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禽巴氏杆菌C_(48-1)株成熟外膜蛋白H基因的原核融合表达 被引量：4
1
作者 曹素芳 黄青云 +2 位作者 韩先干 陈红英 邓宪方 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期67-70,共4页
根据禽巴氏杆菌5:A C48-1株OmpH全长基因序列设计一对特异性引物,经PCR扩增获得成熟外膜蛋白H基因(OmpmH),将OmpmH片段非定向插入原核表达载体pGEX-6p-1中,构建重组表达质粒pGEX-OmpmH。转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG诱导下表达融合蛋白... 根据禽巴氏杆菌5:A C48-1株OmpH全长基因序列设计一对特异性引物,经PCR扩增获得成熟外膜蛋白H基因(OmpmH),将OmpmH片段非定向插入原核表达载体pGEX-6p-1中,构建重组表达质粒pGEX-OmpmH。转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG诱导下表达融合蛋白GST-OmpmH。SDS-PAGE结果显示,GST-OmpmH约为63 Ku,与预期的大小一致。Western blot检测结果表明,GST-OmpmH能与C48-1外膜蛋白免疫血清发生特异性反应,证明C48-1 ompmH原核融合表达成功。其可溶性蛋白经亲和层析纯化,得到了纯度较高的目的蛋白OmpmH。为进一步研究禽巴氏杆菌C48-1 OmpmH的免疫原性奠定了基础。 展开更多
关键词 禽巴氏杆菌 OmpmH SDS—PAGE westrn BLOT 原核表达
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禽巴氏杆菌C_(48-1)外膜蛋白H基因与鸡IL-18基因真核共表达载体的构建及表达 被引量：5
2
作者 曹素芳 黄青云 +1 位作者 韩先干 邓宪方 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期382-384,共3页
根据鸡IL-18和真核质粒pcDNA 3的序列,设计1对特异性引物,以重组质粒pcDNA 3/IL-18为模板,扩增出具有完整真核表达结构的CM V-cIL-18-BGHpA片段。将此片段非定向插入重组表达质粒pcDNA 3/om pH中,经酶切分析、PCR鉴定及序列测定证实成... 根据鸡IL-18和真核质粒pcDNA 3的序列,设计1对特异性引物,以重组质粒pcDNA 3/IL-18为模板,扩增出具有完整真核表达结构的CM V-cIL-18-BGHpA片段。将此片段非定向插入重组表达质粒pcDNA 3/om pH中,经酶切分析、PCR鉴定及序列测定证实成功构建了共表达禽巴氏杆菌C48-1外膜蛋白H基因和鸡IL-18基因的重组表达质粒。将共表达质粒转染Cos7细胞,经RT-PCR、SDS-PAGE及W estern b lotting检测,证明了外膜蛋白H基因及鸡IL-18基因均获得了瞬时表达,为研究禽巴氏杆菌C48-1外膜蛋白H的免疫原性和鸡IL-18在基因疫苗中的免疫调节作用奠定了基础。 展开更多
关键词 外膜蛋白H基因 鸡IL-18 丙烯酰胺凝胶电泳 WESTERN BLOTTING
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禽巴氏杆菌C_(48-1)外膜蛋白H基因克隆及序列分析 被引量：3
3
作者 曹素芳 黄青云 +2 位作者 韩先干 陈红英 邓宪方 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期253-256,共4页
根据已发表的外膜蛋白基因核苷酸序列设计一对特异性引物,应用PCR方法扩增出禽巴氏杆菌5:AC48-1株的ompH全长片段,将ompH进行T-A克隆、序列测定和分析。结果表明,ompH全长1597bp,含有一个1056bp的开放性阅读框架(ORF),编码352个氨基酸,... 根据已发表的外膜蛋白基因核苷酸序列设计一对特异性引物,应用PCR方法扩增出禽巴氏杆菌5:AC48-1株的ompH全长片段,将ompH进行T-A克隆、序列测定和分析。结果表明,ompH全长1597bp,含有一个1056bp的开放性阅读框架(ORF),编码352个氨基酸,前20个氨基酸组成信号肽。与已知的15个血清型及疫苗株CU的ompH的核苷酸及其推导的氨基酸序列比较,核苷酸同源性在51.5%～98.7%之间,氨基酸同源性在39.3%～98.7%之间。氨基酸多序列比较显示,血清型特异性抗原表位位于60～80位和200～220位氨基酸处。 展开更多
关键词 禽巴氏杆菌 外膜蛋白 序列分析 同源性
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禽多杀性巴氏杆菌C_(48-1)外膜蛋白H基因真核表达载体的构建 被引量：3
4
