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医学院校青年教师指导本科生课外科研遇到的问题及解决对策 被引量:15
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作者 路延之 柏银兰 +2 位作者 王丽梅 康健 吴兴安 《中国医药导报》 CAS 2017年第4期135-138,共4页
高等医学院校开展的本科生课外科研训练,是促使学生由学习向发现进行转化的直接途径,是使学生能够适应现代化并面向未来的需要。本文从学生和教师两个角度,对医学院校青年教师指导本科生课外科研过程中出现的若干问题进行了分析,包括学... 高等医学院校开展的本科生课外科研训练,是促使学生由学习向发现进行转化的直接途径,是使学生能够适应现代化并面向未来的需要。本文从学生和教师两个角度,对医学院校青年教师指导本科生课外科研过程中出现的若干问题进行了分析,包括学生科研观念问题、学生实验技能问题、学生探索独立性问题、青年教师引导方向问题、青年教师自身工作安排问题等。同时提出了相应问题的解决对策,包括引导学生正确科研观念形成、做好学生实验操作培训工作、培养学生科研独立性、建立学生良好科研思维、安排好教师自身各项工作等方面,使青年教师能够在培养本科生科研综合能力的过程中发挥更大的作用。 展开更多
关键词 青年教师 本科生 课外科研 实验
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结核分枝杆菌亚单位疫苗Ag85b-ESAT-6+Hsp65-IL-2的安全性评价研究 被引量:3
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作者 路延之 王丽梅 +5 位作者 康健 杨锐 张鑫 姚庆港 柏银兰 徐志凯 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期945-951,共7页
目的评价结核分枝杆菌亚单位疫苗Ag85b-ESAT-6+Hsp65-IL-2在小鼠和豚鼠体内的安全性。方法小鼠慢性毒性实验:C57BL/6J小鼠间隔2周、皮下3次注射100μg亚单位疫苗(Ag85b-ESAT-6和Hsp65-IL-2各50μg),观察临床症状表现和器官病理学改变。... 目的评价结核分枝杆菌亚单位疫苗Ag85b-ESAT-6+Hsp65-IL-2在小鼠和豚鼠体内的安全性。方法小鼠慢性毒性实验:C57BL/6J小鼠间隔2周、皮下3次注射100μg亚单位疫苗(Ag85b-ESAT-6和Hsp65-IL-2各50μg),观察临床症状表现和器官病理学改变。小鼠急性毒性实验:C57BL/6J小鼠皮下注射100μg亚单位疫苗(Ag85b-ESAT-6和Hsp65-IL-2各50μg),观察小鼠临床症状、体重、摄食摄水量、器官的脏器系数和病理学表现。豚鼠全身过敏实验:Hartley豚鼠间隔2d、皮下3次注射1 000μg、100μg、10μg亚单位疫苗(Ag85b-ESAT-6和Hsp65-IL-2均按质量1∶1混合),16d后用二倍剂量足背静脉注射激发,观察体重变化和全身过敏症状。结果小鼠慢性毒性实验表明,亚单位疫苗多次注射后不引起临床症状和病理损伤;小鼠急性毒性实验表明,亚单位疫苗对小鼠不产生临床症状,对小鼠体重、摄食摄水量、脏器系数、器官病理学改变影响无统计学意义;豚鼠全身过敏实验表明,疫苗短期多次致敏对豚鼠的体重无明显影响,低剂量疫苗不引起豚鼠产生全身过敏反应。结论亚单位疫苗Ag85b-ESAT-6+Hsp65-IL-2在小鼠和豚鼠体内均表现出良好的安全性,可用于进一步TB预防和治疗性疫苗的研制。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 亚单位疫苗 安全性评价 Ag856-ESAT-6+Hsp65-IL-2
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人补体受体1型衍生分子融合基因CR1-SCR2D的构建、表达及生物学活性鉴定 被引量:1
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作者 路延之 李庆伟 +2 位作者 杨绍俊 张璇 汪正清 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期251-256,266,共7页
目的构建和表达具有抑制补体生物活性的双功能域人补体受体1型衍生分子CR1-SCR2D。方法基于我室前期工作,将CR1-SCR1-3、人工α螺旋肽段linker、SCR15-17 3个DNA片段依次克隆到改造载体pPIC9k(+)和pPICZαB,构建出表达质粒pPICZαB-CR1-... 目的构建和表达具有抑制补体生物活性的双功能域人补体受体1型衍生分子CR1-SCR2D。方法基于我室前期工作,将CR1-SCR1-3、人工α螺旋肽段linker、SCR15-17 3个DNA片段依次克隆到改造载体pPIC9k(+)和pPICZαB,构建出表达质粒pPICZαB-CR1-SCR2D;电转化毕赤酵母X-33得到阳性重组子,甲醇诱导目的蛋白CR1-SCR2D表达,SDS-PAGE和Western blot鉴定表达结果;经纯化获得CR1-SCR2D并进行糖基化鉴定后,用CH50和AH50法鉴定目的蛋白在体外抑制补体的生物活性。结果成功构建了目的基因的表达质粒pPICZαB-CR1-SCR2D,基因测序正确;SDS-PAGE和Western blot证实目的基因在毕赤酵母中实现了分泌表达;经镍柱纯化后得到较纯的CR1-SCR2D,糖基化鉴定证明其存在糖基化;CH50法和AH50法结果显示CR1-SCR2D均有较CR1-SCR1-3和CR1-SCR15-17更好的抑制补体生物学活性。结论成功构建了双功能域人补体受体1型衍生分子融合基因CR1-SCR2D,在毕赤酵母中实现了CR1-SCR2D的分泌表达,该融合蛋白对经典/MBL途径及旁路途径补体激活均具有较好的抑制作用。 展开更多
