IL-21 gpi和sGM-CSF共同修饰的瘤苗构建及其抗肿瘤效应 被引量：4

1

作者 赵枫姝 胡卫华 +5 位作者 窦骏 褚莉莉 何向锋 余方流 吴昀 刘春生 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期508-512,共5页

目的:构建膜锚定IL-21和分泌性GM-CSF(sGM-CSF)双表达瘤苗,并对其抗肿瘤效应及其机制作初步探讨。方法:用分子生物学方法构建双表达IL-21 gpi和sGM-CSF重组质粒,将鉴定过的重组质粒以脂质体转染B16F10细胞制成瘤苗,用流式细胞仪检测转... 目的:构建膜锚定IL-21和分泌性GM-CSF(sGM-CSF)双表达瘤苗,并对其抗肿瘤效应及其机制作初步探讨。方法:用分子生物学方法构建双表达IL-21 gpi和sGM-CSF重组质粒,将鉴定过的重组质粒以脂质体转染B16F10细胞制成瘤苗,用流式细胞仪检测转染瘤苗IL-21 gpi和sGM-CSF的表达。以瘤苗治疗荷瘤鼠,经观察小鼠肿瘤体积、生存率来分析瘤苗的抗瘤性,并检测了瘤苗治疗鼠的细胞免疫活性。结果:正确构建了pRSC/IL-21 gpi-sGM-CSF重组质粒,转染细胞可很好地表达膜锚定IL-21和分泌性GM-CSF,制备的瘤苗能有效地发挥抗肿瘤效应,其机制与瘤苗治疗鼠的脾细胞增殖活性、NK细胞及CD8+细胞细胞毒活性增强有关。结论:成功构建了具有抗肿瘤活性的膜锚定IL-21和分泌性GM-CSF双表达瘤苗,为进一步抗肿瘤免疫治疗研究奠定了基础。 展开更多

关键词 瘤苗 IL-21 GPI GM-CSF

下载PDF 职称材料

肿瘤抗原P1A与细胞因子mGM-CSF共表达载体的构建和表达 被引量：5

2

作者 赵枫姝 陈峻崧 +3 位作者 房雪峰 陈国兵 洪晓武 窦骏 《东南大学学报（医学版）》 CAS 2004年第3期184-188,共5页

目的 :构建并鉴定细胞因子mGM CSF和肿瘤特异抗原P1A共表达载体 ,为研究新型的肿瘤疫苗提供新的策略。方法 :以PCR方法从pCI neo P1A中扩增出P1A编码基因片段 ,构建于pRSC质粒上 ;再从pORF mGM CSF中扩增出mGM CSF基因片段 ,插入pRSC P1... 目的 :构建并鉴定细胞因子mGM CSF和肿瘤特异抗原P1A共表达载体 ,为研究新型的肿瘤疫苗提供新的策略。方法 :以PCR方法从pCI neo P1A中扩增出P1A编码基因片段 ,构建于pRSC质粒上 ;再从pORF mGM CSF中扩增出mGM CSF基因片段 ,插入pRSC P1A重组质粒P1A基因的上游。以酶切和DNA测序进行鉴定。并将鉴定过的重组质粒以脂质体法转染 772 1细胞 ,用RT PCR法鉴定转染细胞中P1A基因和mGM CSF基因的表达。结果 :经酶切鉴定和DNA测序证实mGM CSF和P1A重组质粒构建正确 ,并在转染此质粒的 772 1细胞中检测出了P1A和mGM CSF基因的表达。结论 :成功构建mGM CSF和P1A的共表达载体 。 展开更多

关键词 肿瘤抗原P1A 细胞因子 MGM-CSF 表达载体 肿瘤疫苗

下载PDF 职称材料

免疫平衡的重要调节者白细胞介素-21 被引量：2

3

作者 赵枫姝 窦骏 《生物技术通讯》 CAS 2008年第5期715-717,共3页

白细胞介素-21(IL-21)是γc家族的一个新成员,主要由活化的CD4+ T细胞产生,对多种表达IL-21受体(IL-21R)的细胞如T细胞、B细胞、NK细胞及DC细胞等均有作用。近年发现IL-21与Th细胞系中新发现的分支Th17细胞的发生密切相关,在调节CD4+ T... 白细胞介素-21(IL-21)是γc家族的一个新成员,主要由活化的CD4+ T细胞产生,对多种表达IL-21受体(IL-21R)的细胞如T细胞、B细胞、NK细胞及DC细胞等均有作用。近年发现IL-21与Th细胞系中新发现的分支Th17细胞的发生密切相关,在调节CD4+ T细胞究竟是分化为Th17细胞还是CD4+CD25+Foxp3+ Treg细胞中有"开关"作用,从而对免疫系统发挥重要的调节作用,在自身免疫性疾病和抗肿瘤免疫中扮演着重要的角色。简要综述了IL-21与Th17细胞、CD4+CD25+Foxp3+ Treg细胞之间的关系及对免疫平衡的调节作用。 展开更多

