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4株禽腺病毒4型的分离及序列分析
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作者 邝瑞欢 陈玫婷 +4 位作者 孟宪波 王刚 徐志宏 谢梓民 董嘉文 《广东畜牧兽医科技》 2024年第4期43-48,共6页
禽腺病毒4型(Fowl adenovirus 4,FAdV-4)是家禽常见的传染病病原之一,可引起鸡心包积液-肝炎综合征,死亡率为20%-80%,给家禽养殖业造成巨大的经济损失。该研究分离鉴定了分别来自广东省和云南省的4株FAdV-4,通过对FAdV-4主要结构蛋白He... 禽腺病毒4型(Fowl adenovirus 4,FAdV-4)是家禽常见的传染病病原之一,可引起鸡心包积液-肝炎综合征,死亡率为20%-80%,给家禽养殖业造成巨大的经济损失。该研究分离鉴定了分别来自广东省和云南省的4株FAdV-4,通过对FAdV-4主要结构蛋白Hexon基因和Fiber-2基因的全基因扩增及序列分析,结果显示,4株FAdV-4分离株(分别命名为JM、QY、FS和YN)Hexon基因和Fiber-2基因的核苷酸序列相似性均为100%。Hexon基因和Fiber-2基因系统进化树显示,本研究分离的4株FAdV-4均位于I群禽腺病毒的C种,属于禽腺病毒4型分支,与我国流行的FAdV-4亲缘关系较近。该研究为探究目前流行的FAdV遗传进化关系提供了参考。 展开更多
关键词 禽腺病毒4型 病毒分离 Hexon基因 Fiber-2基因 序列分析
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广东地区H9N2亚型禽流感病毒HA和NA基因生物学特征分析 被引量:2
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作者 曾庆航 刘杨 +5 位作者 孙敏华 胡鑫宇 谢梓民 张敏霞 袁朝霞 廖明 《广东农业科学》 CAS 2023年第5期103-111,共9页
【目的】监测广东地区H9N2亚型禽流感病毒(Avian Influenza Virus,AIV)的遗传变异和分子进化趋势,为我国H9N2亚型AIV的防控提供参考。【方法】对2022年广东地区3株H9N2亚型AIV的HA和NA基因进行扩增、克隆、测序,使用DNAStar、PhyloSuit... 【目的】监测广东地区H9N2亚型禽流感病毒(Avian Influenza Virus,AIV)的遗传变异和分子进化趋势,为我国H9N2亚型AIV的防控提供参考。【方法】对2022年广东地区3株H9N2亚型AIV的HA和NA基因进行扩增、克隆、测序,使用DNAStar、PhyloSuite软件进行序列拼接和比对,再运用MEGA、Megalign、NetNGlyc 1.0Server等软件,对其核苷酸和氨基酸序列进行遗传进化、核苷酸同源性分析,以及受体结合、蛋白活性、耐药性和糖基化等关键位点分析。【结果】系统发育树和核苷酸同源性分析结果显示,3株分离株的HA和NA基因分别属于h9.4.2.5分支和1分支,与早期毒株的核苷酸同源性分别为81.6%~91.7%和88.2%~91.2%,分别命名为h9.4.2.5c分支和1.2分支;核苷酸和氨基酸序列分析发现,HA裂解位点为PSRSSR↓GLF,受体结合位点产生I155T、H183N、A190T/V、T212I、Q226L、Q227M突变,糖基化位点产生218N非糖基化和新增313N糖基化突变;NA茎部缺失187~195位9个核苷酸(ACAGAGATA),导致缺失63~65位3个氨基酸(TEI);NA红细胞结合位点产生K/E/S368N、D369N突变,与NA蛋白活性,耐药性的相关位点E119、D151、R152、R224、E276、R292、R371均未发生突变。【结论】2022年广东地区分离的3株H9N2亚型AIV已经进化成新的亚群,部分突变可能增强了对哺乳动物的适应性,且其抗原性发生改变,但尚未获得对奥司他韦和扎那米韦等抗流感病毒药物的耐药性。 展开更多
关键词 H9N2 禽流感 HA基因 NA基因 遗传进化 生物学特征