关键词 人补体受体1型 短同源重复序列1-3 短同源重复序列15-17 融合基因 补体抑制活性
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人CR1-SCR1-3蛋白对急性大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用 被引量:2
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作者 杨绍俊 张璇 +1 位作者 路延之 汪正清 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第13期1323-1326,共4页
目的探讨补体活化在大鼠急性脑缺血再灌注中的作用及人补体受体1型SCR1-3蛋白(CR1-SCR1-3)的保护作用。方法健康雄性SD大鼠75只,采用完全随机设计分组法分为假手术组(n=15)、CI/R组(n=30)及CI/R+CR1-SCR1-3组(n=30)。线栓法建立大鼠大... 目的探讨补体活化在大鼠急性脑缺血再灌注中的作用及人补体受体1型SCR1-3蛋白(CR1-SCR1-3)的保护作用。方法健康雄性SD大鼠75只,采用完全随机设计分组法分为假手术组(n=15)、CI/R组(n=30)及CI/R+CR1-SCR1-3组(n=30)。线栓法建立大鼠大脑中动脉栓塞模型,缺血1 h,再灌注24 h,对大鼠进行行为学检测,记录神经功能缺陷评分;TTC染色法测定脑梗死体积;制作脑匀浆测定大脑皮层髓过氧化物酶(MPO)活性、丙二醇(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性;制备切片观察大脑皮质区补体C4b沉积及病理改变。结果缺血再灌注24 h后,CR1-SCR1-3蛋白可明显改善CI/R+CR1-SCR1-3组大鼠神经功能(P<0.05);脑梗死体积亦明显减少(P<0.01);与CI/R组比较,CI/R+CR1-SCR1-3组MPO活力、MDA含量显著降低(P<0.01),而SOD活性显著增高(P<0.01);缺血脑组织皮质区原位补体C4b沉积显著减少(P<0.01),病理损伤亦明显减轻。结论补体活化参与了脑缺血再灌注损伤过程,CR1-SCR1-3蛋白对大鼠急性CI/R损伤具有保护作用。 展开更多
关键词 补体 人补体受体1型 短同源重复1—3 大脑中动脉栓塞 脑缺血再灌注损伤 炎症
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人CR1-SCR1-3对补体介导的脓毒症小鼠炎症损伤的保护作用 被引量:2
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作者 张璇 杨绍俊 +1 位作者 路延之 汪正清 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期9-13,共5页
目的观察人补体受体1型功能域SCR1-3(CR1-SCR1-3)对补体介导的脓毒症小鼠炎症损伤的保护作用。方法昆明小鼠150只,随机分为对照组(50只),脓毒症组(50只),CR1-SCR1-3保护组(50只)。采用内毒素腹腔注射致脓毒症模型,各组分别于实验前1 h... 目的观察人补体受体1型功能域SCR1-3(CR1-SCR1-3)对补体介导的脓毒症小鼠炎症损伤的保护作用。方法昆明小鼠150只,随机分为对照组(50只),脓毒症组(50只),CR1-SCR1-3保护组(50只)。采用内毒素腹腔注射致脓毒症模型,各组分别于实验前1 h腹腔注射D-氨基半乳糖600 mg/kg增敏。对照组腹腔注射等体积PBS;脓毒症腔注射LPS(50μg/kg)+等体积PBS;CR1-SCR1-3保护组注射LPS(50μg/kg)+CR1-SCR1-3(15 mg/kg)。各组留10只小鼠,观察实验后72 h生存率。其他小鼠在实验后8 h测定血清IL-1β含量,12 h后取肺组织标本检测髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)水平、免疫组织化学检测C4b沉积及观察肺病理学改变。结果脓毒症组的脓毒症反应最强烈,16 h后全部死亡,保护组的脓毒症症状减轻,16 h后生存率达40%,显著提高(P<0.05)。脓毒症组的血清促炎症介质IL-1β和肺组织MPO水平均明显升高,保护组的显著降低(P<0.001)。脓毒症组的肺组织原位C4b沉积明显增多,保护组的明显减少。病理学检查显示,保护组小鼠肺损伤较脓毒症组的明显减轻。结论补体在脓毒症的发生和发展中起重要作用,人CR1-SCR1-3对脓毒症小鼠炎症损伤具有一定的保护作用。 展开更多
关键词 脓毒症 内毒素 人补体受体1型 补体 肺损伤
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医学微生物学实验课程教学实践与体会 被引量:1
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作者 康健 柏银兰 +2 位作者 路延之 徐志凯 王丽梅 《教育教学论坛》 2016年第22期283-284,共2页
