表达CSFV E2线性表位的PCV2病毒样颗粒的制备及免疫原性研究

1

作者 李岩岩 张帅 +5 位作者 赵云环 任晓祥 李思琪 王文钊 左玉柱 范京惠 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期70-77,共8页

为制备携带猪瘟病毒(CSFV)E2蛋白的猪圆环病毒2型(PCV2)病毒样颗粒(VLP),并在小鼠体内评价其免疫原性,本研究采用PCR扩增PCV2 Cap基因,利用重叠延伸PCR将PCV2 Cap蛋白的诱饵表位(aa169~aa180)替换成编码两个连续的CSFV E2蛋白线性表位(a... 为制备携带猪瘟病毒(CSFV)E2蛋白的猪圆环病毒2型(PCV2)病毒样颗粒(VLP),并在小鼠体内评价其免疫原性,本研究采用PCR扩增PCV2 Cap基因,利用重叠延伸PCR将PCV2 Cap蛋白的诱饵表位(aa169~aa180)替换成编码两个连续的CSFV E2蛋白线性表位(aa829~aa837)的融合基因(PCV2-Cap^(169~180)-E2^(829~837))经测序鉴定正确后克隆至载体pET-32a(+)中,构建重组质粒p-Cap-E2并采用PCR方法鉴定正确后转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达重组蛋白(PCV2-Cap-E2),采用改良的镍亲和层析法纯化重组蛋白,并利用SDS-PAGE与western blot对重组蛋白的表达形式及反应原性鉴定;利用透射电镜观察纯化的重组蛋白能否形成VLP;利用本研究制备的VLP、PCV2及CSFV商品化疫苗分别免疫小鼠,采用ELISA方法检测免疫后不同时间小鼠体内的抗体水平及细胞因子含量。SDS-PAGE结果显示,在49 ku处出现目的条带,且重组蛋白主要以可溶性形式表达,纯化得到单一的目的蛋白;western blot结果显示,重组蛋白能够与猪源PCV2多克隆抗体(PAb)、猪源CSFV PAb及HRP标记的6×His-Tag小鼠单克隆抗体(MAb)发生特异性反应,在49 ku处出现特异性条带;电镜观察可见重组蛋白形成规则的VLP;抗体的ELISA结果显示,与PBS对照相比,VLP能够诱导小鼠产生较高的PCV2及CSFV抗体水平(P<0.01),与各商品化疫苗均无显著差异。细胞因子的ELISA结果显示,与PBS对照组相比,VLP能够诱导小鼠产生较高水平的细胞因子(P<0.01)。体外病毒中和试验结果显示,VLP免疫的小鼠血清中具有中和PCV2的活性。综上所述,本实验首次在大肠杆菌中可溶性表达并获得了纯化的重组蛋白(PCV2-Cap-E2),且其能够在体外自组装成VLP,并可刺激小鼠产生针对PCV2 Cap蛋白及CSFV E2蛋白的特异性抗体,为研制针对PCV2和CSFV的新型二联VLP疫苗提供了物质基础。 展开更多

关键词 猪圆环病毒2型 病毒样颗粒 猪瘟病毒E2蛋白 CAP蛋白

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规模化猪场猪蓝耳病防控思路

2

作者 代飞 王敬友 +4 位作者 张帅 赵云环 孟子薇 范京惠 左玉柱 《猪业科学》 2024年第4期32-35,共4页

近年来,中国养猪业的规模越来越大,单体养殖场的存栏量越来越多,同时,集约化、规模化、智能化以及行业内高素质人才占比越来越高,尤其是2018年非洲猪瘟进入中国以来,养猪企业在生物安全意识、生物安全硬件以及生物安全的执行标准上都达... 近年来,中国养猪业的规模越来越大,单体养殖场的存栏量越来越多,同时,集约化、规模化、智能化以及行业内高素质人才占比越来越高,尤其是2018年非洲猪瘟进入中国以来,养猪企业在生物安全意识、生物安全硬件以及生物安全的执行标准上都达到了世界一流水平。 展开更多

关键词 非洲猪瘟 养猪企业 猪蓝耳病 规模化猪场 世界一流水平 存栏量 生物安全意识 养殖场

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2022年~2023年上半年河北省猪繁殖与呼吸综合征病毒的遗传变异分析

