哺乳动物胚胎干细胞研究进展 被引量：3

1

作者 邓守龙 彭涛 +3 位作者 吕自力 王安江 王亮 曹文广 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第9期86-93,共8页

胚胎性干细胞包括从动物早期胚胎的卵裂球、囊胚内细胞团细胞分离建系的胚胎干细胞(embryonic stem cell,ESC)、从胚胎生殖嵴原始生殖细胞(primordial germ cell,PGC)分离建系的胚胎生殖细胞(embryonic germ cell,EGC)和来源于畸胎瘤中... 胚胎性干细胞包括从动物早期胚胎的卵裂球、囊胚内细胞团细胞分离建系的胚胎干细胞(embryonic stem cell,ESC)、从胚胎生殖嵴原始生殖细胞(primordial germ cell,PGC)分离建系的胚胎生殖细胞(embryonic germ cell,EGC)和来源于畸胎瘤中的胚胎性癌细胞(embryonic carcinoma cell,ECC)。ESC具有发育分化的多潜能性和无限的自我更新能力,能在体外长期培养并具有向机体各种组织细胞分化的潜能。所以,被广泛应用于胚胎发育与细胞分化调控的研究,作为修复器官与器官移植的种子细胞,并可用于转基因动物的生产。作者主要综述了干细胞的最新研究进展,ESC培养扩增诱导机制,定向分化方法。 展开更多

关键词 干细胞 胚胎干细胞 定向分化

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哺乳动物成体干细胞的研究进展 被引量：3

2

作者 邓守龙 彭涛 +3 位作者 吕自力 王亮 王安江 曹文广 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第10期88-93,共6页

干细胞具有自我更新能力,能够产生高度分化的功能细胞。干细胞按照发育阶段分为胚胎干细胞和成体干细胞。根据干细胞的发育潜能分为三类:全能干细胞、多能干细胞和单能干细胞。胚胎干细胞的发育等级较高,是全能干细胞,而成体干细胞的发... 干细胞具有自我更新能力,能够产生高度分化的功能细胞。干细胞按照发育阶段分为胚胎干细胞和成体干细胞。根据干细胞的发育潜能分为三类:全能干细胞、多能干细胞和单能干细胞。胚胎干细胞的发育等级较高,是全能干细胞,而成体干细胞的发育等级较低,是多能或单能干细胞。一般认为成年组织或器官内的干细胞具有组织特异性,只能分化成特定的细胞或组织,然而,研究结果表明,组织特异性干细胞同样具有分化成其他细胞或组织的潜能,这为干细胞的应用开创了更广泛的空间。作者主要综述了干细胞的研究进展及几种成体干细胞的诱导分化。 展开更多

关键词 干细胞 成体干细胞 诱导分化

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体细胞核移植生产转基因牛胚胎的研究 被引量：1

3

作者 邓守龙 刘晓 +1 位作者 曹文广 王安江 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2008年第12期16-19,共4页

为了优化利用体细胞核移植生产转基因牛早期胚胎的体系,以携带绿色荧光蛋白-新霉抗性双标记基因的pMSCV质粒转染的胎牛耳成纤维细胞为供体,以体外成熟的牛卵母细胞为受体构建克隆胚,研究供体细胞的传代次数对转基因胚的影响和重构胚在... 为了优化利用体细胞核移植生产转基因牛早期胚胎的体系,以携带绿色荧光蛋白-新霉抗性双标记基因的pMSCV质粒转染的胎牛耳成纤维细胞为供体,以体外成熟的牛卵母细胞为受体构建克隆胚,研究供体细胞的传代次数对转基因胚的影响和重构胚在不同电场条件下(电场强度、直流电脉冲次数)融合效率及其在不同体外培养系统中的发育效果。结果表明:传代5次的细胞做核供体较有利于转基因胚的发育;在电场条件为电场强度1.6 kV/cm、直流脉冲1次的融合率最高;负压单层细胞共培养体系中的转基因囊胚发育率较好,与未转基因体细胞核移植胚的发育相比无显著差异(P>0.05)。 展开更多