医学微生物学实验课程是与医学微生物学理论课程相辅相成的教学模块,实验课程能很好地诠释理论课程中难以理解的概念以及微生物学课程必须掌握的无菌操作、生物安全防护知识、常见病原微生物的分离培养等基本技术。近年来SARS、禽流感... 医学微生物学实验课程是与医学微生物学理论课程相辅相成的教学模块,实验课程能很好地诠释理论课程中难以理解的概念以及微生物学课程必须掌握的无菌操作、生物安全防护知识、常见病原微生物的分离培养等基本技术。近年来SARS、禽流感、甲型H1N1、登革热、MERS等传染病的发生和传播,使得医学微生物学实验课程的地位越来越重要。所以本文就医学微生物学实验课程5个方面逐一进行教学分析,浅谈教学实践和教学体会,希望对提高教学质量、提高学生实验水平和解决实际问题的能力有所帮助。 展开更多
关键词 微生物学 实验课 教学体会
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卡介苗对1型糖尿病小鼠的免疫治疗作用及其机制
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作者 康亚莉 扈启宽 +8 位作者 宁唤唤 周洁 任瑞 康健 路延之 韦垠 高晓菁 张琳娜 柏银兰 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期768-775,共8页
目的评价卡介苗(BCG)对1型糖尿病(T1DM)小鼠的免疫治疗效果,并探索其作用机制。方法将15只SPF级雄性C57BL/6小鼠随机分为造模组(n=10,腹腔注射50 mg/kg链尿佐菌素建立T1DM模型)与对照组(n=5,腹腔注射等量柠檬酸缓冲液);取造模成功即随... 目的评价卡介苗(BCG)对1型糖尿病(T1DM)小鼠的免疫治疗效果,并探索其作用机制。方法将15只SPF级雄性C57BL/6小鼠随机分为造模组(n=10,腹腔注射50 mg/kg链尿佐菌素建立T1DM模型)与对照组(n=5,腹腔注射等量柠檬酸缓冲液);取造模成功即随机血糖≥16.7 mmol/L的10只小鼠分为T1DM组(n=5)与卡介苗(BCG)组(n=5)。随后BCG组小鼠经皮下注射BCG 1×10^(6) cfu/只进行免疫治疗,4周后加强免疫治疗1次,T1DM组与对照组注射相同剂量磷酸盐缓冲液(PBS)。在实验周期(13周)内,每周监测小鼠体重和进食量变化,尾静脉采血检测各组小鼠血糖水平,采用口服葡萄糖耐量实验(OGTT)检测各组小鼠葡萄糖负荷后的血糖调节能力。采用HE染色观察各组小鼠胰腺组织病理变化,免疫组化染色检测胰腺胰岛素水平,酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组小鼠血清C-肽含量,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组小鼠脾组织细胞因子mRNA水平,流式细胞术检测各组小鼠脾细胞中调节性T细胞(Treg)比例。结果BCG免疫治疗2次后(第13周),T1DM组小鼠血糖水平明显高于对照组(P<0.001),而BCG组血糖水平虽高于对照组(P<0.01),但明显低于T1DM组(P<0.01)。OGTT结果显示,3组小鼠在葡萄糖灌胃后血糖水平迅速升高,120 min时开始下降,到180 min时,对照组小鼠血糖水平降至正常水平;与对照组比较,T1DM组及BCG组小鼠在120 min后血糖水平虽有下降趋势,但在180 min时仍明显高于对照组(P<0.001),而BCG组与T1DM组间差异无统计学意义(P>0.05)。在初次免疫时(第5周),与对照组比较,T1DM组和BCG组小鼠体重增长百分比明显降低(P<0.0001),进食量明显增加(P<0.0001)。BCG免疫治疗2次后(第13周),与对照组比较,T1DM组小鼠体重增长百分比仍明显降低(P<0.0001),进食量明显增加(P<0.0001);与T1DM组比较,BCG组小鼠体重增长百分比增高(P<0.001),进食量减少(P<0.001),且与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。HE染色结果显示,与对照组比较,T1DM组小鼠胰岛发生明显的萎缩,而BCG组小鼠胰岛形态与对照组接近,且胰岛内细胞数目明显多于T1DM组。免疫组化染色结果显示,与对照组比较,T1DM组小鼠胰腺中胰岛素阳性面积明显减少(P<0.01),而BCG组胰岛素阳性面积虽然少于对照组(P<0.05),但明显多于T1DM组(P<0.05)。ELISA检测结果显示,与对照组比较,T1DM组、BCG组血清C-肽含量明显降低(P<0.001,P<0.05),但BCG组血清C-肽含量明显高于T1DM组(P<0.05)。qRT-PCR结果显示,与对照组比较,T1DM组脾组织细胞因子mRNA水平无明显变化(P>0.05);BCG组白细胞介素-2(IL-2)、IL-10、转化生长因子-β(TGF-β)mRNA水平与对照组和T1DM组比较均明显升高(P<0.0001),而γ干扰素(IFN-γ)mRNA水平无明显变化(P>0.05)。流式细胞术检测结果显示,与对照组比较,T1DM组小鼠体内Treg细胞百分比降低(P<0.05);与T1DM组比较,BCG组小鼠Treg细胞百分比明显增高(P<0.05),且与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论BCG免疫治疗可诱导Treg细胞增多,调节自身免疫应答,并通过减轻胰腺病理损伤、恢复胰岛细胞功能以促进胰岛素分泌,从而降低T1DM小鼠的血糖水平。 展开更多
关键词 卡介苗 1型糖尿病 免疫治疗
