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珍稀植物华木莲SRK基因的克隆与亚细胞定位
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作者 邱珊姗 邓凌帆 +4 位作者 刘苗苗 张建强 王颜波 刘齐元 王建革 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期1339-1347,共9页
【目的】利用杂种优势是植物育种的重要目的,但对于自交不亲和物种来说,因为亲本杂合,很难充分利用最大杂种优势。自交不亲和是开花植物避免近交的重要繁育机制,自交不亲和与自交亲和相互转换在自交不亲和物种中非常普遍,这种转换可为... 【目的】利用杂种优势是植物育种的重要目的,但对于自交不亲和物种来说,因为亲本杂合,很难充分利用最大杂种优势。自交不亲和是开花植物避免近交的重要繁育机制,自交不亲和与自交亲和相互转换在自交不亲和物种中非常普遍,这种转换可为自交不亲和物种育种开辟新的途径。华木莲(Sinomanglietia glauca)为木兰科珍稀物种,有重要科学价值和良好应用前景,但适应能力差,自我更新能力弱。华木莲呈现迟发性自交不亲和特征,自交不亲和机理尚不清楚。从华木莲转录组中鉴定出了与孢子体自交不亲和反应关键基因S位点受体激酶(S-locus receptor kinase,SRK)基因高度同源基因SgSRK,这是唯一一类与已知自交不亲和基因高度同源的迟发性自交不亲和基因,因此了解该基因的作用成为研究华木莲自交不亲和机理的出发点。克隆基因、分析其编码蛋白理化性质及亚细胞定位是进行基因功能分析的前提,因此了解SgSRK基因克隆与亚细胞定位可为揭示该基因在华木莲自交不亲和中的作用提供参考。【方法】以自花授粉后3 h华木莲心皮为材料,根据转录组扩增出了SgSRK基因,对其编码蛋白分析了理化性质,鉴定了结构域,推断了疏水性、信号肽、跨膜结构,并对其亚细胞定位进行了预测。为探讨SgSRK基因与已知的不同物种SRK基因演化关系,基于蛋白序列利用最大似然法构建了系统发育树。将目的基因和GFP基因构建了重组表达载体并转化农杆菌,然后将含有目的基因重组表达载体的农杆菌直接注射烟草叶片,3 d后利用荧光显微镜观察叶片注射部位基因瞬时表达情况,确定其编码蛋白的亚细胞定位。【结果】SgSRK基因共计2463 bp(GenBank登录号:MW139903),编码蛋白含有820个氨基酸,编码蛋白具有4个结构域:B;ectin、S;ocus;lycop、PAN-2、Pkinase Tyr结构域,有跨膜结构,存在信号肽,因此编码蛋白质可分为膜外域、跨膜域、胞内磷酸激酶域。共聚焦荧光显微镜观察表明,该基因蛋白产物定位在细胞质中和细胞膜上,细胞膜上表达更多。【结论】SgSRK基因具有植物SRK基因典型特征。 展开更多
关键词 华木莲 自交不亲和 S位点受体激酶 分子克隆 亚细胞定位 生物信息学
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华木莲SgMLPK基因的克隆与亚细胞定位
2
作者 邓凌帆 邱珊姗 +4 位作者 刘苗苗 张建强 王颜波 刘齐元 王建革 《福建农林大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2022年第2期210-216,共7页
以华木莲心皮为材料克隆了SgMLPK,对其编码蛋白理化性质进行分析,对其结构域、疏水区、跨膜结构、亚细胞定位进行了推断,基于最大似然法构建了系统发育树.将SgMLPK与GFP基因构建了重组表达载体并转化了农杆菌,直接注射到烟草叶片中,36 ... 以华木莲心皮为材料克隆了SgMLPK,对其编码蛋白理化性质进行分析,对其结构域、疏水区、跨膜结构、亚细胞定位进行了推断,基于最大似然法构建了系统发育树.将SgMLPK与GFP基因构建了重组表达载体并转化了农杆菌,直接注射到烟草叶片中,36 h后用荧光显微镜观察SgMLPK蛋白的亚细胞定位.结果表明,SgMLPK蛋白定位于细胞质和细胞膜上,共417个氨基酸(碱基1254 bp),具有苏氨酸激酶结构域和信号肽,存在疏水区,无跨膜区域. 展开更多
关键词 华木莲 自交不亲和 M位点受体激酶 克隆 亚细胞定位
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