关键词 白细胞介素-21 TH17细胞 TREG细胞 免疫平衡 自身免疫 抗肿瘤免疫

下载PDF 职称材料

Tutor培训对医学院教师成长发展的促进作用

4

作者 赵枫姝 季红 +7 位作者 唐秋莎 谢波 花菊兰 董榕 李新荣 曾水林 张建琼 王立新 《西北医学教育》 2016年第4期580-582,585,共4页

研讨型教学已成为我国医学院医学教学改革的主要内容。东南大学医学院自2011年起在本科教育中逐步开展研讨型教学改革,包括PBL、CBL和RBL,并建立了完整的Tutor培训与评估体系,为医学教学改革提供了有力保障。学院在Tutor培训与评估体系... 研讨型教学已成为我国医学院医学教学改革的主要内容。东南大学医学院自2011年起在本科教育中逐步开展研讨型教学改革,包括PBL、CBL和RBL,并建立了完整的Tutor培训与评估体系,为医学教学改革提供了有力保障。学院在Tutor培训与评估体系的建立及教师的发展成长方面积累了一定经验,本文就此作一初步探讨,以期为我国的医学教师发展提供借鉴。 展开更多

关键词 医学教育 研讨型教学 PBL Tutor培训 教师发展与成长

下载PDF 职称材料

mIL-21基因转染的Sp2/0瘤苗细胞的抗肿瘤机制探讨 被引量：5

5

作者 褚莉莉 窦骏 +4 位作者 赵枫姝 唐权 张爱凤 王永仿 顾宁 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期507-510,共4页

目的:探讨小鼠IL-21瘤苗-Sp2/0-mIL-21抗肿瘤效应的机制。方法:用流式细胞术检测Sp2/0-mIL-2瘤苗细胞表面MHC-Ⅰ类分子及CD80分子的表达。以瘤苗细胞接种BALB/c小鼠,以CFSE,7-AAD标记,用流式细胞术检测NK细胞、CTL的细胞毒活性。观察肿... 目的:探讨小鼠IL-21瘤苗-Sp2/0-mIL-21抗肿瘤效应的机制。方法:用流式细胞术检测Sp2/0-mIL-2瘤苗细胞表面MHC-Ⅰ类分子及CD80分子的表达。以瘤苗细胞接种BALB/c小鼠,以CFSE,7-AAD标记,用流式细胞术检测NK细胞、CTL的细胞毒活性。观察肿瘤组织中淋巴细胞的浸润。用RT-PCR检测肿瘤组织中CXC家族趋化因子I-TAC的表达。结果:与对照组相比,瘤苗细胞膜表面MHC-Ⅰ类分子的表达明显上调。瘤苗接种组小鼠NK细胞、CTL的细胞毒活性明显增强。病理分析发现,肿瘤组织中有较多的淋巴细胞浸润并检测到干扰素诱导的T细胞α趋化因子(I-TAC)的表达上调。结论:肿瘤细胞瘤苗Sp2/0-mIL21可增强小鼠的细胞免疫作用,其抗肿瘤机制可能与T细胞的增殖、活化,促进NK细胞的分化成熟,淋巴细胞向肿瘤组织浸润,以及增强NK细胞和CTL的细胞毒活性有关。 展开更多

关键词 白细胞介素-21 瘤苗 羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE) 7-氨基放线菌素D(7-AAD) 干扰素诱导的T细胞α趋化因子(I-TAC) 抗肿瘤机制

原文传递

B16F10/ESAT-6-GPI-IL-21瘤苗安全性及抗肿瘤效应研究 被引量：4

6

作者 何向锋 王净 +6 位作者 余方流 赵枫姝 蔡凯 张洪义 陈峻崧 陈登宇 窦骏 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期779-782,共4页

