基于CRISPR/Cas9基因编辑技术构建PD-L1-GFP报告基因HT29细胞株

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作者 谢钰珍 覃鸿妮 +2 位作者 吴凡 孙曙光 孟丽君 《山东理工大学学报（自然科学版）》 2024年第2期67-72,共6页

利用CRISPR/Cas9基因编辑技术和同源重组技术在PD-L1基因的特定位置敲入绿色荧光蛋白(GFP)序列,构建含有PD-L1-GFP报告基因的结肠癌细胞(HT29)稳定细胞株。根据CRISPR-Cas9靶点设计原则,针对PD-L1基因终止密码子设计两对sgRNA,退火形成... 利用CRISPR/Cas9基因编辑技术和同源重组技术在PD-L1基因的特定位置敲入绿色荧光蛋白(GFP)序列,构建含有PD-L1-GFP报告基因的结肠癌细胞(HT29)稳定细胞株。根据CRISPR-Cas9靶点设计原则,针对PD-L1基因终止密码子设计两对sgRNA,退火形成双链后连接至Lenti-V2空载质粒中,转化培养后提取质粒并测序验证。对于正确的Lenti-V2-sgRNA重组质粒,T7E1酶切验证其基因编辑效率。根据靶点位置设计左同源臂+GFP+右同源臂序列合成Donor片段,双酶切后连接至pUC19,重组载体转化扩增后同样进行质粒提取和测序验证。将验证成功的Lenti-V2-sgRNA和pUC19-donor-GFP共转染HT29细胞,荧光显微镜检测GFP表达情况,菌落PCR及基因测序验证GFP报告基因的靶向插入效果。经酶切和测序鉴定,靶向编辑PD-L1的Cas9载体Lenti-V2-gRNA和含GFP基因的Donor质粒pUC19-donor-GFP构建成功。两个重组质粒转染HT29细胞后,显微观察、多克隆验证、单克隆筛选及鉴定结果显示,GFP成功转入HT29细胞并进行了表达,经有限稀释法筛选出的单克隆细胞荧光均一,且与对照组相比,阳性细胞克隆的基因组PCR均检测到特异条带,表明在PD-L1终止密码子前成功插入了GFP片段,细胞株构建成功。通过基因编辑技术成功构建了稳定表达PD-L1-GFP报告基因的HT29结肠癌细胞株,建立了一个可以直观在细胞上观察PD-L1是否表达以及表达的强弱程度的系统,为后期体内外筛选调控PD-L1的上游新靶点及药物奠定了基础。 展开更多

关键词 PD-L1 CRISPR/Cas9 报告基因 GFP

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CA-NHEJ系统对大肠杆菌链霉素耐药基因rpsL的编辑效率及其耐药性研究

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作者 谢钰珍 覃鸿妮 +4 位作者 吴凡 胡杨晓然 薛高旭 赵雪 张勇 《江苏农业科学》 北大核心 2023年第23期17-21,共5页

以控制质粒拷贝数的pcnB基因与链霉素耐药性rpsL基因为靶标基因,研究CA-NHEJ系统对大肠杆菌的基因编辑效率,及rpsL相关基因与链霉素耐药性的关系。通过CA-NHEJ系统成功实现了对大肠杆菌MG1655的pcnB和rpsL基因编辑,其中,pcnB基因编辑效... 以控制质粒拷贝数的pcnB基因与链霉素耐药性rpsL基因为靶标基因,研究CA-NHEJ系统对大肠杆菌的基因编辑效率,及rpsL相关基因与链霉素耐药性的关系。通过CA-NHEJ系统成功实现了对大肠杆菌MG1655的pcnB和rpsL基因编辑,其中,pcnB基因编辑效率达100%,rpsL基因仅有1个克隆缺失第22~24位3个氨基酸,其他4个克隆未编辑成功但具有链霉素抗性;进一步利用CA-HR系统敲除大肠杆菌MG1655的rpsL基因CCTGCGCTG序列(第22~24位氨基酸),编辑效率达100%,验证了CA-HR的高效性,抗性鉴定表明,该序列是影响链霉素抗性的关键序列,是一个未曾报道的新突变;对于未编辑成功但具有链霉素抗性的4个克隆进行基因测序及比对,找出了rhsC和gadB等6个可能与链霉素抗性相关的其他基因。 展开更多