关键词 牛 体细胞核移植 转基因 体外培养

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体细胞克隆牛的研究进展 被引量：4

4

作者 邓守龙 彭涛 +3 位作者 吕自力 陆东林 王安江 王亮 《新疆畜牧业》 2008年第3期4-7,共4页

体细胞核移植是目前生物技术领域研究的热点之一,具有重大的科学意义和应用价值。牛有产奶量高等独特优势,具有巨大的应用潜力,不同国家已相继诞生了体细胞克隆牛及转基因牛。本文回顾了牛体细胞核移植简史,对体细胞核移植方法、体细胞... 体细胞核移植是目前生物技术领域研究的热点之一,具有重大的科学意义和应用价值。牛有产奶量高等独特优势,具有巨大的应用潜力,不同国家已相继诞生了体细胞克隆牛及转基因牛。本文回顾了牛体细胞核移植简史,对体细胞核移植方法、体细胞供核细胞的种类、受体卵母细胞去核方法、重构胚的激活、体外培养体系以及限制牛体细胞核移植应用的因素等进行了综述,并展望了牛体细胞核移植的应用前景。 展开更多

关键词 牛 体细胞 核移植 克隆

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哺乳动物卵母细胞孤雌激活的研究进展 被引量：3

5

作者 邓守龙 王安江 《中国奶牛》 2008年第6期34-38,共5页

本文概述了卵母细胞孤雌激活的研究历程,并从激活机制、激活方法及影响因素等方面对孤雌激活的研究意义和发展前景进行了综述。

关键词 哺乳动物 卵母细胞 孤雌激活

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转基因克隆牛的研究进展 被引量：2

6

作者 邓守龙 吕自力 +1 位作者 陆东林 王安江 《新疆畜牧业》 2008年第2期14-18,共5页

转基因动物在畜牧业生产以及生物医学上具有广阔和诱人的应用前景,生产转基因的方法也很多,本文就体细胞核移植生产转基因牛的供体细胞种类、转染方法和转基因牛的应用作一综述,同时也指出了转基因牛存在的不足,并展望了其发展前景。

关键词 牛 转基因 体细胞核移植

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转GFP基因核移植牛胚胎的研究

7

作者 邓守龙 吕自力 +2 位作者 王亮 王安江 曹文广 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第8期73-78,共6页

试验采用脂质体转染法与电穿孔法,以携带绿色荧光蛋白(GFP)-新霉抗性(neo-)双标记基因的pMSCV质粒转染胎牛耳成纤维细胞为供体与体外成熟的牛卵母细胞为受体构建克隆胚。研究了体外成熟培养液中添加EGF(表皮生长因子)对转基因胚的影响,... 试验采用脂质体转染法与电穿孔法,以携带绿色荧光蛋白(GFP)-新霉抗性(neo-)双标记基因的pMSCV质粒转染胎牛耳成纤维细胞为供体与体外成熟的牛卵母细胞为受体构建克隆胚。研究了体外成熟培养液中添加EGF(表皮生长因子)对转基因胚的影响,不同转染方法构建供体细胞对重构胚发育的影响和在不同体外培养系统中的发育效果。结果显示,体外成熟培养液中添加EGF 30 ng/mL组的卵母细胞成熟率最高,但对后期转基因重构胚的囊胚发育率的影响,以添加EGF 20ng/mL组的最高;以胎牛耳成纤维细胞为供体细胞,不同转染方法转染供体细胞构建重构胚,其囊胚发育率差异不显著(P>0.05);mSOFaa+颗粒细胞单层细胞共培养体系中的转基因囊胚发育率最好,该体系更适合体细胞核移植法生产转基因牛胚胎。 展开更多