3

作者 顾文源 张帅 +4 位作者 赵云环 李思琪 刘濮毓 范京惠 左玉柱 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期1287-1294,共8页

为了解当前河北省猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的流行及流行株的遗传变异情况,本研究利用荧光定量PCR方法对2022年~2023年上半年于河北省不同规模养猪场采集的229份疑似PRRSV感染猪的组织病料样品进行检测,结果显示,PRRSV阳性率为17.9... 为了解当前河北省猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的流行及流行株的遗传变异情况,本研究利用荧光定量PCR方法对2022年~2023年上半年于河北省不同规模养猪场采集的229份疑似PRRSV感染猪的组织病料样品进行检测,结果显示,PRRSV阳性率为17.9%(41/229)。对鉴定的15株PRRSV ORF5基因进行测序、遗传进化分析、以及潜在的N-糖基化位点分析。结果显示,15株PRRSV ORF5基因序列的同源性为81.8%~99.8%,氨基酸序列的同源性为81.1%~100.0%;15株PRRSV均属于PRRSV-2型,其中的10株属于谱系1(Lineage 1),1株属于Lineage 5,4株属于Lineage 8;属于Lineage 5的HB-HD-2株为一株类RespPRRS MLV疫苗株。部分病毒株的GP5蛋白氨基酸序列毒力相关位点出现R13Q、R151I、R151K突变,属于Lineage 1的10株PRRSV GP5蛋白在诱骗表位出现V27A和V29A突变,在其它中和表位区及高变区也出现了不同程度的变异;糖基化位点分析结果显示,GP5蛋白在aa44~aa46、aa51~aa53位N-糖基化位点相对保守,在aa30~aa32、aa33~aa35、aa34~aa36和aa57~aa59发生了不同程度的突变。以上结果表明,当前河北省PRRSV流行株复杂多样,Lineage 1 PRRSV(NADC30-Like、NADC34-Like)正成为优势病毒株,猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)防控形势仍较为严峻。本研究为掌握当前河北省PRRSV的遗传变异情况,以及PRRS疫苗开发和防控提供了新数据和信息。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 遗传进化分析 N-糖基化位点 GP5蛋白

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猪场常见消毒药对非洲猪瘟病毒的消毒效果

4

作者 顾文源 张帅 +3 位作者 贾丽娜 赵云环 范京惠 左玉柱 《中国动物检疫》 CAS 2023年第8期103-108,共6页

为做好非洲猪瘟(ASF)防控,保障猪场生物安全措施的有效实施,通过查阅文献分析了多种猪场常见消毒药(火碱、酸、过硫酸氢钾、卤素类和醛类)的特点及使用方法,综述了其对非洲猪瘟病毒(ASFV)的杀灭效果。结果显示:在22℃时,1.0%和0.5%的火... 为做好非洲猪瘟(ASF)防控,保障猪场生物安全措施的有效实施,通过查阅文献分析了多种猪场常见消毒药(火碱、酸、过硫酸氢钾、卤素类和醛类)的特点及使用方法,综述了其对非洲猪瘟病毒(ASFV)的杀灭效果。结果显示:在22℃时,1.0%和0.5%的火碱溶液可将ASFV杀灭;800倍稀释的二氯异氰尿酸钠溶液可在0.5 h杀灭ASFV;1.0%的柠檬酸能够将ASFV减少4个对数单位以上;3.0%的醋酸以及0.1%、0.5%和1.0%的戊二醛溶液均对ASFV有杀灭效果。综上,推荐火碱(0.5%)或二氯异氰尿酸钠(稀释度1:800)用于环境消毒,戊二醛(0.1%~1.0%)用于带猪消毒。本文通过综述猪场常用消毒药对ASFV的消杀效果,为猪场消毒药的选择和使用提供指导,以助于猪场的ASF防控。 展开更多

关键词 非洲猪瘟 生物安全 消毒药 效果

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中药组方对PRRS防控效果的评价

5

作者 张帅 代飞 +5 位作者 王敬友 赵云环 王荣申 宫新城 范京惠 左玉柱 《猪业科学》 2023年第11期91-94,共4页

猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)感染引起的一种烈性传染病,俗称“猪蓝耳病”,临床以引起母猪的繁... 猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)感染引起的一种烈性传染病,俗称“猪蓝耳病”,临床以引起母猪的繁殖障碍以及不同年龄段猪只呼吸道疾病为主要特征。PRRS为免疫抑制性疾病,感染猪免疫系统受损、免疫力下降,易继发其他病原体感染,使得临床症状加重。目前我国流行的PRRSV毒株主要是NADC-30 like、NADC-34 like等类高致病性毒株。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 呼吸道疾病 烈性传染病 繁殖障碍 中药组方 免疫抑制性疾病 猪蓝耳病 病原体感染

