运用CFSE和PKH26双染法快速鉴定细胞外囊泡

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作者 郭春 李艳伟 +4 位作者 王佳佳 邢月婷 黄莹莹 宋兴辉 叶小康 《中国组织化学与细胞化学杂志》 CAS CSCD 2023年第3期282-289,共8页

目的细胞外囊泡(extracellular vesicles,EVs)称为细胞间“信使”,通过传递物质和信息调控受体细胞的功能和表型,在生理状态维持及疾病进程中发挥重要作用。然而,亚微米直径、高异质性、低折射率等特性使EVs的分析鉴定严重受阻。本研究... 目的细胞外囊泡(extracellular vesicles,EVs)称为细胞间“信使”,通过传递物质和信息调控受体细胞的功能和表型,在生理状态维持及疾病进程中发挥重要作用。然而,亚微米直径、高异质性、低折射率等特性使EVs的分析鉴定严重受阻。本研究旨在探索一种准确、高效的EVs流式检测方案,为EVs的功能研究提供技术支撑。方法首先采用差速离心法分离获得EVs,用已知直径的聚苯乙烯微球作为标尺,对流式细胞仪检测EVs的各项参数进行调试和优化以达到最佳信噪比;梯度稀释EVs样本,优化其上样浓度以降低群检测效应(swarming effect),在此基础上进一步用PKH26和CFSE两种荧光染料对EVs脂膜和蛋白进行双荧光标记,从而实现对EVs物理和生化特性的多参数分析,最后通过特异性抗体标记、电镜观察、纳米颗粒跟踪分析对EVs样本进行验证分析。结果参数优化后的流式细胞仪在散色光通道能将80 nm的微球信号与仪器背景噪音信号清楚分开;通过对样本的梯度稀释建立的浓度与稀释倍数之间的标准工作曲线的相关系数达0.99以上,说明仪器可以对EVs进行定量分析;荧光染色显示EVs呈CFSE及PKH26双阳性,占比约5.46%,与抗体标记的结果相近;电镜和纳米颗粒跟踪分析验证其粒径及群体分布与流式结果一致。结论联合散射光与脂膜荧光染料标记是一种经济、高效的EVs流式检测方案,有利于EVs流式分析的标准化。 展开更多

关键词 流式细胞术 细胞外囊泡 CFSE PKH26

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高校大型仪器共享平台人才培养模式路径探析——基于浙江大学医学院公共技术平台的实践与探索 被引量：5

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作者 宋兴辉 刘双双 +4 位作者 黄莹莹 李艳伟 王佳佳 郭春 邢月婷 《实验技术与管理》 CAS 北大核心 2022年第4期232-235,共4页

高校大型仪器平台已成为推进高校科研能力提升的重要技术条件保障。随着高校科研能力和技术的发展,高校大型仪器共享平台经历了由仪器操作服务向仪器开发创新、人才培养的转变。基于此,该文以加强实验技术创新为主线,搭建了三维教学模式... 高校大型仪器平台已成为推进高校科研能力提升的重要技术条件保障。随着高校科研能力和技术的发展,高校大型仪器共享平台经历了由仪器操作服务向仪器开发创新、人才培养的转变。基于此,该文以加强实验技术创新为主线,搭建了三维教学模式,着力将平台打造成高层次技术人才培养、高水平仪器技术孵化的教学科研基地,为新时代高校科研发展提供技术支撑。 展开更多

关键词 大型仪器 共享平台 人才培养模式 培养路径

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基于实时无标记技术研究流式分选后细胞活性的检测方法

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作者 李艳伟 王佳佳 +4 位作者 邢月婷 郭春 黄莹莹 宋兴辉 黄琼 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第7期1084-1089,共6页