关键词 牛 转基因 供体细胞转染 体外培养

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哺乳动物卵母细胞孤雌激活的研究进展 被引量：2

8

作者 邓守龙 王安江 《黑龙江动物繁殖》 2008年第3期7-10,共4页

本文主要从卵母细胞孤雌激活机制、方法及影响因素,对孤雌激活的研究意义和发展前景等方面作一综述。

关键词 哺乳动物 卵母细胞 孤雌激活

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对牛卵母细胞孤雌激活条件优化的研究

9

作者 邓守龙 王安江 《中国奶牛》 2008年第10期34-36,共3页

本文探讨了HYA(透明质酸酶)的浓度和作用时间对牛体外成熟卵母细胞脱卵丘的影响,不同强度电脉冲+乙醇+6-DMAP对牛体外成熟卵母细胞的孤雌激活作用以及和乙醇+6-DMAP激活的比较。对电融合脉冲强度和脉冲次数进行了优化。结果表明:卵母细... 本文探讨了HYA(透明质酸酶)的浓度和作用时间对牛体外成熟卵母细胞脱卵丘的影响,不同强度电脉冲+乙醇+6-DMAP对牛体外成熟卵母细胞的孤雌激活作用以及和乙醇+6-DMAP激活的比较。对电融合脉冲强度和脉冲次数进行了优化。结果表明:卵母细胞成熟培养22h,用0.20%HYA作用10min或0.50%HYA作用5min效果较好。在激活电压1.6kV/cm、20μs/次、间隔1s,脉冲次数为1次的条件下的激活效果较好,在此条件下与乙醇+6-DMAP激活相比较,孤雌激活胚胎的囊胚率分别为19.6%和26.9%,差异不显著。 展开更多

关键词 牛 卵母细胞 孤雌激活

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牛卵母细胞的孤雌激活研究

10

作者 邓守龙 王安江 《黑龙江动物繁殖》 2008年第5期5-7,共3页

本文探讨了透明质酸酶(HYA)的浓度和作用时间对牛体外成熟卵母细胞脱卵丘的影响,不同强度电脉冲+乙醇+6-DMAP对牛体外成熟卵母细胞的孤雌激活作用以及和乙醇+6-DMAP激活的比较。对电融合脉冲强度、脉冲次数进行了优化。结果表明:卵母细... 本文探讨了透明质酸酶(HYA)的浓度和作用时间对牛体外成熟卵母细胞脱卵丘的影响,不同强度电脉冲+乙醇+6-DMAP对牛体外成熟卵母细胞的孤雌激活作用以及和乙醇+6-DMAP激活的比较。对电融合脉冲强度、脉冲次数进行了优化。结果表明:卵母细胞成熟培养22h,用0.20%HYA作用10min或0.50%HYA作用5min效果较好。在激活电压1.6kV/cm、20μs/次、间隔1s,脉冲次数为1次的条件下的激活效果较好,在此条件下与乙醇+6-DMAP激活相比较,孤雌激活胚胎的囊胚率分别为19.6%和26.9%,差异不显著。 展开更多

关键词 牛 卵母细胞 孤雌激活

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外源Toll样受体2转基因绵羊的构建与鉴定 被引量：3

11

作者 张弘韬 潘求真 +2 位作者 冯国兴 邓守龙 连正兴 《黑龙江八一农垦大学学报》 2013年第6期26-30,共5页

Toll样受体2(Toll-like receptor 2,TLR2)是识别革兰氏阳性细菌如引起羊乳腺炎、炭疽病、破伤风等病原体的一种重要受体,而TLR2过表达转基因羊为研究TLR2在防卫细菌侵染中的作用提供了一个理想的模型。因此,研究首先通过显微注射TLR-2... Toll样受体2(Toll-like receptor 2,TLR2)是识别革兰氏阳性细菌如引起羊乳腺炎、炭疽病、破伤风等病原体的一种重要受体,而TLR2过表达转基因羊为研究TLR2在防卫细菌侵染中的作用提供了一个理想的模型。因此,研究首先通过显微注射TLR-2过表达载体3S-Loxp-TLR2的方法对绵羊进行外源基因TLR2整合,然后采用PCR和Southern blot方法对其进行鉴定、拷贝数验证和表达量分析。结果表明,注射148个受精卵,共产下15只小羊,其中8只小羊检测为阳性,转基因率为53.3%;Southern杂交结果发现转TLR2小羊的基因组中外源TLR2基因均为单拷贝;且转基因羊TLR2 mRNA表达高于对照。说明成功构建了转TLR2基因羊。 展开更多