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全日制教育硕士导师队伍建设的问题与途径探讨 被引量：2

6

作者 赵云环 罗筱霖 《新课程研究（中旬）》 2015年第12期21-22,共2页

导师是全日制教育硕士培养的第一责任人,对学生的成长及专业学位研究生教育的发展都具有重要影响。在深入推进专业学位研究生培养模式改革的过程中,全日制教育硕士导师队伍建设中尚存在一些问题。部分导师对专业学位尚未形成准确的理解... 导师是全日制教育硕士培养的第一责任人,对学生的成长及专业学位研究生教育的发展都具有重要影响。在深入推进专业学位研究生培养模式改革的过程中,全日制教育硕士导师队伍建设中尚存在一些问题。部分导师对专业学位尚未形成准确的理解定位,在培养教育硕士过程中没有与基础教育形成必要的紧密联系,大学导师与中小学导师对教育硕士的共同指导未取得应有的效果。因此,亟须采取有效措施加强导师队伍建设,如改革不合理的导师遴选办法,加强对教育硕士导师的管理,并进一步完善双导师制度。 展开更多

关键词 全日制教育硕士 导师队伍建设 问题 途径

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我国教师专业发展阶段研究:20年回顾与前瞻 被引量：2

7

作者 赵云环 《吕梁教育学院学报》 2012年第1期8-11,共4页

我国学者对教师专业发展阶段的研究已大致经历了20年的时间。综观20年的研究,并参考课程设计模式中"目标模式"与"历程模式"的理念,可以将我国已有的研究成果归类为两种取向:"结果取向"与"过程取向&q... 我国学者对教师专业发展阶段的研究已大致经历了20年的时间。综观20年的研究,并参考课程设计模式中"目标模式"与"历程模式"的理念,可以将我国已有的研究成果归类为两种取向:"结果取向"与"过程取向"。同一取向下又有着不同的研究视角。在研究方法上,主要运用文献研究法,个别研究使用了访谈法与比较研究法,而个案研究与实地考察较为缺乏。对此问题,无论在研究内容上还是研究方法上,都有需进一步改进之处。 展开更多

关键词 我国教师专业发展 过程取向 结果取向 建议

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试论教师专业道德对传统职业道德的超越 被引量：2

8

作者 赵云环 《基础教育研究》 2012年第2期22-23,26,共3页

随着社会发展对教育提出的要求日渐提高，教育改革在各个国家相继被提上日程并逐步深入。教育改革的主体与动力在于教师，教育品质的关键也在教师。教师专业化与教师专业发展已成为教育界的重要研究领域。在教育教学活动以及教师专业发... 随着社会发展对教育提出的要求日渐提高，教育改革在各个国家相继被提上日程并逐步深入。教育改革的主体与动力在于教师，教育品质的关键也在教师。教师专业化与教师专业发展已成为教育界的重要研究领域。在教育教学活动以及教师专业发展的过程中， 展开更多

关键词 教师专业发展 职业道德 专业道德 传统 教育改革 教育教学活动 教师专业化 社会发展

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携带BCoV抗原表位的乙型肝炎病毒核心抗原病毒样颗粒的制备及免疫效果评价

9

作者 郭晓旭 张帅 +5 位作者 刘莹 赵云环 王传文 李妍 范京惠 左玉柱 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期178-184,共7页

