅴ期和成虫模型。 展开更多
关键词 广州管圆线虫 褐云玛瑙螺 流行病学
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广东省江门市广州管圆线虫病流行病学调查 被引量：11
8
作者 张赟 黄迪 +2 位作者 谭启明 陈代雄 詹希美 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期370-373,共4页
目的对广东省江门市广州管圆线虫病进行流行病学调查。方法2006-2007年在广东省江门市礼乐镇和五邑大学及新会市三江镇和双水镇,调查广州管圆线虫不同宿主感染情况和特征,包括用消化法检测褐云玛瑙螺(Achatina fulica)和福寿螺(Pomacea ... 目的对广东省江门市广州管圆线虫病进行流行病学调查。方法2006-2007年在广东省江门市礼乐镇和五邑大学及新会市三江镇和双水镇,调查广州管圆线虫不同宿主感染情况和特征,包括用消化法检测褐云玛瑙螺(Achatina fulica)和福寿螺(Pomacea canaliculata)感染广州管圆线虫(Angiostrongylus cantonensis)Ⅲ期幼虫情况;解剖褐家鼠(Rattus norvegicus)、板齿鼠(Bandicota indica)和黄胸鼠(Rattus flavipectus)心、肺,检查心肺血管中广州管圆线虫成虫感染率;随机抽样问卷调查当地居民广州管圆线虫病史及饮食习惯等。ELISA检测300份居民血清广州管圆线虫特异性IgG和IgM抗体阳性率。结果检查褐云玛瑙螺695只,福寿螺720只,其广州管圆线虫Ⅲ期幼虫阳性率分别为45.0%和1.8%;平均感染度分别为53.74±147.30条/只和5.23±8.51条/只。检查鼠类229只,广州管圆线虫成虫感染率为4.4%。问卷调查300人,其中11.3%有食生或半生鱼、虾史,5.3%在劳动中直接或间接接触过褐云玛瑙螺和福寿螺。检查300份居民血清,IgG抗体阳性42份,阳性率为14.0%,其中IgM抗体阳性5份,阳性率为1.7%。结论江门市为广州管圆线虫病流行区,居民受到该病的威胁。 展开更多
关键词 广州管圆线虫 流行病学 褐云玛瑙螺 福寿螺 江门市
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青蒿琥酯抗弓形虫病的疗效观察 被引量：12
9
作者 申川军 詹希美 +5 位作者 杨绍基 何蔼 郑焕钦 张瑞琳 李卓雅 曹爱莲 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2003年第5期128-129,共2页
关键词 青蒿琥酯 弓形虫病 小鼠 实验 动物模型 磺胺嘧啶
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中国不同品系福寿螺主要形态比较 被引量：11
10
作者 孙志坚 曾清香 +5 位作者 张波 彭东觉 曲振宇 杨潇 詹希美 吴瑜 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期184-189,共6页
目的描述我国广州地区福寿螺的形态差异,期望为广州管圆线虫病防治的研究及福寿螺蔓延控制的研究提供证据。方法对广州地区黑色福寿螺、黄色福寿螺、灰色福寿螺的螺壳、软体部、呼吸管、足、齿舌进行观察,描述三类福寿螺的形态学差异。... 目的描述我国广州地区福寿螺的形态差异,期望为广州管圆线虫病防治的研究及福寿螺蔓延控制的研究提供证据。方法对广州地区黑色福寿螺、黄色福寿螺、灰色福寿螺的螺壳、软体部、呼吸管、足、齿舌进行观察,描述三类福寿螺的形态学差异。结果对三类福寿螺的足及呼吸管进行HE染色分析,显示软体部颜色不同的原因主要是黑色颗粒的有无和沉积数量的多少。对福寿螺齿舌的观察显示,灰色福寿螺第一、第二突起与中央齿宽的比值明显大于黑色福寿螺和黄色福寿螺;在扫描电镜下,三类福寿螺的齿舌未见明显不同。结论我国广州地区的福寿螺存在三种变异。 展开更多
关键词 福寿螺 螺壳 软体部 齿舌
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广州管圆线虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因的克隆表达及免疫保护作用研究 被引量：8
11
作者 潘智华 何蔼 +4 位作者 程梅 李卓雅 于彦杰 贺华良 詹希美 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期534-538,共5页