关键词 绵羊 TLR-2 过量表达 转基因

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获能液及精子密度对牛性控精子体外受精成功率的影响 被引量：2

12

作者 倪明 林松涛 +5 位作者 韩光 马学海 吕自立 王安江 邓守龙 张居农 《中国奶牛》 2008年第12期30-32,共3页

本实验探讨了不同的精子获能添加物、精子密度、精子获能液对牛性别分离精子体外受精(IVF)的影响。结果表明:受精液中同时添加10μg/mL的肝素与5mmol/L的咖啡因,能促进牛性控精子体外获能与受精。精子密度在1.0×106个/mL时其囊胚... 本实验探讨了不同的精子获能添加物、精子密度、精子获能液对牛性别分离精子体外受精(IVF)的影响。结果表明:受精液中同时添加10μg/mL的肝素与5mmol/L的咖啡因,能促进牛性控精子体外获能与受精。精子密度在1.0×106个/mL时其囊胚发育率最高。用BO液和mTyrode’s液对牛性控精子进行获能和受精处理,其受精效果差异不显著(P>0.05),但BO液作用时间短对早期胚胎的发育影响较小,比较适合牛性控精子IVF。 展开更多

关键词 体外受精 体外获能 性控精子

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基因工程在绵羊和山羊育种中的应用 被引量：1

13

作者 邓守龙 杜旭光 连正兴 《内蒙古大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2019年第4期447-453,共7页

基因工程技术可以改造生物的基因组,实现基因的删除、替换或插入.羊作为草食家畜的代表,在基因工程领域发挥着引领作用.1984年世界首例试管羊诞生;1997年世界上首例克隆羊降临,揭开了哺乳动物体细胞克隆的序幕;2006年世界首例转基因羊... 基因工程技术可以改造生物的基因组,实现基因的删除、替换或插入.羊作为草食家畜的代表,在基因工程领域发挥着引领作用.1984年世界首例试管羊诞生;1997年世界上首例克隆羊降临,揭开了哺乳动物体细胞克隆的序幕;2006年世界首例转基因羊生产“抗凝血酶III”在欧洲上市,打开了转基因动物产品实现产业化的大门.羊作为适用于生物工程操作的大家畜,必将在基因工程领域的基础理论研究、新品种培育和人类疾病治疗等方面发挥不可替代的作用. 展开更多

关键词 基因编辑 基因工程 遗传改良 羊

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基因组编辑技术在鱼类基因功能研究及鱼类遗传改良中的应用 被引量：1

14

作者 张宝路 李鸣 +1 位作者 毛可佳 邓守龙 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第5期59-63,共5页

利用分子生物学技术将重组基因转移到鱼类中进行人工修饰是目前研究的热点。分子生物学为基因组编辑提供了技术基础,分子生物学领域不断获得新发现为基因组编辑方法的优化与应用提供了有力保障。基因组编辑技术是一种能精确改造生物基因... 利用分子生物学技术将重组基因转移到鱼类中进行人工修饰是目前研究的热点。分子生物学为基因组编辑提供了技术基础,分子生物学领域不断获得新发现为基因组编辑方法的优化与应用提供了有力保障。基因组编辑技术是一种能精确改造生物基因组,实现基因定点敲除和外源基因定点整合的技术,其可实现鱼类的品种改良和鱼类模型构建,亦是研究基因功能的重要手段。目前,运用此技术已建立了多种转基因鱼,并且能够实现外源基因的组织特异性启动,控制外源基因在特定的时间和/或特定的组织器官内表达。文章主要综述了与鱼类基因组编辑相关的方法,以及鱼类作为动物模型在遗传改良上的应用。 展开更多