目的:评估B16F10/ESAT-6-GPI-IL-21瘤苗用于C57BL/6小鼠的安全性及其诱导的抗肿瘤免疫效应。方法:应用免疫荧光、FCM检测瘤苗细胞ESAT-6-GPI的表达情况;以Western blot方法检测瘤苗细胞IL-21的表达情况;动物实验检测瘤苗体内应用的安全... 目的:评估B16F10/ESAT-6-GPI-IL-21瘤苗用于C57BL/6小鼠的安全性及其诱导的抗肿瘤免疫效应。方法:应用免疫荧光、FCM检测瘤苗细胞ESAT-6-GPI的表达情况;以Western blot方法检测瘤苗细胞IL-21的表达情况;动物实验检测瘤苗体内应用的安全性;制备荷瘤鼠术后免疫模型,评价瘤苗免疫效果。结果:B16F10/ESAT-6-GPI-IL-21瘤苗细胞表面有靶抗原ESAT-6-GPI表达,并分泌IL-21。于C57BL/6小鼠皮下接种2×105个B16F10/ESAT-6-GPI-IL-21瘤苗细胞,60天内未见致瘤,但能够诱导小鼠产生有效的抗肿瘤免疫效应。结论:B16F10/ESAT-6-GPI-IL-21瘤苗致瘤性明显下降,低剂量应用具有安全性,能够诱导小鼠产生有效的抗肿瘤免疫效应。 展开更多

关键词 B16F10细胞 IL-21 ESAT-6 GPI 肿瘤疫苗

下载PDF 职称材料

结核杆菌Ag85A和mGM-CSF共同表达载体的构建与CTL活性的诱导 被引量：5

7

作者 陈峻崧 窦骏 +4 位作者 赵枫姝 陈国兵 房雪峰 洪晓武 唐权 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期399-403,共5页

构建、鉴定结核杆菌Ag85A和细胞因子GM CSF共同表达质粒 ,为研究新型抗结核杆菌DNA疫苗提供新的策略。先从质粒pBSby5中扩增出结核杆菌Ag85A基因序列并插入到质粒pIRES上成为pI85A ,用PCR方法从pc mGM CSF质粒中扩增出mGM CSF ,构建于pI... 构建、鉴定结核杆菌Ag85A和细胞因子GM CSF共同表达质粒 ,为研究新型抗结核杆菌DNA疫苗提供新的策略。先从质粒pBSby5中扩增出结核杆菌Ag85A基因序列并插入到质粒pIRES上成为pI85A ,用PCR方法从pc mGM CSF质粒中扩增出mGM CSF ,构建于pI85A质粒上 ,成为共同表达质粒pI85AGM。然后转染 772 1细胞 ,进行蛋白的表达和鉴定。结果经酶切鉴定和DNA测序证实重组质粒构建正确。通过RT PCR、SDS PAGE、Westernblot检测证实Ag85A与mGM CSF基因的转录和蛋白表达正确。Ag85A与mGM CSF免疫组小鼠的CTL活性明显增强。表明细胞因子GM CSF和结核杆菌Ag85A共同表达载体构建成功 ,并能诱导小鼠的CTL活性 。 展开更多

关键词 结核杆菌 GM-CSF 抗原85A 重组质粒 基因疫苗

下载PDF 职称材料

探讨BCG初次免疫结核杆菌DNA疫苗加强免疫方案的效应 被引量：2

8

作者 唐权 窦骏 +3 位作者 赵枫姝 禇莉莉 潘猛 王永仿 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期591-594,共4页

目的:探讨BCG初次免疫(BCG-prime),结核杆菌共表达DNA疫苗加强免疫(DNA疫苗-boost)的策略对小鼠的免疫效果。方法:将BCG及结核杆菌重组DNA疫苗依次免疫小鼠,通过检测CTL和NK细胞的杀伤活性和特异性淋巴细胞增殖,以及小鼠血清抗体及细胞... 目的:探讨BCG初次免疫(BCG-prime),结核杆菌共表达DNA疫苗加强免疫(DNA疫苗-boost)的策略对小鼠的免疫效果。方法:将BCG及结核杆菌重组DNA疫苗依次免疫小鼠,通过检测CTL和NK细胞的杀伤活性和特异性淋巴细胞增殖,以及小鼠血清抗体及细胞因子的水平,观测BCG-prime、共表达结核杆菌Ag85A/GM-CSFDNA疫苗boost策略对小鼠的免疫效果。结果:采用prime-boost免疫策略组的小鼠CTL的杀伤活性明显增强、特异性淋巴细胞明显增殖、IFN-γ的水平明显增高,NK细胞杀伤活性与对照组相比也有一定提高,但未超过BCG单独免疫效果。免疫小鼠血清特异性抗体的滴度超过单独DNA疫苗免疫组。结论:在采用BCG-prime-结核杆菌DNA疫苗boost免疫策略后,能增强对小鼠的免疫效应,尤其是Th1型细胞免疫反应增强明显,为进一步在动物体内进行保护性效应试验的研究提供了实验依据。 展开更多