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结核分枝杆菌6 kD早期分泌靶抗原单克隆抗体的制备及其特异性分析
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作者 宁唤唤 任瑞 +5 位作者 康健 白鹭 路延之 谢燕玲 张芳琳 柏银兰 《中国医药导报》 CAS 2023年第5期20-23,共4页
目的制备结核分枝杆菌(Mtb)6 kD早期分泌靶抗原(ESAT-6)单克隆抗体(mAb)并分析其特异性。方法用亲和层析法纯化目的蛋白ESAT-6,并用该蛋白免疫小鼠。分离免疫小鼠的脾细胞并与骨髓瘤细胞融合,筛选分泌mAb的杂交瘤细胞系。制备腹水并纯化... 目的制备结核分枝杆菌(Mtb)6 kD早期分泌靶抗原(ESAT-6)单克隆抗体(mAb)并分析其特异性。方法用亲和层析法纯化目的蛋白ESAT-6,并用该蛋白免疫小鼠。分离免疫小鼠的脾细胞并与骨髓瘤细胞融合,筛选分泌mAb的杂交瘤细胞系。制备腹水并纯化mAb。酶联免疫吸附试验法分析mAb亚类和相对亲和力,蛋白印迹法检测其特异性。结果制备了可分泌ESAT-6抗体的杂交瘤细胞系,获得了纯化的mAb。mAb亚型为IgG1,相对亲和力为3.9×10^(-5)。该mAb可特异性识别Mtb的ESAT-6。结论制备抗ESAT-6的mAb为ESAT-6用于结核病诊断与防治制剂及其机制研究奠定了基础。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 分泌蛋白 6 kD早期分泌靶抗原 单克隆抗体
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参芪花粉片对低氧暴露下大鼠胃肠黏膜屏障损伤的保护作用观察 被引量:5
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作者 欧阳荣键 路延之 周其全 《湖南中医药大学学报》 CAS 2018年第2期154-159,共6页
目的探讨低氧暴露下胃肠黏膜屏障损伤的机制及参芪花粉片对其产生的保护作用,为胃肠黏膜的应激损伤防治提供科学依据。方法 60只SD大鼠随机分为平原对照组(PCT)、单纯低氧暴露组(SHE)和低氧暴露+参芪花粉片保护组(GAP),在模拟海拔7 000 ... 目的探讨低氧暴露下胃肠黏膜屏障损伤的机制及参芪花粉片对其产生的保护作用,为胃肠黏膜的应激损伤防治提供科学依据。方法 60只SD大鼠随机分为平原对照组(PCT)、单纯低氧暴露组(SHE)和低氧暴露+参芪花粉片保护组(GAP),在模拟海拔7 000 m的低压舱内暴露72 h,观察各组大鼠小肠黏膜厚度改变、肠上皮细胞凋亡、肠道细菌移位情况,检测血清和小肠的TNF-α和IL-6水平,以及TLR4 m RNA表达水平。结果低氧暴露组大鼠肠黏膜损伤严重,紧密连接间隙增宽,硝酸镧颗粒进入上皮细胞紧密连接间隙内以及周围组织间隙或细胞内,肠系膜淋巴结和脾脏有细菌移位;低氧暴露+参芪花粉保护组肠黏膜损伤减轻,黏膜厚度增加,硝酸镧颗粒很少进入组织间隙和细胞内,移位细菌明显减少。与平原对照组比较,低氧暴露组血清内毒素、TNF-α和IL-6水平显著增高,参芪花粉片保护组血清内毒素、TNF-α和IL-6水平显著降低;低氧暴露后空肠组织TLR4 m RNA表达量显著增加,给予参芪花粉片后TLR4表达量明显下降,差异有统计学意义(P<0.01)。结论低氧暴露能引起严重的肠黏膜屏障功能损伤,给予参芪花粉片后可以降低肠黏膜通透性,对肠黏膜损伤具有一定的保护作用。 展开更多
关键词 低氧暴露 肠黏膜 屏障损伤 细菌易位 参芪花粉片
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结核分枝杆菌分泌蛋白MPT64单克隆抗体的制备及其特异性 被引量:3
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作者 谢燕玲 宁唤唤 +6 位作者 梁璇 康健 任瑞 张慧 张娜娜 路延之 柏银兰 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期387-393,共7页
目的制备结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)分泌蛋白MPT64的单克隆抗体(Monoclonal antibody,mAb),并分析mAb的特异性。方法PCR扩增mpt64基因并克隆入pET28a(+)构建原核表达载体;将获得的重组菌株在IPTG作用下诱导表达MPT6... 目的制备结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)分泌蛋白MPT64的单克隆抗体(Monoclonal antibody,mAb),并分析mAb的特异性。方法PCR扩增mpt64基因并克隆入pET28a(+)构建原核表达载体;将获得的重组菌株在IPTG作用下诱导表达MPT64蛋白,Western blot验证蛋白表达;亲和层析法纯化目的蛋白。重组MPT64蛋白免疫小鼠,取脾细胞与杂交瘤细胞SP2/0融合,筛选得到阳性杂交瘤细胞系。以该杂交瘤细胞制备小鼠腹水,中压液相色谱仪纯化腹水获得mAb。ELISA法检测获得的mAb的相对亲和力和亚类,Western blot检测mAb的特异性。结果本研究成功构建原核表达载体pET28a(+)-mpt64并诱导表达了MPT64蛋白。亲和层析法获得纯化的重组MPT64蛋白。该重组蛋白免疫小鼠的脾细胞和SP2/0细胞融合后,经筛选获得能够稳定分泌抗MPT64 mAb的杂交瘤细胞系MPT64-A5B2。中压液相色谱仪纯化小鼠腹水中的MPT64-A5B2 mAb。该mAb的亲和力为2.813×10^(-7) g/mL,属于IgG 1亚类。MPT64-A5B2 mAb能特异性识别Mtb中的MPT64蛋白。结论本研究制备了MPT64重组蛋白,并获得了抗MPT64 mAb,为MPT64用于结核病诊断和治疗制剂的研制奠定了基础。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 MPT64 分泌蛋白 单克隆抗体