利用流式细胞法、细胞计数试剂盒(CCK-8)法、实时细胞功能分析(RTCA)法分别检测分选前后细胞的活性,综合比较了3种方法的检测原理、操作特点等。结果显示,流式细胞法测得的分选后细胞凋亡率为(3.85±0.008)%,分选前细胞凋亡率为(14.... 利用流式细胞法、细胞计数试剂盒(CCK-8)法、实时细胞功能分析(RTCA)法分别检测分选前后细胞的活性,综合比较了3种方法的检测原理、操作特点等。结果显示,流式细胞法测得的分选后细胞凋亡率为(3.85±0.008)%,分选前细胞凋亡率为(14.09±0.021)%,分选后细胞凋亡率低于分选前,具有统计学差异(P<0.05);分选前后的活细胞比例显示,分选后活细胞比例高于分选前,具有显著性统计学差异(P<0.001)。CCK-8法测得的分选后细胞活性高于分选前,具有显著性统计学差异(P<0.001);RTCA法测得的分选后细胞连续增殖活性明显高于分选前,具有极显著性统计学差异(P<0.0001)。结果显示,相较于CCK-8法和流式细胞法,RTCA法的细胞用量少、可回收,操作简便,无需标记,检测灵敏度高,可获得实时动态的细胞生长曲线,适合研究分选后细胞长效动态的活性变化,可为基础和临床分选后活细胞的功能研究提供检测手段。 展开更多

关键词 实时细胞功能分析 流式细胞分析 流式细胞分选 CCK-8 细胞活性

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稀有细胞群单细胞分选方案的优化

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作者 宋兴辉 李艳伟 +3 位作者 王佳佳 邢月婷 黄莹莹 郭春 《生物化工》 2020年第4期92-93,96,共3页

目的:探讨稀有细胞群单细胞分选方案的优化。方法:分析仪器设备的设置、分选前细胞的准备和分选方案的选择。结果:通过提供的单细胞分选的方案,使单克隆形成率达86.5%。结论:建立了单细胞分选的优化方案,并重点分析了提高单克隆形成率... 目的:探讨稀有细胞群单细胞分选方案的优化。方法:分析仪器设备的设置、分选前细胞的准备和分选方案的选择。结果:通过提供的单细胞分选的方案,使单克隆形成率达86.5%。结论:建立了单细胞分选的优化方案,并重点分析了提高单克隆形成率的影响因素和解决方法。 展开更多

关键词 单细胞分选 单克隆形成率 细胞活性

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用白醋泡脚能治疗脚气吗

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作者 李慧博 邢月婷 《农村百事通》 2020年第11期51-51,共1页

在日常生活中,不少人可能都听说过用白醋泡脚治疗脚气的说法,那么这个说法可信吗?下面让我们来听听专家的解释。"通过用白醋泡脚的方式治疗脚气是有一定作用的,但只适用于那些脚气情况比较轻的患者。对于脚气情况严重者还是需要及... 在日常生活中,不少人可能都听说过用白醋泡脚治疗脚气的说法,那么这个说法可信吗?下面让我们来听听专家的解释。"通过用白醋泡脚的方式治疗脚气是有一定作用的,但只适用于那些脚气情况比较轻的患者。对于脚气情况严重者还是需要及时就医,按照医嘱用药的。"广西桂林市第二人民医院中医科副主任医师熊继发介绍。 展开更多

关键词 副主任医师 醋泡脚 广西桂林市 中医科 脚气 医嘱用药 就医 过用

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养生益寿文摘

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作者 刘晓旭 于俊民 +10 位作者 郭晓晖 李悦康 刘子雨 胡健波 李爽 李慧博 邢月婷 代小佩 杨代武 黄亚鑫 唐墨莲 《家庭医药（就医选药）》 2020年第6期72-77,共6页