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非洲猪瘟病毒I177L蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备
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作者 曾繁聪 柯骏鸿 +9 位作者 姜含雨 辛宁 罗瑞 谢梓民 杨惠湖 易和友 张桂红 何淑仪 黄淑坚 陈耀 《动物医学进展》 北大核心 2023年第3期8-14,共7页
为了制备抗非洲猪瘟病毒I177L蛋白的多克隆抗体,根据HLJ/2018株的I177L序列,设计引物,扩增带有His标签序列的I177L序列,并将其插入pMAL-c5x原核表达载体中,转化至Rosetta(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导表达和切胶纯化后,用Xa蛋白酶因子... 为了制备抗非洲猪瘟病毒I177L蛋白的多克隆抗体,根据HLJ/2018株的I177L序列,设计引物,扩增带有His标签序列的I177L序列,并将其插入pMAL-c5x原核表达载体中,转化至Rosetta(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导表达和切胶纯化后,用Xa蛋白酶因子去除重组蛋白中的MBP标签。将处理后的I177L蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体。结果显示,在37℃、0.6 mmol/L IPTG条件下,诱导5 h后,重组MBP-I177L蛋白表达量最高,蛋白分子质量大小约为67 ku,与预期大小相符;重组蛋白以可溶性表达为主;多克隆抗体经Western blot、间接ELISA及IFA试验结果显示,抗体效价为1∶128000,并且该抗体能特异性识别I177L蛋白。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 I177L蛋白 原核表达 多克隆抗体
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禽腺病毒血清2型分离鉴定及感染SPF鸡发病模型建立
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作者 胡鑫宇 孙敏华 +3 位作者 曾庆航 谢梓民 袁朝霞 廖明 《广东农业科学》 CAS 2023年第7期146-155,F0002,共11页
【目的】建立禽腺病毒血清2型(FAdV-2)的发病模型,为评价FAdV-2的免疫原性和疫苗有效性提供参考。【方法】对疑似禽腺病毒感染的样品进行分离鉴定,对分离株Fiber基因和Hexon基因序列进行遗传演化分析,使用DNAStar和MEGA7.0软件对分离株... 【目的】建立禽腺病毒血清2型(FAdV-2)的发病模型,为评价FAdV-2的免疫原性和疫苗有效性提供参考。【方法】对疑似禽腺病毒感染的样品进行分离鉴定,对分离株Fiber基因和Hexon基因序列进行遗传演化分析,使用DNAStar和MEGA7.0软件对分离株和其他FAdV代表株进行核苷酸和氨基酸同源性比较。在确定分离到的病毒为FAdV-2后,通过动物实验分析分离株在不同感染途径和不同感染剂量下对6周龄SPF鸡的致病性,筛选出建立FAdV-2血清型发病模型的最佳感染方式和最佳感染剂量。【结果】从发病鸡组织样品中成功分离得到1株FAdV-2血清型毒株,命名为KM株。遗传演化分析表明,KM株和GX01株同属于禽腺病毒Ⅰ群D种中的FAdV-2血清型;同源性分析结果显示,KM株和GX01株的Fiber基因和Hexon基因核苷酸序列同源性分别为98.9%和99.3%,推导出氨基酸同源性分别为98.9%和98.8%。KM株静脉注射感染途径的致病性高于肌肉注射,试验鸡出现明显的心包积液-肝炎综合征;KM株发病模型的感染途径为静脉注射,感染剂量为108.0 TCID50,感染后鸡群死亡率为50%,剖检病死鸡可见明显的病理变化,鸡群感染后1 d泄殖腔排毒阳性。【结论】首次验证了FAdV-2能引发心包积液-肝炎综合征,建立了FAdV-2感染SPF鸡的发病模型,可为药物研发和疫苗评价提供一定参考,将有效预防和减少FAdV-2传播。 展开更多