关键词 结核杆菌 抗原85A BCG DNA疫苗 prime-boost免疫策略

原文传递

GPI修饰的ESAT-6核酸疫苗的构建及其免疫功能初探 被引量：2

9

作者 何向锋 王净 +6 位作者 余方流 赵枫姝 张洪义 陈峻崧 陈登宇 曹文虎 窦骏 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期737-740,746,共5页

目的构建糖基化磷脂酰肌醇(GPI)修饰的结核杆菌早期分泌性抗原靶(ESAT-6)核酸疫苗,初步分析其免疫功能。方法利用重叠PCR法构建pIRES-ESAT-6-gpi重组体,转染B16F10细胞,G418筛选阳性克隆,用RT-PCR、免疫荧光检测转染细胞的ESAT-6抗原表... 目的构建糖基化磷脂酰肌醇(GPI)修饰的结核杆菌早期分泌性抗原靶(ESAT-6)核酸疫苗,初步分析其免疫功能。方法利用重叠PCR法构建pIRES-ESAT-6-gpi重组体,转染B16F10细胞,G418筛选阳性克隆,用RT-PCR、免疫荧光检测转染细胞的ESAT-6抗原表达情况;采集ESAT-6核酸疫苗免疫鼠血清,分别检测抗体滴度和CDC效应,免疫磁珠法分选CD4+和CD8+T细胞,CFSE/7-AAD细胞毒实验分析CTL细胞毒活性。结果测序正确的重组体pIRES-ESAT-6-gpi转染细胞后,ESAT-6表达于细胞膜表面。ESAT-6核酸疫苗免疫血清和CD8+T细胞分别通过CDC效应和细胞毒作用杀伤膜表达ESAT-6的B16F10细胞。结论构建的GPI修饰的ESAT-6核酸疫苗能够诱导免疫鼠产生体液和细胞免疫反应,杀伤膜表达ESAT-6的B16F10细胞,为进一步基于该法构建B16F10瘤苗的抗肿瘤免疫效应及机制研究奠定了基础。 展开更多

关键词 B16F10 ESAT-6 GPI 核酸疫苗

原文传递

基于“Ladder to Top”教育理念的卓越医生培养模式的思考与探索 被引量：11

10

作者 王立新 唐秋莎 +4 位作者 谢波 季红 赵枫姝 胡向阳 花菊兰 《中国高等医学教育》 2015年第9期16-17,134,共3页

自卓越医生教育培养计划实施以来,国内各医学院校均积极开展医学教学改革。东南大学作为教育部第一批卓越医生教育培养计划项目试点高校,从医学教育模式、培养体系和实践途径等方面进行了思考,提出了"遵循生命轨迹、构筑卓越之梯-L... 自卓越医生教育培养计划实施以来,国内各医学院校均积极开展医学教学改革。东南大学作为教育部第一批卓越医生教育培养计划项目试点高校,从医学教育模式、培养体系和实践途径等方面进行了思考,提出了"遵循生命轨迹、构筑卓越之梯-Ladder to Top"的教育理念,为开展卓越医生教育培养计划提供了理论基础。 展开更多

关键词 卓越医师 医学教育 培养模式 临床医学 生命轨迹

下载PDF 职称材料

无血清培养的SP2/0细胞肿瘤学特性的研究 被引量：6

11

作者 李雅婷 窦骏 +4 位作者 赵枫姝 潘猛 王永仿 曹明刚 文萍 《生物技术通讯》 CAS 2008年第1期20-23,共4页

目的:研究无血清培养条件下SP2/0细胞的相关肿瘤学特性。方法:应用MTT法检测用无血清培养所得的SP2/0细胞的增殖能力及这些细胞中SP细胞的比例,并检测它们的体内致瘤性。结果:SP2/0细胞在无血清培养基中增殖缓慢,但当把它们放回含血清... 目的:研究无血清培养条件下SP2/0细胞的相关肿瘤学特性。方法:应用MTT法检测用无血清培养所得的SP2/0细胞的增殖能力及这些细胞中SP细胞的比例,并检测它们的体内致瘤性。结果:SP2/0细胞在无血清培养基中增殖缓慢,但当把它们放回含血清培养中,则表现出比普通培养的SP2/0细胞有更高的增殖能力;无血清培养可以使SP2/0细胞中的SP细胞比例增加;无血清培养的SP2/0细胞比普通培养的SP2/0细胞在鼠体内有更高的体内致瘤性。结论:无血清培养可以增加SP2/0细胞中具有干细胞特性的瘤细胞比例,即可以富集SP2/0细胞的肿瘤干细胞。 展开更多