拔牙能瘦脸?口腔颌面专家辟谣了如今“小V脸”成为了众多女性追求的目标,所以很多人采取医美手段,为的就是拥有“明星”“网红”的同款脸型。据坊间流传,拔几颗牙就能轻松瘦脸,免去磨骨之苦,甚至有明星亲口说过自己拔了几颗牙之后脸就小... 拔牙能瘦脸?口腔颌面专家辟谣了如今“小V脸”成为了众多女性追求的目标,所以很多人采取医美手段,为的就是拥有“明星”“网红”的同款脸型。据坊间流传,拔几颗牙就能轻松瘦脸,免去磨骨之苦,甚至有明星亲口说过自己拔了几颗牙之后脸就小了,不少女性听后蠢蠢欲,可事实真的如此吗?中日友好医院口腔医学中心主任的徐宝华教授对此持否定态度,也就是说,拔牙并不能瘦脸! 展开更多

关键词 中日友好医院 口腔颌面 拔牙 坊间流传 口腔医学中心 益寿文摘 瘦脸

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“小鼠脾脏单细胞悬液不同制备方法及其流式细胞术检测”综合实验的建立与探索 被引量：3

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作者 黄莹莹 邢月婷 +5 位作者 阿依西布·萨吾提 杨丹 李艳伟 王佳佳 郭春 周南 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2023年第4期680-687,共8页

由于流式细胞术应用中涉及的样品制备、仪器使用和数据解读均比较复杂,该文对流式实验教学的内容和形式进行了有益的探索,建立了“小鼠脾脏单细胞悬液不同制备方法及其流式细胞术检测”的综合性实验。新方法不仅包含小鼠原代组织取材、... 由于流式细胞术应用中涉及的样品制备、仪器使用和数据解读均比较复杂,该文对流式实验教学的内容和形式进行了有益的探索,建立了“小鼠脾脏单细胞悬液不同制备方法及其流式细胞术检测”的综合性实验。新方法不仅包含小鼠原代组织取材、单细胞悬液不同制备方法(手动解离、自动解离)、流式细胞仪计数、显微观察等步骤,而且能涵盖流式抗体的配色与标记、流式细胞仪操作、数据分析(T淋巴细胞亚群的分群)等多个知识点,并围绕不同解离方法对实验结果的影响进行了探讨,极大地改善了实验教学效果和质量,充分发挥了流式细胞术在高校教学和科研中的重要支撑作用,使学生学会完整的流式技术链条,并提升了其科研能力与创造力,从而为培养复合型科研人才提供助力。 展开更多

关键词 单细胞悬液 手动解离 自动解离 流式检测 实验教学

原文传递

离心参数对流式分选后样本的影响研究 被引量：2

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作者 黄莹莹 邢月婷 +5 位作者 孟晓瑜 桑文华 李艳伟 宋兴辉 郭春 王佳佳 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2021年第10期2001-2008,共8页

流式分选术是对细胞或生物颗粒进行无菌筛分的技术,因具有检测速度快、通量高、灵敏度高等优势,故在医学及生命科学领域有广阔的应用前景。离心是流式分选后富集细胞的常用技术,直接影响流式分选后样本的细胞活性和得率。该文以KPC细胞... 流式分选术是对细胞或生物颗粒进行无菌筛分的技术,因具有检测速度快、通量高、灵敏度高等优势,故在医学及生命科学领域有广阔的应用前景。离心是流式分选后富集细胞的常用技术,直接影响流式分选后样本的细胞活性和得率。该文以KPC细胞系(即小鼠胰腺组织特异性kras缺失p53突变形成胰腺癌分离的癌细胞,简称KPC)和小鼠原代脾脏细胞为例,利用FACS SORP Aria II分选仪进行分选。对离心力、离心时间等参数进行优化,结果表明KPC细胞分选后,300×g、4°C离心25 min,能获得高得率高活性的细胞用于下游实验,而小鼠原代脾脏细胞则300×g、4°C离心15 min最为合适。该方法解决了流式分选后细胞离心难、离心损失大的问题,可提高分选实验实际得率,为流式分选术的应用提供技术参考。 展开更多

关键词 流式分选 离心时间 离心力 得率 细胞活性

原文传递

实时检测收集液对分选后HEK293T细胞活性的影响 被引量：1

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作者 李艳伟 宋兴辉 +3 位作者 邢月婷 王佳佳 郭春 黄莹莹 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2021年第10期2009-2020,共12页