关键词 CA-NHEJ系统 CA-HR系统 RPSL基因 耐药性

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校企协同背景下高职院校基因工程技术课程改革探索与实践

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作者 吴凡 覃鸿妮 +1 位作者 谢钰珍 张勇 《科教导刊》 2023年第3期124-126,共3页

文章基于校企协同深入合作之大趋势,围绕职业教育与产业、行业对接的需求,以已有的国家级工程协同创新中心和区域生物医药公共实训基地为支撑,联合省级产教融合型试点企业共建生物医药产业学院,共同开展“基因工程技术”课程改革,通过... 文章基于校企协同深入合作之大趋势,围绕职业教育与产业、行业对接的需求,以已有的国家级工程协同创新中心和区域生物医药公共实训基地为支撑,联合省级产教融合型试点企业共建生物医药产业学院,共同开展“基因工程技术”课程改革,通过介绍在课程设计、教学实施、学业评价等方面的具体做法,以期为地方院校相课程改革提供参考,切实提高区域人才培养质量。 展开更多

关键词 课程改革 校企协同 课堂生态 基因工程

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牛胰腺DNaseⅠ基因的合成、表达及功能验证 被引量：1

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作者 覃鸿妮 谢钰珍 +3 位作者 薛高旭 梅啸 沈为琴 蔡一林 《西南大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期24-31,共8页

从NCBI下载牛胰腺DNaseⅠ蛋白序列,利用密码子优化软件(Codon Optimization)进行序列优化,设计并合成24条首尾重叠的引物合成786bp的DNaseⅠ基因,构建重组载体pET30a-DNaseⅠ,转入BL21(DE3),ArcticExpress(DE3),BL21(DE3)pLysS 3种感受... 从NCBI下载牛胰腺DNaseⅠ蛋白序列,利用密码子优化软件(Codon Optimization)进行序列优化,设计并合成24条首尾重叠的引物合成786bp的DNaseⅠ基因,构建重组载体pET30a-DNaseⅠ,转入BL21(DE3),ArcticExpress(DE3),BL21(DE3)pLysS 3种感受态中诱导表达后,纯化目的蛋白并验证其活性.结果表明:BL21(DE3),ArcticExpress(DE3)两种感受态菌落生长异常,且未纯化到目的蛋白,BL21(DE3)pLysS感受态菌落生长正常,但未经诱导和葡萄糖诱导表达的菌液中也未纯化到目的蛋白,IPTG诱导扩大培养的菌液中纯化到0.15 mg/mL的目的蛋白.经验证,酶原液能彻底消化λ-DNA和不同大小的质粒DNA,酶稀释液消化产物电泳检测显示条带拖尾弥散,表明酶稀释液只能消化部分λ-DNA. 展开更多

关键词 DNaseⅠ 基因合成 基因表达 基因功能验证

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利用CRISPR/Cpf1系统构建人ABCG1和ABCG4基因敲除的293T细胞株 被引量：1

5

作者 覃鸿妮 谢钰珍 +1 位作者 马傲 蔡一林 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2019年第4期741-750,共10页

【目的】基于CRISPR/Cpf1(AsCpf1/LbCpf1)技术构建人ABCG1和ABCG4基因敲除的人胚肾细胞(HEK293T)稳定细胞株,旨在研究ABCG1和ABCG4基因的生物学功能。【方法】针对ABCG1和ABCG4基因作用的功能域,设计2对靶向ABCG1和ABCG4基因前7个外显子... 【目的】基于CRISPR/Cpf1(AsCpf1/LbCpf1)技术构建人ABCG1和ABCG4基因敲除的人胚肾细胞(HEK293T)稳定细胞株,旨在研究ABCG1和ABCG4基因的生物学功能。【方法】针对ABCG1和ABCG4基因作用的功能域,设计2对靶向ABCG1和ABCG4基因前7个外显子的sgRNA序列,分别克隆到AsCpf1和LbCpf1的载体上。将测序验证正确的重组质粒转染到HEK293T细胞中,T7E1酶切和测序验证敲除效率,对敲除成功的293T细胞利用有限稀释法筛选获得基因双突变的敲除细胞株,对其基因组进行PCR扩增并双向测序验证编辑结果,选择有正确编辑结果的PCR产物进行TA克隆,进而测序验证单克隆细胞株编辑效率。【结果】结果获得敲除ABCG1和ABCG4基因的稳定细胞株各1株(AsCpf1-ABCG1-sgRNA 1-1和LbCpf1-ABCG4-sgRNA 2-1)。【结论】通过利用新型基因编辑技术CRISPR/Cpf1系统,获得了永久性敲除目的细胞靶基因的细胞株,可为进一步探索和证实ABCG1和ABCG4在细胞中胆固醇代谢和调节作用提供帮助。 展开更多

