构建不同筛选特性的HBV X基因真核表达载体 被引量：2

1

作者 贺兴鄂 雷建华 +3 位作者 杨旭 王文龙 罗红雨 梁骏 《中西医结合肝病杂志》 CAS 2005年第5期274-276,共3页

目的:构建不同筛选特性的两个HBV X基因真核表达载体。方法:从质粒pEcob6中PCR扩增HBV X全基因,利用pCEP4和pcDNA3.1(+)两者多克隆位点的特点,选用pGEMR○-T Easy Vector构建中间载体pEasy-X,分别酶切后连接特异性片段构建载体pCEP4-X和... 目的:构建不同筛选特性的两个HBV X基因真核表达载体。方法:从质粒pEcob6中PCR扩增HBV X全基因,利用pCEP4和pcDNA3.1(+)两者多克隆位点的特点,选用pGEMR○-T Easy Vector构建中间载体pEasy-X,分别酶切后连接特异性片段构建载体pCEP4-X和pcDNA3.1(+)-X。结果:从质粒pEcob6成功PCR扩增出HBV X全基因并克隆至质粒pEasy-X,酶切、PCR及测序均证实真核表达载体质粒pCEP4-X和pcDNA3.1(+)-X构建成功。结论:具有不同筛选特性的两个HBV X基因真核表达载体业已成功构建。 展开更多

关键词 HBV X基因 真核表达载体 构建 基因真核表达载体 HBVX 筛选 PCDNA3.1(+) PCR扩增 载体质粒 特异性片段 多克隆

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胸腺五肽联合乙肝疫苗对HBsAg低滴度慢性无症状携带者疗效分析 被引量：1

2

作者 贺兴鄂 王文龙 +1 位作者 田沂 雷建华 《中西医结合肝病杂志》 CAS 2004年第6期325-327,共3页

目的观察胸腺五肽联合乙肝疫苗对HBsAg低滴度慢性无症状携带者的疗效。方法将低HBsAg滴度(<20ng/ml)的慢性乙肝病毒感染者治疗组分为A组HBsAg滴度<500ng/ml(n=29)、A1组500ng/ml<HBsAg滴度<20ng/ml(n=14);将对照组分为相应... 目的观察胸腺五肽联合乙肝疫苗对HBsAg低滴度慢性无症状携带者的疗效。方法将低HBsAg滴度(<20ng/ml)的慢性乙肝病毒感染者治疗组分为A组HBsAg滴度<500ng/ml(n=29)、A1组500ng/ml<HBsAg滴度<20ng/ml(n=14);将对照组分为相应的B组(n=23)和B1组(n=20)。治疗组采用胸腺五肽注射液1mg肌肉注射,初始20日为1次/d,继后为隔日1次,疗程140天,并予乙肝疫苗40μg,上臂三角肌皮下注射,每月1次,疗程4个月。对照组口服维生素等药物护肝治疗。应用时间分辨免疫荧光分析法(TRF)定量检测治疗前后患者乙肝病毒标志物的滴度变化。结果用TRF法检测,A组HBsAg有14例(483%)<05ng/ml,HBsAb有17例(586%)>10mIU/ml;对照B组只有2例(2/23,87%)感染者同时出现HBsAg<05ng/ml和HBsAb>10mIU/ml。治疗后A组与B组HBsAg和HBsAb滴度相比较,P值均<005,差异有显著性意义。治疗后A1和B1组HBsAg和HBsAb滴度相比较,P值均>005,差异无显著性意义。结论胸腺五肽联合乙肝疫苗对HBsAg滴度<500ng/ml的慢性无症状携带者,有明显降低HBsAg和升高HBsAb滴度的作用,有部分感染者可清除乙肝病毒。 展开更多

关键词 滴度 HB 胸腺五肽 乙肝疫苗 无症状携带者 慢性 联合 结论 显著性 意义

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两个不同筛选特性的表达HBV X基因肝癌细胞模型的建立

3

作者 贺兴鄂 雷建华 +3 位作者 杨旭 王文龙 罗红雨 梁骏 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期636-639,共4页