流式细胞分选是纯化活细胞较为常用的实验方法,是获得高活性细胞的有效手段,其中收集液为分选后的细胞提供一定的营养环境,从而保证分选后细胞的高活性。该研究选用流式细胞分选仪分选人肾上皮细胞系HEK293T(简称293T)细胞,用3组即A组(... 流式细胞分选是纯化活细胞较为常用的实验方法,是获得高活性细胞的有效手段,其中收集液为分选后的细胞提供一定的营养环境,从而保证分选后细胞的高活性。该研究选用流式细胞分选仪分选人肾上皮细胞系HEK293T(简称293T)细胞,用3组即A组(含BSA的PBS缓冲液)、B组(含FBS的PBS缓冲液)、C组(含FBS的DMEM培养基)收集液分别接收分选后的293T细胞,以流式细胞检测法、细胞计数试剂盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)检测法、实时细胞分析(Real Time Cellular Analysis,RTCA)检测法分别检测分选后细胞的活性情况并进行统计分析。结果显示,A组中含0.4% BSA的PBS缓冲液、B组中含10% FBS的PBS缓冲液、C组中含10% FBS的DMEM培养基接收的细胞活性分别高于各组内的对照,凋亡率分别为(4.12±0.474)%、(4.10±0.660)%、(3.71±0.291)%,均具有显著性统计学差异(P<0.000 1)。比较三种细胞活性检测方法发现,RTCA检测法具有极简的操作流程,无须标记,可实时获得细胞的动态增殖曲线的优点,可作为分选后细胞活性最客观的检测方法。该研究为揭示收集液对细胞活性的影响提供参考依据,为快速客观检测分选后细胞活性提供实时检测方法。 展开更多

关键词 CCK-8 流式细胞分析 实时检测 流式细胞分选 细胞活性 收集液

原文传递

一种新的皮肌炎患者外周血Treg淋巴细胞亚群的多色分析方法的建立

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作者 黄莹莹 姜宇 +4 位作者 邢月婷 李艳伟 郭春 王佳佳 徐琴 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2022年第7期1359-1369,共11页

为探索建立新的皮肌炎患者外周血Treg淋巴细胞亚群分析方法,利用流式细胞仪设计并优化针对Treg细胞的15色流式染色方案。该文收集了皮肌炎患者和健康志愿者的外周血,用密度梯度离心法分离获得外周血单个核细胞(peripheral blood mononuc... 为探索建立新的皮肌炎患者外周血Treg淋巴细胞亚群分析方法,利用流式细胞仪设计并优化针对Treg细胞的15色流式染色方案。该文收集了皮肌炎患者和健康志愿者的外周血,用密度梯度离心法分离获得外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)。该研究分别对抗体浓度、染色时间、孵育温度、是否避光、荧光素放置时间及上机收样电压等进行优化,最终完成单样品15色高通量流式检测,并结合FlowJo软件对目标细胞Treg亚群进行高阶数据分析。结果表明,(1)BLANK十字架法结合染色指数法可确立方案(Panel)的最适电压值;(2)抗体TIGIT BV421、HLA-DR PE、CD127 BV605、CD103 R718、CD25 PE-Cy7滴定后的最优标记量分别为1.25、1.25、3、2.5、5μL/test(100μL染色体积/test);(3)多色流式抗体染色的最佳条件是4°C、避光条件下孵育30 min;(4)样本制备后应尽快检测,放置时间不超过24 h。该研究中建立的15色Panel可成功分析人PBMC样本Treg细胞亚群及相关活化分子的表达情况。此方法可应用于以皮肌炎为代表的伴有Treg细胞缺陷的外周血Treg淋巴细胞亚群的分析。 展开更多

关键词 皮肌炎 Treg细胞亚群 15色高通量流式分析 活化

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一种细胞外囊泡的流式检测方案的探索与建立 被引量：1

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作者 郭春 王佳佳 +4 位作者 李艳伟 邢月婷 宋兴辉 黄莹莹 叶小康 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2021年第3期570-577,共8页