作者 曹素芳 黄青云 +1 位作者 韩先干 邓宪方 《中国兽医科技》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期117-120,共4页
应用限制性内切酶BamHⅠ将片段ompH从重组质粒pMDT-omp H切下,非定向插入真核表达质粒pcDNA3中,经酶切分析、PCR鉴定及序列测定,证实成功构建了禽多杀性巴氏杆菌C48-1外膜蛋白H基因的重组真核表达质粒pcDNA3-ompH。将重组表达质粒转染至... 应用限制性内切酶BamHⅠ将片段ompH从重组质粒pMDT-omp H切下,非定向插入真核表达质粒pcDNA3中,经酶切分析、PCR鉴定及序列测定,证实成功构建了禽多杀性巴氏杆菌C48-1外膜蛋白H基因的重组真核表达质粒pcDNA3-ompH。将重组表达质粒转染至 COS7 细胞,经RT-PCR、SDS-PAGE及Western-blotting检测,证明了外膜蛋白H基因获得了瞬时表达。 展开更多
关键词 禽多杀性巴氏杆菌 外膜蛋白H基因 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 蛋白质印迹法
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鸭IL-18基因克隆与序列分析 被引量：4
5
作者 韩先干 黄青云 +2 位作者 尹会方 邓宪方 柯艳坤 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第9期3545-3547,共3页
[目的]为深入研究鸭IL-18的基因表达及其生物学活性和分子佐剂的应用奠定基础。[方法]依据GenBank中香港鸭IL-18基因的序列设计1对特异引物,以广东水鸭脾淋巴细胞总RNA为模板进行RT-PCR扩增,克隆广东水鸭IL-18基因并进行序列分析。[结果... [目的]为深入研究鸭IL-18的基因表达及其生物学活性和分子佐剂的应用奠定基础。[方法]依据GenBank中香港鸭IL-18基因的序列设计1对特异引物,以广东水鸭脾淋巴细胞总RNA为模板进行RT-PCR扩增,克隆广东水鸭IL-18基因并进行序列分析。[结果]测序结果表明,广东水鸭的IL-18基因开放阅读框为603 bp,编码201个氨基酸,分子量为23.2 kDa。序列分析表明,所获得的广东水鸭IL-18基因与GenBank中香港鸭的核苷酸同源性为98.2%,氨基酸同源性为100%。它与鸡和火鸡的核苷酸同源性分别为86.9%和87.1%,而氨基酸同源性分别为96.5%和97.0%。[结论]进化树分析结果表明,鸭IL-18基因与鸡和火鸡进化关系较近。 展开更多
关键词 鸭IL-18基因 RT-PCR 序列分析
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禽多杀性巴氏杆菌C_(48-1)成熟外膜蛋白H基因原核表达最适条件的探索 被引量：1
6
作者 曹素芳 黄青云 +1 位作者 韩先干 邓宪方 《中国兽医科技》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期45-48,共4页
应用PCR扩增出禽多杀性巴氏杆菌C48 1成熟外膜蛋白H基因(ompmH),将ompmH片段按正确的阅读框定向插入原核表达载体pGEX 6p 1中谷胱甘肽转移酶(GST)基因的下游,获得了重组表达质粒pGEX ompmH。然后将重组质粒转化大肠埃希氏菌BL21(DE3),... 应用PCR扩增出禽多杀性巴氏杆菌C48 1成熟外膜蛋白H基因(ompmH),将ompmH片段按正确的阅读框定向插入原核表达载体pGEX 6p 1中谷胱甘肽转移酶(GST)基因的下游,获得了重组表达质粒pGEX ompmH。然后将重组质粒转化大肠埃希氏菌BL21(DE3),当转化菌的D600nm值达到0.6～0.8时,对异丙基硫代 β D 半乳糖苷(IPTG)的诱导浓度、诱导时间和诱导温度等条件进行了试验,根据聚丙烯酰胺凝胶电泳判定融合蛋白GST ompmH表达的最适条件。结果,当细菌的D600nm值为0.6～0.8时,IPTG最佳诱导浓度为0.8mmol L,最佳诱导时间为4h,最适诱导温度为25℃。并用免疫印迹法对表达产物进行检测,结果显示表达的融合蛋白GST ompmH能与C48 1外膜蛋白免疫血清发生特异性反应,证明pGEX 6p 1载体表达的融合蛋白保留了天然蛋白的抗原性。 展开更多
关键词 禽 多杀性巴氏杆菌 成熟外膜蛋白H基因 聚丙烯酰胺凝胶电泳 免疫印迹法 融合蛋白
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检验检疫证书进入“电子时代”
7
作者 邓宪方 罗辉 《中国检验检疫》 2015年第11期36-37,共2页
签证、行政许可证、高铁票、机票……随着社会的电子化程度和信息化程度越来越高，电子汪书作为互联网大数据信息的一种载体，逐步取代传统纸质证书，在政府部门和商业领域广泛应用．
关键词 检验检疫证书 电子时代 数据信息 商业领域 政府部门 许可证 信息化 电子化
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