关键词 无血清培养 增殖能力 SP细胞 肿瘤干细胞

下载PDF 职称材料

mIL-21基因治疗小鼠肿瘤及其机制的初步研究 被引量：2

12

作者 陈国兵 窦骏 +3 位作者 赵枫姝 陈峻崧 褚莉莉 唐权 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期126-130,共5页

建立小鼠Sp2/0皮下肿瘤模型,以我们构建并鉴定过的真核表达质粒peDNA3.1/mIL-21在瘤体内直接注射,考察mIL-21基因治疗对小鼠Sp2/0肿瘤的疗效。结果显示pcDNA3.1/mIL-21质粒治疗对小鼠皮下Sp2/0肿瘤有一定的生长抑制作用,CTL和NK细胞毒... 建立小鼠Sp2/0皮下肿瘤模型,以我们构建并鉴定过的真核表达质粒peDNA3.1/mIL-21在瘤体内直接注射,考察mIL-21基因治疗对小鼠Sp2/0肿瘤的疗效。结果显示pcDNA3.1/mIL-21质粒治疗对小鼠皮下Sp2/0肿瘤有一定的生长抑制作用,CTL和NK细胞毒活性明显增强,IFN-γ分泌升高显著,但抗体无明显升高。表明mIL-21基因治疗的抗肿瘤效应,可能和细胞免疫功能增强有关。 展开更多

关键词 白细胞介素21 肿瘤 基因治疗 CTL NK

下载PDF 职称材料

mGM-CSF重组质粒的构建、表达及活性鉴定 被引量：3

13

作者 洪晓武 窦骏 +2 位作者 陈国兵 陈峻崧 赵枫姝 《实用癌症杂志》 2004年第1期9-12,共4页

目的　构建pc mGM CSF重组质粒载体 ,为mGM CSF基因治疗肿瘤的研究奠定基础。方法　采用RT PCR方法从小鼠脾脏中获得目的基因mGM CSF ,克隆于 pcDNA3 .1/Myc His( -) (A )质粒上 ,成为pc mGM CSF ,用PCR、酶切进行鉴定 ,然后用脂质... 目的　构建pc mGM CSF重组质粒载体 ,为mGM CSF基因治疗肿瘤的研究奠定基础。方法　采用RT PCR方法从小鼠脾脏中获得目的基因mGM CSF ,克隆于 pcDNA3 .1/Myc His( -) (A )质粒上 ,成为pc mGM CSF ,用PCR、酶切进行鉴定 ,然后用脂质体转染小鼠骨髓瘤细胞SP2 / 0 ,用G 418筛选后通过RT PCR和SDS PAGE鉴定 ,将转染SP2 / 0上清加入NFS 60细胞 ,检测蛋白活性。结果　重组质粒中含有mGM CSF基因 ,在SP2 / 0中有表达 ,且表达产物能分泌到肿瘤细胞外 ,分泌到细胞外的产物用mGM CSF依赖株NFS 60细胞检测证明具有生物学活性。结论　成功构建含mGM CSF真核表达重组质粒 。 展开更多

关键词 mGM—CSF 重组质粒 表达 活性鉴定 基因治疗 粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 肿瘤

下载PDF 职称材料

米托蒽醌处理B16F10-ESAT-6-gpi/IL-21瘤苗特征及其诱导的抗肿瘤免疫反应初探 被引量：1

14

作者 何向锋 施文 +5 位作者 赵枫姝 谭清和 王建红 陈登宇 曹文虎 窦骏 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期464-468,共5页