关键词 CRISPR/Cpf1 ABCG1 ABCG4 基因敲除 稳定细胞株

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慢病毒载体介导稳定表达Cas9基因的293T细胞系构建及其基因编辑效率验证 被引量：1

6

作者 覃鸿妮 谢钰珍 +1 位作者 杨晨晨 张勇 《扬州大学学报（农业与生命科学版）》 CAS 北大核心 2020年第4期29-35,45,共8页

为通过慢病毒感染细胞构建稳定表达CRISPR/Cas9的293T细胞系,实现高效率基因编辑,PCR扩增Cas9基因片段,酶切后克隆到慢病毒载体pLent-EF1a-MF-CMV-GFP-P2A-Puro上,将该质粒与慢病毒包装质粒psPAX2、pMD2.G共感染293FT细胞,48 h后收集病... 为通过慢病毒感染细胞构建稳定表达CRISPR/Cas9的293T细胞系,实现高效率基因编辑,PCR扩增Cas9基因片段,酶切后克隆到慢病毒载体pLent-EF1a-MF-CMV-GFP-P2A-Puro上,将该质粒与慢病毒包装质粒psPAX2、pMD2.G共感染293FT细胞,48 h后收集病毒并浓缩纯化测定其病毒滴度,最后用纯化后的病毒感染293T细胞,通过抗性和荧光标记筛选得到稳定表达Cas9的细胞系,并对单克隆细胞进行DNA、RNA特异性和反转录验证。针对ABCG4基因设计sgRNA并构建重组载体感染单克隆细胞,通过DNA特异性和T7E1酶切验证基因敲除效率。结果表明:成功构建了Cas9-pLent慢病毒载体,用构建成功的慢病毒载体对293FT细胞进行慢病毒包装(三质粒系统)并对包装成功的病毒进行了浓缩与纯化,最后通过病毒感染293T细胞,采用荧光观察的方式测定其病毒滴度均在106 TU·mL-1之上。用纯化后的病毒感染293T细胞并通过加药(Puro)进行抗性筛选,筛选出3株能稳定表达Cas9的293T细胞系,目的基因ABCG4的基因编辑功能验证表明其中1株T7E1酶切掉带明显,sgRNA靶向敲除效率较高,该株命名为Cas9-293T-10A。该研究建立了稳定表达Cas9的293T细胞系,可用于目的基因的高效敲除。 展开更多

关键词 CRISPR/Cas9 慢病毒载体 细胞系 基因编辑

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江苏、山西、湖南三省份汉族人群ALDH2基因多态性分布研究 被引量：3