为了制备可用于牛冠状病毒(BCoV)亚单位疫苗的含BCoV S蛋白抗原表位的病毒样颗粒(VLP),本研究将BCoV S1和S2蛋白中含B细胞表位的aa351~aa403(159 bp)和aa771~aa784(42 bp)对应的密码子按大肠杆菌偏好性原则优化后插入乙型肝炎病毒核心抗... 为了制备可用于牛冠状病毒(BCoV)亚单位疫苗的含BCoV S蛋白抗原表位的病毒样颗粒(VLP),本研究将BCoV S1和S2蛋白中含B细胞表位的aa351~aa403(159 bp)和aa771~aa784(42 bp)对应的密码子按大肠杆菌偏好性原则优化后插入乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)主要免疫显性区域(MIR),合成该重组基因后克隆至pET-32a(+),经酶切鉴定显示正确构建了重组质粒pET-32a(+)-HBcAg-BCoV S1+S2。将该重组质粒分别转化E.coli BL21(DE3)和伴侣感受态细胞BL21(DE3)(含pG-KJE8分子伴侣质粒),经诱导表达后采用镍柱亲和层析法纯化两种不同表达形式的重组蛋白,SDS-PAGE检测重组蛋白的表达及纯化效果,结果显示两种表达系统均正确表达了重组蛋白,分别命名为VLP-A、VLP-B,前者为包涵体表达,后者为可溶性表达。纯化后浓度分别为0.9 mg/mL、1.4 mg/mL。利用透射电镜观察纯化后的两种重组蛋白是否形成VLP,结果显示二者均形成VLP,且可溶性表达的重组蛋白形成的VLP产量略高。将两种VLP乳化后以50μg/只分别免疫小鼠,于免疫后7 d、14 d、21 d、28 d、35 d和42 d采血制备血清,采用ELISA方法检测小鼠血清中的BCoV IgG特异性抗体水平及细胞因子IFN-γ、IL-4,结果显示,将两种VLP乳化后免疫小鼠产生的BCoV IgG抗体(P<0.01)和两种细胞因子水平(P<0.05)均显著高于对照组,且可溶性表达的VLP诱导产生的抗体水平和细胞因子水平更高。本研究首次制备了含BCoV S蛋白抗原表位的VLP,两种不同表达形式的重组蛋白均形成VLP,且在小鼠体内均能够产生免疫应答,为BCoV亚单位疫苗及相关生物制品的制备奠定了基础。 展开更多

关键词 乙肝病毒核心抗原 牛冠状病毒 病毒样颗粒 分子伴侣质粒

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A型塞内卡病毒VP2蛋白抗原区的原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立

10

作者 翟刚 顾文源 +6 位作者 王晶 刘莹 赵云环 刘涛 张帅 左玉柱 范京惠 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期1025-1031,共7页

为建立高效的A型塞内卡病毒(SVA)的血清学检测方法,本研究经PCR扩增SVA VP2基因的优势抗原区域(VP2-1基因)后构建重组质粒p ET-32a-VP2-1,将其转化大肠杆菌感受态细胞并经IPTG诱导表达重组VP2蛋白(rVP2),表达产物经镍柱亲和层析法纯化... 为建立高效的A型塞内卡病毒(SVA)的血清学检测方法,本研究经PCR扩增SVA VP2基因的优势抗原区域(VP2-1基因)后构建重组质粒p ET-32a-VP2-1,将其转化大肠杆菌感受态细胞并经IPTG诱导表达重组VP2蛋白(rVP2),表达产物经镍柱亲和层析法纯化后利用western blot鉴定,结果显示,在42 ku处出现特异性条带,表明r VP2可以与SVA阳性血清特异性反应。以r VP2为包被抗原,经反应条件的优化,建立了基于SVA VP2抗原区的间接ELISA抗体检测方法。本研究建立的间接ELISA检测方法的最适抗原包被浓度为2μg/mL,5%脱脂乳的PBST作为封闭液37℃孵育1 h,待检血清的最适稀释度为1∶500,兔抗猪Ig G-HRP稀释度为1∶10000,最佳显色时间为10 min。当检测样品的S/P值<0.201时,样品检测结果为阴性;当检测样品的S/P值≥0.201时,结果为阳性。利用该方法检测SVA,猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪瘟病毒(CSFV)等阳性血清,结果显示,除SVA检测为阳性外,其他病毒均为阴性,特异性较强。将SVA阳性血清2倍倍比稀释(1∶50,1∶100,1∶200,1∶400,1∶800,1∶1600)后经该间接ELISA方法检测,评估其敏感性,结果显示,SVA阳性小鼠血清在1∶800稀释后检测结果仍为阳性,敏感性较高。将同一批次和不同批次纯化的r VP2包被ELISA板,按照该ELISA方法检测8份猪SVA阳性血清,评估该方法的重复性。结果显示,批内、批间重复性试验的变异系数均小于10%,该方法重复性好。利用本实验建立的间接ELISA方法与血清中和试验同时对266份临床血清样品检测,结果显示,本研究建立方法检测的样品阳性率为19.1%,中和试验检测的样品阳性率为19.55%,两种方法检测结果符合率为97.7%。本研究首次基于SVA r VP2建立的间接ELISA方法操作简单、特异性强、敏感性高、重复性好,为SVA的检测和其感染的防控提供了可靠的技术支持。 展开更多