背景与目的:蒽环类药物处理可使肿瘤细胞免疫原性增加。本文旨在分析米托蒽醌(mitoxantrone,MIT)处理的B16F10-ESAT-6-gpi/IL-21瘤苗特征,初步探讨该瘤苗诱导的抗肿瘤免疫反应。方法:MIT处理B16F10-ESAT-6-gpi/IL-21瘤苗后,用吖啶橙/嗅... 背景与目的:蒽环类药物处理可使肿瘤细胞免疫原性增加。本文旨在分析米托蒽醌(mitoxantrone,MIT)处理的B16F10-ESAT-6-gpi/IL-21瘤苗特征,初步探讨该瘤苗诱导的抗肿瘤免疫反应。方法:MIT处理B16F10-ESAT-6-gpi/IL-21瘤苗后,用吖啶橙/嗅化乙啶(AO/EB)染色法观察瘤苗细胞形态,流式细胞仪(FCM)检测其粒度及凋亡比例,荧光显微镜观察瘤苗凋亡后细胞膜表面结核杆菌早期分泌靶抗原6KD(ESAT-6)的表达情况,蛋白质印迹法(Western blot)检测瘤苗经MIT处理后IL-21的表达。瘤苗免疫小鼠后,FCM检测了补体依赖的细胞毒性(complement dependent cytotoxicity,CDC)及细胞毒T细胞(cytotoxicT lymphocyte,CTL)活性。结果:经MIT处理后,瘤苗停止分裂,细胞逐渐增大,数日内可保持生物活力,并表达IL-21。瘤苗细胞凋亡后,ESAT-6成点簇状分布于胞膜表面。MIT处理的瘤苗能诱导小鼠产生抗肿瘤免疫应答,免疫鼠血清和CD8+T细胞可分别通过CDC和CTL杀伤野生型B16F10细胞。结论:MIT处理的B16F10-ESAT-6-gpi/IL-21瘤苗失去增殖能力,但仍能表达IL-21且具有免疫原性,能诱导小鼠产生抗肿瘤免疫反应。 展开更多

关键词 米托蒽醌 肿瘤疫苗 ESAT-6 GPI IL-21

下载PDF 职称材料

小鼠白细胞介素21瘤苗的构建及其抗肿瘤效应研究 被引量：3

15

作者 褚莉莉 窦骏 +3 位作者 赵枫姝 唐权 王永仿 顾宁 《生物技术通讯》 CAS 2007年第1期29-31,共3页

目的:建立稳定表达小鼠白细胞介素21(mIL-21)的肿瘤细胞瘤苗,观察其在小鼠体内是否能够诱导有效的抗肿瘤免疫反应及免疫记忆效应。方法:将已鉴定的重组质粒pcDNA3.1/mIL-21用脂质体法转染Sp2/0细胞制备瘤苗,RT-PCR法鉴定瘤苗中mIL-21的... 目的:建立稳定表达小鼠白细胞介素21(mIL-21)的肿瘤细胞瘤苗,观察其在小鼠体内是否能够诱导有效的抗肿瘤免疫反应及免疫记忆效应。方法:将已鉴定的重组质粒pcDNA3.1/mIL-21用脂质体法转染Sp2/0细胞制备瘤苗,RT-PCR法鉴定瘤苗中mIL-21的表达。通过流式细胞仪检测细胞周期来反映瘤苗体外增殖活性,再将其接种BALB/c小鼠,监测肿瘤生长情况,观察mIL-21瘤苗诱导的抗肿瘤效应;用ELISA法检测血清IFN-γ和IL-4含量。结果:得到稳定表达mIL-21的瘤苗Sp2/0-mIL-21。与对照组相比,体外增殖活性无差异。皮下接种BALB/c小鼠后,肿瘤生长缓慢,部分小鼠无瘤体生长并长期存活;用野生株Sp2/0瘤细胞再次攻击未长肿瘤的实验小鼠,4周后亦未见肿瘤生长。接种瘤苗小鼠血清中IFN-γ水平明显上升,IL-4无明显增高。结论:成功构建了mIL-21瘤苗Sp2/0-mIL-21,其能诱导有效的抗肿瘤免疫反应及免疫记忆效应。 展开更多

关键词 白细胞介素21 瘤苗 抗肿瘤效应

下载PDF 职称材料

小鼠骨髓瘤中肿瘤干细胞的初步分析 被引量：2

16

作者 李雅婷 窦骏 +3 位作者 文萍 赵枫姝 蒋翠莲 顾宁 《微生物学免疫学进展》 2008年第4期31-35,共5页

探讨小鼠骨髓瘤(SP2/0细胞)中肿瘤干细胞存在与否。以克隆形成试验检测SP2/0细胞中具有形成克隆能力细胞的大体比例;采用BrdU标记滞留试验检测SP2/0细胞中含有DNA永生化链的细胞,即具有干细胞特性的细胞;检测SP2/0细胞中具有干细胞特性... 探讨小鼠骨髓瘤(SP2/0细胞)中肿瘤干细胞存在与否。以克隆形成试验检测SP2/0细胞中具有形成克隆能力细胞的大体比例;采用BrdU标记滞留试验检测SP2/0细胞中含有DNA永生化链的细胞,即具有干细胞特性的细胞;检测SP2/0细胞中具有干细胞特性的SP细胞存在情况及其比例。结果显示,SP2/0细胞中有一部分细胞具有形成克隆的能力;SP2/0细胞中含有DNA永生化链的细胞;SP2/0细胞中存在SP细胞,其比例约为0.7%。而且SP2/0细胞中存在肿瘤干细胞。 展开更多