目的:构建两个不同筛选特性的表达HBV X基因肝癌细胞模型。方法:应用脂质体介导转染克隆有HBV X全基因真核表达载体pCEP4-X和pcDNA3.1(+)-X入肝癌细胞HepG2,hygromyc in和neomyc in筛选单细胞克隆,传代培养一定时期后应用PCR,RT-PCR和W ... 目的:构建两个不同筛选特性的表达HBV X基因肝癌细胞模型。方法:应用脂质体介导转染克隆有HBV X全基因真核表达载体pCEP4-X和pcDNA3.1(+)-X入肝癌细胞HepG2,hygromyc in和neomyc in筛选单细胞克隆,传代培养一定时期后应用PCR,RT-PCR和W estern b lot方法鉴定HBV X基因的表达。结果:转染后成功筛选出耐hygromyc in或neomyc in的单细胞克隆,并能传代培养一定时期。PCR,RT-PCR和W estern b lot结果显示HBVX基因获得表达。结论:成功构建不同筛选特性的两个HBV X基因表达肝癌细胞模型。 展开更多

关键词 HBV X基因 真核表达载体 肝癌细胞

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不同e抗原水平检测方法对抗HBV治疗疗效评价结果的影响

4

作者 贺兴鄂 雷建华 +3 位作者 杨旭 王文龙 田沂 黄力 《中西医结合肝病杂志》 CAS 2005年第1期3-4,10,共3页

目的 :分析血清e抗原水平不同监测方法可能对抗HBV治疗中疗效评价和追踪期复发率评价的影响。方法 :对 69例α干扰素 (IFN)或拉米夫定 (LAM )抗HBV治疗评价为“完全应答”的慢性乙型肝炎患者追踪观察 ,比较 3 1例以ELISA法监测血清e抗... 目的 :分析血清e抗原水平不同监测方法可能对抗HBV治疗中疗效评价和追踪期复发率评价的影响。方法 :对 69例α干扰素 (IFN)或拉米夫定 (LAM )抗HBV治疗评价为“完全应答”的慢性乙型肝炎患者追踪观察 ,比较 3 1例以ELISA法监测血清e抗原水平变化的患者和 3 8例应用时间分辨免疫荧光法的患者完全停药后的复发率 ,同时进行性别比、平均年龄、开始治疗时的ALT和HBVDNA水平及治疗方案的可比性分析。结果 :两组患者上述因素具有可比性 ,以ELISA法检测血清e抗原者追踪期复发率为 3 2 3 % ,应用时间分辨免疫荧光法者为 10 .5 % ,两者有统计学差异 (χ2 =4 .985 ,P =0 .0 2 6)。结论 :抗HBV治疗的疗效评价 ,其结果的客观性可能受e抗原水平监测方法的影响。推测时间分辨免疫荧光法有助于提高疗效评价的客观性 ,避免误判 ,从而指导合理用药 ,减少复发。 展开更多

关键词 E抗原 抗HBV 治疗疗效 复发率 疗效评价 血清 免疫荧光法 水平 评价结果 客观性

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应用短发夹状RNA研究HBV X基因表达对三氧化二砷诱导HepG2细胞凋亡特性的影响