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PBL在全科医学微生物学教学中的应用 被引量:9
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作者 康健 柏银兰 +3 位作者 王丽梅 路延之 张芳琳 吴兴安 《基础医学教育》 2018年第5期337-339,共3页
在进行全科医学专业医学微生物学的教学过程中,在传统教学方式的基础上结合PBL教学模式,根据学生的实际情况开展教学工作,通过提升教师的专业素养,并对现有的教学模式和考核方式进行改革,致力于培养学生的创新思维,使学生的临床实践能... 在进行全科医学专业医学微生物学的教学过程中,在传统教学方式的基础上结合PBL教学模式,根据学生的实际情况开展教学工作,通过提升教师的专业素养,并对现有的教学模式和考核方式进行改革,致力于培养学生的创新思维,使学生的临床实践能力不断提高,培养适应现代社会需求的高等医学教育人才。 展开更多
关键词 医学微生物学 PBL教学法 全科医学专业
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结核分枝杆菌EsxV亚单位疫苗黏膜免疫诱导的免疫应答 被引量:1
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作者 白鹭 宁唤唤 +6 位作者 康健 梁璇 谢燕玲 彭钰君 张婧瑶 路延之 柏银兰 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期379-386,共8页
目的研究结核分枝杆菌抗原Rv3619c(EsxV)黏膜免疫小鼠诱导的免疫应答水平。方法PCR法扩增esxV基因克隆入原核表达载体pET28a(+),获得的重组E.coli诱导表达目的蛋白,SDS-PAGE电泳和Western Blot鉴定蛋白的表达,亲和层析法纯化EsxV蛋白。... 目的研究结核分枝杆菌抗原Rv3619c(EsxV)黏膜免疫小鼠诱导的免疫应答水平。方法PCR法扩增esxV基因克隆入原核表达载体pET28a(+),获得的重组E.coli诱导表达目的蛋白,SDS-PAGE电泳和Western Blot鉴定蛋白的表达,亲和层析法纯化EsxV蛋白。以EsxV和/或联合环二腺苷酸(c-di-AMP)经鼻黏膜免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测小鼠特异性抗体水平及亚类,MTS法检测脾细胞增殖,qRT-PCR检测脾和肺脏细胞因子表达水平,ELISA法检测脾细胞因子分泌水平。结果成功构建EsxV的原核表达载体pET28a(+)-esxV并诱导表达目的蛋白,亲和层析法获得了纯化的重组EsxV蛋白。EsxV经黏膜免疫可诱导显著的体液免疫应答,但诱导的细胞免疫应答水平不高。EsxV与c-di-AMP经黏膜接种可诱导特异性IgG水平增加,EsxV蛋白特异的脾细胞增殖,脾和肺细胞的IFN-γ转录增加。c-di-AMP显著提高EsxV特异的IFN-γ、IL-2、IL-10和IL-17细胞因子分泌,而不诱导炎症因子TNF-α和IL-6表达。结论EsxV与c-di-AMP佐剂构建的亚单位疫苗可诱导特异性体液和细胞免疫应答,可进一步用于新型结核病亚单位疫苗的研制。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 6kDa早期分泌靶抗原分泌系统蛋白V(EsxV) 亚单位疫苗 黏膜免疫 环二腺苷酸
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逆向设计在全科医学专业基础教学中的应用 被引量:1
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作者 柏银兰 吕欣 +3 位作者 路延之 康健 吴兴安 张芳琳 《中国医药导报》 CAS 2020年第1期82-85,共4页
加强全科医生培养是我国未来卫生事业发展所必须。逆向设计是用于设计教育课程的一种方法,是以学习目标为终点的教学方式。本文从医学基础主干课《医学微生物学》课程特点出发,根据逆向设计教学的程序,从明确教学实施对象、确定学习目... 加强全科医生培养是我国未来卫生事业发展所必须。逆向设计是用于设计教育课程的一种方法,是以学习目标为终点的教学方式。本文从医学基础主干课《医学微生物学》课程特点出发,根据逆向设计教学的程序,从明确教学实施对象、确定学习目标、设计和实施评估方法、教学课程的设置和教学方法的选择、课程的实施和总结评价5个方面进行设计和讨论,探索逆向设计用于医学院校全科医学基础教学的方式。 展开更多
关键词 逆向设计 全科医学 基础教学 医学微生物学
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抗原85B-6kDa早期分泌靶抗原(Ag85B-ESAT-6)亚单位疫苗黏膜免疫对结核分枝杆菌的免疫应答