7

作者 谢钰珍 覃鸿妮 +2 位作者 梅啸 吴凡 张宇 《甘肃科技纵横》 2018年第10期71-73,共3页

为了解ALDH2基因型在江苏省、陕西省和湖南省汉族人群中的分布情况,以647例无血缘关系的健康人群为研究对象,其中江苏386例,山西137例,湖南124例,采集外周静脉血后提取基因组DNA,通过荧光定量PCR检测ALDH2基因型,最后比较三省份基因多... 为了解ALDH2基因型在江苏省、陕西省和湖南省汉族人群中的分布情况,以647例无血缘关系的健康人群为研究对象,其中江苏386例,山西137例,湖南124例,采集外周静脉血后提取基因组DNA,通过荧光定量PCR检测ALDH2基因型,最后比较三省份基因多态性的分布特征。结果表明:GG、GA和AA三种基因型在江苏汉族人群中的频率分别为59%、36%、5%;在山西人群中分别为77%、22%、1%;在湖南人群中分别为63%、30%、7%。两两省份比较后,山西和江苏之间、山西和湖南之间的差异均有统计学意义(P<0.05),而江苏和湖南之间无统计学意义(P>0.05)。结论:三省份样本都有区域代表性,优势基因型均为GG型。山西省GG基因型频率明显高于江苏省和湖南省,山西人对酒精的耐受程度比江苏人和湖南人强。 展开更多

关键词 乙醛脱氢酶2 单核苷酸多态性 基因型频率

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适用于转录组测序的大豆根总RNA的提取方法研究

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作者 谢钰珍 覃鸿妮 +2 位作者 张宇 梅啸 吴凡 《安徽农业科学》 CAS 2017年第36期137-139,共3页

[目的]获得高质量、高产量并能满足转录组测序要求的大豆根总RNA。[方法]比较分析了Trizol法、CTAB-Li Cl法和试剂盒法的提取效果。[结果]3种方法均能从大豆根中提取出总RNA。但与Trizol法、CTAB法相比,试剂盒法提取的大豆根总RNA纯度... [目的]获得高质量、高产量并能满足转录组测序要求的大豆根总RNA。[方法]比较分析了Trizol法、CTAB-Li Cl法和试剂盒法的提取效果。[结果]3种方法均能从大豆根中提取出总RNA。但与Trizol法、CTAB法相比,试剂盒法提取的大豆根总RNA纯度高、完整性好,平均浓度达413.9 ng/μL,A260/A280≈2.14,A260/A230≈2.10,方法可重复性好。[结论]试剂盒法提取的RNA满足转录组测序的质量要求,可进行后续的转录组测序和其他分子生物学相关研究工作。 展开更多

关键词 大豆 根 总RNA 转录组测序 提取方法

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慢病毒载体介导稳定表达Cpf1的细胞系的构建及其基因编辑效率验证

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作者 覃鸿妮 谢钰珍 +3 位作者 陈罡 密苗苗 彭赛男 张勇 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2020年第2期246-251,共6页

【目的】通过慢病毒转染细胞构建稳定表达CRISPR/Cpf1的293 T和HT 1080细胞系,实现高效率基因编辑。【方法】PCR扩增AsCpf1和LbCpf1基因片段,酶切后克隆到慢病毒载体pLent-EF1a-MF-CMV-GFP-P2A-Puro上,将该质粒与慢病毒包装质粒psPAX2、... 【目的】通过慢病毒转染细胞构建稳定表达CRISPR/Cpf1的293 T和HT 1080细胞系,实现高效率基因编辑。【方法】PCR扩增AsCpf1和LbCpf1基因片段,酶切后克隆到慢病毒载体pLent-EF1a-MF-CMV-GFP-P2A-Puro上,将该质粒与慢病毒包装质粒psPAX2、pMD2.G共转染293FT细胞,通过抗性和荧光标记筛选得到稳定表达LbCpf1和AsCpf1的细胞系,并对单克隆细胞进行DNA、RNA特异性和反转录验证。用设计好的针对ABCG1基因的sgRNA转染单克隆细胞,通过DNA特异性和T7E1酶切验证基因敲除效率。【结果】成功构建了Cpf1-pLent慢病毒载体,重组载体对293 FT细胞进行慢病毒包装、浓缩与纯化后,病毒滴度均在10~6 TU/mL之上。用纯化后的病毒感染293 T和HT 1080细胞,筛选出3株能稳定表Cpf1的细胞系,目的ABCG1基因的基因编辑功能验证表明其中2株T7EΙ酶切掉带明显,sgRNA靶向敲除效率较高,命名为AsCpf1-293 T-7D和AsCpf1-HT108002-3B。【结论】建立了稳定表达Cpf1的293T和HT 1080细胞细胞系,可以用于目的基因的高效敲除。 展开更多