关键词 禽腺病毒 动物模型 分离鉴定 禽腺病毒血清2型(FAd V-2) 致病性 心包积液-肝炎综合征
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幼鸽疾病综合征病因分析及诊断研究进展
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作者 刘梦凡 柯骏鸿 +5 位作者 姜含雨 杨惠湖 谢梓民 罗瑞 黄淑坚 梅堃 《广东畜牧兽医科技》 2023年第5期69-74,共6页
近年来,幼鸽疾病综合征(Young pigeon disease syndrome,YPDS)在全球广泛传播,给养鸽业造成巨大经济损失,目前对YPDS的研究较少,无诊断标准,且无特效药物和疫苗,对该病的防控带来巨大挑战。为更好地了解该综合征,该文从YPDS病因、流行... 近年来,幼鸽疾病综合征(Young pigeon disease syndrome,YPDS)在全球广泛传播,给养鸽业造成巨大经济损失,目前对YPDS的研究较少,无诊断标准,且无特效药物和疫苗,对该病的防控带来巨大挑战。为更好地了解该综合征,该文从YPDS病因、流行情况、诊断方法及防控措施等方面进行系统阐述,以期为YPDS的防治提供参考。参考国内外近三十年相关文献,对可能导致YPDS的病原进行系统阐述,并对每种诊断方法及防治措施进行总结。YPDS主要是由鸽圆环病毒(Pigeon circovirus,PiCV)、鸽疱疹病毒(Pigeon herpesvirus,PiHV)、鸽腺病毒(Pigeon adenovirus,PiADV)共同引发的一种多因素疾病,可导致7-15周龄幼鸽死亡。主要临床症状表现为精神沉郁、羽毛凌乱、厌食、呕吐、腹泻等。该综合征目前防控措施主要为加强饲养管理。该文总结了有关YPDS病因、诊断方法及防控措施,以期为生产实践提供参考。 展开更多
关键词 幼鸽疾病综合征 病因 诊断
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禽呼肠孤病毒病疫苗的研究进展 被引量:5
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作者 谢梓民 郭锦玥 +1 位作者 黄淑坚 温峰 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第3期30-34,共5页
禽呼肠孤病毒(Avian reovirus, ARV)是目前严重危害养禽业发展的一种病原微生物,其引起的禽呼肠孤病毒病在全球各地的家禽养殖场广泛流行。近年来,ARV在我国养禽业的感染率呈逐渐上升趋势,给我国养禽业造成了重大的经济损失。安全、高... 禽呼肠孤病毒(Avian reovirus, ARV)是目前严重危害养禽业发展的一种病原微生物,其引起的禽呼肠孤病毒病在全球各地的家禽养殖场广泛流行。近年来,ARV在我国养禽业的感染率呈逐渐上升趋势,给我国养禽业造成了重大的经济损失。安全、高效的疫苗是有效预防禽呼肠孤病毒病的重要手段。文章综述了国内外禽呼肠孤病毒病弱毒疫苗、灭活疫苗和基因工程疫苗的研究进展,以期为研发有效预防禽呼肠孤病毒病疫苗提供参考。 展开更多
关键词 禽呼肠孤病毒 弱毒疫苗 灭活疫苗 基因工程疫苗 疾病防控
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Ⅰ亚群D种禽腺病毒的研究进展 被引量:1
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作者 谢梓民 张俊勤 +2 位作者 孙敏华 黄淑坚 廖明 《广东畜牧兽医科技》 2021年第6期1-6,共6页