关键词 猪 A型塞内卡病毒 VP2 间接ELISA

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猪繁殖与呼吸综合征病毒M基因的截短表达及胶体金免疫层析法的建立

11

作者 胡冉冉 赵云环 +4 位作者 刘莹 张帅 郭禹 左玉柱 范京惠 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2023年第6期94-100,共7页

为建立一种快速、便捷的检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体的胶体金免疫层析方法,本试验通过原核表达截短的M基因作为检测线,葡萄球菌A蛋白(SPA)和鸡抗SPA作为金标抗原和质控线。结果显示,该试纸条与猪伪狂犬病毒(PRV)、猪传染性... 为建立一种快速、便捷的检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体的胶体金免疫层析方法,本试验通过原核表达截短的M基因作为检测线,葡萄球菌A蛋白(SPA)和鸡抗SPA作为金标抗原和质控线。结果显示,该试纸条与猪伪狂犬病毒(PRV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪圆环病毒2型(PCV2),均不存在交叉反应,特异性强;最低检测限度为1∶6400,灵敏性高;批间、批内无差异性;4℃可保存30 d,稳定性好;临床样品检测结果与爱德士试剂盒符合率达到94.82%。综上所述,本试验建立了一种敏感性高、特异性好的PRRSV抗体检测的免疫层析试纸条,为PRRSV的监测、预防及诊断提供了技术支持。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 M基因 原核表达 胶体金免疫层析法

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戊二醛癸甲溴铵弥雾方式对3种病原的消毒试验

12

作者 刘濮毓 王文钊 +6 位作者 张帅 李思琪 刘莹 赵云环 王荣申 范京惠 左玉柱 《中国动物检疫》 CAS 2023年第5期115-120,共6页

为探究戊二醛癸甲溴铵弥雾方式对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪链球菌、猪大肠杆菌的临床消毒效果,以实验室条件模拟临床中戊二醛癸甲溴铵弥雾消毒方式,将戊二醛癸甲溴铵和悬浮增效剂以弥雾形式喷雾到所消毒的空间内,对涂布了PRRS... 为探究戊二醛癸甲溴铵弥雾方式对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪链球菌、猪大肠杆菌的临床消毒效果,以实验室条件模拟临床中戊二醛癸甲溴铵弥雾消毒方式,将戊二醛癸甲溴铵和悬浮增效剂以弥雾形式喷雾到所消毒的空间内,对涂布了PRRSV的培养皿和接种猪链球菌、猪大肠杆菌的血清培养基进行消毒,消毒后将培养皿内病毒洗脱后接种于Marc-145细胞,血清培养基放置在适宜环境培养,观察细胞病变和细菌生长情况,以此判断消毒效果。结果显示:戊二醛癸甲溴铵在空间浓度为2.1 mL/m^(3),消毒时间为30 min时,对PRRSV有一定的消毒作用;当空间浓度为3.5 mL/m^(3),消毒时间为60 min时,可对PRRSV完全灭活;空间浓度为2.1 mL/m^(3),消毒时间为50 min时,对猪链球菌可完全灭活,消毒时间为35 min时,对大肠杆菌可完全灭活。结果表明,戊二醛癸甲溴铵弥雾消毒方式对PRRSV、猪链球菌和猪大肠杆菌有着良好的消毒效果,可应用于猪场日常空舍消毒,对猪场生物安全防控具有重要意义。 展开更多

关键词 戊二醛癸甲溴铵 猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪链球菌 猪大肠杆菌

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泰万菌素对猪繁殖与呼吸综合征的防控效果试验 被引量：4

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作者 张帅 刘媛 +4 位作者 王迈 谷建辉 赵云环 刘莹 左玉柱 《中国动物检疫》 CAS 2022年第4期113-119,共7页