关键词 CRISPR/Cpf1 慢病毒载体 细胞系 基因编辑

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苏州育龄女性MTHFR和MTRR基因多态性研究 被引量：1

10

作者 谢钰珍 覃鸿妮 +2 位作者 吴凡 李洁 刘莹莹 《生物化工》 2022年第2期95-98,109,共5页

目的:分析苏州女性叶酸代谢相关基因MTHFR和MTRR的基因多态性分布特征。方法:以1 985例苏州育龄女性为研究对象,采集口腔黏膜上皮细胞,提取其基因组DNA后荧光定量PCR法分析其MTHFR C677T位点、A1298C位点和MTRR A66G位点的基因多态性,... 目的:分析苏州女性叶酸代谢相关基因MTHFR和MTRR的基因多态性分布特征。方法:以1 985例苏州育龄女性为研究对象,采集口腔黏膜上皮细胞,提取其基因组DNA后荧光定量PCR法分析其MTHFR C677T位点、A1298C位点和MTRR A66G位点的基因多态性,并与新疆、长春、郑州、镇江、广州等地区比较。结果:苏州女性的MTHFR C677T TT纯合突变基因型频率为19.0%,低于长春、烟台、郑州、镇江和上海,高于湖北、广州、海南,总体呈北高南低趋势;MTHFR A1298C CC纯合突变基因型频率为2.8%,高于长春、烟台、郑州,低于湖北、广州、海南,总体呈北低南高趋势;MTRR A66G GG纯合突变基因型频率仅与烟台、广州、海南有统计学差异,基因多态性分布的地域差别不明显。结论:苏州女性MTHFR和MTRR基因多态性分布情况具有地区差异性。 展开更多

关键词 亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR) 甲硫氨酸合成酶还原酶(MTRR) 单核苷酸多态性 苏州市

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限制性外切酶Ⅰ(EXO1)的合成、克隆与表达

11

作者 谢钰珍 覃鸿妮 +1 位作者 张勇 赵文玮 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2020年第3期534-539,共6页

【目的】核酸外切酶I(Exonuclease 1,EXO1)是一种多功能的3’→5’外切酶,主要应用于清除DNA或RNA双链分子中存在的单链。目前商品化的EXO1都是在大肠杆菌中诱导表达,表达量不高,且后续纯化步骤复杂。人工合成核酸外切酶I sbcB基因,并... 【目的】核酸外切酶I(Exonuclease 1,EXO1)是一种多功能的3’→5’外切酶,主要应用于清除DNA或RNA双链分子中存在的单链。目前商品化的EXO1都是在大肠杆菌中诱导表达,表达量不高,且后续纯化步骤复杂。人工合成核酸外切酶I sbcB基因,并在大肠杆菌中高效表达及纯化。【方法】采用重叠PCR合成sbcB基因,通过酶切将其克隆至表达载体pET-30a上并转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,并对表达条件进行优化,获得限制性外切酶Ⅰ(EXO1)的大量表达。亲和层析纯化重组蛋白后对酶的活性进行研究。【结果】亲和纯化后获得大量表达蛋白EXO1,大小与预测的54.5 KD相符;以S1核酸外切酶为对照进行的功能验证证实:sbcB基因表达产物EXO1能够消化单链,但不会消化双链,纯化的EXO1具有很好的酶活性。【结论】依据本文方案制备的限制性外切酶Ⅰ(EXO1)产量高、纯度高,适用于实验室测序前PCR产物的处理。 展开更多

关键词 EXO1 sbcB基因 核酸外切酶 基因表达

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关于医院药品核算标准化问题的探讨 被引量：1

12

作者 谢钰珍 赵丽娟 《中国卫生经济》 2006年第7期71-73,共3页

目的：探讨和规范医院药品核算权责发生制的标准及其方法。方法：比较和分析深圳市4家医院2003—2006年分别采用收费处实际收款制和采用处方、医嘱发生制进行药品核算的数据结果。结果：采用处方、医嘱发生制进行药品核算的盘点亏盈率为... 目的：探讨和规范医院药品核算权责发生制的标准及其方法。方法：比较和分析深圳市4家医院2003—2006年分别采用收费处实际收款制和采用处方、医嘱发生制进行药品核算的数据结果。结果：采用处方、医嘱发生制进行药品核算的盘点亏盈率为0．1%～0．9%,与国家制定的标准相符；采用收费处实际收款制进行药品核算的盘点亏盈率为1．0%～16．0%,与国家制定的标准相差较远。2种方法比较也有显著差别。结论：处方、医嘱发生制是实现医院权责发生制的正确方法。 展开更多