目的对广州管圆线虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂(cystatin)基因进行克隆、原核表达,并对表达产物的免疫保护作用作出初步鉴定。方法将广州管圆线虫cystatin基因克隆入载体pGEX-4T-1中,转化大肠杆菌BL21进行诱导表达。用纯化融合蛋白隔周免疫小... 目的对广州管圆线虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂(cystatin)基因进行克隆、原核表达,并对表达产物的免疫保护作用作出初步鉴定。方法将广州管圆线虫cystatin基因克隆入载体pGEX-4T-1中,转化大肠杆菌BL21进行诱导表达。用纯化融合蛋白隔周免疫小鼠1次,共3次,设GST免疫及未免疫对照组,末次免疫后1w用广州管圆线虫Ⅲ期幼虫攻击感染,3w后剖杀小鼠,计算减虫率及保护率,并测定小鼠特异性IgG抗体水平变化。结果成功构建了pGEX-4T-1/cystatin重组表达质粒,并在大肠杆菌中得以高效可溶性表达,融合蛋白免疫小鼠后诱导产生了58.1%的减虫率及20%的保护率,与对照组相比减虫效果显著(P<0.01)。结论广州管圆线虫cystatin基因能在大肠杆菌中高效表达并可诱导小鼠产生一定水平的保护性免疫力。 展开更多
关键词 广州管圆线虫 半胱氨酸蛋白酶抑制剂 分子克隆 免疫保护
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弓形虫MIC 6羧基端蛋白片段的表达及其多克隆抗体的制备 被引量：7
12
作者 郑斌 何蔼 +4 位作者 李卓雅 郑小英 张瑞琳 杨潇 詹希美 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期870-874,共5页
目的克隆表达刚地弓形虫微线体蛋白6羧基端蛋白片段(Tg MIC6C),制备多克隆抗体。方法PCR扩增目的基因片段,克隆到pGEX-4T-1载体上,构建MIC6C/pGEX-4T-1原核表达系统;IPTG诱导表达GST-MIC6C融合蛋白,亲和层析融合蛋白;用纯化的融合蛋白... 目的克隆表达刚地弓形虫微线体蛋白6羧基端蛋白片段(Tg MIC6C),制备多克隆抗体。方法PCR扩增目的基因片段,克隆到pGEX-4T-1载体上,构建MIC6C/pGEX-4T-1原核表达系统;IPTG诱导表达GST-MIC6C融合蛋白,亲和层析融合蛋白;用纯化的融合蛋白混合免疫佐剂免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,纯化并分析抗体的特异性。结果构建了MIC6C/pGEX-4T-1原核表达系统并获得纯化的GST-MIC6C融合蛋白;获得了抗目的蛋白的多克隆抗体,抗体能特异地识别目的蛋白,抗体效价为1∶8 000。结论在体外获得了纯化的GST-MIC6C融合蛋白及其多克隆抗体,为后续GSTpull-down筛选与MIC6相互作用的蛋白奠定了基础。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 微线体蛋白6 蛋白表达 多克隆抗体
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GST沉降技术验证弓形虫醛缩酶与肌动蛋白的相互作用 被引量：6
13
作者 郑斌 尹志奎 +2 位作者 何蔼 李卓雅 詹希美 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期363-367,共5页
目的通过GST沉降技术(GST pull-down)验证刚地弓形虫醛缩酶(aldolase)与肌动蛋白(actin)的相互作用。方法 PCR扩增弓形虫cDNA中aldolase和actin基因,分别亚克隆至原核表达质粒pGEX-4T-1和pET30a,转化至大肠埃希菌BL21(DE3),1 mmol/L异丙... 目的通过GST沉降技术(GST pull-down)验证刚地弓形虫醛缩酶(aldolase)与肌动蛋白(actin)的相互作用。方法 PCR扩增弓形虫cDNA中aldolase和actin基因,分别亚克隆至原核表达质粒pGEX-4T-1和pET30a,转化至大肠埃希菌BL21(DE3),1 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,亲和层析法纯化表达产物。采用腹部皮内多点注射免疫SD大鼠15只,首次免疫Actin-His6蛋白量为200μg/只,第2次起免疫蛋白量为100μg/只,共免疫4次,每次间隔7 d,末次免疫后5 d收集心脏血,制备Actin-His6抗血清。