5

作者 贺兴鄂 雷建华 +2 位作者 杨旭 孙会卿 童明 《中西医结合肝病杂志》 CAS 2008年第1期27-31,I0002,共6页

目的:应用shRNA(短发夹状RNA)介导的RNA干扰研究HBV X基因表达对三氧化二砷(As2O3)诱导HepG2细胞凋亡特性的影响。方法:用噻唑蓝(MTT)还原法分析经2.0μmol/L As2O3处理的HepG2细胞和表达HBVX基因的HepG2-X细胞的生长抑制率。以未处理... 目的:应用shRNA(短发夹状RNA)介导的RNA干扰研究HBV X基因表达对三氧化二砷(As2O3)诱导HepG2细胞凋亡特性的影响。方法:用噻唑蓝(MTT)还原法分析经2.0μmol/L As2O3处理的HepG2细胞和表达HBVX基因的HepG2-X细胞的生长抑制率。以未处理细胞为对照,流式细胞术分析细胞凋亡比和细胞周期,采用Caspase3/cpp32活性比色试剂盒测定As2O3处理后细胞裂解物中Caspase3的活性。应用脂质体介导HBX序列特异性shRNA表达载体pXi-1、pXi-2和序列无关对照pXi-3转染HepG2-X,再次分析细胞凋亡比、细胞周期和Caspase3活性的变化。结果:MTT法表明2.0μmol/L As2O3处理36小时具有理想的细胞生长抑制率。As2O3作用后细胞凋亡比明显增高(P<0.05),G2/M期细胞增多(P<0.05)。不同HBV X基因表达水平的细胞As2O3诱导的细胞凋亡比有统计学差异(P<0.05),HepG2-X与HepG2比较,其As2O3诱导的细胞凋亡比下降,且细胞裂解物的Caspase3活性下降(P<0.05),但应用序列特异性shRNA抑制HBV X基因表达后凋亡比和Caspase3活性可再次增高,而作为对照的序列无关的shRNA则无此效应,但这种效应与细胞周期无关。结论:As2O3可诱导HepG2细胞凋亡。表达HBVX基因后As2O3诱导的HepG2细胞凋亡比和Caspas3活性下降,特异性shRNA抑制HBV X基因表达后则无此效应,但这种效应与细胞周期无关。 展开更多

关键词 肝炎 病毒 乙型 基因 X 三氧化二砷 HEPG2细胞 RNA干扰 细胞凋亡

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乙型肝炎甲状腺素水平及其动力学变化

6

作者 贺兴鄂 苏先狮 李炎升 《中西医结合肝病杂志》 CAS 1992年第3期23-24,共2页

本文观察了48例急性黄疸型和慢性活动型乙型肝炎的血清甲状腺素水平及其动力学改变。观察结果显示两组肝炎病人的血清T_3 T_4 rT_3 水平明显低于正常人组。血清TSH水平明显高于正常人值。动力学改变表明无论急性或慢性乙型肝炎,甲状腺... 本文观察了48例急性黄疸型和慢性活动型乙型肝炎的血清甲状腺素水平及其动力学改变。观察结果显示两组肝炎病人的血清T_3 T_4 rT_3 水平明显低于正常人组。血清TSH水平明显高于正常人值。动力学改变表明无论急性或慢性乙型肝炎,甲状腺素每日生成率、体内分布总量均明显低于正常人组。上述各项结果在两组肝病之间进行比较无统计学意义。结合上述表明与肝脏的甲状腺素相应结合部位,脱碘酶的活性和TBPA血清浓度有关。 展开更多

关键词 乙型肝炎 甲状腺激素 对比研究

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乙型肝炎患者血清HBV DNA水平与肝功能关系分析 被引量：9

7

作者 雷建华 杨旭 +2 位作者 贺兴鄂 黄力 梁骏 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第10期1583-1585,共3页

目的分析乙型肝炎患者血清HBVDNA水平与肝功能关系。方法收集传染科同日测定HBVDNA水平和主要肝功能指标的274例乙肝患者的资料,比较各型乙肝患者HBVDNA水平和阳性率,比较HBVDNA阴性和阳性患者的肝功能指标,并分析HBVDNA与肝功能指标的... 目的分析乙型肝炎患者血清HBVDNA水平与肝功能关系。方法收集传染科同日测定HBVDNA水平和主要肝功能指标的274例乙肝患者的资料,比较各型乙肝患者HBVDNA水平和阳性率,比较HBVDNA阴性和阳性患者的肝功能指标,并分析HBVDNA与肝功能指标的相关性。结果各型乙肝病例的DNA阳性率差异无显著性,病情轻重不同的患者、急性和慢性病例DNA阳性率差异也无显著性,各组HBVDNA水平差异无显著性。各组病例HBVDNA阳性和阴性者ALB、TBIL、PT差异均无显著性。各组病例HBVDNA水平与TBIL、PT无统计学相关性。但多种类型患者HBVDNA阳性者ALT水平高于阴性者,且HBVDNA水平与ALT有一定相关性,另外慢性重度患者HBVDNA水平与ALB有一定相关。结论HBV复制水平与肝功能状态无明显相关性,但在部分患者HBV复制水平对肝功能可能有一定影响。 展开更多

关键词 乙型肝炎病毒 HBV DNA 肝功能

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靶向整合于MHCC97-H细胞的HBx基因shRNA表达载体的构建和鉴定 被引量：4