为检验泰万菌素对猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的防控效果,用2种泰万菌素制品(A、B)和黄芪多糖饲喂妊娠母猪,通过统计临床生产指标、母猪和仔猪抗体水平、病毒检出率以及细胞因子IL-2、IFN-γ表达水平等,综合评价泰万菌素的PRRS防控效果。... 为检验泰万菌素对猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的防控效果,用2种泰万菌素制品(A、B)和黄芪多糖饲喂妊娠母猪,通过统计临床生产指标、母猪和仔猪抗体水平、病毒检出率以及细胞因子IL-2、IFN-γ表达水平等,综合评价泰万菌素的PRRS防控效果。结果显示:泰万菌素的PRRS防控效果明显优于黄芪多糖,其中泰万菌素A、B组母猪的产健仔率由试验前的84.98%分别提高到94.44%、91.89%,产弱胎、死胎或木乃伊胎率相应降低;泰万菌素A、B组母猪流产率降低,体内抗体下降速率减缓,所产仔猪抗体稳定性和整齐度提高,母猪血液中的PRRS病原检出率和浓度降低,IL-2表达水平下降,IFN-γ表达水平上升。结果表明,泰万菌素可降低妊娠母猪因PRRS造成的繁殖障碍率,同时可通过调控细胞因子水平增强机体免疫力,从而起到防控PRRS的作用。本研究为PRRS防控提供了一种新思路。 展开更多

关键词 泰万菌素 猪繁殖与呼吸综合征 黄芪多糖 妊娠母猪 细胞因子

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基于ASFV EP402R编码蛋白CD2v的生物信息学分析

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作者 张帅 顾文源 +3 位作者 赵云环 刘莹 左玉柱 范京惠 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期92-98,共7页

为深入了解非洲猪瘟病毒(ASFV)的EP402R编码蛋白CD2v结构与功能的关系和病毒-宿主作用机制,本研究通过在线工具对Pig/HLJ/2018中国分离株CD2v蛋白进行了遗传进化和生物信息学分析。结果显示:Pig/HLJ/2018株与格鲁吉亚Georgia 2007、Geor... 为深入了解非洲猪瘟病毒(ASFV)的EP402R编码蛋白CD2v结构与功能的关系和病毒-宿主作用机制,本研究通过在线工具对Pig/HLJ/2018中国分离株CD2v蛋白进行了遗传进化和生物信息学分析。结果显示:Pig/HLJ/2018株与格鲁吉亚Georgia 2007、Georgia 2008以及其他中国毒株处于同一分支,基因型同为Ⅱ型;同一基因型CD2v蛋白氨基酸序列一致性高达100%,不同基因型间蛋白氨基酸序列表现出差异,氨基酸一致性在76.8%~81.7%之间;该CD2v蛋白表达的蛋白大小为41.00889 kD;蛋白结构主要以无规卷曲为主;存在信号肽和跨膜区;存在4个优势B细胞表位和5个T细胞表位。结果表明:当前中国流行株为基因Ⅱ型;CD2v蛋白在ASFV入侵机体、免疫逃逸等过程中扮演重要角色,为ASFV的深入研究和ASF的防治奠定了基础。 展开更多

关键词 非洲猪瘟 CD2v 作用机制 生物信息学

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芪板青颗粒体外抗PRRSV效果研究

15

作者 刘斌 张帅 +4 位作者 刘濮毓 赵云环 王荣申 范京惠 左玉柱 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期99-104,F0003,共7页

为了检验芪板青颗粒体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒效果,降低养猪场因感染猪繁殖与呼吸综合征病毒带来的损失,本试验通过调整芪板青颗粒溶液与猪繁殖与呼吸综合征病毒液加到Marc-145细胞中的不同顺序,分别检验芪板青颗粒对猪繁殖与呼吸... 为了检验芪板青颗粒体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒效果,降低养猪场因感染猪繁殖与呼吸综合征病毒带来的损失,本试验通过调整芪板青颗粒溶液与猪繁殖与呼吸综合征病毒液加到Marc-145细胞中的不同顺序,分别检验芪板青颗粒对猪繁殖与呼吸综合征病毒的抑制、杀灭和阻断作用。结果显示:芪板青颗粒对猪繁殖与呼吸综合征病毒有一定的抑制、杀灭和阻断作用,在芪板青溶液浓度为24.4~3125.0 mg/L时,有显著的抑制和杀灭猪繁殖与呼吸综合征病毒作用,在浓度195.3~3125.0 mg/L时,有显著的阻断猪繁殖与呼吸综合征病毒作用。结果表明:芪板青颗粒可用于体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒,本试验为芪板青颗粒的应用提供了依据,为猪繁殖与呼吸综合征的防治提供了帮助。 展开更多