关键词 药品核算 权责发生制 盘点 医院

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AOPE基因定点突变质粒的构建及qPCR鉴定

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作者 覃鸿妮 谢钰珍 杜雅馨 《科技风》 2018年第31期213-215,共3页

随机选取5份待检测老年痴呆症的唾液标本,等量混合后提取基因组DNA并通过PCR扩增人第19号染色体上的载脂蛋白E(AOPE)基因,再与PMD-19T质粒连接构建重组质粒,转入DH5α感受态细胞中。经菌液PCR和测序鉴定为阳性的克隆抽取其质粒,以此重... 随机选取5份待检测老年痴呆症的唾液标本,等量混合后提取基因组DNA并通过PCR扩增人第19号染色体上的载脂蛋白E(AOPE)基因,再与PMD-19T质粒连接构建重组质粒,转入DH5α感受态细胞中。经菌液PCR和测序鉴定为阳性的克隆抽取其质粒,以此重组质粒为模板通过PCR对AOPE基因的rs7421位点G突变为T,构建的突变质粒经qPCR鉴定,得到相应的荧光值,不同基因型的结果分成三类聚类图:CC型(野生纯合),CR型(杂合突变)和RR型(纯合突变),将得到的荧光数据值上传到生物信息数据库当中,以此为依据可以从AOPE基因层面上对待检测对象的阿尔茨海默病发病风险做出评估。 展开更多

关键词 AOPE基因 定点突变 重组质粒 qPCR鉴定

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高表达抗PD-1单克隆抗体细胞株工艺开发的研究 被引量：1

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作者 张勇 覃鸿妮 +1 位作者 谢钰珍 王倩文 《生物化工》 2019年第4期9-13,共5页

以PD-1分子为靶点,以中国仓鼠卵巢(CHO)细胞为宿主,构建高表达抗PD-1单克隆抗体的细胞株,优化细胞株筛选工艺,优化工艺参数,得到稳定高表达PD-1细胞株。运用悬浮细胞CHO表达抗PD-1的抗体,首先在质粒构建中,将重链和轻链插到同一个载体上... 以PD-1分子为靶点,以中国仓鼠卵巢(CHO)细胞为宿主,构建高表达抗PD-1单克隆抗体的细胞株,优化细胞株筛选工艺,优化工艺参数,得到稳定高表达PD-1细胞株。运用悬浮细胞CHO表达抗PD-1的抗体,首先在质粒构建中,将重链和轻链插到同一个载体上,保证了重链和轻链的比例为1∶1,实现共表达,轻重链在一个载体上,再同PD-1基因共转染,对后面的基因扩增筛选提供基础。采用悬浮培养,使用化学成分确定的培养基CD培养基,支持重组CHO细胞的生长,达到高密度培养,从而得到高表达蛋白。结果表明蛋白表达量稳定性分析表明,筛选出两株表达量较高的细胞株,表达量分别达到2.03g/L和2.09g/L,为抗PD-1抗体的生产提供了稳定高产的细胞系。得到了稳定高表达PD-1细胞株,且蛋白质量与原研药一致。 展开更多

关键词 PD-1 单克隆抗体 细胞株 工艺开发

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现代学徒制探索与实践——以苏州工业园区服务外包职业学院生命科学系为例 被引量：1

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作者 覃鸿妮 梅啸 +1 位作者 谢钰珍 张艳 《高教学刊》 2017年第22期83-85,共3页