8

作者 王文龙 孙会卿 +3 位作者 杨旭 贺兴鄂 雷建华 童明 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期445-447,451,共4页

目的构建靶向整合于人肝癌MHCC97-H细胞乙型肝炎病毒x基因(HBxgene)基因的shRNA真核载体。方法依据从人肝癌细胞株MHCC97-H中克隆的HBx基因序列,设计合成X169、X220及MOCK(无关对照)3对寡核酸,经退火成互补双链并克隆至pGenesil-Ⅰ载体... 目的构建靶向整合于人肝癌MHCC97-H细胞乙型肝炎病毒x基因(HBxgene)基因的shRNA真核载体。方法依据从人肝癌细胞株MHCC97-H中克隆的HBx基因序列,设计合成X169、X220及MOCK(无关对照)3对寡核酸,经退火成互补双链并克隆至pGenesil-Ⅰ载体;经酶切、PCR和测序鉴定;将鉴定的shRNA质粒脂质体转染MHCC97-H细胞,流式细胞分析转染效率。结果酶切、PCR及测序证实pshRNA-X169/X220/MOCK质粒构建符合设计,转染48h后MHCC97-H细胞可激发绿色荧光,pshRNA-X220转染效率最低。结论成功构建靶向整合于人肝癌细胞HBVx基因特异性shRNA表达载体,并成功转染人肝癌细胞株MHCC97-H细胞,为沉默HBx基因实验性肝癌基因治疗奠定基础。 展开更多

关键词 RNA干扰 短发夹RNA 乙型肝炎病毒X基因 MHCC97-H细胞 整合

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各种临床类型乙型肝炎病例血清HBeAg/HBeAb和HBV DNA定量分析 被引量：4

9

作者 雷建华 梁骏 +3 位作者 杨旭 贺兴鄂 黄力 田沂 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第17期2493-2495,2499,共4页

目的分析比较不同临床类型乙型肝炎病例的血清HBeAg/HBeAb与HBVDNA阳性率和定量水平,探讨临床病情与HBV复制水平的关系。方法收集湘雅二医院传染科在同日应用时间分辨免疫荧光法(TRFIA)和荧光定量PCR(FQ-PCR)定量测定血清HBeAg/HBeAb和H... 目的分析比较不同临床类型乙型肝炎病例的血清HBeAg/HBeAb与HBVDNA阳性率和定量水平,探讨临床病情与HBV复制水平的关系。方法收集湘雅二医院传染科在同日应用时间分辨免疫荧光法(TRFIA)和荧光定量PCR(FQ-PCR)定量测定血清HBeAg/HBeAb和HBVDNA水平的不同临床类型乙肝病例共802例,比较各组病例的HBeAg/HBeAb和HBVDNA阳性率和定量水平。结果各组病例间HBeAb水平差异无显著性,慢性轻度病例HBeAg和HBVDNA阳性率及定量水平均较高,急性或亚急性重型以及HBeAb阳性急性黄疸型病例HBeAg和HBVDNA阳性率及定量水平均较低,其他临床类型病例HBeAg和HBVDNA阳性率及定量水平差异均无显著性。结论不同临床类型乙肝病例的血清HBeAb水平差异无显著性,急性乙肝恢复期HBV复制水平较低,但慢性轻度病例HBeAg和HBVDNA较高而急性或亚急性重型病例较低,可能与机体免疫状态相关。 展开更多