关键词 芪板青颗粒 猪繁殖与呼吸综合征 MARC-145细胞

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河北省猪星状病毒4型全基因组测定及遗传进化分析

16

作者 王晶 陈少杰 +6 位作者 张帅 刘莹 赵云环 王传文 李妍 左玉柱 范京惠 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期10-15,共6页

为了解河北省流行的猪星状病毒(PAstV)遗传特性和重组现象,设计了7对特异性扩增引物,利用RT-PCR方法进行全基因组序列扩增;应用DNAStar软件和MEGA 7.0软件对扩增得到的序列进行拼接和核苷酸同源性分析,并建立基于全基因组和ORF2基因的... 为了解河北省流行的猪星状病毒(PAstV)遗传特性和重组现象,设计了7对特异性扩增引物,利用RT-PCR方法进行全基因组序列扩增;应用DNAStar软件和MEGA 7.0软件对扩增得到的序列进行拼接和核苷酸同源性分析,并建立基于全基因组和ORF2基因的系统进化树;利用生物学分析软件对全基因组序列结构特点和重组现象进行分析。结果显示,成功扩增得到1株PAstV4 HB-SJZ全基因组序列;全基因组遗传分析显示,HB-SJZ株与PAstV4参考毒株同源性显著高于其他基因型毒株,为74.2%~81.0%,与匈牙利4型毒株WBAstV-1同源性最高(81.0%);基于ORF2基因分析显示,HB-SJZ株与PAstV4参考毒株同源性为64.8%~68.9%,与日本毒株PoAstV-VIRES-GX03-C3遗传关系最近(68.9%);重组分析显示,HB-SJZ株的ORF1基因与JPN Bu52014株和JPN Mol2-32015株存在重组现象。这一研究提示河北省流行的PAstV4是同物种重组毒株,为该病的流行病学调查提供科学依据,也为该病的防控提供理论基础。 展开更多

关键词 猪星状病毒 全基因组 遗传进化分析 基因重组分析

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猪丁型冠状病毒可视化LAMP检测方法的建立与应用 被引量：7

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作者 赵云环 罗尚星 +5 位作者 顾文源 刘涛 刘莹 郭禹 左玉柱 范京惠 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期19-24,共6页

为建立一种简单、快捷,适用于基层检测猪丁型冠状病毒(PDCo V)的方法,根据Gen Bank上登录的PDCo V N基因的保守序列设计了1组环介导等温扩增(LAMP)引物,以重组质粒p MD19-T-N为模板、羟基萘酚蓝为显色剂,优化反应条件及体系,并检测该方... 为建立一种简单、快捷,适用于基层检测猪丁型冠状病毒(PDCo V)的方法,根据Gen Bank上登录的PDCo V N基因的保守序列设计了1组环介导等温扩增(LAMP)引物,以重组质粒p MD19-T-N为模板、羟基萘酚蓝为显色剂,优化反应条件及体系,并检测该方法的特异性及灵敏度。结果显示,该方法与猪流行性腹泻病毒、猪博卡病毒、猪传染性胃肠炎病毒、伪狂犬病病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型均无交叉反应,且最低检测量为5.1×10^(1)copies/μL。进一步对本实验室2016年至2019年在河北保定收集的95份临床样品进行检测,LAMP检测结果与普通RT-PCR检测结果的符合度高,检测时间为1 h。结果表明,本研究中建立的LAMP检测方法简便、特异、灵敏、快速,有望在PDCo V的临床检测中发挥重要作用。 展开更多

关键词 猪丁型冠状病毒 环介导等温扩增 可视化 羟基萘酚蓝 检测

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非洲猪瘟病毒研究进展 被引量：4

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作者 张帅 刘媛 +3 位作者 赵云环 刘莹 左玉柱 范京惠 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第12期2569-2577,共9页

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)感染引起的猪的一种高度接触性、致死性传染病,病死率可达100%,世界动物卫生组织(OIE)将其列为必须报告的疫病,在我国被列为一类动物疫病。因ASFV... 非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)感染引起的猪的一种高度接触性、致死性传染病,病死率可达100%,世界动物卫生组织(OIE)将其列为必须报告的疫病,在我国被列为一类动物疫病。因ASFV具有庞大的基因组和复杂的免疫逃逸机制,给疫苗的研发带来了困难,目前尚无商品化的疫苗用于本病的防制。为了更深入地了解ASFV,加快ASF疫苗的研发进程,做到对ASF的有效防制,重点对ASFV基础病毒学的最新研究发现与成果进行综述,主要集中在ASFV的蛋白质功能与作用机制、诊断方法以及疫苗的开发进展方面,以期为ASF的有效防制奠定基础。 展开更多