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作者 宁唤唤 张芳琳 +7 位作者 康健 王立飞 路延之 任瑞 白鹭 梁璇 谢燕玲 柏银兰 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第10期886-892,共7页
目的评价抗原85B-6kDa早期分泌靶抗原融合蛋白(AE)亚单位疫苗经黏膜免疫小鼠诱导的免疫应答及其对结核分枝杆菌(MTB)感染的保护力。方法分别用AE、AE联合环二腺苷酸(c-di-AMP)亚单位疫苗经鼻黏膜免疫小鼠,ELISA检测抗体水平以及1型辅助T... 目的评价抗原85B-6kDa早期分泌靶抗原融合蛋白(AE)亚单位疫苗经黏膜免疫小鼠诱导的免疫应答及其对结核分枝杆菌(MTB)感染的保护力。方法分别用AE、AE联合环二腺苷酸(c-di-AMP)亚单位疫苗经鼻黏膜免疫小鼠,ELISA检测抗体水平以及1型辅助T(Th1)细胞的细胞因子γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素2(IL-2)和Th2细胞的IL-10分泌水平,实时荧光定量PCR检测IFN-γ、IL-2、IL-10和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的mRNA水平。MTB静脉感染免疫小鼠,ELISA检测感染小鼠血清抗体及脾细胞细胞因子分泌水平,HE染色分析肺病理改变,平板法计数菌落形成单位(CFU)检测脾和肺荷菌数。结果AE和AE联合c-di-AMP经鼻黏膜免疫可诱导小鼠产生高水平的特异性抗体,促进脾细胞增殖、脾和肺脏Th1/Th2型细胞因子和TNF-α转录增加、脾Th1/Th2型细胞因子分泌增加。小鼠MTB感染后,与对照组相比,AE和AE联合c-di-AMP免疫小鼠特异性抗体水平仍升高,Th1/Th2型细胞免疫应答增强,肺组织呈炎症反应,肺、脾荷菌数显著降低,且AE联合c-di-AMP免疫小鼠肺、脾荷菌数进一步降低。结论AE亚单位疫苗经黏膜接种可诱导小鼠产生体液与细胞免疫应答,并提供对MTB感染的保护力;c-di-AMP为佐剂可在一定程度上提高AE的免疫原性。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌(MTB) 亚单位疫苗 抗原85B(Ag85B) 6kDa早期分泌靶抗原(ESAT-6) 环二腺苷酸(c-di-AMP) 黏膜免疫
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人CR1-SCR2D对脓毒症小鼠炎症损伤的保护作用
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作者 汪晓艳 路延之 汪正清 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期761-767,共7页
目的探讨人补体受体1型双功能域短同源重复序列(CR1-SCR2D)对脓毒症小鼠炎症损伤的保护作用。方法清洁级雄性昆明小鼠随机分为假手术组(40只)、手术组(40只))和保护组(40只)。按参考文献方法构建盲肠结扎穿刺术(CLP)脓毒症小鼠模型,假... 目的探讨人补体受体1型双功能域短同源重复序列(CR1-SCR2D)对脓毒症小鼠炎症损伤的保护作用。方法清洁级雄性昆明小鼠随机分为假手术组(40只)、手术组(40只))和保护组(40只)。按参考文献方法构建盲肠结扎穿刺术(CLP)脓毒症小鼠模型,假手术组和手术组小鼠尾静脉注射无菌PBS 0.2 ml,保护组的小鼠注射CR1-SCR2D蛋白(10 mg/kg)。各组留10只小鼠观察手术后96 h生存率。其他小鼠在手术后24 h测定血清C5a、IL-6、TNF-α含量和肺组织MPO含量;免疫组化检测肺组织C4b和C3b的沉积;HE染色观察肺组织病理改变。结果脓毒症组的小鼠48 h后全部死亡,保护组的48 h死亡率为50%,96 h死亡率为80%,生存率显著提高(P<0.05)。脓毒症组的血清C5a、IL-6、TNF-α含量和肺组织MPO含量均明显升高,保护组的显著降低(P<0.05)。脓毒症组肺组织原位C4b和C3b沉积的平均光密度(MOD)值显著升高,保护组的MOD值显著低于脓毒症组的(P<0.05)。病理学检查显示,保护组小鼠肺损伤较脓毒症组的明显减轻。结论补体系统的过度活化在脓毒症的发生和发展中起重要作用,人CR1-SCR2D能明显减轻脓毒症小鼠炎症损伤,具有很好的保护作用。 展开更多
关键词 补体 补体受体1型 双功能域短同源重复序列 脓毒症
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卡介苗诱导的训练免疫及其抗病毒感染作用
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作者 柏银兰 路延之 +1 位作者 宁唤唤 徐志凯 《微生物与感染》 CAS 2022年第4期259-267,共9页
卡介苗(Bacillus Calmette-Guérin,BCG)是目前唯一获准使用的预防结核病的疫苗。除结核分枝杆菌外,BCG对其他细菌、病毒和寄生虫等非同源病原体感染也具有非特异性的保护作用,还可用于一些肿瘤和自身免疫性疾病的免疫治疗,其机制... 卡介苗(Bacillus Calmette-Guérin,BCG)是目前唯一获准使用的预防结核病的疫苗。除结核分枝杆菌外,BCG对其他细菌、病毒和寄生虫等非同源病原体感染也具有非特异性的保护作用,还可用于一些肿瘤和自身免疫性疾病的免疫治疗,其机制研究表明与训练免疫有关。BCG诱导的训练免疫机制包括引起宿主天然免疫细胞代谢改变、表观遗传重编程及其对再刺激增强的免疫应答。BCG诱导的训练免疫具有抗多种病毒感染的保护作用,且与2019冠状病毒病的死亡率呈负相关,可能会削弱新发病原体在未来大流行中的影响。 展开更多