关键词 乙型肝炎 E抗原 E抗体 HBV DNA

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HBsAg浓度与HBV复制水平的相关性分析 被引量：5

10

作者 雷建华 杨旭 +3 位作者 贺兴鄂 黄力 梁骏 田沂 《中国输血杂志》 CAS CSCD 2006年第5期391-392,共2页

目的探讨HBsAg浓度与HBV复制水平的相关性。方法用时间分辨免疫荧光法(TRFIA)定量测定的乙型肝炎患者血清HBsAg浓度,比较HBV DNA复制或HBeAg患者HBsAg的滴度,同时进行HBsAg与DNA复制或HBeAg相关性分析;应用ROC曲线分析单独应用HBsAg或联... 目的探讨HBsAg浓度与HBV复制水平的相关性。方法用时间分辨免疫荧光法(TRFIA)定量测定的乙型肝炎患者血清HBsAg浓度,比较HBV DNA复制或HBeAg患者HBsAg的滴度,同时进行HBsAg与DNA复制或HBeAg相关性分析;应用ROC曲线分析单独应用HBsAg或联合HBeAg,判断HBV DNA结果及复制状态的可靠性,分析判断DNA结果的符合率。结果HBsAg滴度和HBeAg水平或HBV DNA复制水平呈正相关。ROC曲线分析表明HBsAg滴度可用于HBV DNA阴性或阳性的判断,并且能够提高单独应用HBeAg滴度的ROC曲线下面积。以HBsAg 150ng/ml评估HBV DNA水平具有较高的阳性、阴性预测值和符合率。结论HBsAg浓度与HBV复制水平密切相关。 展开更多

关键词 HBSAG HBEAG HBVDNA 时间分辨免疫荧光法 TRIFA

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铜负荷饲养兔肝、肾组织含铜量和组织病理学观察 被引量：3

11

作者 赖力英 杨旭 +1 位作者 李代强 贺兴鄂 《动物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期96-98,i002,共4页

探讨了新西兰兔在不同剂量铜负荷饮食时肝、肾组织含铜量和组织病理的改变。30只新西兰兔分为5组,对照组(第1组)给与正常饲料,每天每公斤体重120g,铜负荷组(第2、3、4、5组)给予含铜的饲料,铜剂量分别为每天每公斤体重01、1、10、20mg,... 探讨了新西兰兔在不同剂量铜负荷饮食时肝、肾组织含铜量和组织病理的改变。30只新西兰兔分为5组,对照组(第1组)给与正常饲料,每天每公斤体重120g,铜负荷组(第2、3、4、5组)给予含铜的饲料,铜剂量分别为每天每公斤体重01、1、10、20mg,其余饲料用正常饲料补足。每周测体重1次,每10d抽空腹静脉血1次查血清谷丙转氨酶(ALT)及血清铜,每半个月肝穿刺肝组织查铜一次,并做肝组织HE染色光镜下检查。实验结束时,耳静脉注射空气处死动物,取肝、肾组织块作病理检查及组织铜离子含量测定。5个月饲养期内,实验组血清ALT及血清铜离子含量与对照组相比差异无显著性,但组织中的铜离子含量随饲料含铜量的增加而增加。实验组肝组织铜离子含量与对照组相比差异有显著性(P<005),其中最大剂量组与对照组相比差异有极显著性(P<0001)。肾组织铜离子含量中,第4、5组与对照组相比差异有显著性(P<005)。病理检查中,第2、3组肝脏病理改变轻微,第4、5组有较明显的坏死病变。作者认为新西兰兔对铜的耐受性较好,较大剂量、较长时间服用有较好的安全性,可用于铜实验动物模型的建立,但进食剂量过大(含铜20mgkg体重·d以上),短期内可引起严重的肝肾器官病变。 展开更多

关键词 对照组 肾组织 肝组织 含量 正常 血清铜 改变 饲料 体重 养兔

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检测血清胆汁酸及天冬氨酸氨基转移酶在乙型肝炎肝硬化并腹水患者中的意义 被引量：10