该研究旨在探索细胞外囊泡(extracellular vesicles,EVs)分析的标准化流程,建立一种高效的EVs检测方法,为EVs功能及临床转化研究提供技术支撑。实验采用经典的超速离心法分离EVs,借助已知直径的聚苯乙烯微球设定并优化流式检测EVs的参数... 该研究旨在探索细胞外囊泡(extracellular vesicles,EVs)分析的标准化流程,建立一种高效的EVs检测方法,为EVs功能及临床转化研究提供技术支撑。实验采用经典的超速离心法分离EVs,借助已知直径的聚苯乙烯微球设定并优化流式检测EVs的参数,联合应用散色光信号及荧光信号对EVs进行双参数分析鉴定,最后通过电镜观察及蛋白质免疫印迹(Western blot,WB)对鉴定结果进行验证。结果显示,参照纳米微球设定的条件可清楚地将100 nm颗粒信号与噪音信号分离,且微球稀释的梯度和检测到的浓度之间呈线性相关,可以对EVs进行定量分析;荧光染色结果显示,EVs呈CFSE(5,6-Carboxyfluorescein diacetate,succinimidyl ester,蛋白结合染料)及FM1-43(fixable analog of FM?1-43 membrane stain,亲脂性染料)双阳性,占比约3%;电镜验证其形态及直径与预期相一致。该研究通过优化流式方案及双荧光参数分析鉴定探索了EVs流式检测的标准化流程,建立了高效、准确的EVs流式检测方法。 展开更多

关键词 细胞外囊泡 流式细胞术 荧光信号 散射光信号 分析鉴定

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日本医蛭进食前后唾液腺的形态学变化

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作者 鲍亮 王泽冲 +2 位作者 蔡美香 邢月婷 罗媛媛 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2022年第7期1258-1266,共9页

为研究日本医蛭(Hirudo nipponica)进食前后唾液腺的形态和超微结构特征,该文通过光学显微镜和电子显微镜对日本医蛭唾液腺进行观察。基于光学显微镜成像,观察到日本医蛭咽部具有三角形肌肉颚,唾液腺呈葡萄状依附在颚上,腺体呈乳白色且... 为研究日本医蛭(Hirudo nipponica)进食前后唾液腺的形态和超微结构特征,该文通过光学显微镜和电子显微镜对日本医蛭唾液腺进行观察。基于光学显微镜成像,观察到日本医蛭咽部具有三角形肌肉颚,唾液腺呈葡萄状依附在颚上,腺体呈乳白色且对称分布在颚周围。HE染色结果表明,唾液腺细胞是由卵球形的体细胞和细长的导管组成的,且细胞核位于细胞底部或边缘。未进食的日本医蛭唾液腺细胞染色浅,细胞质饱满;进食后的日本医蛭唾液腺细胞染色深,细胞质结构疏松。基于透射电子显微镜成像,观察到唾液腺细胞中存在球形分泌颗粒,且分泌颗粒内部存在高电子密度的致密成分。未进食的日本医蛭唾液腺细胞结构紧致,分泌颗粒相互挤压,且大量分泌颗粒内含有致密成分;进食后的日本医蛭唾液腺细胞结构疏松,分泌颗粒之间存在空隙,且分泌颗粒内致密成分消失。基于扫描电子显微镜成像,观察到唾液腺细胞呈葡萄状排列。未进食的日本医蛭唾液腺细胞表面光滑,细胞圆润;进食后的日本医蛭唾液腺细胞表面存在大量颗粒物质,细胞凹陷。以上结果表明,日本医蛭进食后,唾液腺细胞分泌出的多种分泌蛋白是分泌颗粒中的致密成分,而大部分分泌颗粒还存在于唾液腺细胞内。 展开更多

关键词 日本医蛭 唾液腺细胞 超微结构 分泌颗粒 致密成分

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