关键词 卡介苗 训练免疫 病毒 疫苗 2019冠状病毒病
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结核分枝杆菌EsxV脂质体纳米颗粒亚单位疫苗的制备及免疫学特性 被引量:1
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作者 白鹭 路延之 +8 位作者 宁唤唤 康亚莉 谢燕玲 康健 李雪 崔若囡 韦垠 刘月芹 柏银兰 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期4085-4097,共13页
本研究旨在制备脂质体纳米颗粒(lipid nanoparticles,LNP)为载体的结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)抗原EsxV亚单位疫苗,明确该疫苗经黏膜免疫诱导的免疫应答水平。采用薄膜分散法制备包裹蛋白EsxV和c-di-AMP的LNP(EsxV:C:... 本研究旨在制备脂质体纳米颗粒(lipid nanoparticles,LNP)为载体的结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)抗原EsxV亚单位疫苗,明确该疫苗经黏膜免疫诱导的免疫应答水平。采用薄膜分散法制备包裹蛋白EsxV和c-di-AMP的LNP(EsxV:C:L),并对其包封率、LNP形态、粒径、表位电荷及多相分散指数进行了检测。EsxV:C:L滴鼻免疫BALB/c小鼠,检测免疫后血清和黏膜抗体、肺或脾细胞因子转录及分泌水平、肺T细胞亚群细胞比例。结果成功获得大小均一、呈球状、带负电的EsxV:C:L LNP亚单位疫苗。与EsxV:C相比,EsxV:C:L鼻黏膜接种可诱导小鼠呼吸道黏膜sIgA水平增加,脾细胞因子IL-2分泌水平升高,提高中央记忆T细和组织驻留T细胞的比例。综上,EsxV:C:L经黏膜免疫,可诱导更强的黏膜免疫和记忆性T细胞免疫应答,可能提供更好的抗Mtb感染的保护作用。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 EsxV 环二腺苷酸 脂质体纳米颗粒 亚单位疫苗
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分枝杆菌持续感染小鼠模型的建立及其特征分析 被引量:4
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作者 宁唤唤 路延之 +7 位作者 康健 许艳慧 王立飞 王莹 姚庆港 宋世杰 徐志凯 柏银兰 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第3期219-223,共5页
目的建立不同毒力的分枝杆菌持续感染小鼠模型并分析其免疫应答特征,为结核病新型疫苗及药物评价研究奠定基础。方法分别用结核分枝杆菌(Mtb)标准毒株H37Rv、减毒株H37Ra及疫苗株BCG经尾静脉注射感染BALB/c小鼠,5×10~4 CFU/只。感... 目的建立不同毒力的分枝杆菌持续感染小鼠模型并分析其免疫应答特征,为结核病新型疫苗及药物评价研究奠定基础。方法分别用结核分枝杆菌(Mtb)标准毒株H37Rv、减毒株H37Ra及疫苗株BCG经尾静脉注射感染BALB/c小鼠,5×10~4 CFU/只。感染后4、8周观察小鼠一般状态及体重变化;观察脾脏大体情况和肺组织病理改变;检测分枝杆菌特异性抗体水平、脾淋巴细胞刺激指数(SI)及Th1/Th2细胞因子分泌情况;采用平板计数法计脾、肺脏荷菌数CFUs。结果不同毒力分枝杆菌感染8周后,各组小鼠体重无显著差异;H37Rv感染组脾脏体积显著增大,肺组织病理切片显示菌株感染可引起不同程度的病理损伤;感染4周后小鼠血清特异性抗体水平升高,且感染后8周抗体水平高于4周水平,但不同菌株感染组间差异无统计学意义;不同毒力分枝杆菌感染小鼠的脾淋巴细胞刺激指数(SI)均升高,以H37Rv和H37Ra感染组脾淋巴细胞增殖更显著。H37Rv感染4周后IFN-γ、IL-10分泌水平显著升高(P<0.05)。感染4周后,H37Rv小鼠脾脏荷菌数Log_(10)CFU显著高于BCG组,为4.389±0.1245,而H37Ra感染组与BCG组无显著差异,为4.068±0.2184;各感染组肺荷菌数Log_(10)CFU无显著差异;感染8周后,H37Ra、H37Rv感染组小鼠脾脏荷菌数显著高于BCG组(P<0.05),而肺部荷菌数组间无差异。小鼠呈现持续感染状态。结论本研究成功建立了不同毒力分枝杆菌持续感染小鼠模型,该模型可用于结核病疫苗及药物的研发及筛选。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 小鼠模型 持续感染
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耻垢分枝杆菌感染人脐带间充质干细胞模型的建立及其特征
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作者 康亚莉 宁唤唤 +7 位作者 谢燕玲 任瑞 白鹭 路延之 康健 韦垠 张琳娜 柏银兰 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期5031-5044,共14页