12

作者 赖力英 杨旭 +1 位作者 贺兴鄂 许允 《临床内科杂志》 CAS 2005年第3期195-197,共3页

目的探讨检测肝炎肝硬化并腹水患者中与肝脏病情关系相关的血清生化指标的意义.方法将126例乙肝病毒感染致肝硬化并腹水患者按Child-Pugh肝功能评分法评分并分级,对各级患者的丙氨酸氨基转移酶(ALT) 、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、胆汁酸(... 目的探讨检测肝炎肝硬化并腹水患者中与肝脏病情关系相关的血清生化指标的意义.方法将126例乙肝病毒感染致肝硬化并腹水患者按Child-Pugh肝功能评分法评分并分级,对各级患者的丙氨酸氨基转移酶(ALT) 、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、胆汁酸(TBA)的阳性率行χ2检验,对其均值行t检验.结果所有患者中A级15例,B级73例,C级38例,它们的血清ALT、AST、TBA阳性率依次为39.6%、 84.2%、 93.3%,χ2值依次为2.0412、11.011、34.4112,P值依次为0.25～0.5、<0.005、<0.005;ALT均值C级与A级比较,明显升高(P=0.006),而在A级与B级间比较差异无显著性(P=0.151),AST在A级与B级、B级与C级、C级与A级间比较P值依次为0.000、0.049、0.000,TBA 在A级与B级、B级与C级、C级与A级间比较P值依次为0.000、0.032、0.000.结论在肝炎肝硬化并腹水患者中,按Child-Pugh肝功能评分法评分并分级后,血清AST及TBA数值与肝功能分级有良好的相关性. 展开更多

关键词 乙型肝炎 肝硬化 腹水 胆汁酸 天冬氨酸氨基转移酶

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siRNA沉默HBx基因对肝癌细胞YKL-40蛋白表达影响的研究 被引量：3

13

作者 张永红 贺兴鄂 +2 位作者 唐晓鹏 王文龙 罗开忠 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期241-244,共4页

目的观察HepG2.2.15细胞中乙型肝炎病毒X(HBx)基因沉默对酿酒酵母YKL-40蛋白表达的影响。方法构建靶向HBx基因的siRNA真核表达载体pRNAT-HBx和阴性对照质粒,同时设空白对照组,采用Lipofectinamine 2000脂质体转染法转染人肝癌细胞系HepG... 目的观察HepG2.2.15细胞中乙型肝炎病毒X(HBx)基因沉默对酿酒酵母YKL-40蛋白表达的影响。方法构建靶向HBx基因的siRNA真核表达载体pRNAT-HBx和阴性对照质粒,同时设空白对照组,采用Lipofectinamine 2000脂质体转染法转染人肝癌细胞系HepG2.2.15细胞。采用RT-PCR检测各组中HBx和YKL-40的mRNA水平,Western blot、细胞免疫荧光检测各组中HBx蛋白和YKL-40蛋白的表达。结果pRNAT-HBx明显抑制HepG2.2.15细胞中HBx基因的表达,同时YKL-40的mRNA和细胞内蛋白表达水平也随之相应下调。结论抑制HBx基因的表达能下调HepG2.2.15细胞中YKL-40蛋白的表达,提示HBx蛋白对YKL-40蛋白的表达具有一定的激活作用。 展开更多

关键词 小干扰RNA HEPG2.2.15细胞 乙型肝炎病毒X基因 YKL-40蛋白

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一起严重的艾滋病毒职业暴露处理经过及分析 被引量：2

14

作者 王谷丰 郑煜煌 +3 位作者 王文龙 贺兴鄂 梁峻 田沂 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期965-966,共2页

关键词 HIV职业暴露 艾滋病毒 HIV感染者 AIDS病人 职业感染 HIV污染 医院就诊 治疗处理

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RNA干扰HBx基因对肝癌细胞化疗效果的影响 被引量：1

15

作者 何艳 贺兴鄂 +2 位作者 孙会卿 王文龙 雷建华 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期395-400,共6页

目的:探讨RNA干扰技术和传统的化疗方法联合应用对肝癌细胞生长抑制作用的影响,并选择高效的治疗组合,研究其凋亡机制。方法:鉴定3组肝癌细胞——MHCC97-H(原肝癌细胞株),HK3细胞(转染空质粒的MHCC97-H细胞)和21543细胞(转染含HBx-shRN... 目的:探讨RNA干扰技术和传统的化疗方法联合应用对肝癌细胞生长抑制作用的影响,并选择高效的治疗组合,研究其凋亡机制。方法:鉴定3组肝癌细胞——MHCC97-H(原肝癌细胞株),HK3细胞(转染空质粒的MHCC97-H细胞)和21543细胞(转染含HBx-shRNA质粒的MHCC97-H细胞);RT-PCR检测RNA干扰对HBx mRNA沉寂作用,CCK8和TUNEL分别检测RNA干扰HBx后化疗药物对MHCC97-H肿瘤细胞生长的抑制及诱导细胞凋亡情况。结果:RT-PCR结果显示,与MHCC97-H细胞组比较,21543细胞的HBx mRNA水平下降约91%,HK3细胞HBx mRNA水平下降不明显;RNA靶向干扰HBx基因后的肝癌细胞(21543细胞)较原肝癌细胞(MHCC97-H细胞)和HK3细胞增殖明显减慢,而后两种细胞差别无统计学意义;3种不同细胞加用3种不同浓度的氟尿嘧啶(0～120mg/L)、顺铂(0～32mg/L)后细胞生长明显减慢并呈浓度依赖性,以RNA靶向干扰HBx基因后的21543细胞生长抑制最明显;相同浓度的氟尿嘧啶对3组不同肝癌细胞均可引起细胞凋亡,以21543细胞凋亡最明显。结论:RNA干扰HBx可明显抑制肝癌细胞的增殖,并增加肝癌细胞对化疗药物的敏感性;RNA干扰HBx基因和化疗药物联合应用使肝癌细胞凋亡更明显,细胞增殖速度明显减慢。 展开更多

