采用RT-PCR技术扩增禽呼肠孤病毒(ARV)S1133毒株和广西分离株R 1的2σ基因。将2σ基因克隆至PGEX-4T-1载体上,测序结果表明,插入的片段为2σ目的基因。切下目的基因2σ重组到含有谷胱甘肽(G ST)的融合蛋白质原核表达载体PGEX-4T-1,获得...采用RT-PCR技术扩增禽呼肠孤病毒(ARV)S1133毒株和广西分离株R 1的2σ基因。将2σ基因克隆至PGEX-4T-1载体上,测序结果表明,插入的片段为2σ目的基因。切下目的基因2σ重组到含有谷胱甘肽(G ST)的融合蛋白质原核表达载体PGEX-4T-1,获得重组质粒。经PCR、酶切以及序列分析鉴定,表达2σ基因插入的位置、大小和读码框架均正确,表明成功构建了融合表达载体PGEX-S1133-2σ和PGEX-R 1-2σ。构建好的重组质粒,在大肠杆菌JM 109α中经1 mm o l/L IPTG诱导得到了表达。融合蛋白G ST-2σ和G ST R 1-2σ的相对分子质量为65 100,以包涵体形式存在。W estern-b lot分析表明,融合蛋白能够与ARV阳性血清发生特异性反应,表明该重组蛋白具有良好的反应原性。展开更多
根据副鸡嗜血杆菌的16 S rDNA基因序列设计一对特异性引物XZIC1和XZIC2,对6株副鸡嗜血杆菌进行PCR扩增。结果显示,该对引物对6株副鸡嗜血杆菌均扩增出与预期大小相一致的282bp片段,而对鸡毒支原体、禽巴氏杆菌、鸡传染性支气管炎病毒、...根据副鸡嗜血杆菌的16 S rDNA基因序列设计一对特异性引物XZIC1和XZIC2,对6株副鸡嗜血杆菌进行PCR扩增。结果显示,该对引物对6株副鸡嗜血杆菌均扩增出与预期大小相一致的282bp片段,而对鸡毒支原体、禽巴氏杆菌、鸡传染性支气管炎病毒、鸡新城疫病毒、大肠埃希菌、鸡白痢沙门菌、禽流感病毒(H9)、鸡喉气管炎病毒及葡萄球菌等9种病原体的扩增结果均为阴性。该PCR敏感性结果表明,本方法可以检测到10pg的副鸡嗜血杆菌DNA模板。采用引物XZIC1和XZIC2,对分别用副鸡嗜血杆菌ctcc253、ctcc255、ctcc257、ctcc269株感染SPF鸡的临床病料DNA进行PCR扩增,均可扩增出单一的282bp的片段。展开更多
文摘采用RT-PCR技术扩增禽呼肠孤病毒(ARV)S1133毒株和广西分离株R 1的2σ基因。将2σ基因克隆至PGEX-4T-1载体上,测序结果表明,插入的片段为2σ目的基因。切下目的基因2σ重组到含有谷胱甘肽(G ST)的融合蛋白质原核表达载体PGEX-4T-1,获得重组质粒。经PCR、酶切以及序列分析鉴定,表达2σ基因插入的位置、大小和读码框架均正确,表明成功构建了融合表达载体PGEX-S1133-2σ和PGEX-R 1-2σ。构建好的重组质粒,在大肠杆菌JM 109α中经1 mm o l/L IPTG诱导得到了表达。融合蛋白G ST-2σ和G ST R 1-2σ的相对分子质量为65 100,以包涵体形式存在。W estern-b lot分析表明,融合蛋白能够与ARV阳性血清发生特异性反应,表明该重组蛋白具有良好的反应原性。
文摘根据副鸡嗜血杆菌的16 S rDNA基因序列设计一对特异性引物XZIC1和XZIC2,对6株副鸡嗜血杆菌进行PCR扩增。结果显示,该对引物对6株副鸡嗜血杆菌均扩增出与预期大小相一致的282bp片段,而对鸡毒支原体、禽巴氏杆菌、鸡传染性支气管炎病毒、鸡新城疫病毒、大肠埃希菌、鸡白痢沙门菌、禽流感病毒(H9)、鸡喉气管炎病毒及葡萄球菌等9种病原体的扩增结果均为阴性。该PCR敏感性结果表明,本方法可以检测到10pg的副鸡嗜血杆菌DNA模板。采用引物XZIC1和XZIC2,对分别用副鸡嗜血杆菌ctcc253、ctcc255、ctcc257、ctcc269株感染SPF鸡的临床病料DNA进行PCR扩增,均可扩增出单一的282bp的片段。