【背景】结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)休眠菌形成被认为是潜伏结核感染(latent tuberculosis infection,LTBI)的主要原因,但目前缺乏体内和体外模型进行机制研究。新近研究表明Mtb可感染间充质干细胞(mesenchymal stem... 【背景】结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)休眠菌形成被认为是潜伏结核感染(latent tuberculosis infection,LTBI)的主要原因,但目前缺乏体内和体外模型进行机制研究。新近研究表明Mtb可感染间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)并以休眠状态在细胞中长期存活。然而Mtb感染细胞模型存在周期长和生物安全要求高等问题,需要探索可用的MSC感染细胞模型用于Mtb休眠机制的研究。【目的】建立快速生长型耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis,Ms)感染人脐带间充质干细胞(human umbilical cord MSC,hUCMSC)的细胞模型并研究其特征。【方法】取分离好的hUCMSC,流式细胞术鉴定其表面标志性抗原;以Ms菌株感染hUCMSC,DiI标记细胞膜,荧光显微镜下观察细胞吞噬作用;平板法计数Ms胞内存活率;油红O染色观察细胞脂滴形成;鬼笔环肽荧光染色观察细胞骨架变化;实时荧光定量PCR(real time quantitative PCR,RT-qPCR)检测Ms感染的hUCMSC脂质代谢、静息和分化相关基因转录水平。【结果】Ms感染hUCMSC后在胞内以非复制方式存活,其感染率与感染复数呈正相关;Ms感染hUCMSC可诱导脂滴合成相关基因表达,而抑制降解相关基因转录水平,从而促进细胞内脂滴形成。Ms感染促进hUCMSC细胞骨架发生重构,RT-qPCR检测结果显示细胞增殖和分化相关基因表达增加,Ms感染促进hUCMSC向成脂、成骨细胞分化。【结论】本研究建立了可模拟Mtb休眠形成的Ms感染hUCMSC模型,可进一步用于LTBI机制的相关研究。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 耻垢分枝杆菌 间充质干细胞 休眠菌 结核潜伏感染
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结核分枝杆菌MPT64双抗体夹心ELISA检测方法的建立及初步应用 被引量:1
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作者 谢燕玲 宁唤唤 +7 位作者 路延之 康健 白鹭 代婷 胡家豪 徐子晴 刘博 柏银兰 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2023年第11期1284-1290,共7页
目的建立结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)分泌蛋白MPT64的双抗体夹心ELISA检测方法并评价初步应用效果。方法采用间接ELISA和ELISA叠加试验在各株抗MPT64 mAb中筛选出亲和力较高的识别不同抗原表位的配对抗体;Protein A... 目的建立结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)分泌蛋白MPT64的双抗体夹心ELISA检测方法并评价初步应用效果。方法采用间接ELISA和ELISA叠加试验在各株抗MPT64 mAb中筛选出亲和力较高的识别不同抗原表位的配对抗体;Protein A亲和层析纯化配对的2株mAb腹水,其中1株mAb偶联生物素(Biotin)作为检测抗体,另1株作为捕获抗体,棋盘滴定法优化捕获抗体和检测抗体的工作浓度,建立双抗体夹心ELISA方法;以常规条件作为初始反应条件,依次优化包被、封闭、抗原、抗体以及底物反应环节的条件;以MPT64抗原检测评估建立的ELISA方法的检测限、线性范围、精确性、准确性和特异性;采用该方法检测Mtb H37Ra不同阶段培养上清中MPT64含量,初步评价应用效果。结果ELISA法成功筛选出配对抗体H2F4和A5B2 mAb;液相色谱法从腹水中纯化获得的mAb滴度分别为1∶102400、1∶51200。以生物素偶联的A5B2 mAb作为检测抗体,以H2F4 mAb为捕获抗体,建立并优化MPT64双抗体夹心ELISA方法,确定的试验条件为:1.25μg/mL H2F4 mAb包被酶标板,4℃静置过夜,洗涤;2%BSA室温封闭1 h,洗涤;加入待测样品室温孵育2 h,洗涤;加入2.5μg/mL Biotin-A5B2 mAb室温孵育2 h,洗涤;加入0.5μg/mL Avidin-HRP室温孵育1 h,洗涤;加入TMB显色检测。该ELISA方法对MPT64蛋白的检测下限为39 ng/mL,线性范围为39~1250 ng/mL,具有良好的特异性;该方法检测Mtb培养物,第12 d培养上清呈阳性反应。结论建立的Mtb MPT64双抗体夹心ELISA方法精确性、准确性,特异性良好,可用于MPT64定量检测和Mtb生长检测,为TB快速诊断试剂的研制提供了实验依据。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 分泌抗原 MPT64 单克隆抗体 双抗体夹心ELISA
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