关键词 肝癌细胞 RNA干扰 HBX基因 凋亡 细胞周期 化疗

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RNA干扰肝癌细胞HBX基因表达及细胞增殖的实验研究 被引量：1

16

作者 孙会卿 贺兴鄂 +2 位作者 王文龙 何艳 雷建华 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期241-243,264,共4页

目的探讨RNA干扰技术对肝癌细胞乙型肝炎病毒X基因(HBX)表达和细胞增殖的影响。方法鉴定转染无关的对照序列(HK3细胞)和针对HBX基因shRNA的稳定肝癌细胞株(21543细胞);RT-PCR检测RNA干扰对HBX基因mRNA沉寂作用,利用流式细胞仪检测细胞... 目的探讨RNA干扰技术对肝癌细胞乙型肝炎病毒X基因(HBX)表达和细胞增殖的影响。方法鉴定转染无关的对照序列(HK3细胞)和针对HBX基因shRNA的稳定肝癌细胞株(21543细胞);RT-PCR检测RNA干扰对HBX基因mRNA沉寂作用,利用流式细胞仪检测细胞周期变化。结果复苏后细胞形态差别不大;RT-PCR显示相对于MHCC-97H细胞,21543细胞的HBXmRNA水平的下降约91%,HK3细胞的HBXmRNA水平下降不明显;靶向HBX的RNA干扰后的肝癌细胞(21543细胞)较原肝癌细胞(MHCC-97H细胞)和对照细胞(HK3细胞)增殖明显减慢,而后两种细胞差别不显著;21543细胞周期显示RNA干扰后细胞延缓进入S期,增殖活性明显减低。结论RNA干扰可降低肝癌细胞HBX表达水平,并可明显抑制肝癌细胞的增殖,改变细胞生长周期。 展开更多

关键词 肝癌细胞 RNA干扰 乙型肝炎病毒X基因 细胞周期

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乙型肝炎患者血清钙水平及其与临床的关系分析 被引量：1

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作者 雷建华 杨旭 +2 位作者 贺兴鄂 梁骏 王文龙 《中西医结合肝病杂志》 CAS 2005年第3期162-164,共3页

目的:比较各临床类型乙型肝炎患者的血清钙水平,探讨其与主要肝功能指标和血清尿素氮(BUN)水平的关系。方法:收集湘雅二医院传染科同日测定的439例乙型肝炎患者血清钙水平和主要肝功能指标及BUN检测资料,比较各型患者血清钙水平和异常... 目的:比较各临床类型乙型肝炎患者的血清钙水平,探讨其与主要肝功能指标和血清尿素氮(BUN)水平的关系。方法:收集湘雅二医院传染科同日测定的439例乙型肝炎患者血清钙水平和主要肝功能指标及BUN检测资料,比较各型患者血清钙水平和异常血钙发生情况,并分析血钙与肝功能指标和BUN的相关性。结果:乙型肝炎病例低钙发生率较高,特别是重型肝炎和肝硬化患者平均血钙水平低,易发生低血钙。血钙水平与ALT和TBil无统计学相关性,但慢性肝炎、重型肝炎和肝硬化患者血钙水平与血清Alb水平呈统计学正相关,慢性重度患者血钙水平与PT负相关。肝硬化患者血钙水平还与BUN负相关。低蛋白血症和PT延长的病例伴有低血钙较常见。结论:乙型肝炎患者特别是重型肝炎和肝硬化患者易发生低血钙,血钙水平与肝功能状态和BUN有一定相关性,低蛋白血症和PT延长的病例应注意低血钙的发生。 展开更多