自2015年以来,Ⅰ亚群D种禽腺病毒在我国开始流行,该病毒不仅会引起宿主严重的包涵体肝炎,还能抑制宿主的免疫系统,病死率为10%~30%,给我国的养禽业造成了一定的经济损失。本文针对近年来国内外D种禽腺病毒的研究报道,对该种病毒的病原... 自2015年以来,Ⅰ亚群D种禽腺病毒在我国开始流行,该病毒不仅会引起宿主严重的包涵体肝炎,还能抑制宿主的免疫系统,病死率为10%~30%,给我国的养禽业造成了一定的经济损失。本文针对近年来国内外D种禽腺病毒的研究报道,对该种病毒的病原学、流行病学、致病性研究、检测方法以及疫苗等方面进行综述,比较全面地阐述了该种病毒的研究进展,以期为我国Ⅰ亚群D种禽腺病毒病的预防和治疗提供理论依据。 展开更多
关键词 Ⅰ亚群D种禽腺病毒 病原学 流行病学 致病性 检测方法 疫苗
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Ⅰ群禽腺病毒多种血清型的Hexon、Fiber基因遗传进化分析 被引量:3
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作者 姜含雨 柯骏鸿 +7 位作者 谢梓民 杨惠湖 傅禹铭 曾繁聪 梁昭平 方文棋 张雪莲 黄淑坚 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第17期92-98,共7页
为了进一步丰富和完善广东地区禽腺病毒(Fowl adenovirus,FAdV)的分子流行病学,试验采用PCR及基因克隆测序技术对2014—2020年期间瑞普(天津)生物药业有限公司分离保存的9株Ⅰ群FAdV分离株进行分子生物学鉴定,并通过MEGA 5.1软件对各分... 为了进一步丰富和完善广东地区禽腺病毒(Fowl adenovirus,FAdV)的分子流行病学,试验采用PCR及基因克隆测序技术对2014—2020年期间瑞普(天津)生物药业有限公司分离保存的9株Ⅰ群FAdV分离株进行分子生物学鉴定,并通过MEGA 5.1软件对各分离株的Hexon与Fiber进行遗传演化分析。结果表明:9株Ⅰ群FAdV分离株中有5株4型分离株,分别为GDDL-4、GDHQY-4、GDLHX-4、GDZMY-4、GDZYQ-4;2株8型分离株,分别为GDB3-8a和GDT08-8b;2株11型分离株,分别为GDWYT-11和GDZWJ-11。分离株GDDL-4、GDHQY-4、GDLHX-4、GDZMY-4、GDZYQ-4与FAdV-4型国内参考株GDMZ(GenBank登录号MG856954.1)的同源性为99.9%~100%;分离株GDB3-8a、GDT08-8b与FAdV-8a英国参考株764(GenBank登录号KT862811.1)的同源性为97.1%~97.7%;分离株GDB3-8a、GDT08-8b与FAdV-8b日本参考株TR59(GenBank登录号KT862810.1)的同源性为97.0%~97.5%;分离株GDWYT-11、GDZWJ-11与FAdV-11型英国参考株380(GenBank登录号为KT862812.1)的同源性为97.4%~97.9%。各分离株均包含多个氨基酸位点突变。分离株GDDL-4、GDHQY-4、GDLHX-4、GDZMY-4、GDZYQ-4的Hexon、Fiber与国内部分参考株同源性较高、亲缘性更近;分离株GDB3-8a、GDT08-8b、GDWYT-11、GDZWJ-11的Hexon、Fiber与国外部分参考株同源性较高,遗传距离更近。说明分离株GDDL-4、GDHQY-4、GDLHX-4、GDZMY-4、GDZYQ-4由国内毒株演变而来,分离株GDB3-8a、GDT08-8b、GDWYT-11、GDZWJ-11则由国外毒株演变而来。 展开更多
关键词 禽腺病毒 基因分型 氨基酸 同源性分析 遗传进化
原文传递
4株Ⅰ亚群禽腺病毒分离株对SPF雏鸡的致病性研究
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作者 谢梓民 曾繁聪 +7 位作者 傅禹铭 姜含雨 杨惠湖 柯骏鸿 罗瑞 梁昭平 张雪莲 黄淑坚 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第3期1032-1040,共9页