关键词 非洲猪瘟病毒 蛋白功能 诊断方法 非洲猪瘟疫苗

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基于PRRSV ORF5基因TaqMan qPCR检测方法的建立及遗传变异分析 被引量：3

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作者 张帅 赵云环 +5 位作者 刘莹 翟刚 郭禹 刘涛 左玉柱 范京惠 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期1122-1130,共9页

为了快速、高效、准确地检出猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),并进一步了解河北部分地区的流行毒株遗传变异情况,本研究根据PRRSV经典、高致病性和NADC30代表毒株ORF5基因保守序列设计特异性引物和探针,建立了一种通用型TaqMan qPCR检测... 为了快速、高效、准确地检出猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),并进一步了解河北部分地区的流行毒株遗传变异情况,本研究根据PRRSV经典、高致病性和NADC30代表毒株ORF5基因保守序列设计特异性引物和探针,建立了一种通用型TaqMan qPCR检测方法以实现对猪场的全面筛查,并对筛查出的阳性样品ORF5基因扩增测序后进行遗传进化分析。结果显示:该方法与PRV、PCV2、PEDV、CSFV、TGEV、RV均无交叉反应,特异性强;对重组质粒pMD19T-PRRSV标准品的最低检测下限为2.19×10^(1)拷贝/μL,敏感性高;组内和组间变异系数均小于1%,重复性好;在临床样品检测中较普通PCR有更高的检出率;扩增出的5株PRRSV流行毒株均为美洲型毒株,5株PRRSV流行毒株之间核苷酸序列同源性为82.9%~99.8%,氨基酸序列同源性为82.1%~99.0%;氨基酸序列与国内外已报道的代表株相比在GP5抗原表位及高变区分别存在着不同的差异。结果表明:河北部分地区当前流行毒株复杂多样,优势毒株正从高致病性毒株逐步向NADC30类毒株过渡,提示持续监测PRRSV流行毒株变异动态的必要性,为PRRSV的防控、临床诊断及掌握遗传变异规律提供依据。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 ORF5基因 TaqMan qPCR 遗传变异分析

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河北部分地区猪圆环病毒2型分离鉴定及遗传变异分析 被引量：2

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作者 赵云环 赵强 +4 位作者 刘莹 张帅 郭禹 左玉柱 范京惠 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期853-861,共9页

为了解河北省猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)基因型感染及遗传变异情况,对采自河北省6个不同地区的32份疑似PCV2感染的组织通过PCR进行初步鉴定,并将鉴定为阳性的组织通过接种PK-15细胞分离病毒,通过PCR、间接免疫荧光... 为了解河北省猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)基因型感染及遗传变异情况,对采自河北省6个不同地区的32份疑似PCV2感染的组织通过PCR进行初步鉴定,并将鉴定为阳性的组织通过接种PK-15细胞分离病毒,通过PCR、间接免疫荧光、透射电镜对分离的病毒进行鉴定,利用特异性引物对PCV2进行PCR全基因序列扩增,测序后进行全基因及ORF2基因核苷酸序列分析。结果显示,32份疑似样品中有13份PCV2阳性组织,阳性率为40.65%。对其中1份仅感染PCV2的样品进行病毒的细胞分离及后续鉴定,得到1株可稳定感染和增殖的PCV2毒株。将初步筛选的阳性组织进行PCV2全基因扩增并测序,得到8株PCV2全基因序列,基因组全长均为1768 bp;8株PCV2全基因同源性比对结果为95%~99.8%,ORF2同源性比对结果为94%~100%;遗传进化分析显示,8个分离株归属于3个基因亚型(PCV2a、PCV2b和PCV2d),同源性氨基酸序列分析显示主要变异区在47~63 aa抗原表位区。本试验结果为进一步研究该地区PCV2分子流行病学及相关疾病的免疫防控奠定了基础。 展开更多

关键词 猪圆环病毒2型 分离鉴定 遗传进化分析

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