苏州工业园区服务外包职业学院生命科学系以深入校企合作为基础,通过人才培养模式改革、课程体系构建、实施制度制定等,构建了与地方产业结构相适应的现代学徒制教学体系。通过四年的实践,在教学改革和成果上有所突破,显著提高了学生的... 苏州工业园区服务外包职业学院生命科学系以深入校企合作为基础,通过人才培养模式改革、课程体系构建、实施制度制定等,构建了与地方产业结构相适应的现代学徒制教学体系。通过四年的实践,在教学改革和成果上有所突破,显著提高了学生的实习和就业质量,深化了校企合作机制,增强了专业的社会服务能力,并极大地提高了师资水平。 展开更多

关键词 现代学徒制 生命科学系 人才培养

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体外扩增人CD34^(+)造血干/前体细胞培养方法的研究

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作者 吴凡 谢钰珍 +1 位作者 封怡 焦天赐 《科学技术创新》 2021年第25期35-37,共3页

近年来,干细胞在临床应用方面愈加广泛,但人体内的造血干细胞比例和数量极低,无法满足临床需求。本实验以建立体外扩增人CD34^(+)造血干/前体细胞的培养体系为研究目的,通过收集临床G-CSF动员得到的外周血,利用Ficoll获得单个核细胞(PBM... 近年来,干细胞在临床应用方面愈加广泛,但人体内的造血干细胞比例和数量极低,无法满足临床需求。本实验以建立体外扩增人CD34^(+)造血干/前体细胞的培养体系为研究目的,通过收集临床G-CSF动员得到的外周血,利用Ficoll获得单个核细胞(PBMC),再通过磁珠分选得到CD34^(+)造血干/前体细胞(HSPC);培养过程中调整培养基中细胞因子浓度,得到在FLT3L 100ng/ml,SCF 30 ng/ml,IL-320 ng/ml,IL-615ng/ml条件下,基质细胞存在时,造血干细胞扩增速度增加,可作为体外扩增培养CD34^(+)造血干细胞的培养基成分。 展开更多

关键词 体外扩增 细胞因子 HSPC

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基因工程技术课程思政教学设计与实践

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作者 谢钰珍 覃鸿妮 吴凡 《学园》 2023年第31期23-25,共3页

基因工程技术作为现代生物技术的核心,能够为基因的结构和功能研究奠定基础。以生物类专业的专业核心课程基因工程技术为例,阐述课程思政教学整体设计思路及育人目标,从修订教学目标、丰富教学内容、创新教学方法、完善教学评价多个方... 基因工程技术作为现代生物技术的核心,能够为基因的结构和功能研究奠定基础。以生物类专业的专业核心课程基因工程技术为例,阐述课程思政教学整体设计思路及育人目标,从修订教学目标、丰富教学内容、创新教学方法、完善教学评价多个方面提出对策,为生物医药类相关课程的课程思政教学设计与实施提供参考。 展开更多

关键词 基因工程技术 课程思政 教学设计

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健脾清肺推拿法治疗小儿便秘的临床观察 被引量：2

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作者 谢钰珍 丘丽华 +1 位作者 张少君 叶兵 《按摩与康复医学》 2011年第4期26-27,共2页

目的：观察健脾清肺推拿法治疗小儿便秘的临床疗效。方法：将40例小儿便秘患者随机分为健脾清肺推拿法与中药方剂治疗法，分别观察两组促排便的效果。结果：两组患者经治疗后症状均有明显改善，总有效率治疗组为95％，对照组为80％，两... 目的：观察健脾清肺推拿法治疗小儿便秘的临床疗效。方法：将40例小儿便秘患者随机分为健脾清肺推拿法与中药方剂治疗法，分别观察两组促排便的效果。结果：两组患者经治疗后症状均有明显改善，总有效率治疗组为95％，对照组为80％，两组经统计学比较，差异有显著性意义（P〈0．05）。结论：运用健脾清肺推拿法治疗小儿便秘效果显著，不伤小儿正气，值得推广。 展开更多

关键词 小儿推拿 健脾清肺法 小儿便秘

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培养学生学习数学的良好习惯(三)──培养认真完成作业的习惯

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作者 刘北荣 谢钰珍 《云南教育（小学教师）》 1999年第17期40-41,共2页

关键词 学习数学 良好习惯 作业 培养学生 解题思路 学习习惯 教师 应用题 已知条件 数学活动课

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