【目的】探究Ⅰ亚群禽腺病毒(Fowl adenovirus,FAdV)分离株GDDL-4(FAdV-4)、GDB3-8a(FAdV-8a)、GDT08-8b(FAdV-8b)、GDWYT-11(FAdV-11)对SPF雏鸡的致病性,进而制定更加有效的防控措施。【方法】设立4个攻毒组(GDDL-4、GDB3-8a、GDT08-8b... 【目的】探究Ⅰ亚群禽腺病毒(Fowl adenovirus,FAdV)分离株GDDL-4(FAdV-4)、GDB3-8a(FAdV-8a)、GDT08-8b(FAdV-8b)、GDWYT-11(FAdV-11)对SPF雏鸡的致病性,进而制定更加有效的防控措施。【方法】设立4个攻毒组(GDDL-4、GDB3-8a、GDT08-8b、GDWYT-11)及对照组,攻毒组选择腿部肌内注射接种0.2 mL 105 TCID50病毒液,对照组接种等体积PBS。接种后观察SPF雏鸡的临床症状、剖检病变及组织病理学变化,同时检测其排毒量和病毒载量。【结果】所有攻毒组鸡均表现为精神沉郁、消瘦、扎堆等,病理剖检以严重心包积液-包涵体肝炎综合征病变为主,其中GDDL-4组症状最为严重,死亡率最高达85%,总体死亡率在0~85%之间。排毒分析结果发现,GDDL-4和GDB3-8a组出现高滴度排毒(≥104拷贝/μL),GDT08-8b和GDWYT-11组仅能检测到低滴度(≤103拷贝/μL)排毒。器官指数表明,除GDT08-8b组与对照组无明显差异外,其余攻毒组均能造成器官不同程度的肿大或萎缩。病理组织学切片显示,肝脏、肾脏、法氏囊的正常结构被破坏,可见肝细胞有大量淋巴细胞浸润、肾间质充血出血、法氏囊淋巴细胞坏死等。病毒载量分析结果显示,GDDL-4与GDWYT-11组在肝脏组织中病毒滴度最高,而GDB3-8a与GDT08-8b组在十二指肠中病毒滴度最高。【结论】Ⅰ亚群FAdV的死亡率高,4株分离株均可导致雏鸡肝脏出现包涵体肝炎的病理变化,均可反复排毒,且分离株对不同的组织器官有不同的亲嗜性,在肝脏与十二指肠等组织中的病毒载量最高。 展开更多
关键词 禽腺病毒(FAdV) SPF雏鸡 剖检病变 组织病理学 排毒量 病毒载量
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新型鸭呼肠孤病毒DH13株σC蛋白的原核表达及其多克隆抗体制备 被引量:4
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作者 李文俊 黄惠兰 +4 位作者 杨惠湖 谢梓民 崔惠仪 黄淑坚 张雪莲 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第9期2953-2959,共7页
试验旨在建立新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)σC蛋白的原核表达系统,制备σC蛋白的多克隆抗体,并评估所制备抗体的效价。通过RT-PCR方法扩增获得NDRV DH13株σC基因,连接至pET-30a(+)及pET-32a(+)载体中,构建原核表达质粒,并将其转化大肠杆菌BL... 试验旨在建立新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)σC蛋白的原核表达系统,制备σC蛋白的多克隆抗体,并评估所制备抗体的效价。通过RT-PCR方法扩增获得NDRV DH13株σC基因,连接至pET-30a(+)及pET-32a(+)载体中,构建原核表达质粒,并将其转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导获得两种σC重组蛋白,经SDS-PAGE分析蛋白表达形式。利用切胶方法纯化不含His标签σC重组蛋白,利用Ni-NTA柱纯化含His标签σC重组蛋白。以纯化的无His标签蛋白为免疫原免疫兔子获得兔抗σC多克隆抗体,Western blotting分别使用抗His标签的单克隆抗体和NDRV-σC蛋白阳性血清两种一抗评估抗体的特异性,间接ELISA(iELISA)检测抗体滴度。SDS-PAGE结果显示获得34和37 ku两种重组蛋白,且均得到高效表达。Western blotting结果显示制备的多克隆抗体具有良好的特异性,所制备的抗体与σC蛋白亲和力较好。间接ELISA检测结果显示其效价达1∶25600。本试验成功构建σC蛋白的原核表达系统,制备的σC蛋白多克隆抗体为深入研究σC蛋白的生物学功能及开展NDRV基因工程疫苗的研发奠定了基础。 展开更多