关键词 乙型肝炎患者 关系分析 肝硬化患者 肝功能指标 血钙水平 低蛋白血症 重型肝炎 PT延长 血清尿素氮 BUN 低血钙 相关性 临床类型 检测资料 发生情况 TBIL 功能状态 统计学 负相关 传染科 二医院 发生率 病例 ALT 正相关

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拉米夫定治疗中反弹致重型肝炎临床分析 被引量：1

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作者 王文龙 杨旭 +1 位作者 许允 贺兴鄂 《实用预防医学》 CAS 2006年第5期1307-1308,共2页

关键词 拉米夫定治疗 重型肝炎 临床分析 慢性乙型肝炎 抗病毒治疗 免疫清除期 一线药物 不良反应

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播散型马尔尼菲青霉病报告及分析 被引量：1

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作者 王文龙 杨旭 +2 位作者 贺兴鄂 许允 陈丽敏 《中国医学工程》 2006年第5期500-503,共4页

目的掌握马尔尼菲青霉病的临床和病理特点。方法结合文献,对3例播散型马尔尼菲青霉病病例的临床和病理特点、诊疗经过进行综合分析。结果3例患者的临床表现为:发热、消瘦、贫血、皮损、肝脾淋巴结肿大、肺部损害等;其中2例合并于艾滋病... 目的掌握马尔尼菲青霉病的临床和病理特点。方法结合文献,对3例播散型马尔尼菲青霉病病例的临床和病理特点、诊疗经过进行综合分析。结果3例患者的临床表现为:发热、消瘦、贫血、皮损、肝脾淋巴结肿大、肺部损害等;其中2例合并于艾滋病。病变主要侵犯单核巨噬细胞系统。确诊有赖于涂片镜检、真菌培养及组织病理发现马尔尼菲青霉菌。其中1例不能耐受两性霉素B付反应,自动出院;另2例死亡。结论在艾滋病流行时期,对马尔尼菲青霉菌感染应高度警惕,及早诊断治疗,以改善患者的预后。 展开更多

关键词 马尔尼菲青霉菌 播散型 获得性免疫缺陷综合症 诊断

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乙肝病毒X基因真核表达载体pEGFP-X的构建及其表达

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作者 王文龙 贺兴鄂 +3 位作者 杨旭 蒋永芳 雷建华 孙会卿 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2006年第5期652-654,680,共4页

目的:构建pEGFP-X真核表达载体,观察其在肝癌细胞株中的表达。方法:从质粒pcDNA3.1(+)-X酶切获HBV X基因片段,克隆至pEGFP-N1;用酶切、PCR和测序鉴定pEGFP-X载体;用脂质体法,将重组载体(pEGFP-X)和空载体(pEGFP-N1)瞬时转染肝癌细胞细胞... 目的:构建pEGFP-X真核表达载体,观察其在肝癌细胞株中的表达。方法:从质粒pcDNA3.1(+)-X酶切获HBV X基因片段,克隆至pEGFP-N1;用酶切、PCR和测序鉴定pEGFP-X载体;用脂质体法,将重组载体(pEGFP-X)和空载体(pEGFP-N1)瞬时转染肝癌细胞细胞株BEL-7402;分别用RT-PCR、荧光显微镜鉴定HBV X和EGFP基因表达。结果:鉴定证实pEGFP-X载体构建成功;该质粒瞬时转染的BEL-7402有HBV X基因表达,并发绿色荧光。结论:构建的pEGFP-X真核载体能在BEL-7402中表达,绿色荧光蛋白示踪利于表达HBV X基因稳定细胞株的筛选,并为探讨HBV X基因在HCC中的致瘤机理提供实验模型奠定基础。 展开更多

关键词 乙型肝炎病毒X基因 加强型绿色荧光蛋白 真核表达载体 RT—PCR BEL-7402

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