以纯化的GST-Aldolase蛋白作为探针蛋白与Actin-His6蛋白液进行GST沉降实验,实验产物进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blotting)分析。结果获得了弓形虫aldolase和actin基因序列,构建了相应的原核表达载体。表达并纯化了GST-Aldolase和Actin-His6蛋白。Actin-His6蛋白免疫SD大鼠后获得其抗血清,经抗体亲和纯化柱纯化,获得Actin-His6多克隆抗体。SDS-PAGE和Western blotting结果显示,GST沉降实验产物中的蛋白条带可被Aldolase-His6多克隆抗体和Actin-His6多克隆抗体识别。结论弓形虫醛缩酶与肌动蛋白存在相互作用。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 醛缩酶 肌动蛋白 GST沉降技术 蛋白相互作用
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弓形虫MIC6羧基端相互作用蛋白的筛选 被引量：9
14
作者 郑斌 尹志奎 +1 位作者 何蔼 詹希美 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期970-974,共5页
目的筛选与弓形虫微线体蛋白6羧基端(MIC6C)相互作用的蛋白。方法以GST-MIC6C蛋白作为探针蛋白,利用GST pull-down技术,从弓形虫裂解液中筛选与其相互作用的蛋白,SDS-PAGE分析实验产物;将目标蛋白条带转印至PVDF膜,测蛋白序列,BLAST2在... 目的筛选与弓形虫微线体蛋白6羧基端(MIC6C)相互作用的蛋白。方法以GST-MIC6C蛋白作为探针蛋白,利用GST pull-down技术,从弓形虫裂解液中筛选与其相互作用的蛋白,SDS-PAGE分析实验产物;将目标蛋白条带转印至PVDF膜,测蛋白序列,BLAST2在线对比搜索相似蛋白序列,初步确定目标蛋白。制备目标蛋白的抗体,Western blot分析GST pull-down实验产物。结果 GST pull-down实验筛选到的目标蛋白的序列与弓形虫醛缩酶的序列一致;制备了醛缩酶的多克隆抗体,目标蛋白条带能被该抗体特异地识别。结论采用GST pull-down技术,初步筛选出与弓形虫MIC6C相互作用的蛋白为醛缩酶。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 微线体蛋白6羧基端 GSTpull-down 醛缩酶
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实验室条件下广州管圆线虫生活史的建立 被引量：7
15
作者 顾金保 刘敏 +4 位作者 李华 罗宇利 李晓旭 陈晓光 詹希美 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期551-554,共4页
目的人工建立一套规范的实验室条件下的广州管圆线虫生活史过程,探索广州管圆线虫人工繁殖的技术和方法,为深入研究广州管圆线虫病,提供充足、有效的试验材料。方法从广州管圆线虫疫区采集广州管圆线虫中间宿主褐云玛瑙螺,解剖分离三期... 目的人工建立一套规范的实验室条件下的广州管圆线虫生活史过程,探索广州管圆线虫人工繁殖的技术和方法,为深入研究广州管圆线虫病,提供充足、有效的试验材料。方法从广州管圆线虫疫区采集广州管圆线虫中间宿主褐云玛瑙螺,解剖分离三期幼虫,经口感染SD大鼠。6周后采集镜检鼠粪,贝尔曼漏斗法分离粪便内一期幼虫感染实验室养殖的二代褐云玛瑙螺白化种白玉蜗牛25只,3周后解剖螺镜检三期幼虫并计数。将阳性螺直接喂食饥饿SD大鼠10只,感染2周后检测血清,6周后镜检鼠粪,并分别于3、5、8周时解剖大鼠观察虫体。结果感染3周后解剖白玉蜗牛镜检可见三期幼虫,大鼠感染2周后检测血清特异性抗体阳性,6周后镜检鼠粪可见一期幼虫,3周后脑部解剖可见四期幼虫,5周、8周后心肺部解剖可见成虫与虫卵。结论利用SD大鼠与白玉蜗牛为宿主在实验室条件下成功建立广州管圆线虫生活史。 展开更多
关键词 广州管圆线虫 生活史 实验室 白玉蜗牛
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中山市健康成人外周血EB病毒抗体谱的调查研究 被引量：9
16
作者 易冰 余元龙 +5 位作者 季明芳 程伟民 顾耀亮 罗秋育 詹希美 宗永生 《热带医学杂志》 CAS 2007年第8期729-731,721,共4页