关键词 肿瘤干细胞 克隆形成 DNA永生化链 SP细胞

下载PDF 职称材料

结核杆菌抗原85A与GM-CSF诱发抗鼠黑色素瘤效应研究 被引量：1

17

作者 刘春生 吴昀 +5 位作者 窦骏 文萍 赵枫姝 唐权 李金龙 王亚琴 《东南大学学报（医学版）》 CAS 2010年第1期57-61,共5页

目的:用结核杆菌抗原85A(Ag85A)和细胞因子GM-CSF,作为异种抗原及免疫增强剂,研究其在鼠体内能否有效地诱导抗黑色素瘤免疫应答。方法:用分子生物学法构建重组质粒pRSC-Ag85A/GM-CSF,通过细胞转染获得稳定表达Ag85A和GM-CSF的B16黑色素... 目的:用结核杆菌抗原85A(Ag85A)和细胞因子GM-CSF,作为异种抗原及免疫增强剂,研究其在鼠体内能否有效地诱导抗黑色素瘤免疫应答。方法:用分子生物学法构建重组质粒pRSC-Ag85A/GM-CSF,通过细胞转染获得稳定表达Ag85A和GM-CSF的B16黑色素瘤细胞。48只C57BL/6小鼠随机均分为B16细胞组、B16-pRSC细胞组、B16-Ag85A细胞组和B16-Ag85A/GM-CSF细胞组,分别将上述不同B16细胞经背部皮下接种小鼠。通过观察其致瘤性的强弱、荷瘤鼠生存时间、鼠血清IFN-γ水平以及CTL、NK细胞杀伤活性,分析Ag85A和GM-CSF在抗肿瘤免疫效应中作用。结果:B16-Ag85A/GM-CSF细胞组小鼠肿瘤生长明显受到抑制,生存时间较对照组平均延长40%,血清IFN-γ分泌较对照组高1倍,CTL、NK细胞杀伤活性与其他各组相比也有较大的提高。结论:接种稳定表达Ag85A和GM-CSF的B16细胞能降低对小鼠的致瘤性,诱导有效的抗肿瘤效应。 展开更多

关键词 结核杆菌抗原85A 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 致瘤性 免疫佐剂

下载PDF 职称材料

GM-CSF与IL-21基因共转染卵巢癌细胞及其对NK细胞活性的影响 被引量：1

18

作者 王永仿 褚莉莉 +6 位作者 窦骏 赵枫姝 唐权 曹明刚 李雅亭 胡卫华 王净 《中国医药生物技术》 CSCD 2008年第3期183-188,共6页

目的探讨粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)与IL-21基因共转染的体外抗肿瘤效应。方法制备pRSC-GM-CSF-IL21重组质粒,再用脂质体将质粒pRSC-GM-CSF、pRSC-IL21和pRSC-GM-CSF-IL2分别转染人卵巢癌SKOV3细胞(依次命名为SKOV3/GMCSF、SKO... 目的探讨粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)与IL-21基因共转染的体外抗肿瘤效应。方法制备pRSC-GM-CSF-IL21重组质粒,再用脂质体将质粒pRSC-GM-CSF、pRSC-IL21和pRSC-GM-CSF-IL2分别转染人卵巢癌SKOV3细胞(依次命名为SKOV3/GMCSF、SKOV3/IL21、SKOV3/GM-CSF-IL21细胞)。以RTPCR方法检测GM-CSF与IL-21表达;倒置相差显微镜观察各组细胞形态学变化;噻唑蓝法测定各组细胞增殖活性;流式细胞仪检测各组细胞细胞周期分布,细胞表面HLA-ABC、主要组织相容性复合体I类相关基因(MICA/B)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)的表达,以及各组细胞培养上清液对NK细胞活性的影响。以未转染的SKOV细胞和转染空质粒pRSC的细胞(SKOV3/Neo)为对照。结果经酶切与测序鉴定,pRSC-GM-CSF-IL21重组体构建正确,共转染SKOV3细胞中有目的基因GM-CSF、IL-21的表达。各组细胞的形态学、增殖特性、细胞周期分布及HLA-ABC表达无明显变化。SKOV3、SKOV3/Neo、SKOV3/GM-CSF、SKOV3/IL21和SKOV3/GM-CSF-IL2细胞的MICA/B表达量分别为19.24%±2.31%、31.11%3.76%、37.27%±3.04%、54.97%±4.77%和63.94%±5.90%ICAM-1表达量分别为35.88%±3.06%、37.75%±4.09%、68.59%±4.84%、78.53%±5.78%和84.10%±3.98%;加入各组细胞培养上清液后NK细胞活性分别为31.8%±3.6%42.7%±3.3%、54.7%±7.4%、55.9%±4.4%及63.4%6.4%。SKOV3/GM-CSF-IL21细胞分别与SKOV3、SKOV3Neo细胞比较,3项指标的差异均有统计学意义(P<0.01)结论GM-CSF与IL-21基因共转染可上调SKOV3细胞表面MICA/B与ICAM-1表达,表达产物可增强NK细胞活性,这有助于免疫细胞激活,增强抗肿瘤效应。 展开更多

