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金黄色葡萄球菌凝固酶coa基因的克隆、表达及其生物活性分析 被引量：1
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作者 郭海勇 赵雪 +6 位作者 朱小雨 赵研彤 林依丹 施爽 李铄 计银铎 宋勤叶 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期696-702,共7页
目的体外表达金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)凝固酶Coa,评价其生物学活性。方法根据GenBank中金黄色葡萄球菌凝固酶coa基因序列设计特异性引物,采用PCR方法从S.aureus USA300 CA-MRSA 923株基因组中扩增coa基因片段,... 目的体外表达金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)凝固酶Coa,评价其生物学活性。方法根据GenBank中金黄色葡萄球菌凝固酶coa基因序列设计特异性引物,采用PCR方法从S.aureus USA300 CA-MRSA 923株基因组中扩增coa基因片段,将其克隆至pET-24b(+)表达载体,构建重组表达质粒pET-24b-coa;将经双酶切及测序鉴定正确的重组质粒转化感受态细胞E.coli BL21(DE3)中进行IPTG诱导表达;通过SDS-PAGE和Western blot对表达的重组Coa(rCoa)进行鉴定,测定rCoa对人血液和兔血浆的凝固活性;最后用纯化的重组蛋白rCoa免疫BALB/c小鼠,经间接ELISA和Western blot分析其免疫原性。结果构建的重组质粒pET-24b-coa在E.coli BL21(DE3)中以包涵体形式表达rCoa,分子量约74.8 ku,与预期蛋白大小相符;rCoa在体外具有凝固人全血和兔血浆活性,能刺激小鼠产生高效价的抗Coa特异性抗体。结论成功地获得了具有良好凝固酶活性和抗原性的金黄色葡萄球菌凝固酶重组蛋白rCoa,为进一步深入研究S.aureus凝固酶Coa的功能及以Coa为靶点的抗金黄色葡萄球菌抑制剂和疫苗的研制奠定基础。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 凝固酶 生物活性 克隆表达
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