目的探讨来自不同地域的人群感染EB病毒的血清学抗体谱是否存在差异。方法从鼻咽癌高发区中山市的健康成人中收集348例中山籍贯原住居民的血清和81例外省籍贯居民的血清,用ELISA法检测血清中的EBNA1-IgA、EBNA1-IgG、VCA-p18-IgA、VCA-p... 目的探讨来自不同地域的人群感染EB病毒的血清学抗体谱是否存在差异。方法从鼻咽癌高发区中山市的健康成人中收集348例中山籍贯原住居民的血清和81例外省籍贯居民的血清,用ELISA法检测血清中的EBNA1-IgA、EBNA1-IgG、VCA-p18-IgA、VCA-p18-IgG、Zta-IgA和Zta-IgG等6种抗体水平,比较不同抗体组合时两类人群样本的抗EB病毒抗体谱的差别。结果当三项IgA类抗体皆为阴性时,外省籍贯阴性率远远大于中山籍贯样本(P=0);当EBNA1-IgA单阳时,外省籍贯样本阳性率远远高于中山籍贯样本(P=0.001);当Zta-IgA单项阳性时(P=0.008),或者Zta-IgA和VCA-p18-IgA同时阳性时(P=0.001),中山籍贯样本阳性率明显高于外省籍贯样本;而三项IgG类抗体的任意组合,中山籍贯和外省籍贯都无统计学意义。结论中山籍贯原住居民感染的EB病毒常常处于激活状态;相反,外省籍贯的中山居民感染的EB病毒处于潜伏期时表达的EBNA1水平更高。提示中山籍贯原住居民比外省籍贯居民具有更高的风险罹患鼻咽癌。 展开更多
关键词 EB病毒感染 EB病毒抗体谱 鼻咽癌高发区 健康成人
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弓形虫不同分离株致密颗粒蛋白基因的序列分析及其在大肠埃希菌中的表达 被引量：3
17
作者 郑斌 郑焕钦 +4 位作者 何蔼 李卓雅 曹爱莲 张瑞琳 詹希美 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期100-105,共6页
目的分析弓形虫不同分离株致密颗粒蛋白7(densegranuleprotein,GRA7)基因的异同及在大肠埃希菌中表达致密颗粒蛋白。方法从弓形虫不同分离株(RH株、ZS2株和GT株)的基因组中特异地扩增出GRA7基因,将目的基因定向克隆至原核表达载体pGEX-4... 目的分析弓形虫不同分离株致密颗粒蛋白7(densegranuleprotein,GRA7)基因的异同及在大肠埃希菌中表达致密颗粒蛋白。方法从弓形虫不同分离株(RH株、ZS2株和GT株)的基因组中特异地扩增出GRA7基因,将目的基因定向克隆至原核表达载体pGEX-4T-1,转化大肠埃希菌JM109并测序。利用互联网上的在线工具CLUSTALW进行序列分析。异丙基-B-D-硫代半乳糖苷(IPTG)体外诱导pGEX-4T-1/GRA7重组质粒菌的表达,对表达的目的蛋白进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),分别以抗抗谷胱甘肽巯基转移酶(GST)抗体、人抗弓形虫阳性血清为一抗进行Westernblotting分析。以纯化的重组蛋白作为包被抗原,ELISA法检测抗弓形虫阴性、阳性血清。结果弓形虫不同分离株GRA7的基因序列相同;pGEX-4T-1/GRA7重组质粒在大肠埃希菌中表达了目的蛋白,Westernblotting分析表明该蛋白为GST融合蛋白,且能被人抗弓形虫阳性血清所识别;ELISA结果表明该蛋白能与人抗弓形虫阳性血清、兔抗弓形虫阳性血清特异结合,而与抗弓形虫阴性血清无反应。结论弓形虫不同分离株GRA7基因具有高度保守性;GRA7基因在大肠埃希菌中以GST融合蛋白的形式得到表达,且该重组蛋白具有一定免疫反应性。 展开更多
关键词 大肠埃希菌 弓形虫 分离株 十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳 蛋白基因 blotting Western GST融合蛋白 分析及 GRA7基因 谷胱甘肽巯基转移酶 ELISA法检测 致密颗粒蛋白 protein 阳性血清 原核表达载体 重组质粒 重组蛋白
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弓形虫致密颗粒蛋白基因的表达及其重组蛋白免疫反应性的评价 被引量：6
18
作者 郑斌 余南 +3 位作者 李卓雅 郑焕钦 何蔼 詹希美 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第2期119-121,114,共4页