关键词 卵巢肿瘤 粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 白细胞介素21 杀伤细胞 天然

下载PDF 职称材料

从鼠黑色素瘤细胞系中分离和鉴定癌干细胞样细胞 被引量：1

19

作者 潘猛 文萍 +6 位作者 窦骏 李雅婷 唐权 褚莉莉 赵枫姝 蒋翠莲 顾宁 《生物技术通讯》 CAS 2008年第4期500-502,共3页

目的:从鼠黑色素瘤BL6F10细胞系中分离与鉴定癌干细胞(CSC)样细胞,为今后对CSC的鉴定及靶向治疗奠定基础。方法:用不同免疫磁珠标记的单克隆抗体,从BL6F10细胞系中分离有特征性CD表型的瘤细胞,体外观察不同CD表型瘤细胞在软琼脂培养基... 目的:从鼠黑色素瘤BL6F10细胞系中分离与鉴定癌干细胞(CSC)样细胞,为今后对CSC的鉴定及靶向治疗奠定基础。方法:用不同免疫磁珠标记的单克隆抗体,从BL6F10细胞系中分离有特征性CD表型的瘤细胞,体外观察不同CD表型瘤细胞在软琼脂培养基上形成克隆的能力;将这些瘤细胞皮下注射到C57BL/6小鼠,比较其致瘤性。结果:从BL6F10细胞系中分离出不同CD表型的特征性瘤细胞;在软琼脂培养基上,CD133+、CD44+和CD44+CD133+细胞克隆形成率分别高于CD133-、CD44-和CD44+CD133-细胞;CD133+、CD44+、CD44+CD133+和CD44+CD133+CD24+细胞在小鼠体内的致瘤性分别强于CD133-、CD44-、CD44+CD133-和CD44+CD133+CD24-细胞。结论:CD44+CD133+CD24+表型的BL6F10细胞的某些生物学特性与CSC样细胞相似,具有CSC特征,这些实验结果为进一步鉴定BL6F10细胞系中的CSC提供了重要的实验资料。 展开更多

关键词 鼠黑色素瘤 BL6F10细胞系 癌干细胞样细胞 癌干细胞

下载PDF 职称材料

CD34^+脐血造血干细胞的体外培养及其生物学特性研究

20

作者 胡卫华 王净 +4 位作者 何向锋 褚莉莉 赵枫姝 蒋翠莲 李晓丽 《皖南医学院学报》 CAS 2010年第3期161-165,共5页

目的:建立稳定的CD34+脐血造血干细胞(CD34+UHSC)的体外分离、培养扩增体系,并研究其生物学特性。方法:密度梯度离心及免疫磁珠法从脐血中分离CD34+UH-SC,加入细胞因子SCF、IL-3和IL-6进行体外培养扩增,观察细胞形态及其生长特性。应用... 目的:建立稳定的CD34+脐血造血干细胞(CD34+UHSC)的体外分离、培养扩增体系,并研究其生物学特性。方法:密度梯度离心及免疫磁珠法从脐血中分离CD34+UH-SC,加入细胞因子SCF、IL-3和IL-6进行体外培养扩增,观察细胞形态及其生长特性。应用流式细胞仪测定细胞周期及其CD34分子的表达,研究其增殖、生长和分化特性。以RT-PCR法检测干细胞高表达基因ABCG2的转录表达。结果:在体外培养条件下,CD34+UHSC悬浮生长,约1周后易形成克隆球,增殖旺盛,呈现指数生长期;细胞增殖周期随体外培养时间延长而逐渐趋缓;CD34+UHSC表面标志亦随体外培养时间延长而表达下降,同时ABCG2基因的表达亦逐步下调。结论:体外获得纯化的CD34+UHSC,生长稳定、增殖能力强,但随体外培养时间的延长,CD34+分子标志逐步丢失,提示在增殖旺盛的指数生长期7～21d内最适用于各项相关实验研究。 展开更多

关键词 脐血 CD34^+造血干细胞 体外培养 流式细胞术

下载PDF 职称材料