关键词 新型鸭呼肠孤病毒 σC蛋白 原核表达 多克隆抗体
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禽呼肠孤病毒检测方法研究进展 被引量:3
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作者 赵梓桥 柯骏鸿 +5 位作者 姜含雨 杨惠湖 谢梓民 罗瑞 梅堃 黄淑坚 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2022年第11期148-153,共6页
禽呼肠孤病毒(avian reovirus, ARV)主要引起家禽病毒性关节炎和免疫抑制,进而导致继发感染。近年来,随着ARV及其变异毒株的出现,加之传统疫苗对变异株的保护力不足,且没有特效药物治疗,使我国禽养殖业面临ARV感染的巨大风险。目前禽养... 禽呼肠孤病毒(avian reovirus, ARV)主要引起家禽病毒性关节炎和免疫抑制,进而导致继发感染。近年来,随着ARV及其变异毒株的出现,加之传统疫苗对变异株的保护力不足,且没有特效药物治疗,使我国禽养殖业面临ARV感染的巨大风险。目前禽养殖场主要通过严格的生产管理结合周期性检测对禽呼肠孤病毒病进行防控。因此,本文着重介绍并分析了国内外已报道的ARV检测方法,为ARV的监测及新型诊断技术的研发提供依据,同时也为疫病的防控提供参考。 展开更多
关键词 禽呼肠孤病毒 病毒性关节炎 检测方法 研究进展
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鸭干扰素刺激基因的克隆、表达及其多克隆抗体的制备 被引量:1
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作者 黄惠兰 李文俊 +4 位作者 谢梓民 杨惠湖 崔惠仪 黄淑坚 张雪莲 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第11期3713-3721,共9页
本研究旨在克隆、表达鸭干扰素刺激基因(interferon-induced proteins with tetratricopeptide repeats 5,IFIT5)并制备其多克隆抗体。根据GenBank公布的绿头鸭IFIT5(登录号:KF956064)序列设计特异性引物,PCR扩增获得鸭IFIT5基因,并构... 本研究旨在克隆、表达鸭干扰素刺激基因(interferon-induced proteins with tetratricopeptide repeats 5,IFIT5)并制备其多克隆抗体。根据GenBank公布的绿头鸭IFIT5(登录号:KF956064)序列设计特异性引物,PCR扩增获得鸭IFIT5基因,并构建原核表达重组质粒pET-30a-IFIT5和pET-32a-IFIT5及真核表达重组质粒pcDNA3.1-IFIT5。原核表达获得鸭IFIT5重组蛋白后,进行SDS-PAGE分析,并利用镍柱亲和层析方法对重组蛋白进行纯化。以纯化的鸭IFIT5重组蛋白为免疫原制备兔抗鸭IFIT5多克隆抗体。利用间接ELISA测定多克隆抗体效价、用Western blotting鉴定其特异性;将真核表达重组质粒pcDNA3.1-IFIT5转化BHK21细胞,通过间接免疫荧光法鉴定多克隆抗体的反应性。结果表明:目的蛋白主要以包涵体的形式存在;制备的兔抗鸭IFIT5多克隆抗体效价达1∶49600,可特异性识别鸭IFIT5重组蛋白,间接免疫荧光试验则表明纯化的多克隆抗体可特异性识别BHK21瞬时真核表达的鸭IFIT5蛋白。综上,成功克隆了鸭干扰素刺激基因IFIT5,制备的兔抗鸭IFIT5多克隆抗体可用于鸭IFIT5蛋白的检测,可为鸭IFIT5蛋白的后续研究提供材料支撑。 展开更多
关键词 干扰素刺激基因(IFIT5) 基因克隆 蛋白表达及检测
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