目的将克隆入pGEX-4T-1的致密颗粒蛋白基因进行表达并对表达产物的免疫反应性进行评价。方法将重组表达质粒pGEX-4T-1/GRA7转入大肠埃希菌BL21,经IPTG诱导进行SDS变性蛋白质电泳,分别以Anti-GSTAntibody、免抗弓形虫阳性血清和人抗弓形... 目的将克隆入pGEX-4T-1的致密颗粒蛋白基因进行表达并对表达产物的免疫反应性进行评价。方法将重组表达质粒pGEX-4T-1/GRA7转入大肠埃希菌BL21,经IPTG诱导进行SDS变性蛋白质电泳,分别以Anti-GSTAntibody、免抗弓形虫阳性血清和人抗弓形虫阳性血清为一抗进行WesternBlot分析。用GSTrapFFHiTrapaffinitycolumns纯化重组蛋白,以此蛋白作为包被抗原,BLISA法检测抗弓形虫阴性、阳性血清。结果SDS变性蛋白质电泳显示在43KDa～66KDa蛋白条带之间有特异蛋白的表达,蛋白分子量大小与理论值相符。WesternBlot分析表明该重组蛋白为GST融合蛋白,且该蛋白能被人抗弓形虫阳性血清、兔抗弓形虫阳性血清所识别。ELISA结果表明该蛋白能与人抗弓形虫阳性血清、兔抗弓形虫阳性血清特异结合,而与抗弓形虫阴性血清无反应。结论弓形虫致密颗粒蛋白基因在大肠埃希菌中得到表达;该重组蛋白具有良好的免疫反应性。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 致密颗粒蛋白7 基因表达 免疫反应性 酶联免疫吸附试验
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广州管圆线虫γ-丁基甜菜碱羟化酶基因的获得与分析 被引量：6
19
作者 孟锦绣 梁瑜 +5 位作者 何蔼 李卓雅 雷智刚 易冰 张瑞琳 詹希美 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第3期186-189,共4页
目的　对广州管圆线虫成虫cDNA文库的插入片段进行研究。方法　铺平板培养广州管圆线虫成虫cDNA文库 ,从中挑选生长、分离良好的噬菌斑进行PCR扩增 ,根据PCR产物电泳结果挑选较大的cDNA插入片段进行克隆、测序和原核诱导表达 ,对表达产... 目的　对广州管圆线虫成虫cDNA文库的插入片段进行研究。方法　铺平板培养广州管圆线虫成虫cDNA文库 ,从中挑选生长、分离良好的噬菌斑进行PCR扩增 ,根据PCR产物电泳结果挑选较大的cDNA插入片段进行克隆、测序和原核诱导表达 ,对表达产物进行免疫学鉴定 ,用生物信息学方法分析其结构和功能。结果　获得了国内外尚未见报道的广州管圆线虫全长基因 ,该基因长 14 16bp ,编码由 4 2 1个氨基酸组成的γ -丁基甜菜碱羟化酶 (gamma -butyrobetaine ,2 -oxoglu taratedioxygenase ,GAMMA -BBH ,EC 1 14 11 1) ;免疫学鉴定结果显示GAMMA -BBH不能与大鼠的抗血清结合。 结论　首次获得广州管圆线虫成虫GAMMA -BBH表达基因 ,为广州管圆线虫的研究提供实验室依据。 展开更多
关键词 广州管圆线虫 γ-丁基甜菜碱羟化酶 基因 CDNA文库 生物信息学
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广州管圆线虫成虫cDNA文库抗原基因的筛选 被引量：7
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作者 孟锦绣 李卓雅 +5 位作者 詹希美 吴长有 沈浩贤 梁瑜 张瑞琳 何蔼 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第11期934-937,共4页
目的从广州管圆线虫成虫cDNA文库中筛选特异性抗原基因。方法用大鼠感染血清做免疫探针,筛选广州管圆线虫成虫cDNA文库,对筛选得到的阳性克隆作交叉反应试验,PCR扩增外源基因插入片段并测序,用在线生物信息学软件进行同源性比对,推导氨... 目的从广州管圆线虫成虫cDNA文库中筛选特异性抗原基因。方法用大鼠感染血清做免疫探针,筛选广州管圆线虫成虫cDNA文库,对筛选得到的阳性克隆作交叉反应试验,PCR扩增外源基因插入片段并测序,用在线生物信息学软件进行同源性比对,推导氨基酸序列和蛋白质结构及进行功能分析。结果获得15个阳性克隆,分属三种基因,1个属中间纤维(IF)家族基因,3个与旋盘尾丝虫和秀丽杆线虫的真皮抗原同源,11个属主要精原蛋白(MSP)家族基因。其中1种基因表达产物没有发生明显交叉反应。结论从广州管圆线虫成虫cDNA文库中初步筛选出1个潜在特异性抗原基因和1个可能的主要抗原基因。 展开更多
关键词 广州管圆线虫成虫 CDNA文库 抗原基因 筛选
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