文摘目的测定不同浓度的喜树碱(CPT)对宫颈癌HeLa细胞促凋亡作用的影响,并探讨其促凋亡的机制。方法人宫颈癌细胞系HeLa细胞,加入不同浓度的CPT(100 nmol/L^10μmol/L),继续培养24 h。MTT方法检测细胞增殖,并通过倒置显微镜观察细胞形态学变化,细胞核染色法检测细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞早期凋亡率。Western blotting法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、cleave-Caspase-3、细胞色素C(Cyt-C),聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)的表达。结果 MTT实验及细胞形态学结果显示,CPT对HeLa细胞的生长有明显抑制作用,并可导致细胞形态改变,且具有剂量依赖性,其IC_(50)为2.45μmol/L;细胞凋亡检测表明,不同浓度的CPT可导致凋亡小体出现,并可使早期凋亡比例增加。Western blotting法检测结果显示,不同浓度CPT可使HeLa细胞Bcl-2蛋白表达降低,而Bax、cleaved-Caspase-3蛋白表达,胞质Cyt-C,89 k D 5-磷酸核糖-1-焦磷酸(PRPP)蛋白表达增加且呈剂量依赖性。结论 CPT可以诱导HeLa细胞凋亡,其作用机制可能为激活线粒体依赖途径,并活化作用底物PARP而实现。