关键词 基因组编辑 基因功能 动物模型 遗传改良 鱼

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转基因山羊抑制口蹄疫病毒3D基因

15

作者 邓守龙 于坤 +6 位作者 李文婷 姚玉昌 鲁涛 赵雅琳 袁三平 富俊才 连正兴 《中国科学：生命科学》 CSCD 北大核心 2013年第5期404-410,共7页

利用shRNA与高效的"睡美人"(sleeping beauty,SB)转座子系统生产抑制口蹄疫病毒3D基因复制的山羊.对口蹄疫病毒基因(2B,3D)shRNA抑制靶点进行筛选,构建了3条含靶基因shRNA的pLL3.7表达载体,与含靶基因的psiCheck2载体(双荧光... 利用shRNA与高效的"睡美人"(sleeping beauty,SB)转座子系统生产抑制口蹄疫病毒3D基因复制的山羊.对口蹄疫病毒基因(2B,3D)shRNA抑制靶点进行筛选,构建了3条含靶基因shRNA的pLL3.7表达载体,与含靶基因的psiCheck2载体(双荧光素标记)共转染293FT细胞,对合成的shRNA进行筛选.获得的抑制效果好的3D1shRNA(干扰3D基因)插入到SB转座子载体上,将含3D1shRNA的SB转座子与转座酶(2:1,5:1,10:1)通过原核显微注射生产转基因山羊.出生羔羊进行Southern blot与整合位点鉴定,对阳性个体耳成纤维细胞转染含3D基因的pisCheck2载体,观察其抑制率.结果共获得了7只阳性山羊.SB转座子与转座酶的比例为10:1时,生产转基因山羊的效率为21.05%.阳性个体耳成纤维细胞对口蹄疫病毒3D基因有显著抑制效果. 展开更多

关键词 山羊 口蹄疫病毒3D基因 SHRNA “睡美人”转座子

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利用体内外成熟卵母细胞生产转TLR4基因抗病克隆绵羊的研究

16

作者 徐静 卓志勇 +4 位作者 邓守龙 张运海 刘国世 连正兴 张金龙 《中国畜牧杂志》 CAS 北大核心 2013年第7期13-17,共5页

研究旨在提高羊的抗病性能、生产培育高抗病力的转基因羊。本实验分别利用绵羊超数排卵获得的体内卵母细胞和体外成熟培养的卵母细胞作为核受体进行转基因克隆羊的生产。体内超排共获卵2 431枚,其中可用卵77.29%(1 879/2 431);体外成熟... 研究旨在提高羊的抗病性能、生产培育高抗病力的转基因羊。本实验分别利用绵羊超数排卵获得的体内卵母细胞和体外成熟培养的卵母细胞作为核受体进行转基因克隆羊的生产。体内超排共获卵2 431枚,其中可用卵77.29%(1 879/2 431);体外成熟培养共获卵3 292枚,其中可用卵70.90%(2 334/3 292)。体内外核移植实验分别获得体内重构胚1 879枚、体外重构胚1 786枚。结果表明:体内核移植重构胚融合率(81.12%)显著性高于体外核移植重构胚(68.88%)(P<0.05);将部分体内、外重构胚以手术法分别移植于89只及72只受体,体内重构胚移植妊娠率为10.11%,显著高于体外重构胚移植妊娠率(2.78%)。体内、外重构胚移植后各产羔1只,PCR检测均为转TLR4阳性。本实验初步建立了一套较有效的体内外核移植生产转基因克隆羊的方法,并比较了不同来源卵母细胞对核移植效率的影响,发现体内超数排卵所获取的成熟卵母细胞数量、质量均优于体外成熟培养获卵。 展开更多

关键词 超数排卵 IVM 转基因克隆 TLR4 绵羊

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